改良法制备异种脱蛋白骨复合重组人骨形态发生蛋白支架修复长骨大段骨缺损

目的：异种脱蛋白骨因其来源广泛和独特的生物学特性作为组织工程骨支架材料在修复长骨大段骨缺损上有较好的应用前景。 目的：采用改良法制备异种脱蛋白骨复合重组人骨形态发生蛋白支架材料,评价其修复大动物大段长骨缺损的成骨能力。 方法：山羊24只,随机分为单纯异种脱蛋白骨组、自体骨组及异种脱蛋白骨+重组人骨形态发生蛋白组,在每只山羊右侧胫骨中下段截除胫骨总长度20%形成节段性骨缺损,按分组情况植入不同材料,采用半环槽式外固定器固定。术后4~24周每隔4周进行X射线检查,术后24周取新生骨进行双能X射线、组织学、生物力学检测骨缺损修复效果。 结果与结论：①制得的异种脱蛋白骨为三维多孔结构,其孔隙率为(78.5±6.45)%,孔径大小为(472.5±7.02) μm。②各组骨缺损表现为时间依从性的骨修复,生物力学试验抗压缩、三点抗弯曲和抗扭转试验均为自体骨组> 异种脱蛋白骨+重组人骨形态发生蛋白组>单纯异种脱蛋白骨组。③自体骨组、异种脱蛋白骨+重组人骨形态发生蛋白组与正常组比较,山羊胫骨骨密度及骨矿含量、抗压缩压强及极限压强、抗弯曲载荷及极限载荷、抗扭转扭矩及极限扭矩平均值差异均无显著性意义。结果提示改良法制备的异种脱蛋白骨复合重组人骨形态发生蛋白修复山羊胫骨大段缺损成骨能力与自体骨相当,可以作为组织工程支架材料。 关键词：异种脱蛋白骨;重组人骨形态发生蛋白;骨缺损;组织工程;支架材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.16.043     

骨形态发生蛋白2复合异种脱蛋白骨支架材料修复山羊大段骨缺损

背景：单纯骨形态发生蛋白2修复骨缺损只有骨诱导性，单纯异种脱蛋白骨只有骨传导性。 目的：评估异种脱蛋白骨复合骨形态发生蛋白2修复山羊大段长骨缺损的效果。 设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照观察实验，于2005-03/2007-02在解放军第三军医大学创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。 材料：山羊24只用于制备大段长骨缺损模型。市售猪股骨用于制备脱蛋白骨。重组骨形态发生蛋白2为美国Biosource公司产品。 方法：山羊右侧胫骨中下段截除胫骨总长度20%制备节段性骨缺损模型。24只山羊按植入材料的不同分为3组，单纯异种脱蛋白骨组、自体骨组和异种脱蛋白骨+重组骨形态发生蛋白2组，每组8只。 主要观察指标：植入后4，8，12，16，20，24周X射线评估骨缺损情况。植入后24周取新生骨组织进行双能X射线、组织学、生物力学检测修复效果。 结果：植入后12，24周自体骨组和异种脱蛋白骨+重组骨形态发生蛋白2组X射线评分均高于单纯异种脱蛋白骨组，差异有显著性意义（P < 0.05）。植入后24周自体骨组和异种脱蛋白骨+重组骨形态发生蛋白2组骨密度和骨矿含量均高于单纯异种脱蛋白骨组，差异有显著性意义（P < 0.05）。自体骨组和异种脱蛋白骨+重组骨形态发生蛋白2组之间比较差异均无显著性意义（P > 0.05）。植入后24周生物力学测试表明，自体骨组>异种脱蛋白骨+重组骨形态发生蛋白2组>单纯异种脱蛋白骨组。植入后24周，自体骨组、异种脱蛋白骨+重组骨形态发生蛋白2组，新生骨与最初两断端连成一体，新生骨骨小梁排列整齐有序。单纯异种脱蛋白骨组，新生骨与最初两断端部分相连。 结论：重组骨形态发生蛋白2复合异种脱蛋白骨修复山羊胫骨大段缺损成骨能力与自体骨相当。     

