克仑特罗对大鼠肝细胞氮代谢及6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性的影响

目的探讨克仑特罗(Cl)调节大鼠肝细胞物质代谢及药理学机制。方法测定Cl(1×10^-6 mol·L^-1)对大鼠原代肝细胞培养液尿素氮水平以及肝细胞³H-亮氨酸参入,胰岛素样生长因子I(IGF-I)水平和6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)活性的影响。结果Cl使培养液尿素氮浓度下降25.51%(P<0.05);使肝细胞³H-亮氨酸参入量增加23.35%(P<0.05);增加肝细胞产生IGF-I的趋势(P>0.05);使肝细胞G6PDH活性下降45.22%(P<0.05)。β受体阻滞剂普萘洛尔(Pro)对Cl的上述作用均有阻断作用。结论Cl可增强大鼠肝细胞氮素保留和蛋白质合成,以及抑制肝细胞G6PDH活性而具有调节机体物质代谢的药理学效应。     

靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体T细胞的构建及其对肿瘤细胞的杀伤

[摘要] 目的：探索通过嵌合抗原受体（chimeric antigen receptor,CAR）-T 细胞靶向B 细胞成熟抗原（B cell maturation antigen,BCMA）以治疗多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）的方法。方法：构建基于鼠源BCMA scFv 的CAR-BCMA分子,包装为慢病毒载体并感染健康人T 细胞构建CAR-BCMA-T 细胞;构建BCMA阳性细胞系A549-BCMA、A549-BCMAOFP和K562-BCMA作为靶细胞。将CAR-BCMA-T细胞与构建的靶细胞和人骨髓瘤细胞U266 共孵育,CCK-8 法和流式细胞术检测其对BCMA阳性肿瘤细胞的杀伤能力。构建MM患者来源CAR-BCMA-T细胞并检测其杀伤靶细胞A549-BCMA的能力,并采用ELISA和流式细胞术检测CAR-BCMA-T细胞IFN-γ 的释放水平。结果：健康人来源的CAR-BCMA-T经过11 d 培养扩增300 倍,阳性率达到43%;成功构建BCMA阳性靶细胞。在5:1 效靶比下,CAR-BCMA-T对A549-BCMA、K562-BCMA和U266 细胞的杀伤率分别在80%、60%和80%左右,显著高于对BCMA阴性细胞的杀伤率,且杀伤力与靶细胞的BCMA表达强度相关。在效靶比20:1 时,MM患者来源CAR-BCMA-T细胞对靶细胞A549-BCMA的杀伤率达到95%以上,并且大量分泌IFN-γ。结论：本研究成功构建了健康人及MM患者来源的靶向BCMA的CAR-T细胞,其能够有效特异杀伤BCMA阳性的肿瘤细胞。     

异体NK细胞治疗消化道恶性腹水的安全性与疗效(附3例)

目的:分析3例异体自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)治疗转移性消化道肿瘤所致癌性腹水患者的安全性与临床有效性.方法:回顾性分析2018年我院肿瘤科进行的3例利用异体NK细胞治疗转移性消化道肿瘤所致癌性腹水患者.分析治疗前后患者腹水情况、外周血中各种细胞因子(IL-6、IL-8、IL-10、T...     

嵌合抗原受体修饰的CD19-CAR-T的体外构建、扩增及初步功能鉴定

目的： 探索一种特异性靶向 CD19 分子的嵌合抗原受体修饰的 CD19-CAR-T 的构建方法,并明确其体外杀伤 靶细胞的效果。 方法： 运用分子克隆技术,将 PCR 获得的 CD19-CAR 片段构建到 pCDH-GFP 慢病毒载体上,利用包装 的慢病毒颗粒转染供者 CD3 + T 细胞,通过流式细胞术及 PCR鉴定转染效率,并通过 7-AAD染色鉴定扩增得到的CD19- CAR-T细胞体外杀伤CD19 + Ramos靶细胞的效果。 结果： 经慢病毒转染T细胞在体外培养 10 d 后,CD3 + T 扩增达（78.8± 23.2）倍, （58.3±5.4）%的 CD3 + T 细胞表达 GFP,CD19-CAR-T 体外杀伤 CD19 + Ramos 靶细胞在效靶比5∶1时效率为（57.4± 9.3）%。 结论： 本实验成功建立了一种有效的体外构建及扩增CD19-CAR-T的方法,且具有明显靶向性,为CD19 + B细胞肿瘤临 床治疗提供实验依据。