电刺激C2C12细胞时活性氧生成的变化

目的:利用电刺激使C2C12细胞产生收缩运动,实时观察细胞内活性氧(ROS)生成的时相变化。方法:利用培养的C2C12细胞,电刺激使其产生收缩运动,测定细胞ROS生成速率、线粒体MDA含量、总SOD活性和胞浆内Na+,K+-ATPase活性。结果:(1)以45V、20ms5、Hz的强度刺激C2C12细胞,细胞内ROS生成迅速增加,在刺激60min时ROS的生成速率呈显著性升高(P<0.01),然后缓慢下降,继续刺激到120min时,ROS生成再次升高(P<0.01),随后迅速下降。(2)线粒体总SOD活性逐渐升高,至150min和180min时都与对照组相比有显著性差异(P<0.05);MDA量在90min时略有升高,随后下降,但无显著性差异。(3)电刺激C2C12细胞引起胞浆内Na+,K+-ATPase活性升高,刺激至180min时与刺激90min时相比酶活性显著下降(P<0.05)。结论:利用电刺激C2C12细胞模型,可实时测定收缩细胞的ROS生成速率变化,为运动性ROS产生的机理提供了直接证据。     

ShRNA介导的Smad4基因沉默对C2C12成肌细胞纤维化的影响

目的:研究慢病毒介导的Smad4-shRNA对TGF-β1诱导的纤维化进程的影响。方法:(1)设计并选择抑制效能最高的Smad4-shRNA,包装生产慢病毒,转染C2C12成肌细胞,并检测转染后细胞的Smad4表达;(2)根据TGF-β1诱导C2C12成肌细胞向成肌纤维细胞分化的模型,以慢病毒介导的Smad4-shRNA转染细胞,将不同处理的细胞分为A、B、C、D四组,分别为C2C12细胞组、TGF-β1诱导组、C2C12细胞转染组和TGF-β1诱导后转染组。通过荧光Realtime-PCR和Westerblot检测各组collagen I和α-SMA表达水平。结果:(1)慢病毒介导Smad4-shRNA1转染C2C12细胞后,其Smad4 mRNA和蛋白表达显著低于未转染组(P<0.05);(2)TGF-β1诱导组α-SMA和Collagen I mRNA及蛋白表达均显著高于C2C12细胞组(P<0.05);(3)TGF-β1诱导后转染组α-SMA与collagen I mRNA及蛋白表达显著低于TGF-β1诱导组(P<0.05),与C2C12细胞组和C2C12细胞转染组相比则无明显差异(P>0.05)。结论:降低Smad4表达能有效抑制成肌细胞及受TGF-β1诱导成肌纤维细胞的纤维化过程,提示Smad4可能成为拮抗骨骼肌纤维化的靶点。     

沙棘总黄酮对牵张所致心衰心肌细胞的收缩力学和钙离子转运的影响

目的 研究沙棘总黄酮在改善心衰状态下心肌细胞收缩功能的作用。方法 体外培养大鼠心肌细胞并通过超负荷培养建立心衰心肌细胞模型,给予心衰心肌细胞不同剂量的沙棘总黄酮,然后检测岂细胞的收缩力学特性和钙离子转运状况。结果 沙棘总黄酮显示出有增加心肌细胞收缩力的作用,并且这种作用具有量－－效关系,其心肌细胞收缩力的作用是与沙棘总黄酮的相关系数均在１．０￣０．９之间,而沙棘总黄酮增强心肌细胞收缩力的作用是与细     

NF-κB在电刺激引起C2C12肌管线粒体功能低下时的作用

目的:探讨NF-κB在不同电刺激状态下C2C12肌管粒体功能低下时的作用.方法:采用TY-C型电刺激器(强度为45 V、20 ms、5 Hz)刺激分化6天的C2C12肌管来建立耐力运动时的神经冲动模型,对照组无任何电刺激,实验组分为刺激即刻组、孵育组和对照组,刺激即刻组的刺激时间分别为60分钟、75分钟、90分钟、120分钟、150分钟和180分钟,孵育组刺激120分钟后放入培养箱中继续培养,时间分别为30分钟、60分钟、120分钟和180分钟.测定各组细胞pIKK-α、NF-κB及MnSOD活性变化.结果:与对照组相比,电刺激即刻组C2C12细胞NF-κB活性显著升高(P＜0.O1),且刺激120分钟和150分钟增加明显(P＜0.05),到180分钟时,略有下降.孵育组中孵育120分钟时NF-κB活性较孵育组其它细胞显著增加(P＜0.01);与对照组相比,刺激即刻各组细胞内pIKK-α表达显著增加(P＜0.05),但不同时间电刺激各组之间无显著差别.孵育组中,孵育120分钟细胞pIKK-α蛋白表达与孵育组其他细胞相比显著升高(P＜0.01);与对照组相比,刺激即刻组刺激150分钟时细胞线粒体MnSOD活性显著增加(P＜0.01),孵育组孵育120分钟时C2C12细胞线粒体MnSOD活性显著增加(P＜0.01).结论:(1)在电刺激引起C2C12细胞产生氧化应激,导致细胞线粒体功能的下降中,内源性ROS的产生会激活NF-κB的表达,同时激活IKK-α的磷酸化,且在电刺激强度一定时,NF-κB的活性对电刺激的应答有一定的时相性.(2)随着刺激时间的不同,细胞线粒体MnSOD的活性变化有差异,且线粒体MnSOD活性的变化与刺激时间有关,推测NF-κB的表达上调了细胞内抗氧化物酶MnSOD的表达,这在一定程度上对细胞起到保护作用.     