以部分脱钙冻干骨材料为支架组织工程骨移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化

背景：骨衍生材料中冻干骨异抗原去除不充分，免疫原性强烈；脱蛋白骨和完全脱钙骨基质抗原性较弱，但前者无成骨诱导能力，后者生物力学性能很差，临床应用受到限制。 目的：观察以部分脱钙冻干骨材料为支架的组织工程骨移植后兔外周血T细胞亚群的变化及移植组织的组织学变化。 设计、时间及地点：随机分组设计、动物对照观察，于2006-06/2007-06在四川大学华西医院，生物治疗国家重点实验室与干细胞与组织工程研究室完成。 材料：组织工程骨以兔骨膜来源的成骨细胞为种子细胞，经抗原自消化、部分脱钙、冻干后的异体骨为支架材料于体外构建。 方法：将48只兔按随机数字表法分为4组，每组12只。分别用部分脱钙冻干骨、组织工程骨、自体骨、同种异体骨植入兔桡骨1 cm节段性缺损处。 主要观察指标：流式细胞仪检测4组植入前及植入后1，2，4周移植早期外周血Ｔ淋巴细胞亚群变化，并通过组织学检测观察植入后2，4，8，12周时4种材料的成骨作用。 结果：①部分脱钙冻干骨组、组织工程骨组植入后1，2周外周血CD4+和CD8+ T细胞较植入前明显升高(P < 0.05)。植入后4周CD4+ T细胞较植入前偏高不显著(P > 0.05)。自体骨组植入后CD4+和CD8+ T细胞升高不明显(P > 0.05)。同种异体骨组植入后1，2，4周外周血CD4+和CD8+ T细胞较植入前及其他各组同期均明显增高(P < 0.05)。②组织工程骨组植入后2周与材料孔隙内有成骨细胞和成软骨细胞，可见骨及软骨混合性新生物形成，周边分布有破骨细胞，部分网架呈蚕食状被破坏吸收。植入后4周，形成的新生骨过渡为编织骨。植入后8周，形成板层骨，部分脱钙冻干骨支架材料已被完全降解﹑吸收。植入后12周，植入物均已完全被板层样骨所替代，髓腔再通。 结论：部分脱钙冻干骨为支架材料构建的细胞-材料复合体移植后外周血T淋巴细胞增高，但不影响其良好的修复骨缺损能力。     

酸性成纤维细胞因子/部分脱蛋白骨修复兔早期股骨头缺血性坏死的血管化作用*☆

背景：酸性成纤维细胞因子具有较好的促进血管形成作用以及成骨作用,能否有效地促进早期股骨头缺血性坏死动物模型的血管化有待研究。 目的：探讨酸性成纤维细胞因子复合部分脱蛋白骨对兔股骨头缺血性坏死修复的血管化作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-01/2009-01在南华大学生命科学院完成。 材料：取健康成年新西兰大白兔肋骨,经脱脂、脱蛋白、部分脱钙和冻干等一系列的物理、化学方法处理后制备部分脱蛋白骨。将酸性成纤维细胞生长因子用无菌蒸馏水稀释后加入部分脱蛋白骨粒,得到复合人工骨。 方法：健康成年新西兰大白兔24只,双侧股骨颈交界处开窗,挖除股骨头内约50%松质骨,加用体积分数为95%乙醇灌注 30 min,建立双侧股骨头坏死骨缺损模型。按随机数字表法,随机分为空白组,单纯部分脱蛋白骨组,复合人工骨组。分别于相应股骨头骨缺损区植入部分脱蛋白骨、复合人工骨,空白组不植入材料。 主要观察指标：分别于术后2,4,8周取材,制备墨汁灌注标本,进行微血管计数以及血管面积分析。 结果：2,4,8周时血管计数和血管面积显示,空白组血管数和血管面积最少,单纯部分脱蛋白骨组次之,复合人工骨组最多。复合人工骨组与空白组和单纯部分脱蛋白骨组比较,差异有显著性意义(P < 0.05)。 结论：酸性成纤维细胞生长因子与部分脱蛋白骨复合构建组织工程化人工骨具有较好的促进血管生成作用,对兔早期股骨头缺血坏死具有较好的修复作用。 关键词：股骨头缺血性坏死;酸性成纤维细胞因子;兔;部分脱蛋白骨;血管化     

