嗅鞘细胞移植损伤脊髓组织的超微结构变化

背景：脊髓损伤后神经功能难以自行恢复,嗅鞘细胞具有外周性和中枢性两种胶质细胞的成鞘功能,是修复受损神经最有前途的种子细胞。嗅鞘细胞移植到受损脊髓后的组织学和超微结构的变化可能帮助解释嗅鞘细胞发挥修复作用的机制。 目的: 验证嗅球源性嗅鞘细胞移植对脊髓损伤功能恢复的促进作用,并观察移植的嗅鞘细胞对神经元和轴突组织和超微结构的影响。 方法：将已制备脊髓模型的Wistar大鼠随机分为3组,对照组不做任何注射操作,DMEM/F12组注射DMEM/F12培养基,嗅鞘细胞组注射嗅鞘细胞悬液。每周进行肢体活动BBB评分,8周后取脊髓标本进行组织学和免疫组织化学观察,评价脊髓损伤的修复情况,并观察嗅鞘细胞移植对脊髓组织和超微结构的影响。 结果与结论：3组动物均出现后肢运动功能的恢复,嗅鞘细胞组优于对照组和DMEM/F12组,在4周后更为明显。组织学观察可见,在嗅鞘细胞组可见有神经纤维通过损伤处。损伤处附近,嗅鞘细胞组脊髓腹侧的神经纤维和神经元形态较好,损伤较轻。而对照组和DMEM/F12组神经纤维和神经元损害严重。嗅鞘细胞组的caspsase-3阳性细胞数少于对照组和DMEM/F12组。超微结构观察可见,嗅鞘细胞组的神经纤维和细胞形态均优于对照组和DMEM/F12组。结果表明嗅鞘细胞移植对大鼠脊髓损伤修复有明显的促进作用,并可恢复损伤神经的部分功能,对受损神经纤维和神经元有保护作用。     

嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠NG2的表达

背景：对于脊髓损伤,目前临床尚无有效的治疗对策,近年来嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤修复取得了一定的进展。NG2是主要的硫酸软骨素蛋白多糖分子,对轴突有抑制作用。 目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓损伤大鼠NG2表达的影响,进一步分析嗅鞘细胞移植在修复脊髓损伤中的作用途径。 方法：将112只大鼠随机分为4组,空白组、模型组、嗅鞘细胞移植组及DF12组各28只。空白组仅切开T10全椎板及T9,T11部分椎板,对脊髓未作其他处理;其他3组应用脊髓横切法制作脊髓损伤动物模型。嗅鞘细胞移植组进行嗅鞘细胞移植,每侧断端植入20 000 cells;DF12组于相同部位注射DF12培养液。在大鼠脊髓损伤后1,3,7,14,28,42和56 d时,取材按照SP试剂盒的操作步骤检测NG2的表达。 结果与结论：空白组NG2呈低表达,在模型组、DF12组脊髓损伤24 h后损伤部位的NG2的表达开始升高,7 d时达到顶点,4周时NG2表达明显降低,6,8周时仅在局部有所表达。嗅鞘细胞移植组脊髓损伤1 d时NG2表达开始增加,主要在损伤部位,在各时间点与模型组、DF12组相比NG2表达水平明显降低,但高于空白组NG2各时间点的表达。提示嗅鞘细胞移植后NG2的表达水平降低,嗅鞘细胞具有抑制NG2表达的作用,可消除或减轻细胞外基质中对轴突有抑制作用的化学屏障,这可能是其治疗脊髓损伤促进轴突再生的机制之一。     

