大鼠皮层梗死后同侧丘脑胶质细胞活化和炎性介质动态变化北大核心CSCD

目的观察大鼠皮层局灶性梗死后早期阶段同侧丘脑继发的胶质细胞活化与炎性介质表达的动态变化,探讨远隔损害可能的干预靶点。方法采用雄性SD大鼠,建立易卒中型肾血管性高血压大鼠(strokeprone renovascular hypertensive rat,RHRSP)模型。随机分为假手术组和右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组,假手术组和MCAO组于术后1 d、4 d及8 d取材,每组各时间段9只。改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS)评价神经功能,HE染色以确定MCAO造模成功,免疫荧光检测GFAP、Iba-1、NeuN观察星形胶质细胞、小胶质细胞活化程度及神经元数目,western blot和免疫荧光检测炎性介质ICAM-1、IL-6和TNF-α的表达情况。结果 mNSS评分提示MCAO术后出现神经功能缺损,术后1 d最严重,术后8 d内缓慢恢复。HE染色确认梗死灶局限于右侧皮层。同侧丘脑星形和小胶质细胞自1 d起开始活化,活化增强至8 d更加明显(P<0.001)。术后1 d仅ICAM-1表达增多(P<0.05);4 d时IL-6和TNF-α也增多(P<0.05);至8 d时IL-6表达降低,而ICAM-1和TNF-α仍维持高水平。神经元数目在8 d明显减少(P<0.001)。结论皮层梗死后早期阶段同侧丘脑继发的胶质细胞活化和各炎性介质表达的动态变化具有差异性,对炎性反应进行多靶点的调控可能是神经保护的有效途径。     

针刺对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞活化及炎症介质含量的影响

目的研究针刺对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞活化及TNF-α、IL-1β、IL-6含量的影响。方法建立MCAO大鼠模型,分别针刺内关、曲池后进行神经体征评分,HE染色检测神经元坏死率,ELISA法检测脑组织炎症介质含量,IBA1免疫荧光染色检测小胶质细胞活化。结果与假手术对照组相比,模型对照组大鼠神经体征评分、脑海马神经元坏死率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量、IBA1表达均明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,内关组、曲池组神经体征评分、脑海马神经元坏死率、IL-1含量、IBA1表达明显降低,曲池组TNF-α、IL-6含量明显降低(P<0.05)。结论针刺内关、曲池能改善MCAO大鼠的神经功能损伤,抑制小胶质细胞活化,降低炎症介质含量,提示针刺可能通过影响小胶质细胞活化从而调控脑缺血继发的炎症反应。     

皮质梗死大鼠丘脑腹后核继发性损害及其机制研究

目的 探讨易卒中型肾血管性高血压大鼠(SPRHR)大脑皮质梗死后丘脑腹后核继发性损害及其机制,以为脑梗死临床康复治疗提供理论依据.方法 采用易卒中型肾血管性高血压大鼠制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,应用尼氏染色TUNEL法和免疫组织化学染色检测大鼠梗死侧丘脑腹后核神经元形态、凋亡细胞数目,以及微管相关蛋白-2、胶质纤维酸性蛋白和少突胶质细胞特异性标志蛋白RIP的表达水平.结果 与假手术组比较,手术后1周,MCAO组大鼠梗死侧丘脑腹后核正常神经元数目减少38.3l%(P<0.01);至手术后4周减少73.49%(P<0.01).与假手术组比较,手术后1周,MCAO组大鼠梗死侧丘脑腹后核即可见凋亡细胞(P<0.01),至手术后2周和4周,凋亡细胞持续存在,并可见坏死细胞.与假手术组比较,手术后1周,MCAO组大鼠梗死侧丘脑腹后核微管相关蛋白-2表达水平无明显变化(P>0.05),而胶质纤维酸性蛋白和少突胶质细胞特异性标志蛋白RIP表达水平明显升高(均P<0.01);至手术后2周和4周,微管相关蛋白-2表达水平逐渐降低(P=0.000,0.000),而胶质纤维酸性蛋白(P=0.000,0.000)和少突胶质细胞特异性标志蛋白RIP(P=0.012,0.047)表达水平则逐渐升高且呈持续高表达.结论 大脑皮质梗死后同侧丘脑腹后核神经元呈进行性死亡.梗死侧丘脑神经元凋亡、延迟性星形胶质细胞反应性增生、少突胶质细胞增生及其磷脂蛋白持续高表达可能是造成梗死侧丘脑腹后核继发性损害的重要原因.     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后GABA_A受体亚基α1和γ2在梗死对侧皮层表达的动态变化

