Rho激酶-1在变应性鼻炎小鼠上下呼吸道表达特点及布地奈德的干预作用

目的：观察Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道表达特点及布地奈德对其表达影响,探讨Rho激酶-1在变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应中的作用。方法应用卵清蛋白致敏建立小鼠变应性鼻炎模型,30只小鼠随机分为：变应性鼻炎组,布地奈德组和正常对照组。所有小鼠于末次激发后24小时处死,收集鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液查炎症细胞计数,应用免疫组化方法检测鼻黏膜和肺组织中Rho激酶-1蛋白表达。结果变应性鼻炎组鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达水平显著高于正常对照组（P〈0.05）。变应性鼻炎组小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞增加明显（P〈0.05）。应用布地奈德干预治疗后,小鼠鼻黏膜和肺组织内Rho激酶-1蛋白阳性表达较变应性鼻炎组水平降低,小鼠鼻腔灌洗液和肺泡灌洗液中以炎症细胞总数和嗜酸性粒细胞数较变应性鼻炎组减少。Rho激酶-1蛋白表达与炎症细胞和嗜酸性粒细胞数呈正相关（P〈0.01）。结论 Rho激酶-1蛋白参与变应性鼻炎上下呼吸道炎症反应过程,布地奈德可通过调节Rho激酶-1的表达减轻炎症反应。     

Eotaxin在变应性鼻炎中的表达及组胺调控作用的研究

目的：通过变应性鼻炎动物模型了解Eotaxin在变应性鼻炎中的表达以及变态反应炎性递质组胺对Eotaxin表达的影响,以期深入了解变应性鼻炎的发病机制。方法：卵蛋白致敏法建立变应性鼻炎大鼠模型,应用免疫组织化学、RT-PCR及ELISA法,观察组胺及组胺HR1拮抗剂干预后鼻黏膜、血清及鼻腔灌洗液中Eotaxin的表达量或含量变化。结果：变应性鼻炎干预组与变应性鼻炎无干预组相比,鼻腔灌洗液以及鼻黏膜中Eotaxin的表达量较前者显著增加（P〈0.05）,而H1拮抗剂干预组血清、鼻腔灌洗液以及鼻黏膜中Eotaxin增加均显著受到抑制（P〈0.05）。结论：本实验进一步确认了Eotaxin参与了变应性鼻炎发病的理论基础。组胺作为一种变应性鼻炎中的重要炎症递质可以通过影响Eotaxin的表达参与变应性鼻炎的发病过程,且HR1亦参与了这一过程。     

白细胞介素12基因治疗小鼠变应性鼻炎的实验研究

目的探讨鼻腔局部应用EB病毒(Epstein-Barrvirus,EBV)质粒载体介导的白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)基因治疗对变应性鼻炎炎症反应的调节作用。方法将36只6～8周雄BALB/C实验小鼠随机分为变应性鼻炎组、IL-12基因治疗组和正常对照组,每组12只。以BALB/c小鼠经卵清蛋白(ovalbumin,OVA)免疫建立变应性鼻炎模型,用阳离子脂质体包裹EBV质粒载体介导的IL-12表达质粒(pGEG.mI-L12)形成混合物EBV/lipoplex,于激发前鼻腔局部滴入后,观察小鼠变应性症状的改善情况,并检测该基因在3组实验鼠鼻黏膜局部的表达情况以及对鼻黏膜炎性细胞和Th2细胞因子的影响。结果基因治疗组小鼠鼻黏膜中IL-12mRNA阳性细胞数量明显高于变应性鼻炎组,差异有统计学意义(P<0.01);基因治疗组小鼠鼻黏膜中IL12阳性细胞数量明显高于变应性鼻炎组(P<0.05);变应性鼻炎组鼻黏膜中嗜酸粒细胞、肥大细胞和IL5阳性细胞比例显著高于基因治疗组和正常对照组(P<0.01);变应性鼻炎组外周血中总IgE含量显著高于正常对照组和基因治疗组(F=1216.21,P<0.01)。结论鼻腔局部应用EBV/lipoplex后,pGEG.mIL-12能够在鼻黏膜中高效地表达,能明显抑制鼻腔的变应性反应。EBV/lipoplex有望成为变应性鼻炎免疫治疗一种新的方法。     

