有自杀企图史的抑郁症住院患者临床特征 研究

目的 探讨沉默信息调节因子 1（SIRT1）在癫痫中对小胶质细胞及炎症因子的影响及作 用机制。方法 建立氯化锂 - 匹罗卡品致痫大鼠模型，免疫组化观察各组（对照组和癫痫组）大鼠脑组 织内小胶质细胞活化；采用脂多糖（LPS）建立小胶质细胞活化模型，构建 pcDNA-SIRT1 和 si-SIRT1 载 体，转染至大鼠小胶质细胞中。定量即时聚合酶链反应（qRT-PCR）测定大鼠海马组织及小胶质细胞中 SIRT1 表达，Western blot 检测小胶质细胞的活化标志物 Iba1 和核因子 -κB（NF-κB）通路相关蛋白（p65 和 IκBα）的蛋白表达水平，酶联免疫吸附测定（ELISA）检测促炎因子［白细胞介素 1β（IL-1β）、白细 胞介素 6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）］的表达水平。结果 与 Control 组比较，癫痫大鼠海马组织中 SIRT1 mRNA 表达量显著降低（P＜ 0.05），Iba1 蛋白表达量显著增加（P＜ 0.05），且对照组 CA1、CA2 区 Iba1 阳性细胞数分别为（180±21）、（190±18）/mm2 ，癫痫组 CA1、CA2 区 Iba1 阳性细胞数分别为（412±35）、 （470±37）/mm2 ，两组比较差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。同样，与 Mock 组比较，LPS 活化小胶质细 胞中 SIRT1 表达水平显著降低， Iba1 蛋白表达水平显著增加，差异均有统计学意义（均P＜ 0.05）。转染 pcDNA-SIRT1及si-SIRT1至LPS活化的小胶质细胞中， LPS+pcDNA-SIRT1组IL-1β［（50.0±3.3）ng/L］、IL-6 ［（55.0±3.2）ng/L］和TNF-α［（56.1±3.0）ng/L］表达水平显著低于LPS组和LPS+pcDNA-NC组（均P＜ 0.05）； LPS+si-SIRT1 组中 IL-1β［（98.2±4.3）ng/L］、IL-6［（108.1±4.5）ng/L］ 和 TNF-α［（124.5±4.1）ng/L］表达 水平显著高于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均P＜ 0.05）；同时 LPS+pcDNA-SIRT1 组 NF-κB p65 的表达水平 显著低于 LPS 组和 LPS+pcDNA-NC 组（均P＜ 0.05），IκBα 的表达水平显著高于 LPS 组和 LPS+pcDNANC 组（均P＜ 0.05）；而 LPS+si-SIRT1 组 NF-κB p65 的蛋白表达水平显著高于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均 P＜ 0.05），IκBα 的表达水平显著低于 LPS 组和 LPS+si-NC 组（均P＜ 0.05）。加入 NF-κB 通路激活剂 Aconine 后，与 LPS+pcDNA-SIRT1 组比较，LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine 组大鼠中Iba1表达水平显著升高 （P＜0.05）；LPS+pcDNA-SIRT1+Aconine组大鼠中IL-1β［（72.2±4.3）ng/L］、IL-6［（80.1±4.0）ng/L］和TNF-α ［（87.2±4.5）ng/L］表 达 水 平 显 著 高 于 LPS+pcDNA-SIRT1 组 的［（50.1±2.3）］ng/L、［（55.0±3.4）］ng/L 和 ［（56.3±4.9）ng/L］（均P＜ 0.05）。结论 SIRT1 可能通过抑制 NF-κB 通路活性来抑制癫痫大鼠小胶质 细胞的作用。     

ephrinA3在脂多糖诱导的星形胶质细胞中的表达变化

目的 探讨ephrinA3在脂多糖诱导的大鼠大脑皮质星形胶质细胞中的表达变化.方法 提取新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞并纯化培养,随机分为对照组和实验组,脂多糖10mg/L干预后,实验组又分为30min组、6h组、24h组、48h组和72h组,采用倒置相差显微镜观察星形胶质细胞形态学变化,MTT法检测细胞活力,AO/EB荧光染色检测细胞凋亡和坏死情况,CY3免疫荧光及Western blot方法测定不同时间点ephrinA3的表达变化.结果 在脂多糖作用的不同时间中,与对照组相比,作用24h、48h、72h的细胞存活率显著升高,凋亡率显著下降,ephrinA3表达显著升高.结论 ephrinA3在脂多糖诱导的大鼠大脑皮质星形胶质细胞中的表达增高,持续至少72h,其在中枢神经系统损伤后星形胶质细胞增殖方面起重要调控作用.     