蛋白激酶C对大鼠逼尿肌肌条收缩活动影响的实验研究

 目的 探讨蛋白激酶C对大鼠离体逼尿肌肌条自发收缩活动的影响.方法 建立逼尿肌不稳定(detrusor instability ,DI)大鼠模型,制做大鼠逼尿肌肌条,观察不同浓度(3×10-7～3×10-4) mol/L的PMA和H-7对DI及逼尿肌稳定(detrusor stability,DS)大鼠逼尿肌肌条自发收缩活动的影响.结果 3×10-7～3×10-6 mol/L的PMA可明显增加DI、DS大鼠逼尿肌肌条自发收缩频率及收缩幅度,且DI组收缩频率高于DS组(P<0.05),但(3×10-5～3×10-4) mol/L的PMA对DI、DS大鼠逼尿肌肌条自发收缩频率和收缩幅度的促进作用无统计学差别(P>0.05).H-7能逆转PMA诱发的DS肌条的收缩作用,可明显抑制DI肌条自发收缩频率(P<0.05),但对其收缩幅度无影响(P>0.05).结论 蛋白激酶C信号通路可能介导了DI逼尿肌自发兴奋性增高的细胞内信号转导过程.     

电刺激引起C2C12肌管IL-6蛋白及IL-6、GLUT4基因表达的变化

目的:研究骨骼肌细胞在不同时间的电刺激下产生的GLUT4基因与肌源性IL-6蛋白含量及其基因表达之间的关系。方法:以小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)为研究对象,分为电刺激组和对照组。分别测定当刺激时间为45 min、60 min、75 min、90 min及120 min时C2C12肌管内糖原含量、GLUT4和IL-6 mRNA表达以及C2C12肌管上清液IL-6含量。结果:(1)电刺激各组GLUT4 mRNA表达均有所增加,其中60 min、75 min和120 min组显著高于对照组(P<0.05);电刺激75 min和120 min组IL-6 mRNA表达显著高于对照组(P<0.05);电刺激各组上清液IL-6含量均显著高于对照组(P<0.05)。(2)随电刺激时间增加,上述各项指标均先增加,后下降,90 min时达低谷。(3)随电刺激时间延长,C2C12肌管糖原含量逐渐减少,其中,刺激120分钟组糖原含量与对照组相比显著减少(P<0.05)。结论:(1)电刺激C2C12肌管对细胞糖代谢产生了一定影响;(2)电刺激C2C12肌管引起的GLUT4 mRNA表达的增加很可能与肌管收缩产生的IL-6有关。     

丝裂霉素C诱发CHL细胞染色体畸变的量效关系

本实验室曾对丝裂霉素 C(MC)诱发人血培养物的细胞遗传效应进行过观察,在此基础上我们研究了 MC 诱发 CHL 细胞染色体畸变的量效关系。CHL 细胞经不同剂量 MC 处理后,畸变细胞、染色单体断裂(ctb)、单体互换(cte)、易位(t)及总畸变(%)等5项指标随 MC 浓度升高而增加。为进一步检验和描述这5个指标与 MC 浓度的关系,我们用最小二乘法,以 y=c+αx、y=c+αx+βx~2、y=cx~α3个模型,分别对这5个指标进行了回归分析,上述3个模型都可得到具有显著意义的回归参数,根据 F值及相应概率 p 值,p 值从小到大三者次序为:模型1、模型2、模型3。     