变应性鼻炎鼻腔灌洗液和血清中嗜酸粒细胞阳离子蛋白和E-选择素的检测

目的　探讨血清和鼻腔灌洗液中嗜酸粒细胞阳离子蛋白 (eosinophilcationicprotein ,ECP)和血清可溶性黏附分子可溶性E 选择素在变应性鼻炎发病中的表达。方法　采用荧光免疫法测定30例变应性鼻炎患者及 2 0例健康对照组血清、鼻腔灌洗液ECP ,采用酶联免疫吸附试验 (enzyme likedimmunosorbentassay ,ELISA)法测定血清和鼻腔灌洗液中可溶性E 选择素。结果　在变应性鼻炎组的血清可溶性E 选择素与对照组相比 ,差异有极显著性 (t=13 75 ,P =0 0 0 1) ,鼻腔灌洗液中E 选择素显著高于对照组 (t=12 12 ,P <0 0 0 0 1)。变应性鼻炎组鼻腔灌洗液ECP含量明显高于对照组 (t =15 19,P =0 0 0 0 1)。血清中ECP水平与对照组相比 ,差异存在显著性 (t =15 6 7,P <0 0 0 0 1)。结论变应性鼻炎患者血清ECP含量增高与嗜酸粒细胞处于活化状态有关。鼻灌洗液中ECP浓度升高可能是由于嗜酸细胞脱颗粒增强所致 ,而血清和鼻腔灌洗液中E 选择素升高可能与嗜酸性粒细胞趋化移行有关     

胸腺基质淋巴细胞生成素在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达

目的探讨小鼠鼻腔黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的含量及其分布。方法6周龄BALB/c小鼠经卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏并激发制备变应性鼻炎模型,鼻腔激发第10天取鼻黏膜,进行HE染色观察黏膜组织形态,免疫组织化学染色观察TSLP的分布及定位,实时定量RT-PCR检测TSLP的含量。结果与对照组相比,实验组小鼠鼻黏膜上皮连续性破坏,固有层可见嗜酸性粒细胞浸润。对照组小鼠鼻黏膜中TSLP免疫反应阳性产物主要分布于上皮表面及固有层,染色较浅,实验组则较之明显深染。实时定量RT-PCR显示实验组小鼠鼻黏膜TSLP平均表达水平较对照组明显增高,表达量为其217.39倍。结论TSLP在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜大量表达,在变应性鼻炎的发病中可能发挥重要作用。     

真菌球性上颌窦炎临床特征分析

目的 探讨真菌球性上颌窦炎的不同临床特点、治疗方法和疗效。方法 回顾性分析2019年1月—2020年6月收治的49例真菌球性上颌窦炎患者的症状、体征、影像学特点、治疗方法和术后随访,对其不同临床特征和治疗特点进行总结和分析。结果 49例患者均明确诊断为真菌球性上颌窦炎。根据临床资料可分为4种不同的临床特征：①单纯真菌球性上颌窦炎21例：主要临床症状为患侧头痛、脓涕、涕血、鼻塞;术中开放上颌窦并适当扩大窦口,术后给予鼻腔冲洗;②无症状型15例：此型主要是体检或者其他疾病检查无意发现,鼻窦影像学特点有典型的真菌性鼻窦炎特征,术中对上颌窦开放并适当扩大窦口,术后给予鼻腔冲洗;③合并鼻息肉8例：主要临床症状为患侧鼻塞、脓涕、头痛、头晕等症状。手术以切除鼻息肉,开放上颌窦并适当扩大窦口,术后按慢性鼻窦炎伴鼻息肉治疗同时给予鼻腔冲洗;④合并变应性鼻炎5例：主要临床症状为患侧涕血、鼻塞伴喷嚏、清涕、鼻痒等变应性鼻炎症状,术中可见病变窦腔内黏膜水肿,呈息肉样变。开放上颌窦并扩大窦口,术后给予变应性鼻炎治疗同时给予鼻腔冲洗,当病变位于上颌窦前、内下、底壁时,在0°内镜下加行改良泪前隐窝入路手术。结论 根据真菌球性上颌窦炎其不同临床特征进行分型有利于精准诊治;鼻内镜下不同手术入路可以减少手术后复发,改善预后。     

