HPLC法测定复方鲜石斛颗粒中葛根素的含量

目的研究以HPLC法测定复方鲜石斛颗粒中葛根素含量的方法。方法采用ProntosilenrobondC18柱,以甲醇-水为流动相,检测波长为250nm,流速1.0ml·min-1。结果葛根素在0.1175～23.5μg·ml-1范围内线性良好,r=0.9998,平均加样回收率为101.45%,RSD=0.50%(n=6)。结论本法操作简单,结果可靠,重现性好,可作为该产品质量控制的方法。     

广东铁皮石斛GAP基地的石斛鲜品茎和叶中多糖的含量比较研究

目的 通过对不同产地铁皮石斛引种到广东饶平铁皮石斛GAP种植基地的铁皮石斛药材鲜品茎和叶中的多糖含量比较研究,探讨环境因素对石斛多糖的影响.方法 以多糖含量为指标,应用苯酚-浓硫酸比色法测定不同产地的铁皮石斛鲜品茎和叶中的多糖含量.结果 不同原产地的铁皮石斛茎和叶中的多糖含量均有一定差异,其中鲜品的茎以云南-5(T8)样品的多糖含量最高,达到了5.59％,广东河源的样品的多糖含量最低,仅为1.22％;鲜品的叶以云南-4(T7)样品的多糖含量最高,达到了1.90％,福建武夷山的样品的多糖含量最低,为0.95％;多数品种的鲜品茎中的多糖含量高于叶中的多糖含量.结论 原产地的生长环境对铁皮石斛多糖的积累可能有一定影响.     

石斛合剂对糖尿病模型大鼠胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响

研究石斛合剂对高糖、高脂+STZ造模糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡及相关基因Bax、Bcl-2mRNA表达的影响。方法大鼠高脂、高糖饲养1个月后腹腔注射STZ(30mg)制备糖尿病模型,经石斛合剂(7.5、15.0、30.0g.kg-1)治疗2周后检测胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因Bax、Bcl-2mRNA的表达。结果石斛合剂可显著地降低糖尿病大鼠空腹血糖(P<0.05或P<0.01);石斛合剂可显著减少糖尿病模型大鼠胰岛细胞凋亡(P<0.05),降低Bax mRNA表达(P<0.05),增加Bcl-2mRNA表达(P<0.05或P<0.01))。结论石斛合剂可降低血糖、减少大鼠胰岛细胞凋亡,可能与其降低糖尿病模型大鼠胰腺组织Bax、增加Bcl-2表达有关。更多还原     

两种石斛的水溶性多糖和碱溶性多糖体外抗氧化活性的研究

目的 比较金钗石斛、铁皮石斛的水溶性多糖和碱溶性多糖的抗氧化活性.方法 紫外分光光度法测定两种石斛多糖抗氧化自由基的清除率.结果 金钗石斛水溶性多糖和碱溶性多糖、铁皮石斛水溶性多糖和碱溶性多糖对羟自由基的清除率分别是112.69％、52.24％、69.40％、113.43％,对H2O2的清除率分别是38.87％、17.51％、18.69％、37.09％,对DPPH·的清除率分别是54.74％、48.59％、84.04％、78.02％.结论 金钗石斛和铁皮石斛具有一定的体外抗氧化能力.其中,金钗石斛的水溶性多糖的抗氧化能力强于碱溶性多糖.而铁皮石斛的碱溶性多糖的抗氧化能力较强于水溶性多糖.     

金钗石斛对衰老模型大鼠术后认知功能的影响及机制研究

目的 探讨金钗石斛（DNL）对衰老模型大鼠术后认知功能的影响及机制。方法 选择4月龄SD雄性大鼠60只,连续42 d颈背部皮下注射10%D-半乳糖0.125 g/（kg·d）复制衰老模型大鼠,随机分为对照组、POCD+DNL组及POCD组,每组20只。对照组不作处理,POCD+DNL组及POCD组在七氟烷麻醉下行单侧肾切除术。大鼠于麻醉苏醒2 h后灌胃,POCD+DNL组以10 g/（kg·d） DNL水煎剂进行连续灌胃,POCD组与对照组给予相同体积生理盐水灌胃。依据术后不同灌胃时间每组再分为7 d、14 d两个亚组,每亚组10只。采用Morris水迷宫观察各组大鼠行为学表现;采用HE染色观察大鼠海马神经元细胞形态变化;采用ELISA法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平;采用Western blotting检测大鼠海马NF-κB、IκBα蛋白表达。结果 与对照组及POCD+DNL组比较,POCD组大鼠的逃避潜伏期延长（P <0.05）;大鼠海马HE染色结果显示,与对照组及POCD+DNL组比较,POCD组海马神经元细胞排列松散,细胞形态不规则,细胞核固缩,染色较深...     

复方石斛的提取工艺研究

目的:优选复方石斛最佳提取工艺。方法:以粗多糖、总黄酮、石斛碱的含量及干膏率为指标,采用正交试验法,利用多指标综合评价的方法及对权重系数的设置,优先最佳提取工艺。结果:复方石斛最佳提取工艺:10倍量的70%乙醇和水各回流120 min。结论:该优化工艺客观可行,稳定可靠,可为复方石斛的工业生产提供实验依据。     

