肝细胞癌中miR-942-5p的表达及其与患者恶性特征及不良预后的关系

目的:探讨微小RNA-942-5p(miR-942-5p)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其功能。方法:用实时定量PCR检测西安交通大学第一附属医院样本库保存的73例HCC组织和对应癌旁组织中miR-942-5p的表达。分析miR-942-5p表达与HCC患者临床病理资料的关系,同时分析TCGA数据库中miR-942-5p表达与HCC患者总生存率的关系。Transwell小室检测干扰miR-942-5p表达后HCC细胞迁移和侵袭能力的变化,StarBase V3.0网站和荧光素酶报告基因质粒预测分析miR-942-5p的下游靶点,并用Western blot验证。结果:miR-942-5p表达量在HCC组织中明显高于对应癌旁组织(2.390 vs. 1.764,P0.05)。miR-942-5p表达量与HCC患者肿瘤数目、血管浸润和临床分期明显有关(均P0.05)。miR-942-5p高表达HCC患者总生存率明显低于miR-942-5p低表达HCC患者(19.535%vs. 53.873%,P0.05)。沉默miR-942-5p表达后,肝癌HCCLM3和MHCC97H细胞迁移和侵袭能力明显减弱(均P0.05)。预测与分析结果显示,扣针蛋白5(FBLN5)是miR-942-5p的直接下游靶点(P0.05),沉默miR-942-5p表达导致HCCLM3和MHCC97H细胞中FBLN5表达增加。结论:miR-942-5p在HCC组织中表达异常升高并与恶性临床特征和不良预后密切相关,机制可能与miR-942-5p抑制FBLN5表达促进HCC细胞迁移和侵袭有关。     

CCR1趋化因子受体在人肝癌组织中表达及其临床意义

目的了解CCRl趋化因子受体在人肝癌组织中表达分布情况，探讨其表达水平与临床病理特性的关系。方法采用RT-PCR、免疫组化、Western blot技术检测45例肝癌组织及相应癌旁肝组织CCRl趋化因子受体表达及分布情况，并分析其表达水平与临床病理特性的关系。结果RT-PCR、Western blot在肝癌组织及相应癌旁肝组织中均可以检测到CCR1趋化因子受体mRNA及蛋白，肝癌组织表达水平高于癌旁肝组织。免疫组化显示CCR1趋化因子受体主要表达于肝癌细胞膜。CCR1mRNA表达水平与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、分期无明显相关性，而与肿瘤是否有包膜（t=2．305，P〈0．05）、门静脉浸润显著相关（t=3．004，P〈0．01）。无门静脉浸润的肝癌组织中，47．4％免疫组化染色强度为＋＋～＋＋＋，而有门静脉浸润的肝癌组织中，80．8％染色强度为＋＋～＋＋＋，两者比较差异具有显著意义（X^2=5．511，P〈0．05）。结论肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其表达水平与肝癌侵袭性尤其是门静脉浸润相关，有望成为判断肝癌侵袭性及预后的指标。     

MMP-2、TIMP-2在脑胶质瘤中的表达及其意义

目的 分析MMP-2、TIMP-2的表达与脑胶质瘤恶性程度和侵袭性之间的关系。方法 采用免疫组化和原位杂交的方法,检测42例人脑胶质瘤和8例正常脑组织中,MMP-2 mRNA、MMP-2和TIMP-2蛋白表达。结果 MMP-2蛋白表达水平(LI)与肿瘤的分级呈正相关(r=0.872,P<0.01);Ⅲ、Ⅳ级与正常脑组织、Ⅰ～Ⅱ级之间均有显著的差异(P<0.01)。MMP-2mRNA表达与肿瘤的分级同样呈正相关(P<0.01);Ⅲ、Ⅳ级与正常脑组织、Ⅰ～Ⅱ级之间均有显著的差异(P<0.01)。MMP-2蛋白表达增高时TIMP-2蛋白表达也增高;但随着肿瘤恶性程度的增加,TIMP-2表达强度增加的幅度较MMP-2明显减缓。结论 MMP-2的高表达与脑胶质瘤恶性程度呈正相关;TIMP-2与MMP-2间的平衡失调与脑胶质瘤的侵袭性和恶性程度密切相关。     

