RNAi抑制STAT3表达、活化诱导人胶质瘤干细胞凋亡与分化

目的抑制人胶质瘤干细胞(GSCs)信号转导活化转录因子3(STAT3)表达、活化,了解STAT3在细胞凋亡、分化调节中的作用。方法 RNAi抑制人GSCs中STAT3表达、活化,流式细胞分析检测细胞凋亡和干细胞比例变化;实时定量多聚酶链反应(PCR)和Weastern-blot检测Bcl-2、BAX、Caspase-3表达;干扰组和对照组GSCs接种裸鼠,观察成瘤情况。结果干扰组人GSCs凋亡比例(16.03%)显著高于空白组(2.03%)和阴性对照组(3.19%)(P<0.05),CD133+细胞比例(5.7%)显著低于空白组(92.2%)和阴性对照组(87.7%);干扰组Bcl-2表达显著低于空白组和阴性对照组(P<0.05);裸鼠移植瘤实验中,阴性对照组3只成瘤,而干扰组均未成瘤。结论抑制人GSCs中STAT3表达、活化,可诱导凋亡,促进分化,抑制其成瘤能力。细胞凋亡增加可能与Bcl-2表达下调有关。     

Rac1在脑胶质瘤干细胞迁移和侵袭中的作用

目的 通过特异性的Racl活性抑制剂下调胶质瘤干细胞(GSCs)中Rac1的活性,探讨Rac1在GSCs迁移和侵袭中的作用. 方法 将U251细胞置于无血清DMEM/F12干细胞培养基中培养,免疫磁珠分选法分离GSCs,免疫荧光染色检测CD133鉴定GSCs; Rac1活性实验检测CD133+与CD133-细胞活性,Transwell细胞迁移和侵袭实验评价CD133+与CD133-细胞的迁移和侵袭能力;加入Rac1活性抑制剂NSC23766处理GSCs,活性实验检测细胞Racl活性,Western blotting检测hMena和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白的表达;Transwell细胞迁移实验和侵袭实验评价细胞迁移和侵袭能力的改变. 结果 成功培养出悬浮生长的细胞球,可以连续传代并持续表达神经干细胞标志物CD133;CD133+细胞Rac1-三磷酸鸟苷(GTP)表达水平、细胞迁移和侵袭的能力显著高于CD133-细胞,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,NSC23766处理组GSCs的Rac 1-GTP、hMena和MMP-9蛋白表达水平明显降低,迁移和侵袭能力明显减弱,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 GSCs相对于肿瘤中的其他细胞具有更强的迁移和侵袭能力,Rac1对脑GSCs的迁移和侵袭具有调控作用,抑制Rac1活化可能成为治疗恶性胶质瘤的新策略.     

ShRNA-AKT2对人脑胶质瘤U87细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究通过慢病毒载体靶向抑制丝/苏氨酸蛋白激酶2(AKT2)基因表达对胶质瘤细胞株U87增殖、凋亡的影响。方法利用慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰载体感染U87细胞株,逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术(Western blot)分别检测转染后细胞株AKT2 mRNA和蛋白表达水平变化,四唑盐(MTT)法检测细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期改变。结果转染AKT2-shRNA可有效降低U87细胞株内的AKT2表达。干扰组细胞从第3 d开始增殖明显降低(P0.05);AKT2-shRNA干扰组细胞的凋亡率为11.80%±1.83%,明显高于阴性对照组的2.01%±0.20%和未转染组的2.13%±0.32%(P0.05);AKT2-shRNA干扰组细胞周期S期细胞百分比显著低于对照组,而G0/G1期细胞比分比显著高于对照组(P0.05)。结论 AKT2-shRNA可抑制胶质瘤细胞株的增殖,并导致肿瘤细胞凋亡增加。     