目的研究大鼠大脑中动脉缺血再灌注后梗死对侧皮层GABAA受体α1和γ2亚基的表达变化。方法采用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型(MCAO),分为MCAO组和假手术组,分别于术后7、30d和6月断头取脑,采用免疫组织化学技术检测各组中梗死对侧皮层GABAA受体α1和γ2亚基的表达水平。结果 MCAO组大鼠与假手术组大鼠比较,在缺血再灌注7d时GABAA受体α1和γ2亚基在梗死对侧皮层各个脑区的表达无明显差异(P0.05);30d和6个月时α1、γ2亚基在梗死对侧皮层各个脑区的表达均明显增加(P0.05)。结论 MCAO再灌注后梗死对侧皮层GABAA受体α1和γ2亚基发生了泛发而长效的变化,这种变化提示脑缺血再灌注后的远期GABAA受体可能出现了结构和功能上的改变,从而为进一步阐释脑缺血和GABAA受体间的关系,理解缺血性脑卒中后患者出现的相关病理生理学改变提供了理论依据。     

大脑皮层梗死后大继发鼠丘脑、中脑、脊髓和臂丛损害

目的 观察实验性大脑皮层梗死后大鼠同侧丘脑、中脑及对侧颈髓、臂丛神经是否发生继发性损害.方法 32只易卒中型肾血管性高血压大鼠(stroke-prone renovascular hypertensive rats, RHRSP)行右侧大脑中动脉皮层支闭塞(middle cerebral artery codex occlusion, MCAO)术,另外32只暴露而不凝闭大脑中动脉,作为假手术组.分别于术后1、2、3、4周各组各时间点取8只大鼠处死取脑和脊髓,免疫组化方法检测梗死灶同侧丘脑腹后核、中脑黑质及对侧脊髓颈膨大前角微管相关蛋白2(microtubule associated protein2, MAP2)、胶质原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acid protein, GFAP)以及特殊染色检测对侧臂丛神经.结果 与同期假手术组相比,MCAO术后各周梗死灶同侧丘脑腹后核、中脑黑质和对侧脊髓前角MAP2表达降低,GFAP表达增高(P<0.05);而对侧臂丛未见明显改变.结论 同侧丘脑腹后核、中脑黑质及对侧脊髓前角神经元细胞在大脑皮层梗死后存在继发性损害,这可能是梗死后期神经功能恢复困难的重要因素之一.     

Gap19介导Cx43半通道抑制JAK2/STAT3通路活化对急性脑梗死大鼠的保护作用

目的探究Gap19通过介导Cx43半通道活性和JAK2/STAT3通路对急性脑梗死(ACI)大鼠的影响。方法 24只SD大鼠随机分为3组:对照组、MCAO组和MCAO+Gap19组,每组8只。建立ACI大鼠模型(MCAO)和氧葡萄糖剥夺(OGD)体外模型。TTC染色检测大鼠脑梗死面积;mNSS法检测大鼠神经功能缺损;CCK-8检测星形胶质细胞活力;Western blot检测NVU模型Cx43、Cleaved caspase-3、Bcl、Bax和JAK2/STAT3通路相关基因的蛋白表达;溴化乙锭摄取实验检测星形胶质细胞中半通道活性;免疫荧光法检测星形胶质细胞中pSTAT3和Cx43的共定位。结果 MCAO处理导致大鼠脑梗死面积和神经功能缺损均显著上调(P 0.05),Gap19处理显著下调大鼠脑梗死面积和神经功能缺损(P 0.05)。OGD处理导致NVU模型Cx43的蛋白表达和半通道活性显著上调(P 0.05),细胞活力显著下调(P 0.05),促进细胞凋亡;Gap19处理显著上调OGD处理后NVU模型细胞活力(P 0.05),显著下调Cx43的蛋白表达和星形胶质细胞的半通道活性(P 0.05),抑制细胞凋亡,促进JAK2/STAT3通路活化,其中Cx43与pSTAT3存在共定位关系。结论 Gap19通过抑制Cx43半通道和活化JAK2/STAT3通路发挥对ACI大鼠的保护作用。     