变应性鼻炎小鼠鼻黏膜lL-25、lL-33 mRNA表达水平的研究

目的：探讨IL-25 mRNA及IL-33 mRNA在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达及其作用。方法利用Balb/c小鼠建立卵清蛋白致敏的变应性鼻炎小鼠模型,同时使用生理盐水作为对照组,取各组小鼠鼻黏膜组织,使用实时定量PCR法检测两组小鼠鼻黏膜中IL-25 mRNA和IL-33 mRNA的含量。结果IL-25 mRNA和IL-33 mRNA在对照组以及实验组中均有表达,且实验组明显高于对照组,两组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 IL-25和IL-33参与到变应性鼻炎的发病机制中,该结果将有助于提高对变应性鼻炎发病机制的进一步了解,为变应性鼻炎潜在的靶向药物治疗提供了理论依据。     

pGE．GmIL-12／脂质体对变应性鼻炎小鼠嗜酸性粒细胞的影响

目的探讨鼻腔局部应用脂质体包裹的EB病毒（epstein-barr virus,EBV）质粒载体介导白细胞介素12（interleukin-12,IL-12）基因治疗对变应性鼻炎小鼠模型鼻黏膜、外周血和骨髓中嗜酸性粒细胞（eosinophils,Eos）的调节作用。方法采用6N8周雄性BALB／C小鼠,随机分成变应性鼻炎组、基因治疗组和正常对照组,每组各12只。以卵清蛋白致敏激发建立变应性鼻炎组模型,治疗组用阳离子脂质体包裹EBV质粒载体介导的IL-12表达质粒（pGEG.mlL-12）形成混合物EBV／lipoplex,于激发前鼻腔局部滴入。分别用HE染色计数鼻黏膜中Eos数量,用瑞氏染色计数骨髓涂片中Eos比例,以流式细胞仪检测外周血中Eos占粒细胞比例。结果小鼠基因治疗组鼻黏膜Eos显著低于变应性鼻炎模型（P〈0．01）;骨髓涂片中EosLB例显著低于变应性鼻炎模型（P〈0．01）：基因治疗组外周血中Eos显著低于变应性鼻炎模型（P〈0．05）。结论经鼻局部给予脂质体包裹的pGEG-mlL-12能够减少骨髓、外周血和鼻黏膜中Eos数量,可能为呼吸道变应性炎症开辟新的治疗方法。     

嗜酸粒细胞亲合素N端突变体重组腺病毒在小鼠变应性鼻炎中的作用

目的获取人嗜酸粒细胞亲合素(Eotaxin)N端突变体(Met/Eotaxin)重组腺病毒,探讨其在小鼠变应性鼻炎中的作用。方法从人外周血单个核细胞总RNA中克隆人400bp的Eotaxin基因;通过N端点突变获取Met/Eotaxin基因,构建pAdtrack-CMV-Met/Eotaxin腺病毒穿梭质粒;将该质粒在大肠杆菌BJ5183中与腺病毒基因组质粒进行同源重组;将Met/Eotaxin重组腺病毒载体在AD293细胞中包装、扩增获取Met/Eotaxin重组腺病毒(Ad-Met/Eotaxin);采用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和蛋白印迹杂交(Western blot)对Met/Eotaxin重组腺病毒的正确性进行鉴定。采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏和激发诱导小鼠变应性鼻炎,40只小鼠随机分为变应性鼻炎组和Ad-Met/Eotaxin组。Ad-Met/Eotaxin组在每次激发前30min予以每只小鼠2ml滴度为5×109pfu/ml的Ad-Met/Eotaxin腹腔注射。比较二组动物变应性鼻炎症状和鼻黏膜形态学改变,并在荧光显微镜下观察腺病毒转染效率标志物———绿色荧光蛋白在鼻黏膜等组织中的表达。结果PCR和Western blot结果显示Ad-Met/Eotaxin构建正确;Ad-Met/Eotaxin腹腔注射后可高效转染小鼠鼻黏膜;Ad-Met/Eotaxin可显著减轻小鼠变应性鼻炎症状以及鼻黏膜形态学改变。结论Ad-Met/Eotaxin具有阻断小鼠变应性鼻炎的作用。     