三阴性乳腺癌细胞脂肪非典型钙黏蛋白4表达下调的生物学作用及机制

背景与目的 三阴性乳腺癌（TNBC）容易发生侵袭转移,恶性程度极高。笔者团队前期研究发现脂肪非典型钙黏蛋白4（FAT4）在TNBC组织中呈低表达且与预后相关,进而本研究进一步探讨FAT4对TNBC细胞生物学行为的影响,及其相关机制。方法 用qRT-PCR及Western blot检测正常人乳腺上皮细胞系（MCF-10A）及不同TNBC细胞系（BT-549、MDA-MB-231、MDA-MB-468、MDA-MB-436）中FAT4的表达水平。选择其中合适的TNBC细胞系,分别转染FAT4-shRNA（FAT4敲低组）、阴性对照序列（阴性对照组）,以未处理的TNBC细胞为空白对照组,分别采用CCK-8实验、流式细胞术、Transwell小室实验检测细胞增殖能力、凋亡率、侵袭与转移能力的变化,并用Western blot检细胞中Hippo信号通路下游靶点YAP及上皮间质转化（EMT）相关蛋白的变化。结果 与正常人乳腺上皮细胞比较,各TNBC细胞系中FAT4的mRNA与蛋白表达量均不同程度的降低（均P<0.05）。功能实验选用BT-549细胞和MDA-MB-436细胞。无论在BT-549细胞或MDA-MB-436细胞中,与空白对照组比较,FAT4敲低组在转染后24、48、72 h的增殖能力均明显升高、凋亡率明显降低、侵袭与转移能力明显增强（均P<0.05）;YAP蛋白表达量无明显变化（P>0.05）,但磷酸化YAP（p-YAP）表达量明显降低,上皮标志物E-cadherin水平明显降低,而间质标志物N-cadherin水平明显升高（均P<0.05）;阴性对照组与空白对照组间以上指标差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 FAT4表达水平在TNBC细胞中普遍降低,FAT4表达的降低能增强TNBC细胞增殖和侵袭迁移能力、减少TNBC细胞凋亡,其机制可能与FAT4降低后Hippo信号通路下游的YAP蛋白磷酸化减少,从而促进EMT进程有关。     

MMP-2与TIMP-2在神经胶质瘤侵袭中的作用及其意义

目的分析MMP-2、TIMP-2的表达与神经胶质瘤恶性程度和侵袭性之间的关系。方法采用免疫组化S-P法,测定76例不同级别神经胶质瘤和10例正常脑组织中,MMP-2和TIMP-2蛋白表达。结果MMP-2蛋白表达水平与神经胶质瘤的恶性程度呈正相关系(P<0.01);在神经胶质瘤中MMP-2与TIMP-2蛋白表达水平之间呈明显的负相关系。结论MMP-2的表达与神经胶质瘤的恶性程度正相关系;MMP-2与TIMP-2之间的平衡失调与神经胶质瘤的恶性程度和侵袭性密切相关,两者之间协同作用在神经胶质瘤的侵袭中有重要的意义。     

NS-398对HGF诱导的肝癌细胞株MMP-7,MMP-9,TIMP-1表达的影响

目的:研究选择性COX-2抑制剂NS-398对肝癌细胞株MMP和TIMP表达的影响,探讨选择性COX-2抑制剂降低肿瘤细胞侵袭力的机制．方法:以不同浓度的NS-398(0,20,40,60, 80μmol/L)作用于HGF诱导的HepG2细胞,免疫组化法观察细胞中MMP-7,MMP-9,TIMP-1的蛋白质表达,ELISA法检测细胞外培养液中MMP-7,MMP-9,TIMP-1的含量,RT-PCR法分析3种蛋白酶的mRNA转录水平．结果:NS-398作用细胞48 h后,发现MMP-7, MMP-9,TIMP-1的蛋白质表达程度均下降, NS-398作用于HepG2细胞后,MMP-7在培养液中的含量和其在细胞内的mRNA相对水平分别为8．2±0．6,5．8±0．8,4．3±0．8,2．7±0．4, 1．7±0．4μg／L和0．58±0．06,0．42±0．03,0.37±0．01,0．36±0．01,0．33±0．01:MMP-9在培养液中未检出,其细胞内mRNA相对水平分别为0．32±0．02,0．23±0．02,0．21±0．01,0．17±0．01,0．13±0．01;TIMP-1在培养液中的含量和其在细胞内的mRNA相对水平分别为39．0±0．9,29．5±2．8,25．0±0．9,16．8±0．4,11．8±0．3μg/L和0．19±0．02,0．17±0．02,0．16±0．01, 0．13±0．01．0．结论:选择性COX-2抑制剂能够抑制MMP和TIMP基因转录,使TIMP/MMP比例失衡,这可能是其降低肿瘤细胞侵袭力的机制之一．     

CDH17对胃癌细胞侵袭性的影响及其机制

目的:探讨CDH17在胃癌细胞中的表达及其对胃癌侵袭性的影响。方法:分别用Transwell侵袭实验、免疫荧光染色及Western blot法检测正常胃黏膜GES-1细胞和胃癌MGC803细胞与BGC823细胞的侵袭力与CDH17、上皮标志物E-cadherin、间质标志物N-cadherin的表达,以及两种胃癌细胞转染CDH17si RNA后以上指标的变化。结果:正常胃黏膜GES-1细胞无穿膜细胞、无CDH17与N-cadherin表达,而有明显的E-cadherin表达;与GES-1细胞比较,两种胃癌细胞均有明显的穿膜细胞及明显的CDH17与N-cadherin表达,而E-cadherin呈低表达(均P0.05),且高侵袭力的MGC803细胞上述变化较低侵袭力的BGC823细胞更为明显;两种胃癌细胞转染CDH17si RNA后,上述指标变化较转染前明显抑制(均P0.05),且在两种细胞间的差异缩小(均P0.05)。结论:CDH17高表达可能通过上皮间质转化促进胃癌细胞系侵袭性。     