异种脱蛋白松质骨支架体内移植后血清T细胞亚群的变化

背景：研究提示异种脱蛋白松质骨可能成为一种极有实用价值的骨组织工程支架材料,但仍缺少细胞生物学及免疫学论证。 目的：脱蛋白法制备骨组织工程用的异种松质骨支架,探讨其山羊体内移植后免疫学性能。 方法：成年猪股骨远端松质骨,采用逐级脱蛋白方法去除异种骨中的抗原性成分。取6~8月龄雄性山羊8只随机分成2组,实验组双侧3、4横突间各植入脱蛋白松质骨2块。对照组植入相同数量未经处理新鲜松质骨。 结果与结论：采用脱蛋白处理后的猪松质骨光镜下可见骨孔内无细胞、神经、血管和嗜酸性物质染色。脱蛋白松质骨中胶原类氨基酸含量高,与新鲜松质骨相比无明显差异,而酪氨酸、色氨酸和半光氨酸波峰消失。新鲜松质骨氨基酸含量为19.89%,脱蛋白松质骨氨基酸含量为18.06%。脱蛋白松质骨植入后各时间点CD3+、CD4+、CD8+、CD28+水平与植入前相比基本保持一致,植入4周后局部抗原免疫组织化学未见阳性表达。提示经脱蛋白处理后异种松质骨低免疫原性,植入体内后没有特异性抗体产生,具有良好的组织相容性。     

带部分松质骨小牛皮质骨支架复合兔骨髓间充质干细胞植入兔体内血管内皮细胞生长因子的表达

摘要 背景：目前异种松质骨作为组织工程材料较为多见,而皮质骨因其难以降解,孔隙率低等原因限制了其使用。但皮质骨具有许多松质骨不具备的优越性,如生物力学方面,如何开发利用皮质骨是课题研究的重点。 目的：观察兔骨髓间充质干细胞复合带部分松质骨小牛皮质骨支架材料植入兔体内后血管内皮细胞生长因子表达。 方法：健康1月龄新西兰大白兔4只用于干细胞提取;3月龄新西兰大白兔60只,在髂骨翼分别植入骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合异种骨,单纯异种骨,自体髂骨。术后4,8,12,24周取材RT-PCR检测血管内皮细胞生长因子的表达。 结果与结论：血管内皮细胞生长因子的表达情况：在各时间点,单纯异种骨组低于骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合异种骨组和自体髂骨组(P < 0.05)。术后第4周时,骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合异种骨组低于自体髂骨组(P < 0.05),在术后第8,12,24周时,两组差异无显著性意义(P > 0.05)。提示兔骨髓间充质干细胞复合带部分松质骨的小牛皮质骨支架材料植入新西兰兔体内具有较好的血管生成能力。 关键词：成骨诱导;骨髓间充质干细胞;带部分松质骨小牛皮质骨;血管内皮细胞生长因子;骨科生物材料 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.34.005     