嗅鞘细胞移植后大鼠损伤脊髓神经生长因子的表达

目的 研究嗅鞘细胞移植对大鼠损伤脊髓内的神经生长因子(NGF)表达的影响,以从NGF角度探讨嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓损伤的机制.方法 48只SD大鼠用NYU -Ⅱ撞击机(10g-25 mm)损伤T10脊髓制作脊髓损伤(SCI)模型,随机分为嗅鞘细胞组、DMEM组各24只;另设立正常对照组6只.将GFP-嗅鞘细胞细胞悬液移植入嗅鞘细胞组大鼠损伤处,DMEM组用单纯的DMEM/F12液代替,正常对照组不做任何处理.移植术后1d、7d、14 d、21 d,用BBB评分法测定脊髓运动功能,RT - PCR方法比较各时间点NGF表达差异.移植术后第21天应用免疫组化比较嗅鞘细胞组、DMEM组、正常对照组大鼠脊髓损伤区NGF的表达差异.结果 移植后1d、7d、14 d、21 d,嗅鞘细胞移植组运动功能评分均高于同期DMEM组.NGF表达量在术后第1天最高,第7天达峰值,之后缓慢降低.移植后第21天,嗅鞘细胞移植组脊髓NGF表达量高于同期DMEM组和正常对照组.结论 嗅鞘细胞移植可上调损伤脊髓NGF的表达,从而促进了损伤脊髓的修复.     

嗅鞘细胞移植修复大鼠脊髓损伤的组织病理学变化☆

背景：对于脊髓损伤,目前临床尚无有效的治疗对策,近年来嗅鞘细胞移植对脊髓损伤修复取得了一定的进展。 目的：观察嗅鞘细胞移植在缓解损伤脊髓的病理反应和超微结构变化,及其在发生发展中的作用。 方法：60只大鼠随机分为空白组,模型组,嗅鞘胞移植组和DF12组,每组15只。空白组：仅切开T10全椎板及T9,T11部分椎板,对脊髓未作其他处理,明胶海绵轻柔压迫止血;模型组：仅切断脊髓,未作特殊处理;嗅鞘细胞移植组和DF12组：切断脊髓后用微量注射器分别注射嗅鞘细胞和DF12培养液,随后缝合切口。脊髓损伤后1,3,7,14,28,42,56 d每组麻醉2只受检大鼠,取材做光镜观察和电镜观察。 结果与结论：单纯脊髓横切损伤后,发生了出血、水肿、变性、坏死以及囊腔形成,胶质细胞增生和神经纤维再生。嗅鞘细胞移植后,明显减轻了神经元和神经纤维的坏死变性程度,减轻病理反应,并能对损伤神经元实施保护;防止了胶质细胞过度增生形成瘢痕屏障,明显增加了再生神经纤维的数量。提示嗅鞘细胞移植对损伤脊髓具有减轻病理反应和促进修复的作用。     

不同来源嗅鞘细胞修复脊髓损伤的效果比较

背景：研究表明嗅鞘细胞所分泌的细胞黏附分子和神经营养因子具有保护脊髓神经元和促进脊髓轴突再生的效应。 目的：比较嗅球及嗅黏膜固有层来源的嗅鞘细胞异体移植修复脊髓损伤的能力。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-06/2008-06在西电集团医院中心实验室完成。 材料：随机选取雄性3月龄及23月龄SD大鼠各6只,分为实验组(23月龄)和对照组(3月龄),用于嗅鞘细胞的体外培养和纯化;SD大鼠30只随机分为乳鼠嗅球嗅鞘细胞移植组、正常嗅黏膜嗅鞘细胞移植组、对照组,每组10只。 方法：30只SD大鼠制造脊髓损伤模型,分别将体外培养的乳鼠和SD大鼠嗅鞘细胞进行脊髓损伤模型的异体移植,对照组不做移植。 主要观察指标：术后4,8周,进行BBB神经功能评分,诱发电位,组织病理学观察。 结果：实验过程中大鼠死亡7只,各组死亡率大致相同。移植后第4,8周时,乳鼠嗅鞘细胞移植组、正常嗅黏膜嗅鞘细胞组评分差异无显著性意义(P > 0.05),均显著高于空白对照组(P < 0.001);嗅鞘细胞移植2组评分8周高于4周(P < 0.01)。术后4周,各组动物均未引出运动诱发电位,移植后8周时,2组嗅鞘细胞移植组动物均可引出运动诱发电位,2组差异无显著性意义(P > 0.05),空白对照组动物仍未引出运动诱发电位(P < 0.001)。移植后8周,2组嗅鞘细胞移植组脊髓损伤区有较多细胞浸润,对照组细胞数目较少。 结论：来源于嗅球与嗅黏膜的嗅鞘细胞对脊髓损伤修复均有促进作用,且两者作用无明显差异。     

