抗原表位定向选择的人源抗TNF-αFab的鉴定

目的对通过抗原表位定向选择技术（ＥＧＳ）所筛选到的２株人源化ＴＮＦ－α抗体Ｆａｂ段进行分析鉴定。方法测定可变区基因的序列,用亲本鼠单抗Ｚ８进行竞争ＥＬＩＳＡ,用Ｌ９２９细胞检测其体外中和ＴＮＦ－α的活性,并用硫氰酸铵洗脱法比较与亲本鼠单抗的亲和力。结果基因测序表明２株抗体ＶＨ相同,属人ＶＨⅠ亚群;Ｖκ分别属人ＶκⅠ、ＶκⅢ亚群;竞争抑制实验表明所获人源抗体片段与亲本鼠源抗体是针对ＴＮＦ－α的同一抗原表位;体外中和实验证明此抗体片段能中和ＴＮＦ－α对Ｌ９２９细胞的毒性;该抗体片段的亲和力略低于原鼠单抗Ｚ８。结论用ＥＧＳ方法获得的人源抗体片段基本保持了原鼠单克隆抗体Ｚ８的特性     

抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达

为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。     

抗胃癌鼠单抗3H11 Fab段载体的构建、表达及抗体活性检测

目的 构建和表达抗胃癌鼠单抗３Ｈ１１的Ｆａｂ段小分子抗体。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,利用第一骨架区通用引物扩增重链Ｆｄ段和ｋ链的基因,克隆到Ｆａｂ表达载体中,并根据已克隆的３Ｈ１１ ＶＬ的真实序列,重建设计ｋ链５‘端引物,将骨架区引物在ｋ链５’端所造成的氨基酸残基改变纠正为原始序列,再次构建Ｆａｂ表达载体。结果 利用第一骨架区通用引物构建的Ｆａｂ在大肠杆菌中获得表达但未检测到抗原结合活性,将骨架     

新一代测序技术在抗癌药物精准治疗中的研究现状

新一代测序技术的迅猛发展为个性化医学提供前所未有的潜力,生物医学和癌症基因组学在大数据时代也随之发生巨大的变革.随着生物科学技术和计算机处理数据能力的不断提高,高通量测序在多组学生物数据的获取和挖掘中发挥了关键作用.如今,它已经成为了生物学家进行科学研究不可或缺的工具,并在抗癌药物精准治疗领域做出了重要贡献.该文将针对...     

生物信息学共表达外推法初构食管癌精准化疗生物标志物模型

目的：用生物信息学共表达外推（以下简称生信COXEN）法初步构建食管癌精准化疗药物（5-氟尿嘧啶、紫杉醇和顺铂）生物标志物模型。方法：本研究使用5种统计学方法（Pearson相关分析、Spearman相关分析、Welch's t-test、ANCOVA和rank-based ANCOVA）从NCI-60数据库筛选药物敏感性基因,通过COXEN筛选食管鳞状细胞癌患者化疗药物敏感性的生物标志物。利用在线数据库DAVID进行KEGG通路富集分析。结果：筛选出可应用于预测人类食管鳞状细胞癌化疗药物敏感性的生物标志物：5-氟尿嘧啶的生物标志物主要富集在细胞周期G1期和S期（RNA和核糖体的合成、DNA复制）中;顺铂的生物标志物主要与蛋白聚糖、细菌侵袭上皮细胞和白细胞跨内皮迁移有关;紫杉醇的生物标志物主要与局部黏附、小细胞肺癌和HTLV-I感染通路有关。结论：生信COXEN法筛选出可应用于预测人类食管鳞状细胞癌单个化疗药物敏感性的基因,能为将来构建更有转化应用价值的多组合化疗方案预测模型提供研究基础。     

紫外线照射清除聚合酶链反应的污染

紫外线照射清除聚合酶链反应的污染王卓智王琰李振甫董志伟聚合酶链反应（ＰＣＲ）用于临床检测肿瘤、病毒、支原体、衣原体和细菌，具有极高的灵敏度，但ＰＣＲ扩增体系又很容易被污染，产生假阳性。利用紫外线照射可以清除ＰＣＲ污染，其原理是紫外线能诱导ＤＮＡ上相邻...     

TNF-α单抗Fab段基因的克隆及其在大肠杆菌的表达

目的进行ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ段基因的克隆并在大肠杆菌中表达。方法用逆转录－聚合酶链反应技术（ＲＴ－ＰＣＲ）从分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆重链Ｆｄ段和κ链基因；并用ＥＬＩＳＡ和免疫印迹分析证明表达的Ｆａｂ段特异结合ＴＮＦ－α。结果从分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆出了重链Ｆｄ段和κ基因。经ＤＮＡ序列测定表明，ＶＨ、Ｄ、ＪＨ分别属于ＶＨ３Ｄ、ＤＳＰ２和ＪＨ４；Ｖκ和Ｊκ分别属于Ｖκ１和Ｊκ１。将该Ｆｄ和κ链ｃＤＮＡ克隆到表达载体ｐＣｏｍｂ３Ｈ中，在大肠杆菌中获得了表达。结论ＥＬＩＳＡ和免疫印迹分析表明，表达的Ｆａｂ段可特异地和ＴＮＦ－α结合。     

用抗原表位定向选择方法人源化抗TNF-α抗体Fab段

目的用抗原表位定向选择（ｅｐｉｔｏｐｅｇｕｉｄｅｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎ）方法，将鼠源性抗ＴＮＦ－α单抗Ｆａｂ段改造成完全人源性Ｆａｂ。方法首先用鼠单抗Ｆｄ段基因与人的κ链基因库相互配对，构建成人－鼠杂合噬菌体抗体库，筛选可与ＴＮＦ－α结合的克隆，所获得的人κ链基因再与人Ｆｄ基因库组合，建立人源噬菌体抗体库，再进行筛选；类似地以鼠κ链基因和人Ｆｄ库组合构建杂合抗体库，筛选人Ｆｄ基因，再和筛到的人κ链配对，选择与ＴＮＦ－α特异结合的克隆。结果以鼠抗体Ｆｄ段定向选择人κ链获得能与ＴＮＦ－α特异结合的杂合抗体Ｆａｂ片段，再以这些人κ链定向选择人Ｆｄ段获得能与ＴＮＦ－α结合的完全人源性的Ｆａｂ，但这些Ｆａｂ除与ＴＮＦ－α反应外，与一些无关蛋白有交叉反应。以鼠单抗κ链定向选择人Ｆｄ段获得能与ＴＮＦ－α特异结合的杂合Ｆａｂ，其中一个克隆显示很强的结合活性，以该克隆的Ｆｄ与筛到的人κ链配对，得到了能与ＴＮＦ－α特异结合的人源性Ｆａｂ片段。结论抗原表位定向选择方法提供了一种有效的鼠单抗人源化路线     

生物信息学一致性相关系数法预测非小细胞肺癌的NP化疗方案药物敏感性基因

目的 用生物信息学一致性相关系数(CCC)法预测非小细胞肺癌一线化疗方案NP方案(长春瑞滨+顺铂)药物敏感性基因.方法 使用5种统计学方法:Pearson相关分析、Spearman相关分析、Welch's t-test、ANCOVA和rank-based ANCOVA,从NCI 60数据库筛选药物敏感性基因,通过CCC...