胸腺基质淋巴细胞生成素在变应性鼻炎模型小鼠鼻黏膜中的表达

目的：探讨胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）在变应性鼻炎模型小鼠鼻黏膜中的表达。方法：将20只6～8周BALB／c小鼠随机分为变应性鼻炎组和自然对照组,每组10只。以鸡卵清蛋白致敏建立变应性鼻炎模型。组织标本石蜡包埋,采用免疫组织化学方法和荧光PCR方法检测TSLP在小鼠鼻黏膜中的表达。结果：自然对照组鼻黏膜未见明显TSLP表达,变应性鼻炎组鼻黏膜可见明显TSLP表达。结论：TSLP在变应性鼻炎的鼻黏膜中表达。     

布地奈德对变应性鼻炎大鼠鼻腔灌洗液中嗜酸粒细胞凋亡的影响

目的 建立大鼠变应性鼻炎( allergic rhinitis,AR)模型,观察布地奈德对AR大鼠鼻腔灌洗液中嗜酸粒细胞( eosinophil,EOS)凋亡的影响。方法 采用卵清蛋白、氢氧化铝建立大鼠AR模型,分为AR组(B组)、布地奈德组(C组),每组10只大鼠,分别于模型建立后第31～38天,每只每日每侧鼻腔滴入磷酸盐缓冲液50μL、布地奈德50μL(1.28μg/μL),另设对照组(A组)大鼠10只。第39天取各组大鼠鼻腔灌洗液测定EOS百分比,流式细胞术检测EOS凋亡率。 结果 C组大鼠鼻腔灌洗液中EOS为(5.10±0.51)%,明显低于B组的(29.37±4.33)%(P<0.01);C组鼻腔灌洗液中EOS凋亡率为(18.48±2.84)%,明显高于B组的(3.36±0.50)%(P<0.01);且B组、C组大鼠鼻腔灌洗液中EOS百分比与其凋亡率呈显著负相关(r=-0.892, P<0.05)。结论 布地奈德可明显减少AR大鼠鼻腔内EOS浸润,并能显著增加EOS凋亡,进而减轻AR的炎症反应,从而达到治疗AR的目的。     

鼻内镜下等离子射频鼻后神经切断术治疗中重度变应性鼻炎疗效观察

目的 探讨鼻内镜下等离子射频行鼻后神经切断治疗中重度持续性变应性鼻炎的疗效。方法 2015年1月—2018年1月收治中重度变应性鼻炎合并下鼻甲肥大患者80例,其中46例同时合并有鼻中隔偏曲,所有患者应用等离子射频行鼻后神经切断术,同时行下鼻甲成形术;对46例合并鼻中隔偏曲患者行鼻中隔矫正术,观察手术前后变应性鼻炎症状改善情况。结果 术后经随访1年有效率100%,2年有效率95%,3年有效率88.75%,患者术后1、2、3年VAS总评分均比术前明显好转,3年内随着年限延长,治疗有效率逐年下降,VAS总评分逐年上升（P<0.05）。结论 鼻内镜下等离子射频行鼻后神经切断联合鼻中隔矫正及下鼻甲成形术治疗中重度变应性鼻炎疗效确切,长期效果仍需要进一步研究。     