Syndecan-1基因沉默抑制胶质瘤A172细胞增殖和侵袭

目的探讨多配体蛋白多糖-1(Syndecan-1,SDC1)在不同胶质瘤细胞株中的表达水平及其沉默对A172细胞的增殖和侵袭的影响。方法通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和Western Blotting分析SDC1在不同胶质瘤细胞株中的表达水平;将携带SDC1 sh RNA的慢病毒载体感染A172细胞,稳定沉默的细胞株为干扰组,未转染为阴性对照组,转染scramble序列为空白对照组;采用MTT法、台盼蓝拒然法和流式细胞术检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞的迁移和侵袭力;q RT-PCR和Western Blotting检测相关蛋白变化。结果SDC1在不同的胶质瘤细胞株中表达强度不同,差异具有统计学意义(P0.05)。成功构建稳定沉默SDC1的A172细胞株;与阴性对照组和空白对照组相比,干扰组细胞增殖受到抑制(P0.05),迁移力(58.40±5.24 vs.255.8±16.09、226.5±22.84,F=126.4,P0.05)和侵袭力(61.67±16.26 vs.233.70±17.24、244.30±28.15,F=69.87,P0.05)明显抑制;SDC1、PCNA和MMP-9 m RNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05)。结论沉默SDC1基因的表达可抑制胶质瘤A172细胞的增殖、迁移和侵袭,提示SDC1可能成为胶质瘤生物治疗的新靶点。     

siRNA沉默USP22基因对胶质瘤细胞增殖的抑制作用

目的探讨小干扰RNA(si RNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific protease 22,USP22)对胶质瘤细胞增殖的影响和作用机制。方法合成USP22 si RNA及阴性对照si RNA(control si RNA),用脂质体Lipofectamine 2000转染至人胶质瘤U87和U251细胞,分别设为实验组和阴性对照组。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测两组胶质瘤细胞USP22 mRNA和蛋白表达水平的变化。采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测USP22 si RNA对两组胶质瘤细胞的增殖抑制率。流式细胞术定量检测USP22 si RNA对胶质瘤细胞凋亡及细胞周期分布的影响。Western blot检测胶质瘤细胞凋亡蛋白和周期调控蛋白的表达。结果与阴性对照组比较,实验组胶质瘤细胞中USP22 mRNA和蛋白表达显著下降(P0.05),细胞增殖明显受到抑制(P0.05),凋亡率明显上升(P0.05),细胞周期中G2/M期的细胞比例明显增高(P0.05)。Western blot结果显示:细胞凋亡蛋白Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9表达明显下降(P0.05);细胞周期蛋白CDK1、CDK2、Cyclin B1表达水平明显下降(P0.05),Cyclin D1表达水平无明显变化(P0.05)。结论 USP22基因在胶质瘤细胞的增殖中发挥重要作用,其机制可能为调节细胞凋亡和细胞周期。     

DEC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及其稳转胶质瘤细胞系的建立

目的构建人分化型胚胎软骨发育基因1(DEC1)的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并建立稳定敲减DEC1表达的人脑胶质瘤细胞株T98G。方法根据Gen Bank中DEC1基因c DNA序列设计合成两条特异性shRNA序列,同时设计1条非特异性序列作为阴性对照,分别克隆到PsiLVRU6MP质粒载体内,经酶切电泳、DNA测序鉴定后包装成慢病毒颗粒。再以3组慢病毒感染胶质瘤细胞系T98G,用嘌呤霉素筛选后,荧光显微镜下观察m Cherry的表达,Western Blot检测各组DEC1蛋白的表达水平。结果 DEC1基因shRNA慢病毒表达载体经酶切、测序鉴定证实克隆正确。荧光显微镜检测显示各组细胞均已被慢病毒高效感染。Western Blot结果显示,两干扰组细胞各自DEC1蛋白表达水平明显低于未处理组和阴性对照组,分别占未处理组的39.47%±0.69%和41.17%±0.89%(P0.05),但两干扰组之间无显著性差异(P0.05);阴性对照组与未处理组相比亦无明显差异(P0.05)。结论成功构建DEC1基因shRNA慢病毒表达载体,感染胶质瘤T98G细胞系获得成功。两干扰组慢病毒均能明显敲减目的基因DEC1的表达,为进一步研究DEC1在胶质瘤细胞系T98G中的生物学功能和作用机制提供了实验基础。     