嗅鞘细胞移植对脊髓慢性压迫形态和脑源性神经营养因子表达的影响

背景：嗅鞘细胞是介于星形胶质细胞和许旺细胞之间的一类特殊的胶质细胞,具有切实有效的促进神经再生修复的作用,但其相关机制还没确定。 目的：观察嗅球成鞘细胞移植对脊髓慢性压迫损伤后脊髓功能形态和脑源性神经营养因子的影响,以及嗅鞘细胞移植后脊髓慢性压迫损伤动物脊髓功能的修复。 设计、时间及地点：对照动物实验，细胞学观察，于2005-11/2007-03在上海中医药大学脊柱病研究所完成。 材料：新生SD雄性大鼠采用酶消化法培养原代大鼠嗅鞘细胞，并将其制成细胞悬液。雄性3月龄SD大鼠以螺钉持续性压迫大鼠C4脊髓建立脊髓慢性压迫动物模型。 方法：造模后大鼠分为模型组、嗅鞘细胞组、DMEM/Ham’s F-12 培养液组、正常组，每组12只。嗅鞘细胞组在距离脊髓压迫区域上下0.5 mm处选4点注射,按1μL/点脊髓内注射109 L-1嗅鞘细胞，注入速度为1μL/ min。 主要观察指标：应用光学显微镜、电子显微镜观察脊髓形态的变化，采用免疫组织化学、PT-PCR 的方法检测脊髓组织脑源性神经营养因子的分泌，以改良的Gale联合行为评分法对脊髓功能进行评定， 结果：免疫组织化学检测显示，嗅鞘细胞移植能部分改善大鼠脊髓灰质神经细胞的凋亡程度，延缓白质神经纤维的减少，促进髓鞘的修复与再生。与模型组、DMEM/Ham’s F-12 培养液组比较， 嗅鞘细胞移植治疗后脊髓组织中脑源性神经营养因子表达明显增加（P < 0.01）。与模型组、DMEM/Ham’s F-12 培养液组比较，嗅鞘细胞移植能较大程度的改善大鼠脊髓功能（P < 0.05）。 结论：嗅鞘移植能够部分改善脊髓损伤后脊髓组织的病理形态，促进脊髓组织中脑源性神经营养因子的表达，减轻脊髓慢性压迫后的功能损害。     

嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠Sema3A及其受体NP-1基因的表达

背景：嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复机制中对神经生长抑制导向因子的研究较少。 目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓半横断损伤后神经生长抑制导向因子Sema3A及其受体NP-1在RNA水平表达的变化。 方法：17只SD大鼠随机分为嗅鞘细胞移植组、DMEM/F12 培养液移植组和正常对照组。制作T11~T12水平大鼠脊髓左侧半横断损伤模型,立刻分别注射嗅鞘细胞悬液或等量的DMEM/F12 培养液。 结果与结论：6周后取横断水平前后两个脊髓节段,用RT-PCR的方法对Sema3A、NP-1的mRNA进行半定量分析。①嗅鞘细胞在大鼠脊髓内仍有大量存活。②Sema3A及NP-1 mRNA的量,DMEM/F12 培养液移植组明显多于正常对照组(P < 0.05),嗅鞘细胞移植组与培养液移植组比较明显下调,且与正常对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05)。③提示嗅鞘细胞移植有效减少了神经生长抑制导向因子Sema3A及其受体NP-1 mRNA的表达。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床验证

