甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A表达的影响

目的：探讨大剂量甲基强的松龙（MP）对急性脊髓损伤（SCI）大鼠脊髓组织中Nogo-A蛋白表达的影响。方法：将56只成年SD大鼠分为正常对照组（A组,n=8）、急性脊髓损伤组（B组,n=24）和急性脊髓损伤后大剂量MP治疗组（C组,n=24）,C组在损伤后早期从尾静脉注射大剂量MP治疗。分别在术后3、7、14d对B、C组大鼠后肢运动功能行BBB评分,再在各时间点处死动物,取受损节段脊髓行HE染色及免疫组化染色观察形态学变化和Nogo-A在脊髓组织中的分布特点;同时应用Western-blot方法测定各组相应时间点Nogo-A表达量,并与A组比较。结果：B、C组大鼠在损伤后各个时间点后肢运动功能均有一定程度的恢复,Nogo-A蛋白在各组大鼠脊髓组织中均呈阳性表达,分布于神经细胞的细胞浆和脊髓神经纤维周围呈包裹神经纤维的状态。B、C组各个时间点Nogo-A表达均显著高于A组（P〈0.05）,7d时最高,14d时的表达量仍高于正常组;C组在各个时间点的表达量显著低于B组,差异有显著性（P〈0.05）。结论：大鼠急性脊髓损伤后Nogo-A显著升高,早期应用大剂量MP对Nogo-A的表达具有明显的抑制作用。     

缺氧缺血新生鼠脑组织Nogo-A含量变化

目的 探讨Nogo-A在缺氧缺血新生鼠脑组织中含量变化及其意义。方法 将SD大鼠的7日龄新生鼠（n=64）随机分为8组：4个不同时段的缺氧缺血后脑损伤组（HIBD后6h。24h，72h。7d组）和相对时段的假手术对照组，采用Nogo-A（S-19）多克隆抗体免疫组织化学SP法。结果 Nogo-A在HIBD后24h组新生鼠脑组织中含量明显升高达到峰值，72h及7d组降低。与假手术组无统计学差异。结论 Nogo-A在实验性缺氧缺血脑损伤后含量升高，可能抑制了中枢神经系统的再生。     

Nogo-66受体在脂质筏中的定位

目的 探讨Nogo-66受体（NgR）存神经元胞膜脂质筏中的定位。方法 利用免疫荧光双标法检测NgR和脂质筏特异标志物穴蛋白（Cavcolin）在培养的小脑颗粒神经元上的表达．并用Wcstcrn blot法检测以去垢剂法提取的脂质筏中NgR的表达。结果 免疫荧光双标显示NgR和Cavcolin的表达部化．Western blot分析发现脂质筏中NgR的表达为阳性。结论 在小脑颗粒神经元胞膜脂质筏中有NgR的表达．提示脂质筏有可能促进NgR的信号转导。     

血塞通对 MCAO 大鼠不同恢复时间点Nogo-A 蛋白表达的影响

目的：探讨血塞通冻干粉注射液对大鼠局灶性脑缺血模型不同恢复时间点7d，14d，28d大脑皮层的主要抑制因子Nogo-A表达的影响。方法健康雄性SD大鼠，随机分为手术组和非手术组，手术组采用改良Longa方法建立大脑中动脉阻塞（ MCAO）模型，待大鼠术后清醒2h后，进行EZLonga评分，根据评分和体重随机分为血塞通大剂量组（7．2mg／100g）、小剂量组（3．6mg／100g）、尼莫地平组（1．44mg／100g）、模型组（生理盐水），于手术当日开始给药。待7d，14d，28d时，各组取6～8只动物，迅速取脑，于视交叉处将大脑前后分开，前端脑放入10％的甲醛中固定，48h后用PBS将脑组织洗净，石蜡包埋切片，用免疫组织化学染色方法观察不同时间点Nogo-A的表达变化，分别对梗死区、梗死周边区进行平均光密度分析。结果梗死区随着时间的延长，Nogo-A的表达逐渐减弱，在各时间点内，血塞通组和尼莫地平组Nogo-A的表达高于模型组。梗死周边区，模型组Nogo-A的表达趋势是7 d时已经高表达，14 d达到高峰，28 d比14 d略低，但仍保持较高水平，在各时间点，血塞通组比同时间点内的模型组表达低，与模型组差异显著（P＜0．05）。结论血塞通可以保护大鼠梗死区及梗死周边区的神经细胞，可以下调梗死周边区不同恢复时间点Nogo-A的表达。血塞通可能是通过下调Nogo-A的表达来实现大脑神经功能的重塑重建作用。     