替莫唑胺通过TGF-β2影响胶质瘤干细胞的侵袭性研究

目的探讨替莫唑胺能否抑制胶质瘤干细胞(GSCs)和分化的胶质瘤细胞株的侵袭,并降低免疫抑制作用和对转化生长因子-β2(TGF-β2)表达的影响。方法首先从原代培养胶质瘤干细胞(PCGCs),然后,我们通过免疫组化,细胞侵袭实验来研究替莫唑胺对侵袭力的影响,实时逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)等方法来证明TGF-β2的表达影响。结果 TMZ能够抑制胶质瘤干细胞和原代培养胶质瘤干细胞的侵袭力。此外,TMZ在mRNA和蛋白水平下调TGF-β2的表达。结论替莫唑胺能够通过影响TGF-β2的表达来抑制胶质瘤干细胞(GSCs)和分化的胶质瘤细胞株的侵袭,并降低他们的免疫抑制作用,替莫唑胺可作为胶质瘤治疗的免疫调节剂。     

锌指蛋白403对人U251胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的研究锌指蛋白403(gametogenetin-binding protein 2,GGNBP2)表达水平对人胶质瘤细胞增殖,侵袭,迁移能力的影响。方法培养人U251胶质瘤细胞,慢病毒转染构建稳定过表达GGNBP2的U251胶质瘤细胞后,q RT-PCR及Western Blot检测转染效率;CCK8检测细胞细胞增殖能力;Transwell小室法检U251胶质瘤细胞侵袭和迁移能力变化;Western Blot检测AKT,p-AKT,PCNA,MMP9表达水平的改变。结果成功构建稳定过表达GGNBP2的人U251胶质瘤细胞株,与对照组和空载组比较,过表达组细胞增殖(P0.05),侵袭力(57±6 vs.203±6,205±7,F=512.4,P0.05),迁移力(74±7 vs.254±14,248±13,F=242.5,P0.05)明显抑制;Western Blot结果显示,与对照组和空载组比较,过表达组p-AKT(F=45.4,P0.05),PCNA(F=348.5,P0.05),MMP9(F=88.7,P0.05)表达水平明显降低。结论 GGNBP2可能通过抑制AKT的磷酸化水平,并经过相应的信号通路下调PCNA,MMP9表达水平,从而抑制胶质瘤细胞增殖,侵袭和迁移,提示GGNBP2可能成为胶质瘤治疗的潜在靶点。     

YKL-40对MGMT高表达的人胶质瘤干细胞“干性”的影响

目的研究YKL-40在MGMT高表达的人胶质瘤干细胞(h GSCs)中对其干性的影响。方法收集临床胶质母细胞瘤样本,行分离、培养并进一步鉴定为h GSCs。YKL-40慢病毒干涉后,采用单细胞克隆球形成实验、Brd U细胞增值实验检测、RT-PCR法和Western blot法检测h GSCs中干性表达及生物学功能的改变。结果所入围的h GSCs中MGMT均为高表达,并且高表达YKL-40的h GSCs其单细胞成球能力、细胞增殖能力及干性表达均高于低表达YKL-40的h GSCs(P0.05)。结论YKL-40在h GSCs干性维持的过程扮演了重要的角色,YKL-40有可能作为GBM手术后分子靶向治疗的关键靶点,并作为临床GBM诊治提供新的思路。     