妊娠子宫局部收缩的超声观察

本研究对 42例妊娠子宫局部收缩进行观察 ,其声像图酷似子宫肌瘤、胎盘早剥、前置胎盘等 ,但根据其声像图的可变性可与其它疾病进行鉴别。1　资料和方法本组 42例患者均为本院常规Ｂ超检查孕妇 ,年龄 2 0～ 38岁 ,平均 2 9岁 ,妊娠 6～ 33周 ,其中小于 12周 10例、12～ 2 8周2 3例、大于 2 8周 9例。初产妇 2 8例 ,经产妇 14例。使用ａｃｕ ｓｏｎ 12 8ＸＰ彩超 ,探头频率 3 .5ＭＨｚ。受检查者早孕期间必需膀胱适度充盈 ,取仰卧位 ,下腹部行各种切面扫查 ,若发现子宫肌层局部异常时 ,则记录其发生部位、形态大小、边界及内部回声 ,于 0 .5…     

游泳运动对老龄小鼠骨骼肌收缩蛋白基因表达的影响

目的:观察游泳运动对老龄小鼠骨骼肌收缩蛋白基因表达的影响。方法:2月龄雌性ICR小鼠8只(C2),10月龄雌性ICR小鼠32只随机分为10月龄对照组(C10)、12月龄对照组(C12)、12月龄每日运动组(共10周,S1)和12月龄隔日运动组(共10周,S2)(分组命名以取材时间为准)。实验结束后取右侧股直肌,利用RT-PCR方法测定各种收缩蛋白:肌球蛋白重链各亚型(Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb、Ⅱx型)及肌动蛋白(α-actin)基因(mRNA)的表达。结果:C10组股直肌Ⅱa型MHC表达显著上升而Ⅱx型则显著下降(P<0.05)。C12组Ⅱb型MHC的表达则较C10组有明显的下降(P<0.01)。两运动组Ⅱa型MHC的表达均比C12组有明显的提高(P<0.01),Ⅱx型则均显著下降(P<0.01)。S2组α-actin表达低于S1组(P<0.05),Ⅱa型MHC则显著高于S1组(P<0.01)。结论:增龄使小鼠股直肌中Ⅱb-MHC和Ⅱx-MHC均出现下调,而Ⅱa-MHC则出现上调。游泳运动可分别使Ⅱa-MHC和Ⅱx-MHC出现明显的上调和下调。     

高原缺氧对心脏收缩功能的影响

本文采用自身对照的方法,观察了76名健康人进藏前后心脏收缩功能指数的改变,发现海拔高度升高(高于3000m 以上)对人体心脏收缩功能有着明显的影响,并对其机理进行探讨,为进一步防治高原病提供一定依据。     

军人体能训练左心室收缩功能的追踪研究

超声心动不仅可直接观察心脏和大血管结构 ,而且随着心动周期变化可推算心泵功能、收缩功能、舒张功能情况。心功能检测已成为临床诊断、疗效考核、预后评估等方面的重要手段[1] 。体能训练是全训部队的必要课目 ,为观察其对左心室收缩功能的影响 ,我们选择了 12 0名新入伍战士     

针刺穴位后超声监测胆囊收缩功能诊断胆囊炎探讨

目的:超声监测胆囊在针刺穴位后的收缩功能,借此对胆囊炎进行诊断。方法:对临床上已经确诊的51例胆囊炎病例进行超声检查,并测量相关径线,然后运用针刺相关穴位,使胆囊收缩,在针刺后10 min2、0 min、30 min分别进行超声检查,测量相关径线,然后运用胆囊容积计算公式计算出收缩前后胆囊容积,计算胆囊收缩功能。随机抽取与病例组年龄范围相同的25例健康成年人,在针刺穴位胆囊收缩前后进行超声检查,计算胆囊收缩功能,以进行正常对照。将病例组与正常对照组作两样本均数比较的t检验。结果:病例组针刺穴位后的胆囊收缩功能明显低于正常组(t<0.01)。结论:超声监测胆囊在针刺穴位后的收缩功能,可以对胆囊炎进行诊断,并且具有无损伤、痛苦小、病人易接受、可重复等优点,是一种很有发展潜力的中西医结合诊断方法。     

树突状细胞的补体攻膜复合物C5b-9模型的建立

目的建立树突状细胞（DC）的补体攻膜复合物C5b-9模型,为研究补体攻膜复合物对DC的影响奠定基础。方法诱导人外周血单核细胞分化成为不成熟DC,C5b-9体外组装,激光共聚焦检测C5b-9在DC表面组装情况。结果成功诱导出不成熟DC,激光共聚焦显示C5b-9完整组装于DC表面。结论本研究成功建立了DC的补体攻膜复合物C5b-9模型,为将来进一步探讨C5b-9对DC的功能影响奠定了基础。     