定量检测神经生长抑制因子及受体在脑梗死大鼠脑组织中的表达

目的观察神经生长抑制因子(Nogo-A)及其受体(NgR)在脑梗死大鼠不同时间点表达的变化规律。方法将80只SD大鼠制成易脑卒中型肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为脑梗死组和对照组(各40只),脑梗死组大鼠施行右侧大脑中动脉闭塞术,用免疫组织化学法和荧光定量RT-PCR法检测术后第1、2、4和8周脑梗死灶周围Nogo-A及NgR mRNA表达的变化规律。结果免疫组织化学显示脑梗死组Nogo-A和NgR含量在病灶周围先呈逐渐上升趋势,第4周达到高峰,较对照组显著升高(P<0.05),Nogo-A在第8周降低,与对照组无显著性差异(P>0.05);而NgR略微下降,但仍高于对照组(P<0.01)。荧光定量RT-PCR显示脑梗死组Nogo-A与NgRmRNA表达均先上升,在第4周达到高峰,与对照组差异有显著性意义(P<0.01),第8周Nogo-A mRNA表达下降仍高于对照组(P<0.01);NgR mRNA表达在第8周时与对照组无显著性差异(P>0.05)。结论脑梗死损伤可使梗死灶周围组织中Nogo-A及NgR表达增加,可能与脑梗死后神经再生障碍有关。     

三维球体间充质干细胞移植对大鼠缺血再灌注损伤脑组织Nogo-A及NgR表达的影响

目的 探讨胎盘来源间充质干细胞移植对脑缺血再灌注后大鼠脑组织Nogo—A及其受体NgR的mRNA及蛋白表达的影响及意义。方法 实验动物随机分为假手术组(Sham组)及模型组,模型组再分为治疗组(MSCs组)以及溶剂对照组(Vehicle组),应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,缺血2h后拔除鱼线再灌注,1d后MSCs组注射间充质干细胞,Vehicle组注射等量培养基溶液,移植后1d,3d,7d应用RT-PCR法检测mRNA表达水平;Western blot法检测蛋白表达水平。结果 与Vehicle组相比,MSCs组大鼠7d神经运动功能有明显改善(P<0.05);MSCs组1,3,7dmRNA及蛋白水平均较Vehicle组降低(P<0.05)。结论 胎盘间充质干细胞移植可以改善脑缺血再灌注后神经运动功能,其机制可能与下调脑组织Nogo—A及其受体NgR水平有关。     

Impacts of Rho kinase inhibitor Fasudil on Rho/ROCK signaling pathway in rabbits with optic nerve injury

Objective: The aim of this study was to study the impacts of Rho kinase inhibitor Fasudil on expressions of Rho/ROCK signaling pathway associated genes in rabbits with optic nerve injury (ONI), and to explore the therapeutic mechanisms towards ONI. Methods: The rabbit ONI model was established, then the rabbits were divided into model group (treated with saline), control group (treated with dexamethasone, Dex), and intervention group (treated with Fasudil, Fas). The eyeball and optic nerve were sampled at 3, 7, 14 and 21 days after injury. The morphological changes of retina and optic nerve were observed. The expressions of RhoA, Caspase-3, Rock 2 and Nogo-A gene were determined by immunohistochemistry and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) methods. Results: At different time after injury, there were significant differences of RhoA, Caspase-3, Rock 2 and Nogo-A gene expression among three groups (P < 0.05). Conclusions: After ONI, Fas can decrease the expression of Caspase-3 gene, and down-regulate the expressions of Nogo-A and Rock 2 gene. Therefore, it can treat ONI through affecting the Rho/ROCK signaling pathway.     

