缺氧诱导因子-1α在婴幼儿血管瘤及血管畸形中的表达与意义

目的 本研究拟通过检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞增殖核抗原Ki-67、血管内皮标志抗原CD34在婴幼儿血管瘤不同时期、血管畸形和儿童正常皮肤中的表达,探讨缺氧在血管瘤血管生成、细胞增殖中的作用.方法 采用免疫组织化学S-P染色法,检测CD34、HIF-1α、VEGF和Ki-67在小儿血管瘤、血管畸形及正常皮肤组织中的表达,并计算微血管密度(MVD).结果 不同时期血管瘤之间,血管瘤与血管畸形、正常皮肤之间HIF-1α、VEGF、Ki-67、MVD均有显著性差异(P<0.05).血管瘤中HIF-1α表达分别与VEGF、Ki-67、MVD表达呈正相关;而血管畸形HIF-1α与VEGF表达不存在相关关系.结论 缺氧是不同时期血管瘤的普遍现象.HIF-1α能促进血管瘤血管生成.而在血管畸形中可能不存在缺氧的微环境,是"血管内皮细胞生长正常的血管形态异常",因此在血管畸形中不会发生内皮细胞的增殖,也不存在类似血管瘤那样出现增生期和消退期.     

糖皮质激素受体在血管瘤和血管畸形中的表达及意义

目的：检测血管瘤和血管畸形组织中是否存在糖皮质激素受体，并探讨其在血管瘤和血管畸形中的意义。方法：手术切除25例血管瘤、18例血管畸形标本及12例正常皮下组织标本，用免疫组织化学方法检测其组织中糖皮质激素受体、血管内皮生长因子、Ki-67的表达，做图像分析测定，并对3项指标作相关性分析。结果：在血管瘤增生期，皮质激素受体、血管内皮生长因子、Ki-67均有较高表达；在血管瘤退化期、血管畸形和正常皮肤中，糖皮质激素受体、血管内皮生长因子、Ki-67表达极弱或无表达。并且糖皮质激素受体与血管内皮生长因子、Ki-67在血管瘤中的表达呈正相关。结论：糖皮质激素受体、血管内皮生长因子可能在血管瘤的病理发生过程发挥作用，外源性糖皮质激素与糖皮质激素受体结合，可能使血管内皮生长因子分泌减少，而促进血管瘤消退。而糖皮质激素受体、血管内皮生长因子在血管畸形的发生中则无明显作用。     

Rb和P21基因在婴幼儿皮肤血管瘤中的表达及意义

目的探讨Rb和P21蛋白在婴幼儿血管瘤发生、发展及退化过程中的表达及与血管瘤退化有关的可能机制。方法采用免疫组织化学方法（SP法）检测Rb、P21WAF1/CIP1及增殖细胞核抗原在婴幼儿皮肤血管瘤标本增生期、退化期以及血管畸形标本中的表达情况，并用末端脱氧核苷酸基转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸-生物素颈端标记法检测血管内皮细胞凋亡情况，结合CD34相关抗原的免疫组织化学染色，证实Rb和P21表达的细胞是血管内皮细胞。结果增生期血管瘤内皮细胞Rb和P21表达水平低于退化期，差异有统计学意义（P〈0．05），退化期血管瘤Rb和P21表达水平与血管畸形组织相比，差异有显著统计学意义（P〈0．001）。结论Rb和P21可能通过抑制血管瘤内皮细胞增殖和促进血管内皮细胞凋亡，而在血管瘤的退化过程中起重要作用。     

血管瘤血管内皮生长因子受体KDR基因异常甲基化的研究

目的通过建立甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS-HRM）,检测血管内皮生长因子VEGF受体KDR基因启动子区域在不同时期血管瘤、血管畸形及正常皮肤组织中的甲基化状态,初步探讨基因甲基化在血管瘤形成、增生、退化过程中的作用。方法选取不同时期血管瘤石蜡标本48例、血管畸形石蜡标本15例、正常包皮皮肤组织标本8例,分别提取DNA,经亚硫酸氢盐甲基化修饰、纯化、回收DNA,然后用甲基化敏感性高分辨率溶解曲线法（MS-HRM）,定量检测不同标本中血管内皮生长因子受体KDR甲基化水平。结果48例血管瘤标本共检出32例不同程度KDR基因启动子区域甲基化（66．67％）,其中24例增殖期血管瘤标本中检出21例（87．50％）不同程度甲基化,24例消退期血管瘤标本中检出11例（45．83％）不同程度甲基化,增殖期血管瘤与消退期血管瘤标本中KDR的甲基化程度比较,差异有统计学意义（X^2=9．375,P〈0．05）;15例血管畸形标本中仅检出甲基化程度为0-25％者2例（13．33％）,8例正常包皮皮肤组织中检测到1例甲基化0-5％（12．50％）。与血管瘤相比,差异均有统计学意义（P〈0．05,Fisher’确切概率法）。结论血管瘤中血管内皮生长因子受体KDR基因启动子序列CpG岛存在异常甲基化,血管内皮生长因子受体KDR基因异常甲基化可能与血管瘤增生、退化等有关。     