背景: 一系列基础研究证实在动物脊髓损伤的模型中,嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤的再生和恢复脊髓的部分神经功能。部分临床实验证明嗅鞘细胞的移植的确能改善脊髓损伤患者的神经功能,从而改善其生活质量。 目的：验证嗅鞘细胞移植对脊髓损伤患者神经功能修复的作用及安全性。 方法：取流产胚胎嗅球并消化成为单个嗅鞘细胞,培养纯化2周左右,制成嗅鞘细胞悬液。选择脊髓损伤患者213例,全麻下将制备好的嗅鞘细胞悬液采用区域性多靶点注射方法移植于损伤脊髓的周围。采用ASIA量表对患者移植前1d及移植后3周~2个月进行评分,评价患者脊髓恢复状况。 结果与结论：所有患者的脊髓神经功能于术后3周均有不同程度的改变,脊髓功能评分及感觉与运动功能均较移植前明显提高(P < 0.001),且随时间延长呈不断改善趋势;最长患者随访5年,未见已恢复的神经功能 减退及移植不良反应。证实嗅鞘细胞移植对脊髓损伤患者的神经功能恢复有促进作用,可以部分恢复及改善其部分脊髓神经功能,且治疗方法安全。     

嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复：可通过抑制损伤区NogoA、NgR及RhoA表达实现？

目的：观察嗅鞘细胞移植前后脊髓损伤区勿动蛋白（NogoA）、NgR及RhoA的动态变化,探讨嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的可能机制。 方法：实验于2006年9月/2007年5月在西安交大医学院环境与基因重点实验室完成。①实验动物：成年SD大鼠40只,随机数字表法分为正常组、模型组、嗅鞘细胞组、DF12对照组,10只/组。另取30只健康成年雄性SD大鼠作为嗅鞘细胞的来源。②实验方法：除正常组外,其余各组均建立全横切脊髓损伤模型。嗅鞘细胞组将原代培养12d的嗅鞘细胞悬液调整为1×1011 L-1,在距损伤缘上下各1mm处分4点应用微量注射器注射,深度1.0mm,每处各注射1μL。DF12对照组同法每点注射等量DF12培养液,模型组、正常组不进行任何处理。③实验评估：各组分别于移植后1, 4, 8周采用免疫组化技术及Western blot技术动态检测脊髓损伤区NogoA、NgR及RhoA表达的变化。同时在移植后8周行嗜银染色检测组织形态学变化及应用BBB法评价移植后各组动物下肢功能。 结果：①组织形态学变化。嗅鞘细胞移植8周后除正常组外,其余各组均可见明显的神经纤维再生,但模型组与DF12对照组大部分纤维排列紊乱,再生纤维方向性较差;嗅鞘细胞组可见明显的新生轴突,且神经纤维跨越损伤部位修复脊髓损伤,无论在数量还是质量上均优于模型组及DF12对照组。②移植后8周各组下肢运动功能检测BBB评分结果的比较：嗅鞘细胞组BBB评分均明显高于模型组、DF12对照组,且差异有显著性意义（P<0.01）。③免疫组化技术及Western blot技术均显示正常组NogoA、NgR及RhoA的表达明显低于其余3组（P<0.05）,而模型组和DF12对照组差异无显著性意义（P>0.01）;同时OECs组与模型组和DF12对照组比较亦有显著性差异（P<0.05）。结论：嗅鞘细胞移植可能通过降低脊髓损伤区NogoA、NgR及RhoA的表达,从而促进损伤脊髓的修复。     

嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的临床研究现状

目的：对嗅鞘细胞生物学特性、培养纯化、嗅鞘细胞移植的可能机制及嗅鞘细胞移植在临床的应用等方面进行分析,介绍嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状。 资料来源：以olfactory ensheathing cells,spinal cord injury,嗅鞘细胞,脊髓损伤为检索词检索PubMed数据库(2000/2009),中国期刊全文数据库(2000/2009)。 资料选择：纳入标准：①文章所述内容应与嗅鞘细胞及脊髓损伤密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准：①重复性研究。②Meta分析。 结局评价指标：嗅鞘细胞移植治疗脊髓损伤的研究进展。 结果：嗅鞘细胞具有与许旺细胞和星形胶质细胞相似的特征。目前嗅鞘细胞移植的动物实验主要致力于提高轴突再生能力、替代细胞成分、阻止脱髓鞘病变和促进髓鞘再生等方面,移植的嗅鞘细胞具有促进感觉及运动功能恢复的客观结果,有些移植研究甚至已经进入了临床试验阶段。不过嗅鞘细胞移植由动物实验转化到临床应用还受到很多因素的影响,诸如移植剂量、细胞生长因子的活力,细胞移植的风险等,尤其是嗅鞘细胞移植后的近期及远期效果还需要进一步深入研究、评价,并且需要长时间的随访。有研究已经把用基因转染的嗅鞘细胞用于移植,在动物试验身上已经取得了满意的效果。 结论：随着基因工程技术发展以及嗅鞘细胞移植修复神经机制的深入研究,嗅鞘细胞移植必将为临床治疗脊髓损伤的患者带来康复的希望。     

