HMME、HB和THB与血浆、血清和白蛋白溶液的相互作用

目的 分析国产光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)、竹红菌乙素(HB)、2-牛黄酸竹红菌乙素(THB)与不同血液成分生物载体作用时的吸收光谱和荧光光谱,确定HMME、HB和THB光敏剂在血液中的主要载体.方法 HMME、HB和THB分别与不同浓度的人血浆、人血清、牛血清和牛血清白蛋白溶液充分作用后,观测吸收光谱和荧光光谱的变化.结果 HMME、HB和THB与人血浆、人血清、牛血清以及牛血清白蛋白发生作用,引起了吸收和荧光光谱强度和位置的变化.HMME的吸收光谱和荧光光谱峰的红移比较明显,HB和THB的吸收光谱峰红移不明显,荧光谱中出现了新的荧光峰.结论 HMME、HB和THB与人血浆和人血清的作用规律基本相同,与牛血清和牛血清白蛋白作用规律不完全相同.HMME主要与血清白蛋白结合;HB与白蛋白作用的同时也与其他组分结合;THB与血清白蛋白结合后有电荷转移态强荧光峰的生成.     

两种新型竹红菌乙素衍生物在人胃腺癌BGC-823细胞中吸收规律的研究

目的探讨两种新型光敏剂5-氨基-1-戊磺酸竹红菌乙素衍生物（PENSHB）和15位脱乙酰基13位3-氨基-1-丙磺酸竹红菌乙素衍生物（DPROHB）在人胃腺癌BGC-823细胞中的吸收规律。方法以浓度为4μM的PENSHB、DPROHB对人胃腺癌BGC-823细胞分别孵育0、0.5、1、2、4和8 h,用荧光分析法测定细胞内光敏剂含量,通过浓度-荧光强度标准曲线换算成光敏剂浓度,绘制每种光敏剂的孵育时间-细胞含量的关系曲线。以浓度为0.5、1、2、4和8μM的两种光敏剂分别孵育BGC-823细胞4 h后,测定细胞内荧光强度,绘制光敏剂的孵育浓度-细胞含量关系曲线。结果 BGC-823细胞对PENSHB和DPROHB的吸收含量随孵育时间的延长而增加,两者变化趋势相近,孵育1 h内细胞吸两种新型光敏剂收含量增加较快,4 h达到平台。在本实验的浓度范围内PENSHB和DPROHB的细胞吸收量随孵育浓度的增高而增加,基本呈线性关系,上升趋势相似。两者在细胞内的吸收含量依赖孵育时间及孵育浓度。结论两种新型竹红菌乙素衍生物PENSHB和DPROHB在提高水溶性及光动力效应的同时,细胞吸收特性良好,是有潜在应用前景的新型光敏剂。     

光动力疗法治疗鲜红斑痣的基础研究—血啉甲醚与血卟啉衍生物吸收特性的比较

目的　观察新型光敏剂——血啉甲醚(HMME)在鸡冠皮肤组织和血管内皮细胞(EC)的吸收特点。 方法　莱亨鸡12只,分为HMME组和血卟啉衍生物(HpD)组,每组6只。分别静脉注射HMME或HpD10mg/kg,每隔10min取血2.5ml和鸡冠皮肤组织2.5g。培养新生儿脐带EC,培养液中加入HMME或HpD,孵育浓度分别为20、40、60、80和100 μg/ml,孵育时间为即刻、15、30、60、120、180和240min。采用荧光分析法测定光敏剂含量,并绘制EC吸收光敏剂的浓度—含量和时间—含量关系曲线。 结果　静脉注射HMME或HpD后,其血清浓度的峰值出现在注射后10min,以后随时间迅速下降,二者的曲线形态基本一致。HMME在鸡冠组织中的含量于注射后10min显著高于HpD（P＜0.01）,以后虽然下降速率较快,但在注射后80min仍显著高于HpD（P＜0.05）。培养EC可迅速吸收HMME和HpD,30min达峰值的89%以上;其吸收量与孵育浓度呈线性关系,对HMME的吸收量显著高于HpD（P＜0.01）。 结论　HMME较HpD更容易被皮肤微血管EC摄取,这将有利于鲜红斑痣的治疗。     

