家兔颈动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞表型转化及p38的表达变化

目的观察动脉内膜损伤后血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化及其与p38表达的关系。方法分别用HE染色、免疫组化和免疫印迹(W estern b lot)方法检测家兔假损伤组(S组)和损伤组损伤后不同时间点血管形态学改变及血管壁中增殖细胞核抗原(PCNA)、平滑肌α肌动蛋白(SMα-actin)和p38蛋白表达的变化。结果⑴内膜损伤后1 d血管中膜管腔侧、3 d管腔内表面可见增殖的VSMC,5~7 d新生内膜(NI)形成并逐渐增厚,14~35 d NI进行性增厚。各组中膜均有增殖的VSMC向腔面集聚。⑵S组动脉中膜VSMC及内皮细胞PCNA为阴性。中膜于损伤后1~14 d,NI于5~14 d PCNA阳性细胞率逐渐增加,14 d达高峰,28 d后开始逐渐减少,且NI阳性率略高于中膜。⑶S组动脉中膜SMα-actin表达为阳性,内皮细胞为阴性。SMα-actin阳性面积于损伤后1 d开始减少,3 d最为明显,5 d后开始逐渐增加,NI阳性表达略低于中膜。⑷S组动脉中膜p38较少或无表达,损伤后1~35 d呈持续高表达,以3~14 d最为明显,NI阳性表达略高于中膜。损伤后p38表达变化与PCNA表达变化呈正相关,且早于SMα-actin表达减少。结论内膜损伤后VSMC增殖能力与其表型转化密切相关,p38参与了损伤后VSMC表型转化的信号转导。     

巨细胞病毒感染细胞内微丝骨架重组异常

目的:探讨巨细胞病毒(CMV)感染对人胚成纤维细胞(HF)微丝骨架影响及与病毒复制状态的可能关系。方法:显微镜观察细胞形态;W estern-b lot法分别检测细胞内β型肌动蛋白(β-actin)、球状肌动蛋白(G-actin)和纤维形肌动蛋白(F-actin)的含量;间接免疫荧光标记病毒即刻早期抗原(IE);微丝骨架探针观察HF细胞内感染状况及微丝骨架变化。结果:HF细胞CMV感染率大于95%,IE抗原主要位于细胞核。受染细胞变粗、变圆,甚至脱壁,呈时间依赖性。与未感染组相比,CMV感染后细胞内β-actin蛋白质含量有所下降,但无显著性差异(P>0.05);G-actin水平在感染24 h后增加(0.941±0.061 vs 0.714±0.119,P<0.05),但在感染后72 h、96 h却下降(0.218±0.035、0.230±0.055 vs 0.714±0.119,P<0.05);F-actin水平在感染后24 h、72 h、96 h呈渐进性下降(0.256±0.021、0.127±0.032、0.026±0.008 vs 0.373±0.050,P<0.05)。受染细胞内微丝排列紊乱,极性消失;细胞融合,荧光强度明显减弱。结论:CMV引起HF细胞内肌动蛋白质、微丝骨架形态及重组异常,可能有助于其侵袭宿主细胞并进一步活化及复制。     

低氧对心脏成纤维细胞增殖细胞核抗原表达与表型的影响

目的:观察不同程度低氧对乳鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖细胞核抗原(PCNA)表达与表型的影响。方法:分离、纯化、培养乳鼠CFs, 随机分为3组:对照组、中度低氧组和重度低氧组, 以四唑盐(MTT)比色法检测细胞的增殖情况, 采用免疫组织化学的方法检测PCNA的表达情况, 电镜观察细胞的超微结构, 并采用激光共聚焦显微镜检测各组细胞内α-actin的表达情况。结果:中度低氧组MTT的490nm吸光度值(A_490nm)较对照组增加(18.4±25.0)%(P＜0.05), 而重度低氧组A490nm值较对照组降低(15.8±25.0)%(P＜0.05)。免疫组化结果显示:对照组CFs的PCNA有一定的基础表达, 核内阳性反应颗粒较少, 染色强度为(92.2±9.1)%AU, 中度低氧组CFs的PCNA染色强阳性, 可见密集的阳性反应颗粒, 染色强度为(128.0±11.4)%AU(P＜0.05vs对照组), 重度低氧组CFs核内无明显的阳性反应颗粒, 染色强度为(89.9±8.4)%AU。透射电镜下, 正常组CFs呈梭形, 胞浆内有丰富的粗面内质网和高尔基复合体, 线粒体和微丝的含量较少, 无基膜存在, 呈典型的成纤维细胞表型。中度低氧刺激72h, CFs粗面内质网明显减少, 胞浆内出现大量的微丝, 以质膜下分布最多, 呈现肌成纤维细胞表型。重度低氧组CFs内仅有少量的微丝。激光共聚焦显微镜显示, 对照组CFs内无明显的α-actin表达, 平均荧光值为1119.31±112.24。中度低氧组细胞内出现大量规则排列的成束的微丝, α-actin表达显著增加, 平均荧光值为1638.37±173.42(P＜0.05vs对照组)。重度低氧组细胞内α-actin表达较少, 平均荧光值为1227.52±228.33, 与对照组无显著差异。结论:中度低氧可使乳鼠CFsPCNA表达增加, 并且出现肌成纤维细胞的表型特点, 而重度低氧无此作用, 其具体机制尚待进一步研究。     