胶质瘤干细胞外泌体通过PI3K/Akt信号通路促进胶质瘤U87细胞侵袭、迁移

目的 探讨胶质瘤干细胞（GSCs）外泌体（exo）对胶质瘤U87细胞侵袭、迁移的影响。方法 取对数生长期U87细胞,应用干细胞培养液分离、培养胶质瘤U87细胞中GSCs并提取、鉴定GSCs-exo。取对数生长期U87细胞随机分为4组:对照组和高、中、低GSCs-exo浓度组（分别加入20、40、80 μg/ml的GSCs-exo）。Transwell实验检测U87细胞侵袭能力,划痕实验检测U87细胞迁移能力,免疫印记法检测U87细胞磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）、L1CAM的表达水平。结果 成功分离GSCs并获得GSCs-exo。GSCs-exo组U87侵袭细胞数、细胞迁移率明显高于对照组（P<0.05）,L1CAM、PI3K及p-AKt/Akt表达水平明显高于对照组（P<0.05）,而且均呈浓度依赖性（P<0.05）。结论 GSCs-exo可促进胶质瘤侵袭与转移,其机制可能与上调L1CAM、PI3K表达,促进Akt磷酸化有关。     

靶向沉默c-fos基因表达对胶质瘤U87MG细胞增殖与侵袭的影响

目的探讨靶向沉默c-fos基因表达对胶质瘤U87MG细胞体外增殖与侵袭的影响。方法构建慢病毒载体c-fos-sh RNA,将其转染人脑胶质瘤U87MG细胞,同时将空载体转染细胞作为空载对照,未转染细胞作为空白对照;观察U87MG细胞形态、c-fos m RNA和蛋白表达变化、细胞侵袭和迁移能力、细胞生存率和细胞凋亡率。结果 c-fos-sh RNA慢病毒转染U87MG细胞48 h后,荧光显微镜下观察发现空白对照组U87MG细胞无绿色荧光,而空载体组和转染组U87MG细胞可见绿色强荧光和清晰的细胞轮廓。与空白对照组、空载体组相比,转染组U87MG细胞c-fos m RNA和c-fos蛋白表达显著降低(P0.05);慢病毒转染U87MG细胞24 h后,转染组U87MG细胞存活率显著降低(P0.05),细胞活力显著减弱(P0.05);细胞迁移和侵袭能力明显减弱(P0.05);慢病毒转染72 h后,转染组U87MG细胞凋亡数量显著上升(P0.05)。结论沉默c-fos基因表达可显著抑制脑胶质瘤U87MG细胞增殖和侵袭能力。     

体外共培养大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的影响：Cyclin D1与P27表达调控****

背景：在肝纤维化发生发展过程中,肝星状细胞起着关键作用。研究证实骨髓间充质干细胞移植可作为治疗肝纤维化的方法,但其逆转肝纤维化的机制不明。 目的：探讨体外共培养条件下,大鼠骨髓间充质干细胞对肝星状细胞增殖的调控机制。 方法：实验组在半透膜上接种大鼠骨髓间充质干细胞,在6孔塑料培养板上接种肝星状细胞,建立上下双层细胞共培养体系;对照组将大鼠骨髓间充质干细胞更换为成纤维细胞;空白组仅行肝星状细胞单独培养。WST-8法检测肝星状细胞生长抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,RT-PCR检测肝星状细胞CyclinD1和P27 mRNA的表达,Western blot检测肝星状细胞CyclinD1和P27蛋白的表达。 结果与结论：与空白组、对照组比较,实验组共培养24,48,72 h肝星状细胞生长抑制率均显著升高(P < 0.01);共培养72 h G0/G1期细胞显著增加(P < 0.01),S期细胞显著减少(P < 0.01),可阻滞肝星状细胞由G0/G1期向S期转换。共培养24 h,实验组CyclinD1 mRNA及蛋白表达开始下调,至72 h时表达量显著低于对照组、空白组(P < 0.01);共培养全过程中各组p27 mRNA的表达无明显差异(P > 0.05),共培养24 h时实验组p27蛋白表达较对照组、空白组均显著上调(P < 0.01)。结果证实大鼠骨髓间充质干细胞能够抑制肝星状细胞的增殖,其机制可能是通过下调CyclinD1表达、上调P27蛋白表达,使细胞周期停滞于G0/G1期实现的。     