百里醌抑制人胰腺癌BxPC-3细胞体外运动和侵袭的研究

背景:胰腺癌是恶性程度最高的消化道肿瘤,目前吉西他滨依赖的化疗对抑制胰腺癌转移的治疗效果欠佳。研究发现百里醌对多种肿瘤细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用。目的:探讨百里醌对人胰腺癌BxP C-3细胞体外运动和侵袭的影响及其作用机制。方法:常规培养人胰腺癌细胞株BxP C-3,加入不同浓度百里醌进行处理。采用Boyden小室法检测细胞体外运动、侵袭情况;蛋白质印迹法检测细胞FAK、Akt蛋白表达和Akt磷酸化水平的改变;免疫荧光技术检测细胞内FAK表达、细胞黏着斑和F-actin的变化。结果:10、25μmol/L百里醌对BxP C-3细胞体外运动的抑制率分别为43.4%、73.8%,对体外侵袭的抑制率分别为60.5%、75.6%,百里醌呈浓度依赖性地抑制胰腺癌BxP C-3细胞的体外运动、侵袭(P0.05)。百里醌能明显下调BxP C-3细胞FAK表达,并抑制细胞磷酸化Akt的激活。百里醌可诱导FAK弥散分布于胞质,明显抑制黏着斑形成和F-actin的聚合集化。结论:百里醌通过抑制FAK/PI3K/Akt通路的信号转导和激酶活性,浓度依赖性地抑制人胰腺癌BxP C-3细胞的体外运动和侵袭。     

白细胞介素6促胆囊癌细胞增殖、侵袭与JAK/STAT3信号通路的关系

目的:探讨炎症因子白细胞介素6(IL-6)对胆囊癌细胞生物学行为的影响及其与JAK/STAT3信号通路的关系.方法:将胆囊癌细胞株GBC-SD用IL-6或IL-6+AG490(JAK/STAT3通路抑制剂)作用后,分别用MTT法检测增殖情况;Transwell法检测侵袭能力;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)活性;Western blot法检测磷酸化STAT3(p-STAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白的表达.结果:IL-6(10,50,100 ng/mL)作用后,GBC-SD细胞增殖呈浓度依赖性增加(均P＜0.05),AG490能取消IL-6对细胞增殖的促进作用.IL-6作用GBC-SD细胞后,细胞侵袭能力及MMP-9的分泌明显增加(均P＜0.05),细胞p-STAT3和VEGF的表达明显上调,加入AG490后,以上作用均被取消.结论:IL-6能促进胆囊癌细胞的增殖通和侵袭,其作用可能与其活化JAK/STAT3信号通路,从而上调下游的MMP-9和VEGF的表达有关.     

长链非编码RNA MCM3AP-AS1在胆管癌细胞中的表达及其功能

背景与目的 长链非编码RNA MCM3AP-AS1（MCM3AP-AS1）在原发性肝癌、乳腺癌及胶质母细胞瘤等多种肿瘤中发挥癌基因功能,然而MCM3AP-AS1在胆管癌中的表达、功能及作用机制尚知之甚少。因此,本研究观察MCM3AP-AS1在胆管癌细胞中的表达及其对细胞增殖和侵袭的影响,并初步探讨机制。方法 采用qRT-PCR法检测胆管癌细胞株（CCLP、RBE、9810、HuCCT1）及人肝内胆管上皮细胞株（HIBEC）中MCM3AP-AS1的表达。将胆管癌细胞转染MCM3AP-AS1 siRNA后,以转染无义序列的胆管癌细胞为阴性对照,分别用MTT实验和Transwell实验检测细胞增殖与侵袭能力的变化,用Western blot法检测JAK/STAT3信号通路与上皮间质转化（EMT）相关蛋白表达的变化;最后,用JAK/STAT3通路激动剂白血病抑制因子（LIF）行功能拯救实验验证。结果 所有胆管癌细胞系中MCM3AP-AS1表达量均明显高于HIBEC（均P<0.05）。与阴性对照组比较,CCLP细胞转染MCM3AP-AS1 siRNA后增殖能力与侵袭能力均明显减弱（均P<0.05）;JAK1/2与STAT3表达量无明显变化（均P>0.05）,但p-JAK1/2与p-STAT3表达量明显降低（均P<0.05）,同时,EMT相关蛋白E-cadherin表达升高、vimentin表达降低（均P<0.05）。功能拯救实验结果显示,同时加入LIF后,MCM3AP-AS1沉默对CCLP细胞后的以上作用均被取消,与阴性对照组间差异均无统计学意义（均P>0.05）。结论 胆管癌细胞中MCM3AP-AS1表达上调,MCM3AP-AS1可能通过活化JAK/STAT3通路与EMT过程而促进胆管癌细胞增殖和侵袭。