高压氧治疗对慢性脑缺血大鼠认知功能的影响及其作用机制

目的 探讨高压氧（hyperbaric oxygen,HBO）治疗对慢性脑缺血（chronic cerebral ischemia,CCI）大鼠 学习记忆能力的影响及其作用机制。 方法 选取240只雄性SD大鼠随机分为假手术组、CCI组和HBO组,每组80只。采用双侧颈总动脉阻 断法建立CCI模型,HBO组建模12 h后开始进行HBO治疗28 d,压力0.2 MPa,每日1次,每次60 mi n。采用 Morri s水迷宫实验评估7、14、21、28 d大鼠的学习记忆能力,每个时间点20只,检测前均进行3 d训练, 记录各组大鼠的逃避潜伏时间、穿越平台次数。28 d后处死大鼠取海马组织进行HE染色评估神经元 损伤病理变化,RT-PCR法检测Nogo-A mRNA,Western blot法检测Nogo-A蛋白的表达水平。 结果 ①与假手术组比较,CCI 组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均延长（均P＜0.05）,28 d跨越平台次 数减少（P＜0.05）;与CCI 组比较,HBO组7、14、21、28 d逃避潜伏时间均缩短（均P＜0.05）,28 d跨越 平台次数增加（P＜0.05）。②HE染色显示HBO组神经元损伤程度较CCI组减轻;③CCI组Nogo-A mRNA 和Nogo-A蛋白表达水平均较假手术组升高（均P＜0.05）,HBO组表达水平均较CCI组下降（P＜0.05）。 结论 HBO治疗可改善慢性脑缺血大鼠认知功能,其机制可能与下调海马组织中Nogo-A的表达水平 有关。     

RNA干扰抑制Nogo-A基因表达对PC12细胞多巴胺释放的影响

目的 研究Nogo-A基因沉默对PC12细胞多巴胺释放的影响.方法 构建靶向Nogo-A的短发夹样RNA(shRNA)真核表达载体,并经脂质体转染PC12细胞,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法检测对Nogo-A mRNA及蛋白的抑制效应.采用高效液相色谱仪(HPLC)检测转染前后多巴胺释放的变化.结果 将重组质粒转染到PC12细胞48h后,Nogo-A基因表达明显受抑、多巴胺释放量减少.结论 Nogo-A可能参与PC12细胞多巴胺的释放.     

Nogo—A及NgR在墨西哥钝口螈脑组织中的表达及意义

目的探讨勿动蛋白A（Nogo．A）及勿动蛋白受体（NgR）在正常墨西哥钝VI螈及其中脑胆碱能神经元损伤后脑组织中的表达。方法以正常墨西哥钝口螈脑组织和中脑胆碱能神经元损伤后第3、7、14、21天脑组织作为研究对象,采用免疫荧光技术观察正常墨西哥钝口螈脑组织中Nogo—A及NgR的表达;分别用荧光定量PCR和蛋白质印迹法（WB法）检测正常墨西哥钝口螈和损伤组脑组织中Nogo—A及NgR的mRNA含量和蛋白含量的变化。结果正常墨西哥钝口螈脑组织中存在Nogo．A及NgR的表达,在墨西哥钝口螈中脑胆碱能神经元损伤后（注入AF64A）第3天,中脑乙酰胆碱转移酶（CHAT）阳性细胞数明显减少,与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．01）,损伤后第7、14、21天均有ChAT、5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）双阳性细胞,且随时间的延长而增加。中脑胆碱能神经元损伤后第3、7、14、21天脑组织中,Nogo．A的mRNA和蛋白水平的表达量与正常组比较差异均无统计学意义;而NgR的mRNA和蛋白水平的表达量均下降,与正常组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论中枢神经系统损伤后的再生可能与NgR表达量的下降有关。