复合骨髓间充质干细胞和富血小板血浆煅烧骨在大鼠下颌骨缺损修复中的

背景：用于修复骨缺损的方法有直接植入、复合细胞植入以及加入生长因子植入。近年来,复合细胞植入和加入生长因子植入的研究受到比较广泛的关注。 目的：观察复合骨髓间充质干细胞和富血小板血浆的煅烧骨修复颌骨缺损的作用。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2008-04在青岛大学医学院附属医院中心实验室及口腔研究室完成。 材料：取成年牛长骨骨骺端,经脱脂、脱蛋白、煅烧处理后制得煅烧骨。将第3代的骨髓间充质干细胞悬液加到煅烧骨上制备煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体。将富血小板血浆因子滴加到将要植入的煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体上,制得含富血小板血浆因子的煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体。 方法：用牙钻在Wistar大鼠左侧下颌骨下缘备出1.0 cm×0.8 cm大小缺损,将30只大鼠随机分为3组,每组10只。对照组：将煅烧骨直接植入大鼠下颌骨缺损中。复合骨髓间充质干细胞组：将煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体植入大鼠下颌骨缺损中。复合骨髓间充质干细胞+富血小板血浆组：将含富血小板血浆因子的煅烧骨-骨髓间充质干细胞复合体植入大鼠下颌骨缺损中。 主要观察指标：观察各组煅烧骨在4,8,12周的成骨情况。 结果：复合骨髓间充质干细胞+富血小板血浆组煅烧骨在4,8,12周3个时间点的成骨情况明显优于对照组煅烧骨及复合骨髓间充质干细胞组煅烧骨(P < 0.01),对照组和复合骨髓间充质干细胞组之间的成骨情况差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：复合骨髓间充质干细胞和富血小板血浆的煅烧骨可以促进下颌骨缺损修复,增加血管化与骨化。     

转染血管内皮细胞生长因子骨髓间充质干细胞与牛松质骨支架复合组织工程骨的血管形成

背景：小块组织工程骨植入动物体内后,早期依靠组织液的渗透可获得营养,但大块组织工程骨的营养仅靠组织液的渗透是远远不够的,必须通过血管再生来获得。 目的：观察转染血管内皮细胞生长因子表达载体骨髓间充质干细胞复合组织工程骨植入动物体内后的血管形成能力。 方法：制作日本大耳白兔双侧尺骨中段骨缺损模型,左侧尺骨缺损植入转染血管内皮细胞生长因子表达载体的自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为实验组,右侧尺骨缺损植入自体骨髓间充质干细胞复合脱钙脱脂去蛋白的牛松质骨支架组织工程骨为对照组。术后12周行X射线摄片观察、大体标本观察、苏木精-伊红染色和Masson染色组织切片观察、MiFas图像分析系统定量分析。 结果与结论：实验组与对照组尺骨缺损处均有连续骨痂形成;组织切片经苏木精-伊红染色、Masson三色法染色及MiFas图像分析系统定量分析可见实验组和对照组均有大量的新生骨,但实验组新生血管明显多于对照组(P < 0.01),且血管较粗大,而且与新生骨接近。说明将转染血管内皮细胞生长因子表达载体的骨髓间充质干细胞复合在组织工程骨上植入动物体内可明显促进新生血管的形成。     

生物衍生骨与骨髓间充质干细胞复合修复兔桡骨大段缺损

背景：生物衍生支架材料具备与自身骨相似的结构和微环境,具有较好的应用前景。 目的：探讨生物衍生骨复合成骨诱导的骨髓间充质干细胞修复兔桡骨的节段性骨缺损的可行性,并与单纯生物衍生骨进行比较。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-01/2008-01在南华大学生命科学院实验室完成。 材料：同种异体骨经脱脂、脱蛋白、部分脱钙和冻干等方法处理后制备生物衍生骨支架材料,与自体骨髓间充质干细胞复合制备组织工程骨支架材料。 方法：25只健康成年新西兰大白兔双侧桡骨制备中段15 mm的骨缺损,随机取其中20只兔右侧桡骨为实验组植入组织工程骨,左侧为对照组植入单纯生物衍生骨,不做内外固定;另5只兔双侧骨缺损处不植入任何材料作为空白组。 主要观察指标：应用X射线放射学检查及组织学观察比较3组骨缺损修复的能力。 结果：X射线显示随时间延长骨折处骨痂逐渐增多, 实验组8周基本愈合,12周塑形完成;对照组骨痂少,愈合时间推迟;空白组术后12周骨缺损未见骨性修复,最后形成骨不连。术后2,4,8,12周实验组放射学检查评价新骨生成优于对照组 (P < 0.05)。组织学检查显示实验组术后4周时材料开始吸收,8周基本降解吸收被新生骨取代,12周完全修复;对照组明显推迟,新骨生成速度、生成量低于实验组(P < 0.05);空白组各时点均无新骨形成,最后缺损由纤维组织充填。 结论：成骨诱导的间充质干细胞／生物衍生骨复合构建组织工程化骨植入修复兔桡骨缺损能够加速新骨形成,其修复能力明显优于单纯生物衍生骨。     