大鼠脑梗死后脑组织TNF-α、GFAP、NSE、BDNF、Nestin的表达和神经功能变化

目的探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型不同时期梗死区周围组织胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、巢蛋白(Nestin)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达变化及其意义。方法采用线栓法制作大鼠MCAO模型,并随机分为模型1、3、7、14、21d组。采用免疫组化观察大鼠模型脑组织GFAP、NSE、BDNF、Nestin、TNF-α的表达。采用改良神经功能缺损严重程度量表(modified neurological severity score,mNSS)对MCAO模型大鼠进行神经功能评价。结果大鼠神经功能评分随MCAO术后时间延长而逐渐下降(F=121.282,P<0.05)。GFAP阳性细胞数量随MCAO术后时间推移呈双向反应,术后1、3、7d组逐渐升高,而至14d组和21d组则又逐步降低,其中7d组高于1d组、3d组(P<0.05)。NSE累积光密度(integrated optical density,IOD)随时间延长逐渐上升,其中1d组小于3d组、7d组、14d组、21d组,21d组大于3d组、7d组(P<0.05)。BDNF IOD值呈双向表达,1d组、3d组、7d组、14d组表达逐步降低,21d表达升高,其中1d组和21d组大于14d组(P<0.05)。Nestin+细胞数量随时间的推移呈双向反应,1d组～7d组逐步升高,随后逐步降低,其中7d组高于1d组、3d组(P<0.05)。MCAO后TNF-α表达无统计学差异(P=0.12)。结论 MCAO在急性期(7d前)受损脑组织产生炎症及抗炎反应明显,急性期后(7d后)以神经生长因子产生并促进神经再生为主。     

局灶性脑缺血/再灌注大鼠白细胞介素-1β蛋白和mRNA的表达

目的 :观察脑缺血对白细胞介素 - 1β(IL- 1β)表达的影响 ,及脑缺血后 IL- 1β的细胞来源。方法 :采用线栓法制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞 (MCAO)模型 ,应用原位杂交观察脑缺血再灌注对 IL- 1β m RNA表达的影响 ;应用荧光双标检测 IL- 1β的表达细胞。结果 :(1)正常和假手术大鼠大脑皮层 IL- 1β m RNA阳性细胞表达较少 ,缺血再灌注后缺血侧皮层 IL- 1β m RNA阳性细胞表达明显增加 ,再灌注后 2 h IL- 1β m RNA表达显著增加 ,再灌注后 2 4h逐渐降至正常水平。 (2 )缺血后表达 IL- 1β m RNA的主要细胞为神经元、星形胶质细胞和小胶质细胞。缺血再灌注后12 h IL- 1β蛋白主要表达于星形胶质细胞和小胶质细胞 ,神经元未见 IL- 1β的表达。结论 :脑缺血后 IL- 1β m RNA表达增加 ,IL- 1β可能在缺血性脑损伤中起重要作用。缺血再灌注后 IL- 1β主要来源于星形胶质细胞和小胶质细胞     

锌离子螯合剂DEDTC对MCAO大鼠的神经功能损害及AMPK/eNOS/NF-κB通路的调节作用

目的 探讨锌离子螯合剂DEDTC对大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠的神经功能损害及AMPK/eNOS/NF-κB通路的调节作用。方法 将雄性SD大鼠随机分为对照组、MCAO组、DEDTC组,后2组采用线栓法建立MCAO模型,DEDTC组在造模前30 min给予DEDTC干预,比较3组大鼠神经功能评分、血清生长细胞因子及炎症细胞因子水平、脑组织AMPK/eNOS/NF-κB通路的差异。结果 造模6、12、24 h后MCAO组大鼠的神经功能评分明显高于对照组,DEDTC组大鼠的神经功能评分明显低于MCAO组; 造模24 h后MCAO组大鼠的血清BDNF、VEGF、bFGF、TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1水平及脑组织中AMPK、eNOS、NF-κB的mRNA表达水平明显高于对照组; DEDTC组大鼠的血清BDNF、VEGF、bFGF水平以及脑组织中AMPK、eNOS的mRNA表达水平明显高于MCAO组,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、ICAM-1水平及脑组织中NF-κB的mRNA表达水平明显低于MCAO组。结论 锌离子螯合剂DEDTC对MCAO大鼠神经功能损害具有抑制作用,且该作用可能与AMPK/eNOS/NF-κB通路介导的细胞因子分泌改变有关。     