婴幼儿血管瘤组织中VEGF、VEGFR/KDR及PCNA表达

目的：婴幼儿血管瘤的发病机制尚不清楚，目前已知血管内皮细胞生长因子(VEGF)与血管内皮细胞增殖有密切关系。本文探讨VEGF在血管瘤发生发展中的作用。方法：采用免疫组织化学方法，对临床收集的90例手术切除的新鲜血管病变标本(血管瘤56例，血管畸形34例，其中增生期血管瘤32例，消退期血管瘤24例)，进行VEGF及其受体(VEGFR/KDR)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的检测。结果：VEGF，VEGFR和PCNA表达水平在增生期血管瘤明显升高，与消退期血管瘤、血管畸形和正常皮肤比较差异有显著性(P0.01)。结论：VEGF和VEGFR可能促进血管瘤的生长，增生期血管瘤血管内皮细胞增生活跃。VEGF，VEGFR和PCNA的检测有利于临床鉴别诊断血管瘤及血管畸形，并对血管瘤进行分期。     

婴幼儿血管瘤及血管畸形组织中p16及TRAIL的表达及其意义

目的　检测婴幼儿血管瘤组织中抑癌基因 p1 6及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的表达 ,并探讨它们在血管瘤增生、消退过程中的作用。方法　采用免疫组化SP法检测 32例增生期、2 0例消退期血管瘤及 1 4例血管畸形组织中p1 6和TRAIL的表达。结果　p1 6在增生期和消退期血管瘤组织中阳性表达率分别为 78.1 % (2 5/ 32 )、90 .0 % (1 8/ 2 0 ) ,血管畸形组织中全部为阴性。经秩和检验 :Hc=2 6 .6 ,三者之间差异存在显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,两者之间差异有显著性意义(P <0 .0 5)。TRAIL在增生期和消退期血管瘤组织中阳性表达率分别为 2 1 .9% (7/ 32 )、80 .0 % (1 6/2 0 ) ,血管畸形中全部为阴性 ,卡方检验 :χ2 =2 7.8,三者之间差异存在显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,两两之间比较经 χ2 分割 ,增生期与消退期之间有差异 (P <0 .0 5) ,消退期与血管畸形之间有差异 (P <0 .0 5) ,增生期与血管畸形之间无差异 (P >0 .0 5) ,血管瘤与血管畸形之间有差异。结论　p1 6和TRAIL的表达水平与血管瘤的增生、消退有关 ,p1 6可抑制内皮细胞的分裂增殖 ,TRAIL可通过诱导内皮细胞凋亡发挥作用 ,两者均可促进血管瘤消退     

Fas、bcl-2与移植血管瘤自然退化的动态研究

目的观察凋亡相关基因Fas和bcl-2与裸鼠移植血管瘤细胞增生、凋亡的关系，探讨其在血管瘤自然退化中的作用。方法采用免疫组化SP法检测裸鼠移植血管瘤不同时期Ki-67及凋亡相关基因Fas和bcl-2的表达。结果增殖期移植血管瘤组织中Fas无表达或低表达，而在移植血管瘤退化期中高表达，其阳性表达率在增殖期和消退期分别是25．0％和100％，两者之间差异有显著性意义（P〈0．001）；增殖期移植血管瘤中bcl-2高表达，而在移植血管瘤消退期中低表达，其阳性表达率在增生期和消退期分别是87．50％和31．25％（P〈0．001）；增殖期移植血管瘤组织中均有Ki-67表达，而在移植血管瘤消退期中表达极弱或无表达，其阳性表达率在增生期和消退期分别是100％和37．50％（P〈0．001）。结论在移植血管瘤增殖消退中存在着逐渐活跃的凋亡现象，细胞凋亡是血管瘤的生物学特征，是血管瘤自然消退的关键因素。Fas和bcl-2参与了血管瘤中细胞凋亡的调节。     