异种脱蛋白松质骨支架构建组织工程骨用于脊柱横突间融合*

背景：异种脱蛋白松质骨来源广泛且具有独特的生物学特性,若能解决其免疫原问题,将有望利用异种脱蛋白松质骨开发出一种新型植骨材料。 目的：探讨异种脱蛋白松质骨作为骨组织工程支架的性能,及其在山羊脊柱横突间融合中的作用。 设计、时间及地点：细胞-支架学体内实验,于2008-02/10在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。 材料：6~8月龄健康雄性山羊12只,由牡丹江医学院动物中心提供。 方法：取成年猪股骨远端松质部分,通过理化方法制成脱蛋白松质骨支架,对其形态结构、组成成分、生物力学特性以及材料对种子细胞生物学行为的影响进行检测分析。羊髂骨穿刺取骨髓,梯度密度离心法分离获得第3代骨髓间充质干细胞。将支架材料复合一定量的自体骨髓间充质干细胞、重组人骨形成蛋白2构建组织工程骨。12只羊建立L3、4双侧横突间植骨模型,修复组于左侧植入组织工程骨,对照组于右侧植入相同体积的自体髂骨。 主要观察指标：分别于植入后4,8,12周行X射线片和组织学观察对比分析。 结果：采用脱蛋白处理后的松质骨可见大小不等、相互交通、开放孔隙的网架结构,孔径200~500 μm,孔隙率60%左右,其无机成分为羟基磷灰石,有机成分为胶原,力学性能保存良好,细胞相容性良好。X射线片结果显示：植入第4周,横突桥接处部分区域模糊,以内侧明显,此时修复组材料密度略低于对照组;第8周上下桥接部间隙变小,大量连续骨痂生成;12周后完全融合,两组材料密度接近。移植区组织学观察结果显示：修复组植入后第4周以多点方式形成新骨,第8周岛状生成的骨组织贯穿整个移植材料,12周编织骨交错排列,髓腔形成,成骨活性接近自体髂骨移植;对照组植入后4周有较多新骨形成,8周时出现大量胶原纤维,周边成骨明显,至12周纤维组织减少,成骨活跃。 结论：以异种脱蛋白松质骨为支架材料,复合骨髓间充质干细胞、重组人骨形成蛋白2构建组织工程骨,体外X射线衍射分析及力学测试与体内成骨实验均证明其具有良好的组织相容性和较强的成骨能力,是一种良好的组织工程骨支架材料。 关键词：组织工程骨;异种脱蛋白松质骨;脊柱横突间融合     