microRNA134对胶质瘤U87细胞增殖及侵袭的影响

目的研究微小RNA-134(miRNA-134)对人脑胶质瘤细胞系U87在侵袭、迁移方面的作用并探讨可能的作用机制。方法通过人工合成miR-134 mimic瞬时转染脑胶质瘤细胞系U87,实时定量荧光聚合酶链式反应(PCR)检测细胞miR-134的表达水平;并通过四唑盐比色法(MTT)检测U87细胞增殖情况;Transwell小室法检测各组U87细胞株迁移和侵袭能力;实时定量荧光PCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测各组基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达水平。统计学数据处理釆用SPSS 19.0软件处理,组间比较采用单因素方差分析,P0.05有统计学意思。结果荧光显微镜下观察转染效率90%以上,实时定量荧光PCR结果显示与未处理的空白对照组(control)及空白转染组(Mock)比较,miR-134转染组的miR-134表达水平明显上调,可达到对照组的5~6倍(P0.05);MTT实验结果表明miR-134转染组细胞增殖能力明显下降(P0.05),同时Transwell实验也显示miR-134转染组细胞的迁移能力明显降低(P0.05);实时定量荧光PCR及Western blot分析MMP-3表达情况发现,过表达miR-134可以明显减少MMP-3基因及蛋白的表达水平(P0.05)。结论本研究表明miR-134能够抑制胶质瘤U87细胞的增殖及侵袭迁移能力,其机制可能与抑制MMP-3的表达有关,提示miR-134可能成为胶质瘤治疗的新靶点。     

组蛋白甲基转移酶对人脑胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响及其机制的研究

目的探讨组蛋白甲基转移酶(SMYD2)在人脑胶质瘤及正常脑组织中的表达及其对人脑胶质瘤细胞U87、U251迁移和侵袭的影响。方法运用免疫组织化学方法检测50例脑胶质瘤及10例正常脑组织中SMYD2蛋白的表达水平。应用小干扰RNA(siRNA)技术分别转染人脑胶质瘤U87、U251细胞,Western blot检测SMYD2蛋白及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、p-p65、TIMP1的表达水平;应用细胞划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。结果免疫组织化学显示SMYD2在正常组、低级别胶质瘤(Ⅰ~Ⅱ级)组和高级别胶质瘤(Ⅲ~Ⅳ级)组中表达水平的差异有统计学意义(P0.05),且SMYD2蛋白的表达量与肿瘤的恶性程度呈正相关(r=0.635,P0.05)。与Control-siRNA组比较,SMYD2-siRNA组SMYD2蛋白表达量显著降低,MMP9、p-p65显著降低,TIPM1明显增加,差异均有统计学意义(P0.05~0.01)。细胞划痕实验显示,SMYD2-siRNA组较Control-siRNA组细胞的迁移能力显著降低(均P0.01)。Transwell迁移、侵袭实验显示干扰SMYD2后,人脑胶质瘤U87、U251细胞的迁移、侵袭能力显著下降(均P0.05)。结论 SMYD2在胶质瘤中表达,并且其表达水平与胶质瘤恶性程度呈正相关;SMYD2-siRNA靶向干扰了SMYD2的表达,下调SMYD2的表达水平能够降低人脑胶质瘤细胞U87、U251迁移、侵袭的能力。     