基于玻璃毛细管的骨骼肌细胞取向调控

目的基于玻璃毛细管侧壁对C2C12细胞的接触引导作用,提出一种低成本、高效率、便于批量使用的骨骼肌细胞取向调控新方法,并探究其应用价值。方法设计相关工艺合成甲基丙烯酸化明胶(GelMA),用于制备水凝胶薄膜和水凝胶纤维。以水凝胶薄膜为基底,以玻璃毛细管为调控结构对C2C12小鼠成肌细胞进行取向调控实验。研究了侧壁形状、基底和侧壁材料在细胞取向调控中的作用,探究此调控方法中真正决定细胞取向的因素。并基于原理对毛细管外径参数进行了优化实验。为说明调控所得细胞分化潜能,进行了分化与电刺激实验,将细胞分化形成肌管,施加外部电场并量化其响应效果。结果毛细管的外弧形侧壁对细胞调控作用明显,能得到垂直于毛细管轴向生长的大面积高密度细胞层。此调控方法中发挥主导因素的是侧壁形状,外径750μm毛细管具有最好的调控效果。调控所得细胞分化而成的肌管在外部电场下可产生有效的响应。结论玻璃毛细管的侧壁会引导细胞垂直毛细管轴向生长,可用于批量化骨骼肌细胞取向调控。此调控方法在组织工程和生物混合驱动等领域具有良好的应用前景。     

蛋白激酶C对大肠癌细胞间隙通讯和粘附分子表达的调节

目的:探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)对大肠癌HT - 29细胞间隙通讯和粘附分子表达的调节作用.方法:采用激光共聚焦对细胞间隙通讯(GJIC)功能测定,用Western blot分析E - cadherin(E - cad)、laminin receptor(LnR)、α - catenin和β - catenin粘附分子表达,研究PKC激活剂佛波酯PMA和抑制剂staurosporine(SP)对HT - 29细胞间隙通讯和粘附分子表达的调节作用.结果:GJIC功能测定提示,PMA可延滞GJIC功能恢复(P＜0.05).但SP和PMA共同作用细胞后,可使GJIC功能恢复明显增快,与PMA处理组比较,差异显著(P＜0.05).Western blot分析提示,HT - 29细胞可高表达E - cad、LnR,而低表达α - catenin、β - catenin.100 nmol/L PMA可诱导细胞表达LnR增强,使E - cad表达下调,但对α - catenin、β - catenin表达无影响.而SP可拮抗PMA的作用,使LnR表达下降,E - cad表达增强,对α - catenin和β - catenin的表达作用亦无影响.结论:PMA和SP对细胞表达E - cad、LnR的作用可能受到PKC调控,PMA和SP调节HT - 29细胞粘附的机制可能还涉及其影响了细胞的GJIC功能,可能与PMA和SP调控细胞E - cad表达机制有关.     

256层螺旋CT双时相重建评估左心室收缩功能的可行性研究

目的：通过与超声心动图检查对比,评估256层螺旋C T冠状动脉成像双时相重建评估左心室收缩功能可行性。方法回顾性分析临床怀疑冠心病62例患者的冠脉C T影像学及超声心动图检查资料。采用多时相重建（间隔5％R-R间期）及双时相重建（同步记录心电图波形选择时相进行重建分析,即Q波峰开始时相定义为舒张末期,T波升支中点开始扫描时相定义为收缩末期）分析分别获得左心室舒张末期容积（LVEDV）、左心室收缩末期容积（LVESV）、左心室每搏输出量（LVSV）、左心室射血分数（LVEF）,并与超声心动图检查结果分别进行对比。所有数据运用 MedCalc V11.4.2统计软件处理,P ＜0．05具有统计学差异。结果62例患者均顺利完成检查。双时相及多时相分析所得左心室功能各参数与超声心动图检查结果均具有良好一致性。两种方法均与超声心动图检查具有良好相关性（0．838＜ r ＜0.997）,但运用Bland-Altman分析发现与CT多时相分析相比,双时相重建分析LVEDV、LVESV、LVSV、LVEF值与超声心动图结果之间差异更小（CT双时相-超声差值分别为（6．9±8．9）ml/m2、（0．9±2．6）ml/m2、（6．0±9．0）ml/m2、（1．1±3．6）％;CT多时相-超声LVEDV、LVESV、LVSV、LVEF差值分别为（-7．2±16．5）ml/m2、（5．4±13．1）ml/m2、（-12．6±17．2）ml/m2、（-8．5±10．9）％。结论冠脉CT双时相左心室收缩功能重建分析结果与超声心动图结果具有良好相关性,能够满足临床对左心室收缩功能分析的需要,值得进一步研究与应用。     