星形胶质细胞微丝表达与细胞缝隙连接的关系及其在癫痫发病中的意义

目的研究模拟神经元兴奋环境下即高浓度KCl环境中马桑内酯（coriaria lactone,CL）对培养的星形胶质细胞（astrocyte,AST）肌动蛋白（actin）表达的影响及其与缝隙连接通道的关系,探讨它们在癫痫发病中的意义。方法利用改良McCarthy的方法培养星形胶质细胞,制备细胞爬片,并对培养的细胞进行不同干预分组：A（正常对照组）;B（高浓度的KCl作用组）;C（KCl＋CL组）;D（KCl＋1-hep）组;E（KCl＋CL＋1-hep）组。每组再分为24~48h作用时间亚组。采用直接免疫荧光法,用BODIPY FL phallacdin对星形胶质细胞F-actin进行荧光染色。用激光扫描共聚焦显微镜（laser scan-ning confocal microscope,LSCM）观察各组细胞骨架F-actin的结构及分布,同时测定F-actin含量。结果发现高浓度的KCl作用于星形胶质细胞24,48h后,F-actin的荧光强度较对照组升高（P〈0.01）,同时给予KCl＋CL作用于星形胶质细胞24,48h后F-actin的荧光强度较KCl组明显升高（P〈0.01）,同时给予KCl＋1-hep作用于星形胶质细胞24,48h后F-actin的荧光强度较KCl组明显降低（P〈0.01）,而同时给予KCl＋CL＋1-hep组荧光强度较KCl＋CL组明显降低（P〈0.01）。同一因素作用下24h作用组与48h作用组荧光强度未见统计学差异（P〉0.05）。结论CL可引起星形胶质细胞内F-actin含量的升高,而1-庚醇可引起F-actin含量的降低,这种变化影响细胞骨架微丝装配和星形胶质细胞胞间信号传导,可能在癫痫的产生中发挥重要作用。     

精氨酸加压素对星形胶质细胞凋亡的影响

目的 探讨不同浓度精氨酸加压素(arginine vasopressin,AVP)对原代培养大鼠星形胶质细胞凋亡的影响,以及p38 MAPK途径在该过程中的作用.方法 采用大鼠大脑皮质分离星形胶质细胞,以500 nmol/LAVP处理星形胶质细胞1、6、12、24 h,以及500 nmol/L AVP分别与V1a受体(V1.R)拮抗剂、SB 203580共同处理星形胶质细胞1、6、12、24 h,采用MTT法测定星形胶质细胞存活率变化;以50、100、500 nmol/L AVP对星形胶质细胞分别处理1、6、12、24 h,以及500 nmol/L AVP分别与V1a受体(V1aR)拮抗剂、SB 203580共同处理星形胶质细胞1、6、12、24 h,采用TUNEL法检测星形胶质凋亡情况.结果 以500 nmol/L AVP干预6、12、24 h后,星形胶质细胞存活率下降(P＜0.01),而V1aR拮抗剂、SB 203580与500 nmol/L AVP共同干预星形胶质细胞后,各时间点存活率与对照组比较无统计学差异(P＞0.05).以50、100 nmol/L AVP分别干预1、6、12、24 h未发现星形胶质细胞凋亡数增加(P＞0.05),而500 nmol/L AVP干预6、12、24 h后,星形胶质细胞凋亡细胞增多,24 h达高峰(P＜0.01).V1aR拮抗剂、SB 203580与500 nmol/L AVP共同干预后,各时间点细胞凋亡数未见显著增加(P＞0.05).结论 高浓度AVP能导致星形胶质存活率下降,细胞凋亡增多;V1aR拮抗剂及p38MAPK抑制剂能抑制高浓度AVP诱导的星形胶质细胞凋亡,可能对减轻脑损伤过程中AVP造成的继发损害具有一定作用.     