替莫唑胺通过TGF-β2影响胶质瘤干细胞的侵袭性研究简

目的探讨替莫唑胺能否抑制胶质瘤干细胞（GSCs）和分化的胶质瘤细胞株的侵袭,并降低免疫抑制作用和对转化生长因子-β2（TGF—β2）表达的影响。方法首先从原代培养胶质瘤干细胞（PCGCs）,然后,我们通过免疫组化,细胞侵袭实验来研究替莫唑胺对侵袭力的影响,实时逆转录酶一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）等方法来证明TGF-β2的表达影响。结果TMZ能够抑制胶质瘤干细胞和原代培养胶质瘤干细胞的侵袭力。此外,TMZ在mRNA和蛋白水平下调TGF-β2的表达。结论替莫唑胺能够通过影响TGF-β2的表达来抑制胶质瘤干细胞（GSCs）和分化的胶质瘤细胞株的侵袭,并降低他们的免疫抑制作用,替莫唑胺可作为胶质瘤治疗的免疫调节剂。     

miR-29c对脑胶质瘤U251细胞生物学活性的影响

目的 探讨miR-29c对脑胶质瘤U251细胞生物学活性的影响及可能机制.方法 体外培养胶质瘤U251细胞,实验组将miR-29c mimics转染至细胞,miR mimcs转染作为对照组.应用实时荧光定量PCR检测转染后miR-29c表达量的改变,MTT实验测定细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况,体外侵袭实验分析miR-29c转染后细胞的体外侵袭能力,Western blot检测转染后转录因子YY1蛋白的表达.结果 荧光定量PCR结果显示:实验组miR-29c表达量为(106.65±15.51),较对照组显著上调(P＜0.01).与对照组比较,实验组U251细胞的增殖能力明显降低(P＜0.01),凋亡率增加(P＜0.05),体外侵袭能力明显减弱(P＜0.01),YY1蛋白表达下调(P＜0.01).结论 miR-29c可能通过调控YY1蛋白的表达抑制胶质瘤细胞的生物活性.     

LRIG3基因对脑胶质瘤细胞系U87和U251的细胞周期、侵袭性和凋亡的影响

目的探讨过表达的富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白3(LRIG3)基因对脑胶质瘤细胞系U251和U87的细胞周期、侵袭能力和凋亡的影响。方法将过表达的LRIG3质粒(实验组)和空白质粒(对照组)经慢病毒法感染胶质瘤细胞系U251和U87,筛选稳定细胞株,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Westernblot检测LRIG3表达的变化,碘化丙啶染色后用流式细胞仪测定细胞周期的变化,TransWell小室法检测细胞的侵袭能力,用免疫组化原位末端标记法(TUNEL)检测各组凋亡细胞。结果与对照组相比,实验组U251与U87细胞中LRIG3mRNA水平分别上升67.6%和79.9%,蛋白表达水平分别升高62.3%和91.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组U251细胞中S期与G2/M期细胞数之和低于对照组,有统计学意义(P<0.05);但U87细胞与对照组比无明显差异。实验组U251细胞中穿出细胞数量均明显少于对照组(P<0.05),TUNEL染色结果显示对照组U251细胞凋亡率为23.4%,实验组为35.7%;对照组U87细胞凋亡率为20.2%,实验组为39.5%;对照组与实验组间凋亡率均有明显差异(P<0.05)。结论 LRIG3基因过表达能阻断细胞周期于S期和G2/M期,降低胶质瘤细胞的侵袭能力,加速细胞凋亡。     