女贞子乙醇提取物及酪醇对人表皮黑素细胞黏附和迁移的影响

目的 探讨女贞子乙醇提取物及其单体酪醇对人表皮黑素细胞黏附和迁移的调节作用。方法 体外分离培养人表皮黑素细胞,XTT法测定细胞增殖情况,用经FN包被的培养板测定细胞黏附率,Transwell微孔膜法观测细胞迁移情况,激光共聚焦显微镜观察经中药处理的细胞内肌动蛋白细胞骨架的结构分布,半定量分析细胞内荧光强度。结果 0.0375 ～ 0.6 mg/ml女贞子乙醇提取物均可促进黑素细胞在FN上的黏附（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）;0.5 ～ 2 mmol/L酪醇可促进黑素细胞黏附（P ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。0.15 mg/ml女贞子乙醇提取物及2 mmol/L酪醇无明显细胞毒性,在24 h时不明显促进细胞增殖,选择此浓度为工作浓度,女贞子乙醇提取物及酪醇穿过微孔滤膜的黑素细胞数分别为43.7和51.0个,显著高于对照组的20.3 个（P ＜ 0.01）;两种药物工作浓度作用的黑素细胞与对照组相比,胞内可见较多呈束状的应力纤维,并集中分布于细胞膜内侧和细胞核周围,胞内荧光强度均高于对照组（P ＜ 0.01）。结论 女贞子乙醇提取物及其单体酪醇在体外可促进黑素细胞的黏附及迁移,其机制可能与诱导黑素细胞内肌动蛋白细胞骨架的聚合有关。     

病毒性脑炎患者BDVp24、p40基因片段的核酸检测

目的分别检测病毒性脑炎患者脑脊液有核细胞（CSFMCs）中博尔纳病病毒（BDV）p24、p40基因片段,探讨病毒性脑炎患者与BDV感染的关系及阳性患者的临床特征。方法用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应（FQ—nRT—PCR）方法检测病毒性脑炎患者及对照者CSFMCs中BDVp24、p40基因片段,将两个保守区p24和p40检测均为阳性的标本再做进一步分析,并总结阳性患者的临床特征,同时用β-肌动蛋白（B—actin）作为内参照。结果实验组102例病毒性脑炎患者CSFMCs中BDVp24基因片段检测中有11例阳性,BDVp40基因片段检测中有10例阳性,两个保守区p24和p40检测均为阳性标本10例,对照组84例中均为阴性,两者比较阳性率差异有统计学意义（P〈0．05）。阳性基因片段产物测序后与BDV标准病毒株V和马源的BDV病毒株H1766序列比较,同源性分别为96．35％和98．85％,在4个位点出现基因突变（nt1649T→C,nt1656G→A,nt1670C→T,nt1676C→T）;8例阳性患者主要以精神行为异常为起病方式,患者与动物关系密切,其他临床特征无特殊。结论病毒性脑炎的发生与BDV感染有关,主要以精神行为异常为临床特征。     