异体脱蛋白骨关节复合钙磷骨水泥与重组人血管内皮细胞生长因子和重组人骨形态发生蛋白2移植的免疫学研究*☆

背景：异体骨关节移植因难以克服的免疫排斥反应、与宿主骨愈合困难等问题在临床使用有一定局限性，如何降低其免疫原性、促进其再血管化及成骨是目前研究的重点。 目的：观察复合钙磷骨水泥与重组人血管内皮细胞生长因子及重组人骨形态发生蛋白2的异体脱蛋白骨关节移植材料（CPC/ DPOA /rhVEGF/rhBMP-2）的免疫原性、成骨及再血管化能力。 设计、时间及地点：随机对照体内动物实验，于2006-03/09在重庆医科大学临床学院骨科实验室完成。 材料：自制犬的股骨下端脱蛋白骨关节移植体、DPOA/rhVEGF/rhBMP-2移植体及CPC/ DPOA /rhVEGF/rhBMP-2移植体。 方法：取36只杂交犬，麻醉后距膝关节面30 mm 处用线锯切断股骨制备骨缺损模型，然后随机分成3组，分别植入CPC/rhVEGF/rhBMP-2/DPOA，rhVEGF/rhBMP-2/DPOA及单纯脱蛋白骨关节移植体。 主要观察指标：术后4，8，12，16周进行移植物X射线、组织学、股动脉新生血管分布及T淋巴细胞亚群分析。 结果：术后4~16周，CPC/rhVEGF/rhBMP-2/DPOA移植组新骨形成及再血管化明显好于其他2组(P < 0.01)，各时间点炎症反应较其他组轻(P < 0.01)，Ⅰ型胶原免疫组化的面积积分吸光度值高于其他2组(P < 0.01)。术后2，4周CPC/rhVEGF/ rhBMP-2/DPOA移植组CD4/CD8比值低于其他2组（P < 0.01），术后8，16周3组CD4/CD8比值均较前有所降低，组间差异无显著性意义(P > 0.05)。 结论：CPC/rhVEGF/rhBMP-2/ DPOA移植材料的免疫原性较低，可发生移植材料的早期再血管化和新骨的形成。     

异种脱蛋白松质骨作为支架材料的性能分析*★

背景：异种脱蛋白松质骨因其来源广泛和独特的生物学特性有望成为较好的骨组织工程支架，其关键点为免疫原问题，如能解决免疫原问题，则有望开发出一种新型植骨材料。 目的：通过理化方法制备脱蛋白松质骨，对其结构、组成及生物安全性能进行分析，探讨异种脱蛋白松质骨作为骨组织工程载体可行性。 设计、时间及地点：对比观察实验，于2008-02/2009-01在黑龙江省纤维化生物治疗重点实验室完成。 材料：取成年猪和山羊股骨远端松质部分，1∶1氯仿甲醇液脱脂、体积分数30%H2O2脱蛋白，制得脱蛋白松质骨。 方法：①通过红外光谱仪、X射线衍射分析仪、氨基酸分析仪、力学测试仪进行载体性能测试。②取第3代人髂骨骨髓间充质干细胞调整浓度为2×108 L-1细胞悬液，接种到载体至饱和，倒置显微镜和扫描电镜观察种子细胞黏附及生长增殖情况。③40只BALB/C小鼠随机分为实验组和对照组，每组20只。分离小鼠股后肌肉制成肌袋，实验组植入猪脱蛋白松质骨，对照组直接缝合。术后1,2,4,8周检测分析血清肌苷、谷草转氨酶、谷丙转氨酶水平。④采用免疫酶组织染色方法分析猪脱蛋白松质骨和植入小鼠体内4周脱蛋白松质骨标本的免疫原性。 主要观察指标：体外实验分析脱蛋白松质骨理化性能、免疫原性。动物实验分析生物安全性能。 结果：脱蛋白松质骨载体无机成分主要是与人骨天然成分相同的羟基磷灰石，经过一系列处理后，胶原蛋白并没有被脱除，这种结构保持了较好的力学性能。脱蛋白松质骨由于脱除了主要的免疫原性物质，其免疫原性较弱，毒性低。人骨髓间充质干细胞接种于载体后生长分化良好。 结论：异种脱蛋白松质骨是一种良好骨组织工程载体。     