糖尿病大鼠小肠平滑肌细胞线粒体膜电位变化及其意义

目的　研究糖尿病大鼠小肠平滑肌细胞线粒体膜电位变化与细胞凋亡的关系。方法　Wistar大鼠 70只 ,随机分为 :对照组(n =30 ) ,腹腔注射等量的生理盐水。糖尿病模型组(n=4 0 ) ,以链脲菌素 6 0mg/kg腹腔注射 ;造模 2个月后行大鼠胃排空和肠道传输速度测定 ,应用激光共聚焦显微镜检测小肠平滑肌线粒体膜电位 ,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术 (TUNEL)和流式细胞仪检测细胞凋亡指数 ,Westernblot免疫印迹检测细胞色素C含量。结果　模型组大鼠小肠平滑肌细胞线粒体膜电位 (36 8.8±5 6 4 )显著低于对照组 (96 0 5± 12 6 3,P <0 0 1) ;TUNEL染色显示实验组小肠平滑肌细胞凋亡指数 (9 6 3%± 2 4 7% )显著高于对照组(3 2 3%± 1 2 8% ,P <0 0 1) ;流式细胞仪检测提示实验组小肠平滑肌细胞凋亡率为 15 0 % ,明显高于对照组 (3 0 % ,P <0 0 1)。Westernblot免疫印迹检测实验组细胞色素C含量较对照组明显增高(P <0 0 1)。结论　糖尿病大鼠的胃肠道动力改变和线粒体功能改变与细胞凋亡有关。     

细胞色素C依赖的线粒体途径在hTERT干扰促进肝癌HepG2细胞凋亡中的作用

目的检测靶向RNAi抑制hTERT基因对HepG2肝癌细胞凋亡的促进作用及其与线粒体凋亡途径的关系，探讨hTERT干扰促进细胞凋亡的可能机制。方法收集第20代hTERT基因RNAi真核表达载体稳定转染细胞、对照细胞（转染空载体质粒）及未转染HepG2细胞，采用Western blot检测线粒体、胞质细胞色素C（cyt C）的表达及细胞内caspase-9、Bcl-2、Bax和hTERT的表达。结果与未转染细胞和对照细胞相比，转染细胞hTERT、Bcl-2和线粒体cyt C表达明显减少，Bax和胞质cyt C表达明显增加；未转染细胞及对照细胞仅见约46kD的前caspase-9条带，转染细胞可见46kD前caspase-9条带和35kD caspase-9 p35亚基条带。结论RNAi靶向抑制hTERT基因可通过抑制Bcl-2表达和促进Bax表达引起线粒体cyt C释入胞质，激活caspase-9促进HepG2肝癌细胞凋亡。     

不同浓度肌酸对骨骼肌收缩能力和葡萄糖跨膜转运速率的影响

目的 :研究不同浓度特别是高浓度肌酸在离体条件下对骨骼肌收缩能力以及对葡萄糖跨膜转运进入骨骼肌细胞速率的影响。方法 :对在不同肌酸浓度孵育液中的大鼠比目鱼肌进行最大强直等长收缩刺激 ,分析收缩力输出量时间变化曲线和收缩力总量 ,并用同位素双标法测定肌肉收缩后葡萄糖跨膜转运速率。结果 :大剂量肌酸浓度条件下骨骼肌收缩力明显下降 (P <0 0 5 ) ,并存在剂量———反应的负相关关系 (P <0 0 5 )。当肌酸浓度在正常范围内时 ,骨骼肌收缩力保持在较高水平。在各种肌酸浓度下葡萄糖转运速率改变不明显 (P >0 0 5 )。结论 :离体条件下高浓度肌酸对骨骼肌收缩能力造成不利影响 ,提示运动员应适量补充肌酸 ,不可大量或超量使用 ,以免对运动能力造成负面影响。骨骼肌收缩后葡萄糖跨膜转运的速率不受肌酸的影响     

大鼠C6脑胶质瘤模型的实验研究

应用定向法将体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞悬液 10 μl注入大鼠右脑尾状核 ,悬液内含 1%琼脂糖和 1× 10 6个C6细胞。接种后行一般和MRI检查 ,对 5组接种大鼠分别在第 10、15、2 0、2 5天和自然死亡前做主动脉多聚甲醛灌注固定 ,对脑组织和瘤体标本行HE染色。MRI结果表明 ,5 0只接种大鼠脑内均有肿瘤生长 ,远处和颅外转移率为 4%。所建C6脑胶质瘤模型生长稳定、大鼠生存时间易于判定 ,为脑胶质瘤化疗、放疗和基因治疗奠定了实验基础。