谷氨酰胺对内毒素血症幼年大鼠心肌肌动蛋白及其mRNA表达的影响

目的通过观察谷氨酰胺（glutamine,Gln）对内毒素血症幼年大鼠心肌肌动蛋白（alpha sarcomeric actin,α-SA）及其mRNA表达的影响,探讨Gln在大鼠内毒素血症中对心肌收缩功能的保护作用。方法选健康18日龄Wistar大鼠121只,按腹腔注射药物不同分为：0h对照组（Ctrl：生理盐水,n=11）,内毒素组（LPS,n=55）、谷氨酰胺组（Gln,n=55）;后两组又分为2．4、6、24及72h共5个时点,每个时点11只,在各指定时点分别将大鼠断头分离心脏,8只用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定α-SA mRNA表达,另3只左心室肌用甲醛固定,制成石蜡切片,用免疫组化方法测定α-SA蛋白质表达。结果（1）内毒素血症大鼠心肌α-SA及其mRNA与对照组相比较均有显著下降（P〈0．01）,LPS组在6～24h降至最低;而Gln组则延至24h为最低,72hGln组α-SA已与对照组差异不明显（P〉0．05）。（2）LPS与Gln组同一时点相比较,Gln组α—SA各时点均高于LPS组,而α-SA mRNA在4～72h高于LPS组,早期相差不明显（P〉0．05）。结论（1）α-SA及其mRNA表达在内毒素血症明显受到抑制,收缩蛋白合成减少,而非破坏增加,心肌收缩功能受损。（2）谷氨酰胺可以减轻LPS对α-SA及其mRNA表达的抑制作用,而且恢复较快。     

内皮细胞白细胞黏附分子-1对猪眼小梁细胞形态和细胞骨架的作用

目的研究内皮细胞白细胞黏附分子-1(ELAM-1)对猪眼小梁细胞形态和肌动蛋白细胞骨架的作用,探讨青光眼的发病机制。方法原代培养的猪眼小梁细胞,经白细胞介素1(IL-1)刺激活化后,结合ELAM-1抗体或IgG进一步交联,观察细胞形态、细胞间连接的动态改变及肌动蛋白和细胞厚度的改变。结果未经IL-1作用的猪眼小梁细胞不表达ELAM-1,IL-1作用后猪眼小梁细胞表达ELAM-1。经过IL-1活化的猪眼小梁细胞,结合ELAM-1抗体或IgG进一步交联后,细胞间隙扩大,细胞变圆、变厚,细胞立体感增强;肌动蛋白变稀疏,荧光弥散,细胞的刚性降低,细胞厚度增加。结论猪眼小梁细胞能表达ELAM-1,表达的ELAM-1通过与抗体结合或同时通过IgG交联影响肌动蛋白细胞骨架,改变细胞形态。     

α-平滑肌肌动蛋白在臀肌挛缩症中的表达及意义

目的:观察α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)在臀肌挛缩症的表达、分布.方法:利用免疫组化染色辅以计算机图像定量分析技术,对26例臀肌挛缩症及12例正常臀肌标本α-平滑肌肌动蛋白的表达进行检测.结果:α-SMA在对照组中未见明显表达.12例臀肌挛缩症组织中α-SMA染色阳性,14例臀肌挛缩组织中染色阴性,病变组与对照组比较差异有显著性(P＜0.001);7岁以上组臀肌挛缩症组织α-SMA表达明显减弱,与7岁以下组臀肌挛缩症组织(包括7岁)比较差异有显著性(t=2.364,P=0.028).结论:①肌纤维母细胞是臀肌挛缩症发病的关键病理因素;②臀肌挛缩症中肌纤维母细胞的表达强度与病程有关,7岁以上组病程较长,表达明显减弱,这给临床治疗提供了新思路.     

电离辐射对血管内皮细胞增殖和纤维肌动蛋白的影响

【目的】观察电离辐射对血管内皮细胞增殖和纤维肌动蛋白（F‐actin ）的影响,为探索颌骨放射损伤机制及其预防和治疗提供参考。【方法】对人脐静脉血管内皮细胞株分别予以0 Gy、4 Gy、8 Gy、12 Gy、16 Gy剂量单次照射,照射后立即转入37℃培养箱继续培养12 h、24 h、48 h ,采用酶联免疫检测仪检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞F‐actin的含量。【结果】不同剂量单次照射各组照射后细胞生长速度明显减慢,且与剂量呈负相关,剂量高于12 Gy时细胞生长几乎完全抑制;同时,细胞F‐actin的含量急剧下降,且呈剂量和时间依赖关系。24 h后F‐actin有所回升,但仍明显低于辐射前。【结论】电离辐射可降低血管内皮细胞中的F‐actin ,破坏细胞骨架,抑制细胞的增殖。