吗替麦考酚酯对大鼠弥漫性轴索损伤后脑干胶质细胞激活及硫酸软骨素表达的影响简

目的探讨吗替麦考酚酯（MMF）对大鼠弥漫性轴索损伤（DAD后脑干胶质细胞激活及硫酸软骨素表达的影响。方法将72只DAI后SD大鼠随机分为3组：空白对照组、生理盐水治疗组（NS组）、吗替麦考酚酯治疗组（MMF组）。MMF组腹腔注射MMF（100mg／kg）干预;NS组腹腔注射等量生理盐水;空白对照组只作针扎刺激,不注射任何药物。伤后7、14、28d处死3组大鼠,取大鼠脑干进行巨噬细胞一小胶质细胞质抗原（ED-1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和硫酸软骨素（CS）免疫组化染色,检测活化小胶质细胞、活化星形胶质细胞、硫酸软骨素蛋白聚糖,并以累积光密度（IOD）值进行定量评估。结果在伤后不同时间点,MMF组活化小胶质细胞、活化星形胶质细胞、硫酸软骨素蛋白聚糖IOD值均显著低于NS组与空白对照组（P〈0．05）;而Ns组和空白对照组之间无统计学差异（P〉0．05）。结论MMF可抑制大鼠DAI后脑干小胶质细胞和星形胶质细胞激活,还可降低cs表达。     

布美他尼对LPS诱导的小胶质细胞活化及炎性分泌的影响

目的观察钠-钾-氯共转运体(Na+-K+-2Cl-cotransporter 1,NKCC1)的特异性抑制剂布美他尼(Bumetanide)对LPS(脂多糖)诱导的小胶质细胞活化及炎性因子分泌的影响。方法差速贴壁法培养大鼠原代小胶质细胞,纯化的小胶质细胞分为对照组,LPS组(1.0μg/ml)和布美他尼干预组(NKCC1抑制剂,10μM),在干预1、3、6和12 h固定细胞爬片,免疫荧光双标显示小胶质细胞活化形态;各时间点收取上层培养基,用ELISA法测定各组培养基中TNF-α和IL-1β的水平。结果 LPS干预后小胶质细胞活化,体积增大,布美他尼干预后小胶质细胞活化受到抑制。小胶质细胞分泌的TNF-α和IL-1β在LPS干预1 h时开始明显增加,TNF-α的分泌在6 h达到最高峰;IL-1β的分泌在3 h时达到最高峰(P0.05)。布美他尼干预后与LPS组比较,TNF-α和IL-1β分泌明显减少,其中在3、6、12 h时TNF-α分泌显著降低(P0.05),而IL-1β的分泌在1、3、6、12 h时明显降低(P0.05)。结论布美他尼可减少LPS诱导的小胶质细胞活化及炎性因子分泌增加,提示NKCC1通路在小胶质细胞活化及炎性因子分泌中发挥了重要作用。     

细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对活化星形胶质细胞神经蛋白聚糖、短蛋白聚糖表达的抑制作用

目的研究细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine对星形胶质细胞活化后神经蛋白聚糖(Neurocan)、短蛋白聚糖(Brevican)表达的抑制作用。方法应用睫状神经营养因子(CNTF)刺激法建立体外培养星形胶质细胞的活化模型,实验分3组:对照组、活化组与抑制组。对照组:正常培养的星形胶质细胞;活化组:星形胶质细胞加入20 ng/ml睫状神经营养因子(CNTF)处理24 h;抑制组:星形胶质细胞用20 ng/ml睫状神经营养因子预处理24 h,加入100μmol/L Olomoucine。应用ELISA法检测不同时间点(12 h、24 h、48 h)各组细胞上清液中Neurocan、Brevican含量变化,半定量RT-PCR检测各组细胞GFAP mRNA及Neurocanm RNA、Brevican mRNA的表达变化。结果(1)活化组上清液中Neurocan、Brevican的含量在12 h、24 h、48 h随着时间的延长逐渐增加,与对照组比较差异有显著性(P0.01);抑制组上清液中Neurocan、Brevican含量随着时间的延长较活化组明显降低,与对照组、活化组比较差异有显著性(P0.01)。(2)活化组细胞GFAP mRNA、Neurocan mRNA、Brevican mRNA表达明显增加,与对照组比较差异有显著性(P0.01);抑制组细胞GFAP mRNA、Neurocan mRNA、Brevican mRNA表达均明显下调,与活化组比较差异有显著性(P0.01)。结论细胞周期依赖激酶抑制剂Olomoucine可抑制活化星形胶质细胞神经蛋白聚糖、短蛋白聚糖表达。     