GSTP1通过调节JNK通路抑制癫痫大鼠海马区星形胶质细胞炎性激活

目的 明确谷胱甘肽硫转移酶P1(GSTP1)对星形胶质细胞炎性激活的影响及相关分子机制。方法 10周龄雄性SD大鼠采用腹腔注射氯化锂建立癫痫模型(n=8)并收集海马区脑组织。大鼠原代星形胶质细胞给予不同浓度脂多糖(0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml)诱导处理48 h。利用蛋白质印迹检测组织与细胞中GSTP1、JNK、p-JNK蛋白表达水平，以酶联免疫吸附试验检测TNF-α、IL-1β、IL-6浓度，以高效液相色谱测定谷氨酸(Glu)浓度。将GSTP1过表达载体瞬时转染至脂多糖诱导星形胶质细胞，并给予茴香霉素处理，观察星形胶质细胞炎性激活情况。结果 癫痫大鼠海马区脑组织中GSTP1蛋白表达水平低于正常大鼠，而p-JNK蛋白表达水平与TNF-α、IL-1β、IL-6、Glu浓度高于正常大鼠(P<0.05)。GSTP1与p-JNK蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。脂多糖诱导星形胶质细胞炎性激活，表现为GSTP1蛋白表达水平呈剂量依耐性降低，而p-JNK蛋白表达水平与TNF-α、IL-1β、IL-6、Glu浓度呈剂量依耐性升高(P&l...     

Netrin-1对大鼠实验性脑梗死后同侧丘脑血脑屏障保护作用

目的观察脑梗死后同侧丘脑是否出现血脑屏障破坏,Netrin-1对血脑屏障破坏是否具有保护作用及其能否促进神经功能恢复。方法 Sprague-Dawley大鼠36只,建立右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,假手术(sham)组仅暴露右侧大脑中动脉,分为sham组、MCAO+PBS组及MCAO+netrin-1组,每组6只。通过改良大鼠神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,m NSS)评价神经功能,造模后第8天及第14天取材,HE染色观察梗死灶,免疫荧光检测occludin及albumin表达与分布,Western blot检测occludin及ZO-1表达水平。结果m NSS评分见予以Netrin-1后于梗死后第8天及第14天评分降低(P0.05)。HE染色见右侧皮层梗死灶。Western blot见梗死后第8天开始出现occludin减少(P0.05),第14天occludin及ZO-1均明显减少(P0.05),免疫荧光见梗死后第8天及第14天occludin减少伴albumin血管外渗出;予以Netrin-1后,western blot及免疫荧光见梗死后第14天occludin增多(P0.05),伴albumin渗出增多,ZO-1无明显变化。结论Netrin-1对大鼠实验性脑梗死后同侧丘脑血脑屏障破坏具有保护作用,并可促进梗死后神经功能恢复。     

脑缺血对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能的影响及其机制探讨

目的 探讨脑缺血对阿尔茨海默病(AD)病程进展的影响及其机制.方法 采用大鼠海马注射凝聚态β-淀粉样蛋白(Aβ)1-40建立AD模型,再于海马内注射ET-1建立脑缺血条件,观察脑缺血后AD样大鼠认知功能以及海马内Aβ沉积、神经元丢失和异常磷酸化tau表达的变化;采用免疫组化、原位杂交和RT-PCR法检测海马内星形胶质细胞数量和IL-1、TNF-α表达的变化.结果 脑缺血后AD样大鼠的认知功能明显下降,海马内Aβ沉积增加,神经元丢失增加,异常磷酸化tau表达增加.星形胶质细胞的数量以及IL-1和TNF-α的表达显著增加(均P＜0.01).结论 脑缺血加重了AD样大鼠的认知功能障碍和海马病理损伤,显著增加的星形胶质细胞及IL-1和TNF-α的表达参与了这一过程.防治脑缺血和抗炎治疗可能成为减缓AD进展的新途径.     