Transplantation of olfactory ensheathing cells for promoting regeneration following spinal cord injury

OBJECTIVE： To investigate the status of olfactory ensheathing cells （OECs） transplantation in facilitating the regeneration of spinal cord injury. DATA SOURCES： Articles about OECs transplantation in treating spinal cord injury were searched in Pubmed database published in English from January 1981 to December 2005 by using the keywords of ＂olfactory ensheathing cells, transplantation, spinal cord injury＂. STUDY SELECTION： The data were checked primarily, literatures related to OECs transplantation and the regeneration of spinal cord injury were selected, whereas the repetitive studies and reviews were excluded. DATA EXTRACTION： Totally 43 articles about OECs transplantation and the regeneration and repair of spinal cord injury were collected, and the repetitive ones were excluded. DATA SYNTHESIS： There were 35 articles accorded with the criteria. OECs are the olfactory ensheathing glias isolated from olfactory bulb and olfactory nerve tissue. OECs have the characters of both Schwann cells in central nervous system and peripheral astrocytes. The transplanted OECs can migrate in the damaged spinal cord of host, can induce and support the regeneration, growth and extension of damaged neuritis. Besides, transgenic technique can enable it to carry some exogenous genes that promote neuronal regeneration, and express some molecules that can facilitate neural regeneration, so as to ameliorate the internal environment of nerve injury, induce the regeneration of damaged spinal cord neurons, which can stimulate the regeneration potential of the damaged spinal cord to reach the purpose of spinal cord regeneration and functional recovery. CONCLUSION： OECs are the glial cells with the energy for growth at mature phase, they can myelinize axons, secrete various biological nutrition factors, and then protect and support neurons, also facilitate neural regeneration. OECs have been successfully isolated from nasal olfactory mucosa and olfactory nerve. Therefore, autologous transplantation of OECs and objective genes modified OECs carrying various neurotrophic factors may become an effective method to treat spinal cord injury in the future.     

Transplantation of olfactory ensheathing cells for promoting regeneration following spinal cord injury

OBJECTIVE: To investigate the status of olfactory ensheathing cells (OECs) transplantation in facilitating the regeneration of spinal cord injury. DATA SOURCES: Articles about OECs transplantation in treating spinal cord injury were searched in Pubmed database published in English from January 1981 to December 2005 by using the keywords of "olfactory ensheathing cells, transplantation, spinal cord injury". STUDY SELECTION: The data were checked primarily, literatures related to OECs transplantation and the regeneration of spinal cord injury were selected, whereas the repetitive studies and reviews were excluded. DATA EXTRACTION: Totally 43 articles about OECs transplantation and the regeneration and repair of spinal cord injury were collected, and the repetitive ones were excluded. DATA SYNTHESIS: There were 35 articles accorded with the criteria. OECs are the olfactory ensheathing glias isolated from olfactory bulb and olfactory nerve tissue. OECs have the characters of both Schwann cells in central nervous system and peripheral astrocytes. The transplanted OECs can migrate in the damaged spinal cord of host, can induce and support the regeneration, growth and extension of damaged neuritis. Besides, transgenic technique can enable it to carry some exogenous genes that promote neuronal regeneration, and express some molecules that can facilitate neural regeneration, so as to ameliorate the internal environment of nerve injury, induce the regeneration of damaged spinal cord neurons, which can stimulate the regeneration potential of the damaged spinal cord to reach the purpose of spinal cord regeneration and functional recovery. CONCLUSION: OECs are the glial cells with the energy for growth at mature phase, they can myelinize axons, secrete various biological nutrition factors, and then protect and support neurons, also facilitate neural regeneration. OECs have been successfully isolated from nasal olfactory mucosa and olfactory nerve. Therefore, autologous transplantation of OECs and objective genes modified OECs carrying various neurotrophic factors may become an effective method to treat spinal cord injury in the future.     