大鼠持续性脑缺血后小胶质细胞变化及其与神经元凋亡的关系

目的 研究成年大鼠持续性局灶脑缺血后小胶质细胞的变化及其与缺血后凋亡的关系。方法 采用单侧大脑中动脉近端民凝术建立成年大鼠持续性局灶脑缺血模型。在手术后3h、6h、12h、24h、48h、72h和120h取材,分别用IsolectinB4凝集素标记小胶质细胞和原位末端TUNEL法标记凋亡细胞。结果 缺血后凝集素阳性小胶质细胞和TUNEL阳性小胶质细胞都分布在梗死灶周边区。缺血12h在梗死灶的边缘密集分布凝集素标记阳性细胞,24－72h凝集素阳性小胶质细胞数量增加（P＜0．05）,120h阳性细胞数量减少（P＜0．01）。脑缺血48h、72h、120h在梗死灶边缘区域分布TUNEL阳性凋亡细胞,TUNEL阳性细胞以神经细胞为主。结论 持续性局灶脑缺血后活化小胶质细胞主要分布在梗死灶周边区,可能对缺血后神经元凋亡产生作用。     

MPP~+重新启动多巴胺能神经元细胞周期的作用及机制

目的研究1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)重新启动多巴胺能神经元细胞周期的作用及机制。方法使用MPP+处理神经元样分化的PC12细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测早期凋亡细胞和细胞周期分布,免疫细胞化学检测ERK/MAPK通路活化水平。结果经MPP+处理后,细胞活力呈浓度依赖性下降,经25、50、75、100、150 mmol/L MPP+处理24 h后细胞存活率分别下降至对照组的(97.32±2.41)%(、67.69±3.03)%、(56.00±3.12)%、(47.23±2.55)%、(40.00±2.46)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。经75 mmol/L MPP+处理后出现早期凋亡细胞,随处理时间延长,细胞凋亡率逐渐增加,其处理4、8、16和24 h后细胞凋亡率分别为(7.26±3.43)%、(8.34±3.55)%(、20.04±2.64)%和(28.46±2.35)%(P<0.01)。同时细胞周期中G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多(P<0.01),细胞内ERK1/2通路活化。结论MPP+可通过活化ERK1/2通路重新启动多巴胺神经元的细胞周期,并诱导多巴胺能神经元凋亡。     

p38MAPK在体外培养星形胶质细胞缺氧/复氧损伤中的表达

目的 建立SD大鼠星形胶质细胞缺氧复氧损伤模型,探讨p38MAPK活性变化与星形胶质细胞损伤的关系.方法 体外培养新生SD大鼠星形胶质细胞,实验设正常对照组（N）、SB203580组（SB组,10 μmol/L）、缺氧/复氧组（H/R组）和缺氧/复氧组＋SB203580阻断p38MAPK组（H/R＋SB组）.应用MTT法、WB法、ELISA法检测缺氧4 h、8 h、复氧6 h、12 h、24 h、48 h时细胞存活率,p38MAPK、p-p38（磷酸化p38MAPK）及TNF-α的变化.结果 培养星形胶质细胞GFAP阳性表达率大于97%.缺氧/复氧使星形胶质细胞活力降低,SB203580阻断p38MAPK细胞活力高于H/R组,各组星形胶质细胞总p38MAPK水平无显著变化,缺氧复氧干预后p-p38表达上调,TNF-α水平显著增高.用SB203580阻断p38MAPK通路后,SB＋H/R组较H/R组p-p38、TNF-α水平降低.SB组总p38MAPK、p-p38、TNF-α水平与N组比较无显著变化.结论 p38MAPK信号通路参与了星形胶质细胞缺氧复氧损伤过程.