MAPK/ERK信号通路在大鼠视神经损伤后小胶质细胞活化中的作用及机制研究

目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)信号通路在大鼠视神经损伤后小胶质细胞活化中的作用及机制。方法 将100只成年雄性大鼠随机分为实验组50只和对照组50只,实验组采用荧光金双侧上丘逆行标记视网膜神经节细胞并在培养7d后制作视神经损伤模型,免疫组织化学方法检测2组视网膜铺片小胶质细胞计数情况,应用蛋白免疫印记法检测2组MAPK通路的ERK蛋白表达水平及磷酸化蛋白水平,并应用免疫组化法检测2组视网膜白介素10(IL-10)和肿瘤坏死因子(TNF-α)等表达水平; 向实验组视网膜铺片添加ERK1/2通路阻断剂PD98059,再次检测其IL-10和TNF-α等表达水平及小胶质细胞计数情况。结果 与对照组比较,实验组ERK蛋白表达水平及磷酸化蛋白水平降低,视网膜铺片小胶质细胞计数降低,IL-10阳性率和TNF-α阳性率升高(P<0.05)。与阻断前比较,实验组阻断后6 h的IL-10和TNF-α等表达水平升高,小胶质细胞计数降低(P<0.05)。结论 MAPK/ERK信号通路在大鼠视神经损伤后小胶质细胞活化中具有保护作用,其机制可能通过抑制炎症因子IL-10和TNF-α等表达而减少其视神经损伤并促进小胶质细胞活化。     

AG490对氯化锂-匹罗卡品致癫癎大鼠星形胶质细胞活化及癫癎的影响

目的 探讨匹罗卡品致癫癎大鼠海马肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达、星形胶质细胞活化及JAK/STAT信号转导通路在颞叶癫癎发作中的作用.方法 应用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品(PILO)的方法建立颞叶癫痫 间模型,应用JAK/STAT信号转导通路特异性抑制剂AG490进行腹腔注射建立干预模型组;用Western blotting方法测定大鼠海马匀浆后TNF-α表达水平的变化,用免疫荧光观察AG-490阻滞JAK/STAT通路后对大鼠海马TNF-α表达水平与星形胶质细胞活化及癫痫 间发作的影响.结果 (1)PILO致癫痫 间模型组有80.00%(32/40)的大鼠达Racine分级Ⅳ级以上发作;10.00%(4/40)的雄性大鼠死亡;10.00%(4/40)的雄性大鼠未达Racine分级Ⅳ级发作,模型成功率为80.00%;1月后有自发发作者8只(25.00% 8/32).AG490干预组雄性大鼠Ⅳ级以上发作的发生率为75.00%(30/40);病死率为7.50%(3/40);17.50%(7/40)的雄性大鼠未达Ⅳ 级发作,模型成功率为75%;1月后有自发发作者1只(3.3% 1/30),AG490组Ⅳ级及以上发作及自发发作数与PILO致癫痫 间模型组比较,有显著性差异(P<0.05);(2)PILO致癫癎模型组TNF-α表达水平较对照组开始增高,AG490干预组TNF-α表达水平均较 PILO致癫癎模型组明显降低(P<0.05);(3)PILO癫痫 间模型组可见阳性颗粒在星形胶质细胞内的空间分布,AG490腹腔注射建立干预后阳性颗粒的星形胶质细胞明显减少(P<0.05).结论 癫痫 间发作后TNF-α表达水平明显增高,提示星形胶质细胞增生.AG490可阻断JAK/STAT信号转导通路进而抑制星形胶质细胞活化,同时也可以影响癫痫 间大鼠的行为学变化,提示AG490对癫癎的发作可能有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制星形胶质细胞增生有关.     