血管瘤和血管畸形组织中糖皮质激素受体及其亚型的表达及意义

目的测定血管瘤和血管畸形组织中糖皮质激素受体(GR)及其α受体亚型(GRα)的表达情况,了解它们与血管瘤增生、消退的关系并进而探讨糖皮质激素治疗血管瘤和血管畸形的机制。方法采用免疫组织化学方法检测经病理证实的33例增生期、32例消退期及7例血管畸形标本组织中糖皮质激素受体和糖皮质激素受体α亚型的表达情况。结果GR在血管瘤和血管畸形组织标本中的阳性灰度值分别为(126.95±6.41)、(121.43±6.58),差别无统计学意义。但与正常皮肤的测得值(108.63±6.80)比较,两者均明显增高(P<0.01)。GRα在血管瘤、血管畸形和正常皮肤组织标本中的阳性灰度值分别为(127.32±5.36)、(120.43±6.13)和(109.88±5.28),差别均有统计学意义。GR在增生期、消退期血管瘤组织中的表达分别为(127.91±4.81)、(125.97±5.78),没有统计学差别。GRα的表达分别为(127.55±6.41)、(122.47±6.25),差别均有显著的统计学意义。结论血管瘤和血管畸形组织中均有高表达的GR和GRα,GRα的表达与血管瘤的分期关系密切。GR及GRα的检测对了解血管瘤的增生、消退情况以及进一步地指导糖皮质激素治疗血管瘤和血管畸形有积极意义。     

血管瘤裸鼠移植模型生物学特性的动态观察

目的建立能客观、真实地反映人血管瘤的临床发展过程的稳定的血管瘤裸鼠移植模型，动态观察其生物学特性的变化。方法以裸小鼠为载体，选取1例2月龄婴儿增生期毛细血管瘤，将瘤体组织转种于裸小鼠皮下，动态观察瘤体生长情况及组织学变化，检测不同时期移植血管瘤糖皮质激素受体、血管内皮细胞生长因子、Ki-67的表达。结果血管瘤组织移植后3～4周内，瘤体基本上无明显变化，40d后，大多数瘤体开始生长，60d左右达到最大，90d时可见部分瘤体颜色变浅，质地较前变硬，90～120d时部分瘤体仅有少许残留组织。糖皮质激素受体、血管内皮细胞生长因子、Ki-67在增生期移植血管瘤中高表达，而在退化期移植血管瘤中表达极弱。糖皮质激素受体与Ki-67、血管内皮细胞生长因子的表达正相关，Ki-67与血管内皮细胞生长因子表达正相关。结论将人体血管瘤皮下部分移植于裸鼠所建立的人血管瘤动物模型，能较真实地反映人血管瘤的发展过程，是研究血管瘤的较理想的平台。糖皮质激素受体、血管内皮细胞生长因子与移植血管瘤的演变过程有着密切的关系。     

表皮生长因子在血管瘤和血管畸形中的表达

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)与血管瘤及血管畸形的关系.方法 标本选自1998年3月至2005年10月经手术切除的先天性皮肤血管病变92例患儿,女52例,男40例,年龄为40 d至13岁,平均年龄为1.6岁.组织标本取出后立即浸入10%的中性甲醛溶液中固定,常规石蜡包埋,5μm连续切片,HE染色,同时采用含有正常血管的皮肤标本10例作为对照.采用免疫组织化学方法,对72例血管瘤和20例血管畸形组织切片进行EGF表达的测定.结果 EGF在血管瘤组织中高表达,而在血管畸形组织中低表达(P<0.01).在血管瘤增殖期、退化早期和退化完成期三者之间,EGF的表达存在着差异.在血管瘤中EGF的表达与其内皮细胞的增生程度有关.内皮细胞增生越强,EGF的表达越高(P<0.05).结论 提示EGF与血管瘤的增生及退化有关,而与血管畸形无明显关系.     

婴幼儿血管瘤组织中bcl-2和bax与细胞凋亡的研究

目的　研究凋亡调控基因bcl- 2和bax与婴幼儿血管瘤细胞增生、凋亡的关系,探讨其在血管瘤增生、消退中的作用机制。方法　采用免疫组化SP法检测血管瘤及血管畸形组织中增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡调控基因bcl -2和bax的表达;用末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)介导的d UTP生物素缺口末端标记技术 (TUNEL)检测凋亡细胞。结果　bcl 2阳性表达率在增生期和消退期分别是82.14%和46.67%,两者之间差异存在显著性意义(P<0.01),消退期与血管畸形表达差异无显著性意义(P>0.05)。Bax在血管瘤增生期和消退期均为 100%表达,与血管畸形中的表达差异有显著性意义(P<0.01)。bcl 2和bax在血管畸形组织中均不表达。婴幼儿血管瘤增生期和消退期凋亡指数(apop tosisindex,AI)为30.52±10.25和80.22±6.82;增殖指数 (proliferativeindex,PI)分别为11.40±8.90和4.79±3.63,两者之间差异均存在显著性意义(P<0.01)。AI与bcl 2的表达呈负相关 (r=-0.318,P<0.05),AI与bax的表达无明显相关性 (r=-0.077,P>0.05),AI与bcl 2/bax比值呈负相关 (r=-0.307,P<0.05)。结论　在血管瘤增生消退中存在着逐渐活跃的凋亡现象,细胞凋亡是血管瘤的典型生物学特征,是血管瘤的自然消退的关键因素。bcl -2和bax参与了血管瘤中细胞凋亡的调节。     