铜蒸气激光照射下11种光敏剂杀伤强度的比较

目的　检测目前国内常用的和中国科学院化学研究所合成的共 11种光敏剂 ,比较它们对细胞杀伤效应的强弱 ,筛选出适于临床应用的新型光敏剂。方法　将乳腺癌MDAMB 5 4 3细胞接种于 96孔培养板 ,然后加入用RPMI16 4 0培养基配置的不同浓度的不同光敏剂 ,4h后照光 ,2 4h后用四唑盐比色法测定细胞存活率。以血卟啉衍生物 (HpD)作为标准对照。结果　在 5 10 6nm和 5 78 2nm的混合光照射下 ,竹红菌素A(HA)、竹红菌素B(HB)和 5 ,15 二芳基 2 ,3 二羟基卟吩 (DPCOH)比HpD有更强的杀伤效应。血啉甲醚 (HMME)的杀伤效应是HpD的 1 2左右。其他的一些化合物在此波长条件下杀伤效应较差 ,其中一些是因其溶解性不好而不能完全发挥其杀伤效能。结论　竹红菌素类光敏剂和DPCOH是很有应用开发前景的新型光敏剂     

五种竹红菌素衍生物对A549细胞的光动力效应研究

目的比较五种新型竹红菌素衍生物分别为竹红菌素乙素（hypocrellin,HB）的二位ω-氨基磺酸衍生物THB、3HB和4HB,及十七位ω-氨基磺酸衍生物3SB和4SB对体外培养的人肺腺癌上皮细胞（A549）的光动力（photodynamic therapy,PDT）效应,筛选光动力活性和安全性较好的竹红菌素衍生物。方法 （1）杀伤效应。将0.94 nmol/ml的5种新型竹红菌素衍生物和HB分别与A549细胞孵育4 h后,分别以波长630和532 nm激光照射,功率密度20 mW/cm2,照射时间1 000 s,能量密度20 J/cm2,照光后继续避光孵育24 h后采用MTT法测定细胞存活率。（2）安全系数。分别以波长532和630 nm激光照射,以血卟啉（hematoporph-yrin derivative,HpD）为对照光敏剂,研究17-4-amino-1-butane-sulfonic acid-hypocrellin B（4SB）对A549细胞的光动力效应及和暗毒性,并比较安全系数（暗毒性IC50/光毒性IC50）。结果 （1）杀伤效应。五种竹红菌素衍生物中,4SB在630和532 nm激光照射下对A549的光动力杀伤作用强于其它衍生物,接近HB。（2）安全系数。波长532 nm激光照射,4SB的光毒性分别为103.86和84.16 ng/ml是HpD 960.14 ng/ml的10.53和11.4倍,但前两者之间差异无显著意义（P〉0.05）;波长630 nm激光照射下,4SB光毒性的IC50为50.7 ng/ml,HpDIC50为1 069.88 ng/ml,暗毒性HpD、4SB分别为7.84、21.93μg/ml,安全系数4SB（432.5）〉HpD（7.3）。HpD在532和630 nm两波长下的光毒性IC50差异无显著意义（P〉0.05）,而4SB在532和630 nm两波长下的光毒性差异有显著意义（P〈0.05）。结论 5种衍生物可能成为有价值的光敏剂,值得进一步深入研究。     