超声脱细胞异种松质骨材料的抗原性与生物相容性

背景：异种骨是一种复合组织,来源广泛,一直是骨修复研究领域热衷于制备、改良、开发的植骨材料,其抗原主要分布于骨组织的有核细胞,充分脱细胞是去除异种骨抗原的有效手段。 目的：观察超声脱细胞异种松质骨材料的抗原性与生物相容性。 方法：提取新鲜松质骨、常规材料和超声材料上清,检测抗原特异性淋巴细胞刺激增殖指数;将常规材料和超声材料分别植入SD大鼠体内,以假手术组做对照。流式细胞分析仪检测其外周血CD4+、CD8+淋巴细胞亚群的百分率及CD4+/CD8+淋巴细胞比值的变化;与骨髓基质细胞的接触培养,观察两种材料对基质细胞增殖指数的影响,扫描电镜观察骨髓基质细胞在超声材料和常规材料表面的黏附和增殖情况。 结果与结论：新鲜松质骨刺激指数值最高,超声材料组刺激指数值接近于1,与常规材料组比较有显著性差异(P < 0.05)。术后第2周,常规材料组CD4+T细胞亚群百分率为32.89%,与假手术组(28.72%)比较,差异有显著性意义 (P < 0.05),超声材料组与假手术组比较无显著差异(P > 0.05);常规材料组和超声材料组CD8+T细胞亚群百分率分别为16.28%和13.49%,两组差异有显著性意义(P < 0.05),均高于假手术组(10.07%) (P < 0.01),常规材料组和超声材料组CD4+/CD8+T细胞比值无显著性差异;2周后各组动物CD4+ 、CD8+ T细胞亚群百分率逐渐回落,至术后6周3组之间差异无显著性意义。常规材料和超声材料对骨髓基质细胞的增殖均产生接触抑制效应,常规材料的抑制作用稍强,但差异无显著性意义(P > 0.05)。扫描电镜观测骨髓基质细胞在超声材料表面黏附生长,培养至5 d呈亚融合状态,细胞密度明显高于常规材料组。 结果提示,实验所制备的超声材料,其抗原性较常规材料弱,有利于骨髓基质细胞的黏附生长,表现出良好的生物相容性。 关键词：异种骨;超声生物技术;生物材料;抗原性;生物相容性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2010.34.015     

18FDG和99Tcm-MIBI双核素心肌显像评价经心内膜心肌内移植骨髓间充质干细胞的效果

目的：比较18FDG和99Tcm-MIBI双核素心肌显像评价经心内膜心肌内移植骨髓间充质干细胞的效果。 方法：成年小型猪8头，麻醉后利用心血管支架置入技术栓塞冠状动脉左前降支远端建立心肌梗死模型，随机均分为2组。造模2周后将分离纯化的猪自体骨髓间质干细胞通过NOGA电机械标测系统经心内膜注射移植至细胞组梗死区，对照组仅注射胎牛血清。移植前及移植后4周分别行18FDG和99Tcm-MIBI双核素心肌显像。 结果：移植前两组均可见左室心尖部及前壁呈显著放射性缺损。与对照组比较，移植后4周细胞组梗死区18FDG和99Tcm-MIBI双核素心肌显像所呈现的缺血/梗死节段数均明显减少（P < 0.05）。与移植前比较，移植后4周对照组无明显变化（P > 0.05）；细胞组梗死区18FDG和99Tcm-MIBI双核素心肌显像所呈现的缺血/梗死节段数均明显减少（P < 0.05），且99Tcm-MIBI显像示减少幅度更大（P < 0.05）。 结论：经心内膜心肌内注射移植骨髓间充质干细胞可显著改善心肌灌注损伤，增加存活心肌，且99Tcm-MIBI显像改善效果优于18FDG显像。     

重组人粒细胞集落刺激因子干预后自体骨髓移植对骨折愈合的影响

背景：自体骨髓经皮移植促进骨折愈合已经成为临床一种治疗手段,其中骨髓间充质干细胞在局部微环境下所起到的作用已经得到共识。但是如何提高其在移植骨髓中的含量仍是目前面临的难题。已经有研究报道重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)可动员外周骨髓间充质干细胞快速增殖。 目的：探讨rhG-CSF干预的自体骨髓移植对兔桡骨骨折愈合的促进作用。 方法：制备桡骨中段3 mm宽骨折模型白兔56只,随机分为4组,每组14只。术后1 h,rhG-CSF组,自体骨髓组与PBS对照组均在白兔背部皮下注射rhG-CSF,1次/d,连续5 d。模型组皮下注射相应体积的生理盐水。术后5 d,自体骨髓组抽取自体骨髓经皮回植骨折部位,PBS对照组在骨折处注射相应体积的生理盐水。术后14,28 d取材进行影像学、组织学、组织形态计量学检测与分析。 结果与结论：rhG-CSF,自体骨髓,PBS对照组新生血管、骨小梁形成、4种骨痂记分、外骨痂厚度均优于模型组,尤以自体骨髓组效果最显著(P < 0.01或P < 0.05)。说明rhG-CSF干预能够促进骨折愈合,结合自体骨髓移植促进骨折愈合的效果更佳。     