甲基强的松龙联合嗅鞘细胞移植对急性脊髓损伤大鼠运动功能和诱发电位的影响

背景：嗅鞘细胞移植和甲基强的松龙是两种非常有前途的治疗脊髓损伤方法,关于二者联合治疗脊髓损伤的报道较少,结果也不尽相同。 目的：通过对大鼠行为学评分和诱发电位学检测了解嗅球嗅鞘细胞移植和甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤的修复作用以及二者之间有无协同作用。 方法：以NYU脊髓打击法建立大鼠急性T10脊髓损伤模型,术后分别注射嗅鞘细胞、甲基强的松龙、嗅鞘细胞+甲基强的松龙、无血清的DF12培养液、生理盐水。于术后8周进行后肢体感诱发电位、运动诱发电位检测,并通过BBB评分了解各组大鼠手术前、后运动功能的变化。 结果与结论：术后8周,嗅鞘细胞组、甲基强的松龙组、嗅鞘细胞+甲基强的松龙组与损伤组、DF12组比较,大鼠后肢BBB评分明显升高,体感诱发电位、运动诱发电位 N1波潜伏期缩短,波幅升高,差异有显著性意义(P < 0.05)。嗅鞘细胞+甲基强的松龙组与嗅鞘细胞组、甲基强的松龙组比较,大鼠后肢BBB评分明显升高,体感诱发电位、运动诱发电位N1波潜伏期缩短,波幅升高,差异有显著性意义(P < 0.05)。说明嗅鞘细胞移植和甲基强的松龙单独应用均可以显著促进急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复。二者联合促进急性脊髓损伤大鼠运动功能恢复的效果更加显著。     

接受嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠电生理及后肢功能变化

背景：研究证实嗅鞘细胞有利于神经元存活,并可促进轴突再生。 目的：探讨嗅鞘细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的效果。 方法：健康成年雌性SD大鼠40只,随机分为盐水对照组、细胞移植组,20只/组。另取10只SD大鼠用于嗅鞘细胞的分离培养。盐水对照组、细胞移植组大鼠均建立脊髓损伤模型,取双侧第8~10对肋间神经各2 cm,交叉植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),细胞移植组局部注射嗅鞘细胞2×106个,盐水对照组局部注射等量无菌生理盐水。通过体感诱发电位和运动诱发电位的检测,观察神经电生理恢复情况;BBB后肢运动功能评分结果;通过BDA顺行神经示踪,观察运动传导束恢复情况。 结果与结论：细胞移植组大鼠体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期、波幅明显优于盐水对照组(P < 0.01);细胞移植组大鼠BBB后肢运动功能评分较生理盐水组明显提高(P < 0.01);细胞移植组脊髓损伤区有较多BDA标记阳性神经纤维通过,其数量明显多于盐水对照组(P < 0.01)。证实局部注射嗅鞘细胞可以较好地恢复大鼠脊髓损伤后的神经电生理及后肢运动功能。     