两亲性光敏剂血卟啉单甲醚在不同溶液体系中的存在状态

目的测定血卟啉单甲醚(HMME)在不同浓度、不同溶液体系中的存在状态,以分析其对HMME-光动力学疗法(PDT)的影响。方法按所用溶剂实验分为以下4种溶液体系:HMME-磷酸盐缓冲液(PBS)、HMME-二甲基亚砜(DMSO)、HMME-白蛋白缓冲液和HMME-细胞悬液,每种溶液配成2、4、8、10、20、40、60、80和100μmol/L等9个浓度。首先分别测定其吸收光谱和荧光激发光谱,根据光谱形态特征定性分析HMME在前述9个浓度的4种溶液体系中的存在状态,然后对形成聚集体的溶液利用公式定量分析HMME的缔合数、聚集平衡常数及各浓度下的缔合度。结果通过光谱特征的定性分析发现,浓度为2~10μmol/L时,HMME在DMSO、白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中均以单体为主;浓度为20~100μmol/L时,除DMSO溶液外在其他3种溶液中都有HMME聚集体出现。通过绘制浓度为20~100μmol/L的HMME在PBS、白蛋白缓冲液和细胞悬液中的状态图,聚集数取2时,状态图线性关系较好,HMME在此3种溶液中形成二聚体。缔合度计算结果显示:浓度为20μmol/L的PBS、细胞悬液和白蛋白缓冲液中部分HMME分子开始形成聚集体,但整个溶液仍以单体为主(HMME单体百分数分别为92·3%、90·7%和95·5%);40~100μmol/L溶液中HMME单体含量随浓度增加而减少,100μmol/L的PBS溶液和细胞悬液中70%~75%HMME为单体,近30%的HMME分子发生了聚集,而白蛋白缓冲液中83%的HMME为单体,20%的HMME分子发生了聚集。HMME在PBS和细胞悬液中的聚集平衡常数近似,而且大于在白蛋白缓冲液中的聚集平衡常数,说明HMME的聚集程度在PBS溶液和细胞悬液中比在白蛋白缓冲液中大。与疏水性血卟啉衍生物(HpD)比较结果显示,在PBS溶液中HMME在60μmol/L开始出现明显聚集,而疏水性HpD在20μmol/L即开始出现明显聚集;定量比较各溶液体系中HpD的聚集平衡常数均明显大于HMME,且各浓度时的单体含量明显小于HMME,说明HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中的聚集趋势明显小于HpD。结论两亲性光敏剂HMME在PBS、蛋白缓冲液和细胞悬液中聚集性显著低于疏水性的HpD。浓度低于20μmol/LHMME在4种溶液中均以单体为主,HMME在40~100μmol/L的白蛋白缓冲液、PBS和细胞悬液中都有不同比例HMME分子发生聚集,且都形成二聚体。HMME在不同溶液中的聚集程度不同,按由难到易依次为:DMSO、白蛋白缓冲液、PBS≈细胞悬液。在常规给药条件下,HMME在体液中的存在形式以单体为主,但在高浓度给药时,部分HMME会聚合成聚集体,应注意聚集对HMME-PDT的影响。     

铜蒸气激光照射下光敏剂血卟啉衍生物和血卟啉单甲醚杀伤特性研究

目的 测定血卟啉衍生物(HpD)和血卟啉单甲醚(HMME)在铜蒸气激光照射下的半数杀伤浓度(IC50)和半数杀伤光剂量(IED50),了解HpD与HMME杀伤特性的差异.方法 将小鼠肺血管内皮细胞接种于96孔培养板,然后加入用DMEM(低糖)培养基配置的光敏剂中,4h后应用铜蒸气激光(510.6nm和578.2nm)单色光分别照射,24h后用MTT法测定细胞存活率.结果 在510.6nm和578.2nm波长下,饱和光剂量条件下HMME的IC50分别是HpD的1.31和1.24倍,在饱和光敏剂剂量条件下,HpD的IED50分别是HMME的1.18和1.17倍.结论 HpD在510.6nm和578.2nm波长的杀伤效应均较HMME强并和光剂量、波长密切相关.     

铜蒸气激光照射下三种光敏剂杀伤效应的研究

目的 测定血卟啉衍生物(HpD)和竹红菌素A(HA)、竹红菌素B(HB)在铜蒸气激光照射下的半数杀伤浓度和半数杀伤光剂量，了解HA、HB与HpD杀伤特性的差异。方法 将小鼠肺血管内皮细胞接种于96孔培养板，然后加入用DMEM(低糖)培养基配制的光敏剂，4h后应用铜蒸气激光510．6nm和578.2nm单色光分别照射，24h后用四唑蓝比色法测定细胞存活率。结果 在510.6nm和578.2nm波长饱和光剂量条件下HpD的半数杀伤浓度分别是HA的63、51和70.96倍，是HB的27．08和25．03倍。在饱和光敏剂剂量条件下510.6nm和578．2nm的半数杀伤光剂量HA分别是HpD的6．77和6．59倍，HB则分别是HpD的5．45和4．91倍。结论 HA、HB在510.6nm和578．2nm波长的杀伤效应都较HpD强并和光剂量、波长密切相关。     