调节性T细胞与IgE、IL-4、IL-5在变应性鼻炎小鼠和鼻用激素抗炎中的实验研究

目的 探讨CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞(regulatory T cells, Tregs)与IgE、IL-4、IL-5在变应性鼻炎(allergic rhinitis, AR)小鼠及鼻用激素抗炎中的表达及作用。方法 5～6周龄雌性Balb/c小鼠30只,随机分为正常组、AR组和鼻用激素组。正常组无干预;AR组采用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)全身致敏并雾化和滴鼻激发;鼻用激素组在成功致敏后,每次激发完30min后雾化吸入丙酸氟替卡松10min。小鼠于末次激发24h后处死,鼻黏膜行苏木素-伊红染色;流式检测气管旁引流淋巴结和脾脏中CD4+CD25+FOXP3+Tregs表达; ELISA检测血清中OVA 特异性IgE及鼻腔灌洗液中IL-4、IL-5含量。结果 与正常组小鼠相比,AR组小鼠鼻黏膜出现大量的嗜酸性粒细胞(EOS),CD4+CD25+FOXP3+Tregs表达在气管旁引流淋巴结中上调,脾脏中无差别;IgE、IL-4、IL-5含量明显升高,而鼻用激素组小鼠CD4+CD25+FOXP3+Tregs在气管旁引流淋巴结和脾脏中表达继续明显上调;EOS数目与IgE、 IL-4、IL-5含量均被明显抑制。结论 CD4+CD25+FOXP3+Tregs不仅在AR中,而且在鼻用激素对AR的干预中都发挥着重要的免疫调节作用,同时IgE、IL-4、IL-5介导变应性炎症反应,在AR的发生发展中发挥重要作用。     

P物质在变应性鼻炎中对RANTES mRNA表达的影响及其意义

目的：探讨P物质（SP）在变应性鼻炎（AR）中对RANTESmRNA表达的影响及其意义，深入了解AR的发病机制。方法：以卵清蛋白（OVA）建立AR豚鼠模型（模型组）。然后用SP滴鼻激发AR各组，并与正常豚鼠对照（对照组），观察其症状和鼻黏膜病理学变化，并对鼻腔灌洗液中的嗜酸粒细胞进行计数。采用RT—PCR方法，对各组动物鼻黏膜组织中RANTES mRNA的表达水平进行相对定量比较。结果：SP激发能诱发正常的豚鼠出现相似的AR症状，并能加重模型组豚鼠AR症状和鼻黏膜炎症。而且SP滴鼻使AR豚鼠鼻黏膜RANTES mRNA的表达显著增高（P〈0．05），鼻灌洗液中嗜酸粒细胞数亦明显增高（P〈0．01）。结论：在AR的发病机制中，SP能诱导鼻黏膜表达RANTES，促进嗜酸粒细胞趋化与转运，引发和加重AR的炎症反应。     

免疫耐受型树突状细胞对变应性鼻炎小鼠的调控作用

目的　探讨免疫耐受型树突状细胞（tolerogenic dendritic cells,TolDC）在变应性鼻炎（AR）模型小鼠中的免疫调控作用。方法　SPF级Balb/c小鼠24只,按每组6只随机分成4组,即生理盐水对照组、卵清蛋白致敏的AR小鼠模型组、过继回输TolDC治疗组以及TGF-β/IL-10中和抗体组。分别比较四组间,AR小鼠鼻部症状评分、肺部炎症细胞浸润情况、肺泡灌洗液Th1/Th2炎症因子的表达情况、血清卵清蛋白（OVA）特异性IgE的含量以及肺调节性T细胞（regulatory T cell,Treg）的表达情况。结果　AR小鼠模型建立成功;相较AR模型组,过继回输TolDC治疗组中小鼠鼻部症状显著减轻,肺嗜酸性粒细胞等炎症细胞浸润减轻,肺泡灌洗液Th1/Th2炎症因子的表达下降,血清OVA特异性IgE表达下降,以及肺Treg表达上调;TGF-β/IL-10中和抗体能够逆转TolDC的免疫调控作用。结论　TolDC能够通过TGF-β/IL-10依赖性信号诱导CD4+Foxp3+Treg生成,抑制AR模型小鼠上呼吸道炎症。     