胶质瘤干细胞的结肠癌转移相关基因1表达与替莫唑胺耐药的相关性

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达与胶质瘤干细胞对替莫唑胺(TMZ)耐药的相关性。方法采用实时定量荧光PCR和Western blot方法测定U87胶质瘤细胞来源的干细胞(GSCsU87)、U251胶质瘤细胞来源的干细胞(GSCs-U251)及U87和U251细胞的MACC1 mRNA、蛋白表达水平。通过实时定量荧光PCR和Western blot检测RNA干扰对MACC1的沉默效应。用流式细胞术和CCK-8方法测定MACC1沉默对TMZ诱导的细胞毒性和细胞凋亡的影响。结果胶质瘤干细胞GSCs-U87和GSCsU251中MACC1 mRNA和蛋白表达水平显著增高(均P 0.05)。shRNA-MACC1可以显着抑制MACC1表达(均P 0.05)。用不同浓度的TMZ处理后,与对照组GSCs-U87和GSCs-U251相比,TMZ对MACC1沉默的GSCs-U87和GSCs-U251细胞毒性显著增加,且MACC1沉默的胶质瘤干细胞的凋亡数增高。结论 MACC1基因的沉默可增强TMZ对胶质瘤细胞的凋亡和生长抑制作用,从而增加其对TMZ化疗的敏感性。     

Notch信号通路与胶质瘤细胞上皮间充质转化的相关性

目的 探讨Notch信号通路与胶质瘤细胞上皮间充质转化的关系.方法 采用免疫磁珠法从人脑胶质瘤组织分离脑胶质干细胞,进行体外培养,使用免疫荧光技术鉴定细胞;构建Notch-1基因的RNA干扰反转录病毒载体(pSiRNA-Notch-1),试验分为3组,空白对照组(不转染质粒)、阴性对照组(转染空白质粒)和干扰组(转染pSiRNA-Notch-1),观察3组细胞增殖、分化,采用RT-PCR和Western blot检测Notch-1和Hes-1 mRNA和蛋白表达.结果 干扰组培养第7天细胞增殖及细胞分化吸光度值(A)分别为(1.332±0.614)和(1.203±0.783),明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);细胞增殖培养3 d后,干扰组Notch-1和Hes-1 mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.189±0.021)和(0.301±0.121),(0.422±0.022)和(0.091±0.032),明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);细胞分化培养3 d后,干扰组Notch-1和Hes-1 mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.253±0.071)和(0.192±0.043),(0.178±0.022)和(0.101±0.012),明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).结论 Notch信号通路在胶质瘤细胞增殖分化过程中有重要作用,其中Notch-1和Hes-1可能参与了增殖、分化的调控,需进一步研究.     

长链非编码RNA SNORD3A在脑胶质瘤中的表达变化及功能研究

目的探讨长链非编码(lncRNA)SNORD3A在胶质瘤组织和胶质瘤细胞系中的表达变化,以及对胶质瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法采用生物信息学方法分析美国国家生物技术信息中心(NCBI)GEO数据库收录的GSE58276中差异表达的lncRNA,采集2017年6月至2019年8月手术切除的胶质瘤组织标本30例,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测lncRNA SNORD3A表达水平;小干扰RNA转染胶质瘤细胞系T98G和U251,CCK-8细胞增殖实验检测胶质瘤细胞增殖能力、Transwell细胞侵袭实验检测胶质瘤细胞侵袭能力、Western blotting法检测胶质瘤细胞c-Myc mRNA和蛋白表达变化。结果与对照组相比,胶质瘤组织lncRNA SNORD3A表达水平升高(P=0.000);与HEB细胞相比,胶质瘤细胞系T98G、U87、U251和U373 lncRNA SNORD3A表达升高(均P 0.05)。si-SNORD3A-1组和si-SNORD3A-2组T98G细胞(P=0.001,0.007)和U251细胞(P=0.002,0.009)lncRNA SNORD3A表达水平低于对照组;转染后24、48和72 h,si-SNORD3A-1组和si-SNORD3A-2组T98G细胞(均P=0.000)和U251细胞(均P=0.000)增殖能力低于对照组;转染后48 h,si-SNORD3A-1组和si-SNORD3A-2组穿过小室的T98G和U251细胞数目少于对照组(均P=0.000)、c-Myc mRNA和蛋白表达水平低于对照组(均P 0.01)。结论 lncRNA SNORD3A可能通过靶向c-Myc蛋白促进T98G和U251细胞的增殖和侵袭。