嗅鞘细胞移植对脊髓全横断损伤大鼠大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子表达的影响

背景：多项研究已证实嗅鞘细胞能促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复,但其分子机制还不清楚。 目的：观察嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠大脑运动皮质神经营养因子胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA表达的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007-07/2008-12在昆明医学院神经科学研究所完成。 材料：清洁级健康成年雌性SD大鼠88只,随机分成3组：假手术组8只、模型组40只、细胞移植组40只。另取新生一两天的GFP转基因小鼠5只用于分离培养嗅鞘细胞。 方法：模型组、细胞移植组大鼠建立T9脊髓全横断损伤模型,假手术组仅行T8椎板切除。造模后,细胞移植组吸取嗅鞘细胞悬液15 μL(约3×105个细胞)滴加到约2 mm3的明胶海绵上,将含有嗅鞘细胞的明胶海绵植入大鼠脊髓两横断面之间的间隙处。分别于移植后3,7,14,21,28 d取大脑运动皮质行RT-PCR检测。 主要观察指标：采用免疫细胞化学法对培养的嗅鞘细胞进行鉴定,RT-PCR法检测大脑运动皮质胰岛素样生长因子1和睫状神经营养因子mRNA的表达变化。 结果：培养的嗅鞘细胞p75-NGFR阳性率>90%,主要为双极细胞,突起较长。与假手术组比较,模型组术后3 d睫状神经营养因子表达明显升高,7,14,21 d降至无明显差异,至28 d明显降低(P < 0.05);术后各时间模型组胰岛素样生长因子1的表达无明显差异(P > 0.05)。与模型组比较,移植后14 d细胞移植组胰岛素样生长因子1表达明显增多(P < 0.05);移植后3 d睫状神经营养因子的表达明显减少(P < 0.05),但移植后7,14,21 d表达逐渐回升,至28 d明显高于模型组水平(P < 0.05)。 结论：嗅鞘细胞移植能够促进脊髓损伤修复,其机制可能与促进大脑运动皮质胰岛素样生长因子1 mRNA的表达上调,并在初期抑制睫状神经营养因子mRNA的表达有关。     

Chronic transplantation of olfactory ensheathing cells promotes partial recovery after complete spinal cord transection in the rat

The goal of this study was to ascertain whether olfactory ensheathing cells (OECs) were able to promote axonal regeneration and functional recovery when transplanted 45 days after complete transection of the thoracic spinal cord in adult rats. OECs promoted partial restitution of supraspinal pathways evaluated by motor evoked potentials and modest recovery of hindlimb movements. In addition, OEC grafts reduced lumbar reflex hyperexcitability from the first month after transplantation. Histological results revealed that OECs facilitated corticospinal and raphespinal axons regrowth through the injury site and into the caudal spinal cord segments. Interestingly, raphespinal but not corticospinal fibers regenerated long distances through the gray matter and reached the lower lumbar segments (L5) of the spinal cord. However, delayed OEC grafts failed to reduce posttraumatic astrogliosis. In conclusion, the beneficial effects found in the present study further support the use of OECs for treating chronic spinal cord injuries.     

嗅黏膜嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植修复脊髓损伤

目的：观察嗅黏膜来源的嗅鞘细胞与肌基膜管联合移植后对脊髓损伤的修复效果。 方法：1只SD大鼠行背正中切口，顺椎旁肌纤维切除约1.5 cm×0.8 cm×0.6 cm的肌条，复温、漂洗并挤压肌条以排出肌浆，制成肌基膜管。4只SD大鼠麻醉后取出嗅黏膜，胶原酶消化法分离培养嗅鞘细胞，调整浓度至1011 L-1。取SD大鼠50只，随机分成5组：嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组、肌基膜管组、模型组、正常组，10只/组。除正常组外，其余组均建立脊髓损伤模型，于T10横断脊髓并切除约2 mm，将培养7 d的嗅鞘细胞与肌基膜管按组别分别植入脊髓断端，模型组用浸有DMEM的凝胶海绵桥接横断的脊髓。 结果：移植后第8周，嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组大鼠运动功能明显恢复，出现大关节大幅度运动，且前者运动功能BBB评分升高尤为显著（P < 0.01）；肌基膜管组大鼠仅见小关节轻微活动；模型组大鼠后肢挛缩重，无明显功能恢复。嗅鞘细胞+肌基膜管联合组后肢体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期显著低于其他各组（P < 0.01）。苏木精-伊红染色和核转录因子免疫组化染色结果显示，嗅鞘细胞+肌基膜管联合组、嗅鞘细胞组的移植物与损伤脊髓整合较好，未见明显空洞，有大量染色呈阳性的纤维，纤维较长，由近侧端长入远侧端；肌基膜管组有空洞形成，染色阳性的纤维数量少，纤维细小且排列紊乱；模型组端断间充满瘢痕组织，未见明显染色阳性纤维。 结论：嗅鞘细胞移植可促进脊髓损伤后的轴突再生，肌基膜管作为一种生物管道，两者联合应用可明显促进脊髓损伤后的轴突再生及功能恢复。