AG490对氯化锂-匹罗卡品致癫大鼠星形胶质细胞活化及癫的影响

目的探讨匹罗卡品致癫大鼠海马肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的表达、星形胶质细胞活化及JAK/STAT信号转导通路在颞叶癫发作中的作用。方法应用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品(PILO)的方法建立颞叶癫模型,应用JAK/STAT信号转导通路特异性抑制剂AG490进行腹腔注射建立干预模型组;用Western blotting方法测定大鼠海马匀浆后TNF-α表达水平的变化,用免疫荧光观察AG-490阻滞JAK/STAT通路后对大鼠海马TNF-α表达水平与星形胶质细胞活化及癫发作的影响。结果 (1)PILO致癫模型组有80.00%(32/40)的大鼠达Racine分级Ⅳ级以上发作;10.00%(4/40)的雄性大鼠死亡;10.00%(4/40)的雄性大鼠未达Racine分级Ⅳ级发作,模型成功率为80.00%;1月后有自发发作者8只(25.00%8/32)。AG490干预组雄性大鼠Ⅳ级以上发作的发生率为75.00%(30/40);病死率为7.50%(3/40);17.50%(7/40)的雄性大鼠未达Ⅳ级发作,模型成功率为75%;1月后有自发发作者1只(3.3%1/30),AG490组Ⅳ级及以上发作及自发发作数与PILO致癫模型组比较,有显著性差异(P<0.05);(2)PILO致癫模型组TNF-α表达水平较对照组开始增高,AG490干预组TNF-α表达水平均较PILO致癫模型组明显降低(P<0.05);(3)PILO癫模型组可见阳性颗粒在星形胶质细胞内的空间分布,AG490腹腔注射建立干预后阳性颗粒的星形胶质细胞明显减少(P<0.05)。结论癫发作后TNF-α表达水平明显增高,提示星形胶质细胞增生。AG490可阻断JAK/STAT信号转导通路进而抑制星形胶质细胞活化,同时也可以影响癫大鼠的行为学变化,提示AG490对癫的发作可能有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制星形胶质细胞增生有关。     

远隔缺血后适应通过调节反应性星形胶质细胞的可塑性改善小鼠缺血后脑组织的恢复

目的星形胶质细胞的可塑性改变可以在脑缺血急性期引起脑水肿,在缺血恢复期改变胶质瘢痕的形成。本实验研究远隔缺血后适应(RIPC)在脑缺血再灌注损伤中对星形胶质细胞可塑性调节。方法脑缺血被诱导通过C57小鼠大脑中动脉短暂性的阻断1 h,在再灌注即刻给予RIPC。结果 RIPC能降低小鼠脑缺血再灌注3 d、14 d大脑半球的水肿、梗死面积,减少脑萎缩,提高神经功能恢复和生存率。而且RIPC能调节星形胶质细胞亚型的比例,在小鼠脑缺血再灌注3 d和14 d,RIPC能降低缺血侧纤维型星形胶质细胞(GFAP)及增加原浆型星形胶质细胞(GS)的表达,并且能够下调GFAPα的水平和上调GFAPδ/GFAPα的比例来调节GFAP的亚型。结论RIPC治疗能调节反应性星形胶质细胞的可塑性,提高缺血后神经功能的恢复。     

一种氯化铁诱导血栓生成的小鼠大脑中动脉远端缺血模型

目的 建立稳定的小鼠大脑中动脉远端氯化铁血栓模型，评价其造成的脑损伤及神经功能损伤程 度。 方法 C57BL6/J雄性小鼠随机分为脑缺血组和假手术组。脑缺血组用10%氯化铁（ferric chloride， FeCl3）溶液诱导右侧大脑中动脉远端形成血栓。在术前、术后10 mi n、术后1 d和7 d观测术侧脑血流 和手术动脉血流量的变化。术后1 d观察脑组织梗死率。术后1 d、3 d、5 d、7 d用3种神经学评分[改良 加西亚评分（modified Garcia score，mGS）、改良神经损伤严重程度评分（modified neurological severity scores，mNSS）和15分神经学评估表（15-point neurological evaluation scale，NES）]和胶黏纸测试评价小 鼠神经功能。术后7 d免疫荧光染色标记神经细胞核观察脑组织损伤，标记CD16/32、CD206和Iba1观 察胶质细胞表达。 结果 与假手术组相比，脑缺血组术后10 mi n、1 d、7 d脑表面血流和手术动脉血流下降，术后1 d脑 皮层梗死明显，术后7 d仍有明显脑组织损伤；脑缺血组术后1 d、3 d、5 d和7 d时3种神经学评分及胶 黏纸测试均提示小鼠神经功能不同程度损伤。术后7 d脑缺血组梗死周围皮层M1和M2型胶质细胞表 达增加。 结论 FeCl3溶液可诱导形成稳定的小鼠脑缺血模型，该模型可造成手术侧大脑中动脉远端及脑表 面血流量降低，皮层脑梗死，小鼠神经功能受损，梗死周围胶质细胞表达上调。本研究建立了稳定 氯化铁诱导血栓形成的小鼠脑缺血模型，为脑血栓形成和抗栓药物治疗提供了一种可靠的研究工 具。     