腰椎穿刺移植自体骨髓间充质干细胞治疗脑梗死后遗症6例

背景：骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,而且取材方便,扩增迅速,免疫原性低,在移植过程避免了免疫排斥等反应,是治疗脑梗死等神经系统疾病的理想种子细胞。 目的：探讨自体骨髓间充质干细胞培养后经腰穿治疗脑梗死后遗症的安全性、可行性及疗效。 方法：6例脑梗死后遗症患者进行自体骨髓间充质干细胞移植,骨穿采集自体骨髓单个核细胞,体外分离培养骨髓间充质干细胞4 d后经腰椎穿刺移植蛛网膜下腔,移植后观察疗效及并发症。 结果与结论：培养后骨髓间充质干细胞数量明显增多,患者手术前后肌力和NIHSS评分通过统计分析有显著性差异(P < 0.05),总体症状改善较术前有明显改善;移植后无严重不良事件发生。结果提示,自体骨髓间充质干细胞培养后移植治疗可使脑梗死后遗症患者症状明显改善,治疗安全有效且不良反应小。     

软骨源形态发生蛋白基因转染自体骨髓间充质细胞修复关节软骨缺损

背景：以支架或干细胞在一定程度上能够修复软骨缺损,但是研究中发现较大块的缺损修复效果还达不到令人满意的程度。基因转染后的干细胞能够不断的释放生长因子有可能够为软骨缺损研究带来突破。 目的：进一步验证软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞是否会促进体内兔软骨修复。 方法：从兔骨髓内分离获得骨髓间充质干细胞,脂质体感染的方法将软骨源形态发生蛋白基因转染到骨髓间充质干细胞中。实验组移植转染后的细胞;单纯骨髓间充质干细胞组移植未转染的骨髓间充质干细胞;空白对照组缺损区不移植细胞。术后行组织学检测及组织学评分分析修复情况。 结果与结论：体内修复过程中,软骨源形态发生蛋白转染的骨髓间充质干细胞促进了软骨再生。透明软骨填充了软骨缺损区,并且深部区域显示了软骨下成骨。透明软骨的重建区域优于单纯骨髓间充质干细胞移植组。组织学评分实验组高于骨髓间充质干细胞对照组和空白组。提示转染软骨源形态发生蛋白基因的骨髓间充质干细胞能够促进和提高关节软骨的改建和修复。     

胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的免疫调节*☆◆

背景：众多研究表明间充质干细胞能发挥免疫调节功能,抑制T细胞增殖。 目的：观察胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的调节作用。 方法：将人胚胎骨髓间充质干细胞与正常人外周血单个核细胞或CD4+ T细胞以1∶10比例共培养4 d,以单个核细胞或CD4+T细胞单独培养为对照。应用实时定量PCR检测细胞白细胞介素17 mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中白细胞介素17蛋白水平,流式细胞术检测Th17细胞数量。 结果与结论：胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞共培养组白细胞介素17 mRNA表达水平明显高于单个核细胞组(P < 0.01)。与此一致的是,胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞或CD4+T细胞共培养组细胞上清中白细胞介素17蛋白水平明显高于单个核细胞组、CD4+ T细胞组(P < 0.05,P < 0.01)。胚胎骨髓来源间充质干细胞与CD4+ T细胞共培养组Th17细胞数量明显高于CD4+ T细胞组(P < 0.01),但胚胎骨髓来源间充质干细胞本身并不表达白细胞介素17。表明胚胎骨髓来源间充质干细胞可促进人Th17细胞增殖。