不同方法提取的铁皮石斛提取物对自发性高血压大鼠的降压作用及其机制研究

目的 探讨不同方法提取的铁皮石斛提取物对自发性高血压（spontaneous hypertension rat,SHR）大鼠的降压作用及其机制。方法 32只SHR大鼠根据血压值随机分为水提组、醇水两提组（0.8 g·kg^-1·d^-1）、苯磺酸氨氯地平对照组（0.5 mg·kg^-1·d^-1）及模型组;另设8只Wistar大鼠为正常对照组。每周测量1次给药后2,24 h的血压。治疗8周后,用化学发光法检测血浆肾素活性（plasma renin activity,PRA）以及血浆醛固酮（aldosterone,ALD）、血管紧张素Ⅰ（AngiotensinI,AngⅠ）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的含量;用RT-qPCR法检测肾组织内皮素-1（ET-1）、血管紧张素Ⅱ 1型受体（angiotensinⅡ type 1 receptor,AT1R）的mRNA表达。结果 治疗8周,各治疗组给药后2 h的收缩压、舒张压均显著低于模型组（P<0.01）,醇水两提组显著低于水提组、苯磺酸氨氯地平组（P<0.01）;醇水两提组、苯磺酸氨氯地平组给药后24 h的收缩压、舒张压醇均显著低于模型组（P<0.01）;停药3 d时,各治疗组收缩压/舒张压显著低于模型组（P<0.01）,醇水两提组收缩压显著低于水提组、苯磺酸氨氯地平组（P<0.05或P<0.01）;疗程中治疗3~8周醇水两提组给药后2 h的收缩压、舒张压显著低于水提组（P<0.05或P<0.01）,治疗6周和治疗8周醇水两提组给药后2 h的收缩压、舒张压显著低于苯磺酸氨氯地平组（P<0.01）;正常组与模型组以及各治疗组大鼠血浆中AngⅠ、AngⅡ、PRA和ALD的激素含量无显著差异;模型组AT1R、ET-1的mRNA表达高于正常组（P<0.05）,水提组、醇水两提组、苯磺酸氨氯地平组AT1R的mRNA表达显著低于模型组（P<0.05或P<0.01）,水提组ET-1的mRNA表达显著低于模型组（P<0.05或P<0.01）。结论 铁皮石斛不同提取方法的提取物均可显著降低SHR大鼠血压,铁皮石斛醇水两提提取物（0.8 g·kg^-1·d^-1）降压效果优于相同剂量的水提提取物,其降压作用优于苯磺酸氨氯地平（0.5 mg·kg^-1·d^-1）;铁皮石斛醇水两提提取物及水提取物对血浆AngⅡ激素含量没有影响,可能通过下调AngⅡ 1型受体起到调节血压作用。     

铁皮石斛多糖对RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响

目的研究铁皮石斛多糖(polysaccharides from Den-drobium officinale,DOP)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响并探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞活性;ELISA法检测TNF-α的分泌水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-αmRNA表达量;Western blot技术检测胞质I-κBα蛋白的表达量。结果 DOP在20～160mg·L-1范围内明显促进RAW264.7细胞增殖,无细胞毒性;与空白对照组比较,DOP剂量依赖性地促进TNF-α的分泌;上调TNF-αmRNA表达;Western blot结果显示DOP能明显降低胞质内I-κBα蛋白水平。结论 DOP能增强RAW264.7细胞分泌TNF-α,其作用机制可能与降低胞质内I-κBα蛋白水平,活化核转录因子NF-κB,诱导TNF-αmRNA的表达有关。     

Noble dendrobium polysaccharides protects neuron against LPS-induced neurotoxicity in primary rat neuron/microglia culture

OBJECTIVE To investigate the protective effect of Noble dendrobium polysaccharides(NDP) on inflammatory factors,which are produced and released by 1ipopolysaecharide(LPS)-activated rat cerebral microglia,and to explore the protective mechanisms of NDP against LPS-induced neuron damage.METHODS The whole brains of 1 or 2-day-old mice was dissected,and microglia were isolated and cultured.Before exposure to LPS neurotoxicity,cells were treated with NDP(24 h),and the microglia-conditioned medium(MCM) collected.Primary neuronal cultures were supplemented with the 24 h MCM.The morphology and density of neuronal synapses were observed by immunofluorescence;the production of NO was detected with the Griess reagent;the level of tumor necrosis factor-α(TNF-α) was assessed by ELISA;the degree of neuronal apoptosis was examined with Hoechst 33258.RESULTS The hippocampal neurons were apparently damaged by the supernatant of activated MCM,and the morphology of the neurons changed significantly.Compared to control group,the level of NO was elevated and the expression level of TNF-α protein was significantly increased,and the apoptosis was induced in neurons.NDP improved synaptic morphology and increase synapses density,depress the high-level of NO,inhibited the up-expression of TNF-α protein by LPS,and decreased neuronal apoptosis.CONCLUSION NDP may significantly inhibit the activation of microglia induced by LPS and reduce the release of inflammatory factors.These results showed that NDP exert neuroprotection through depressing the actived microglia.     

金钗石斛多糖对髓系白血病细胞WT1基因表达的影响

目的：探讨金钗石斛多糖对髓系白血病细胞 WT1基因表达的影响。方法用 CCK8方法检测金钗石斛多糖在3种白血病细胞中的 IC50值;3种细胞各分两组,对照组和处理组,对照组细胞保持正常生长,处理组给予金钗石斛多糖刺激。Hoechst33258染色检测两组细胞凋亡情况,用 RT-PCR 检测 WT1表达水平,Western blot 检测 WT1、P53和 BAX 蛋白表达。结果金钗石斛多糖在 3种白血病细胞中具有相近的 IC50值,HL-60、WEHI-3、K562细胞的 IC50分别为（110．71±6．49）、（104±48．50）、（96．66±5．10）mg／mL,3种细胞的 IC50值比较,差异无统计学意义（P ＞0．05）;处理组凋亡率高于对照组（P ＜0．05）;与对照组比较,处理组 WT1基因、蛋白表达水平降低（P ＜0．05）,P53和 BAX 蛋白表达增高。结论金钗石斛多糖能明显降低WT1蛋白表达水平,且对白血病细胞有一定杀伤作用。