山柰酚对缺血性脑损伤大鼠的神经保护作用研究

目的探讨山柰酚(Kaempferol,Kae)对缺血性脑损伤大鼠的神经保护作用。方法山柰酚连续灌胃7 d后进行大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO),缺血2 h后拔出线栓进行再灌注24 h后对大鼠进行神经功能评分;红四氮唑染色测定大鼠脑梗死面积比例; ELISA试剂盒检测梗死侧海马组织ROS、MDA和SOD的含量; Real time PCR检测TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达;免疫印迹检测海马组织NF-κB p65、Bax和Bcl-2蛋白表达。结果山柰酚中、高剂量明显提高MCAO小鼠神经功能受损评分,减少脑梗死面积比例(P 0. 05,P 0. 01); ELISA结果显示,山柰酚各剂量均可显著性增加MCAO小鼠海马SOD含量,降低其ROS和MDA的含量;Real time PCR和免疫印迹结果显示,山柰酚能明显减少MCAO小鼠海马TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达,降低NF-κB p65、Bax的表达及增加Bcl-2蛋白表达。结论山柰酚对缺血性脑损伤的神经保护作用与其抗氧化、抗炎及抗凋亡作用密切相关。     

下调长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本-1调控星形胶质细胞水通道蛋白4表达改善脑缺血/再灌注损伤

目的 探讨下调长链非编码RNA(lncRNA)肺腺癌转移相关转录本-1(MALAT1)调控星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)表达水平改善脑缺血/再灌注(CIR)损伤的机制。方法 采用大脑中动脉闭塞法制作大鼠脑缺血模型：(1)将SD大鼠分成假手术组、缺血/再灌注组、阴性对照(Lv-NC)组和细胞感染慢病毒干扰载体(Lv-RNAi)组。进行大鼠神经功能评分，检测脑组织含水量，用qRT-PCR方法检测MALAT1表达，TTC染色法检测脑梗死体积，Western blot法检测AQP4表达，ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平。(2)分离大鼠星形胶质细胞分为：对照组、缺氧复氧(H/R)组、sh-NC组、sh-MALAT1组、sh-AQP4组、sh-MALAT1+Vector组和sh-MALAT1+AQP组。MTT法检测细胞增殖活性，检测TNF-α、IL-6、IL-1β、MALAT1和AQP4表达水平。结果 (1)与假手术组比较，缺血/再灌注组MALAT1表达量升高，神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积、AQP4蛋白表达量和TNF-α、IL-6、IL-1β含量升高(均P<...     

Dex基于CREB/PGC-1α信号通路调控星形胶质细胞线粒体功能在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 探究右美托咪定(Dex)基于CREB/PGC-1 α信号通路调控星形胶质细胞线粒体功能在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法 采用改良的Zen-land法制作大鼠脑缺血再灌注损伤(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分别在造模后评估假手术(Sham)组、脑缺血再灌注模型(MCAO)组,脑缺血再灌注加药(MCAO+Dex)组大鼠神经功能损伤,脑梗死面积,实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白印迹检测环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(PGC-1α)的mRNA及蛋白表达;透射电子显微镜检测线粒体形态,免疫荧光法检测星形胶质细胞活性氧物质(ROS)及细胞凋亡。制备氧糖剥夺/复氧(OGD/R)星形胶质细胞模型,分为对照组(Control)、溶剂组(OGD/R-Dex0)、低剂量组(OGD/R-Dex-L)、高剂量组(OGD/R-Dex-H),qPCR检测CREB、PGC-lα的mRNA水平,免疫荧光和WB检测CREB、PGC-1α的蛋白表达。在OGD/R星形胶质细胞模型Dex处理的基础上过表达CR...