婴幼儿血管瘤survivin基因启动子甲基化的研究

目的 采用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)检测不同病理阶段的婴幼儿血管瘤组织及正常皮肤组织中survivin基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,探讨survivin基因启动子甲基化与婴幼儿血管瘤增生与退化的可能关系.方法 ①采用免疫组化S-P法检测增殖期婴幼儿血管瘤石蜡标本30例、消退期30例及正常包皮皮肤组织标本10例中survivin蛋白的表达;②提取石蜡包埋块组织基因组DNA并纯化后,采用亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP)分别检测增殖期血管瘤30例、消退期血管瘤30例及正常包皮组织10例中survivin基因启动子CpG岛甲基化情况.结果 ①survivin 蛋白在增殖期血管瘤、消退期血管瘤和正常包皮组织中阳性表达率分别为76.6％ (23/30)、33.3％(10/30)和20.0％(2/10);②10例正常包皮皮肤组织中1例(10.0％)survivin基因启动子CpG岛非甲基化,9例(90.0％)甲基化;30例消退期血管瘤标本中8例(26.6％)survivin基因启动子CpG岛非甲基化,22例(73.3％)甲基化;30例增殖期血管瘤标本中24例(80.0％) survivin基因启动子CpG岛非甲基化,6例(20.0％)甲基化;增殖期血管瘤survivin基因启动子CpG岛甲基化率明显低于消退期和正常包皮组织;③survivin蛋白表达阳性的血管瘤33例中31例survivin基因启动子CpG岛为非甲基化,survivin蛋白表达阴性的27例中26例survivin基因启动子CpG岛为甲基化状态.结论 ①增殖期血管瘤survivin蛋白表达明显高于消退期血管瘤;②survivin基因启动子CpG岛甲基化状态在增殖期血管瘤、消退期血管瘤中存在明显差异;血管瘤组织中survivin基因启动子的甲基化状态与survivin蛋白的表达具有相关性;survivin基因启动子区CpG岛异常甲基化在血管瘤的增殖与消退调控中可能起到了一定作用.     

血清血管内皮细胞生长因子在血管瘤诊断与治疗中的应用

目的 通过检测血清内皮细胞生长因子(VEGF)浓度来鉴别血管瘤和血管畸形，判断血管瘤是处于增生期还是消退期，并评价血管瘤治疗的有效性以及动态监测血管瘤病程的价值。方法 本组115例血管瘤患儿，其中59例增生期血管瘤，38例消退期血管瘤，18例血管畸形；阴性对照组12例，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清血管内皮细胞生长因子(VEGF)浓度。结果 对测得的VEGF浓度通过SAS软件统计分析，发现血管瘤增生期的VEGF浓度显著高于消退期血管瘤、血管畸形和阴性对照，而消退期血管瘤、血管畸形和阴性对照之间的差别没有显著性意义；另外，6例血管瘤患儿(自身对照)激素治疗后的血清VEGF浓度显著性降低。结论 血清VEGF测定对血管性疾病的诊断及病程监测是无创、简单而有效的方法，可推荐为血管瘤诊断和治疗的临床检测手段。     

Angiographic features of rapidly involuting congenital hemangioma (RICH)

Rapidly involuting congenital hemangioma (RICH) is a recently recognized entity in which the vascular tumor is fully developed at birth and undergoes rapid involution. Angiographic findings in two infants with congenital hemangioma are reported and compared with a more common postnatal infantile hemangioma and a congenital infantile fibrosarcoma. Congenital hemangiomas differed from infantile hemangiomas angiographically by inhomogeneous parenchymal staining, large and irregular feeding arteries in disorganized patterns, arterial aneurysms, direct arteriovenous shunts, and intravascular thrombi. Both infants had clinical evidence of a high-output cardiac failure and intralesional bleeding. This congenital high-flow vascular tumor is difficult to distinguish angiographically from arteriovenous malformation and congenital infantile fibrosarcoma.