CD4+ T cells induce productions of IL-5 and IL-13 through MHCII on ILC2s in a murine model of allergic rhinitis

ObjectiveCD4⁺ T cells play an important role not only in the induction of allergy but also in allergic inflammation. Group 2 innate lymphoid cells (ILC2s) also mediate type 2 immune responses in allergic rhinitis (AR). However, the relationships between CD4⁺ T cells and ILC2s in allergic condition are currently not well defined. The study aimed to evaluate the potential influences of CD4⁺ T cells on ILC2s in the murine model of AR.MethodsA murine model of AR was established using ovalbumin (OVA), and OVA-induced ILC2s were sorted and purified from the mouse nasal-associated lymphoid tissue (NALT), and cultured in vitro. Then, the expression of major histocompatibility complex class II (MHCII) on ILC2s was examined. CD4⁺ T cells were separated from AR mice peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). After that, productions of IL-5 and IL-13 on ILC2s cultures were assessed when CD4⁺ T cells or plus anti-MHCII antibody or anti-CD4 antibody were administered into the cultures. Finally, we adoptively transferred ILC2s alone or ILC2s plus anti-MHCII antibody to the murine model of AR to investigate their roles in the nasal allergic inflammation.ResultsWe showed that ILC2s could be induced by OVA in the mouse NALT. The number and percentage of ILC2s in AR mice were increased. MHCII was expressed on ILC2s, and its protein and mRNA were all enhanced in allergic condition. IL-5 and IL-13 proteins and mRNAs were elevated after CD4⁺ T cells administration, and were reduced after these cells plus anti-MHCII antibody or anti-CD4 antibody application. Numbers of sneezing and nasal rubbing as well as counts of eosinophils in nasal lavage fluid (NLF) were all enhanced after the adoptive transfer of ILC2s when compared to AR mice. IL-5 and IL-13 in the NLF of allergic mice were also increased in comparison with AR group. However, above parameters were all decreased after the transfer of ILC2s plus anti-MHCII antibody versus AR mice or ILC2s-treated ones.ConclusionThese findings show that CD4⁺ T cells induce productions of IL-5 and IL-13 through MHCII on ILC2s in AR mice models.     

Evaluation of nasal IgA secretion in normal subjects by nasal spray and aspiration

Objective

Nasal washing (NW) is a popular method for collecting human nasal lavage fluid. However, for NW the subject must be trained, and the method is unsuitable for field studies on untrained subjects. To overcome this problem, we have developed an easy and painless method, a nasal spray and aspiration (NSA) method.

Methods

This method is different from NW in that the nasal cavity is misted over with saline, and the nasal lavage fluid is aspirated from the nostrils through a silicon tube. First, nasal lavage fluid was obtained twice by NSA with an interval of a week between lavages to evaluate intraindividual variability, and the IgA and protein levels in the nasal lavage fluid were measured by enzyme-linked immunosorbent assay and bicinchoninic acid assay, respectively. Next, the IgA value determined by NSA was compared with that by NW in another 12 normal subjects 2 days after NSA.

Results

In 10 normal subjects, mean volume of saline sprayed into the nose was 0.46 ± 0.15 ml (mean ± S.D.). Mean volume of aspirated nasal lavage fluid containing both sprayed saline and nasal secretion was 0.44 ± 0.37 ml. The mean IgA level/mg protein in the nasal lavage fluid determined by NSA was 112 ± 18 μg/mg protein at the first and 99 ± 20 at the second times of measurement, being highly reproducible. The mean value by NSA was 114 ± 19 μg/mg protein, being almost the same as that by NW of 99 ± 27.

Conclusion

These findings suggest that the IgA level/mg protein in nasal lavage fluid determined by NSA instead of NW might be useful for assessing the variability of nasal IgA secretion.