激光激活光敏剂ATX-S10和HpD特性的对比研究

目的对比在激光辐射下ATX-S10和HpD两种光敏剂在其不同浓度及不同光照的功率密度和照射时间的激活规律。方法以454 nm激光器作为激发光源,通过改变光敏剂ATX-S10和HpD浓度,以及激光照射功率密度和照射时间,利用光电倍增管测量单态氧在波长1 270 nm处的红外发光强度变化情况,对比两种光敏剂的激活特性。结果浓度分别为5、10、30、50和100μg/ml的ATX-S10和HpD溶液,氩离子激光器照射后,单态氧的红外发光强度均随光敏剂浓度的增加而增加,光敏剂浓度相同时,ATX-S10比HpD发光强度更强;激光的功率密度越强,相对发光强度越高,相同辐照强度下,ATX-S10比HpD发光强度更强;辐射时间越长,相对发光强度越强,直至达到饱和(60 s),辐射时间相同时ATX-S10比HpD发光强度更强。结论激光功率密度越大、照射时间越长、光敏剂浓度越高,光敏剂的激活率越高。相同条件下ATX-S10的单态氧产率比HpD高。     

细胞膜脂含量对结合血卟啉衍生物（HpD）及其载体的研究

应用电泳方法分离结合HpD的人血清,利用染色和HpD光照后产生红色荧光特性,证明了HpD与血清中脂蛋白和清蛋白组分结合。制备不同卵磷脂/胆固醇摩尔比的脂质体,将其与肝癌细胞融合后,分别加入HpD,经荧光光谱分析,光照后对脂质过氧化物(丙二醛)及荧光偏振度的测定,结果表明HpD与细胞膜上脂质相结合,其结合量与膜脂含量成正相关,光照后,丙二醛增加,膜流动性降低。     

G-CSF联合SB203580对4Gy照射小鼠免疫系统的作用

目的 研究G-CSF联合p38抑制剂SB203580 （SB）对免疫细胞辐射损伤的作用.方法 C57BL/6雄性小鼠按体质量随机分为对照组、照射组和给药组.照射组和给药组给予4 Gy全身照射.给药组小鼠给予腹腔注射G-CSF和SB,G-CSF于4Gy照射后2h和6h给药（1μg/只）,每天2次,连续给药5d,SB于照射后24h给药（15 mg/kg）,隔日给药,共给药5次.照射后10d测外周血计数,进行白细胞CD4、CD8、B220检测、胸腺细胞CD4、CD8检测和骨髓细胞活性氧检测.结果 照射组外周血计数和CD8、B220比例下降,而胸腺细胞中CD4＋CD8＋细胞比例及骨髓细胞活性氧水平显著增加.与照射组相比,联合给药组外周血红细胞数、血小板、CD4、CD8细胞比例升高,胸腺细胞中CD4＋CD8＋细胞比例下降.结论 G-CSF联合SB对4 Gy照射引起的免疫细胞损伤存在保护作用.     

芦荟多糖对高原重度创伤失血性休克大鼠的治疗效果

目的：探讨芦荟多糖（AP）对高原重度创伤失血性休克大鼠的治疗效果。方法：初进高原30只雄性SD大鼠随机分为3组：乳酸林格氏液组（LR,10只）;芦荟多糖组（AP50,AP100各10只）。实验中持续监测平均动脉血压（MAP）,并在放血前（T0）、休克1 h（T3）、复苏1 h末（T5）、2 h末（T7）测动脉血气,记录大鼠生存时间和4 h生存率。结果：AP可显著提升重度创伤失血性休克大鼠MAP,改善动脉血气指标,明显延长动物存活时间。结论：AP有较好的治疗高原重度创伤失血性休克的作用,且AP 100μg/ml是相对较好的剂量。     

血卟啉单甲醚在生理盐水溶液中光漂白的研究

目的观察在光动力学反应过程中血卟啉单甲醚(HMME)的光漂白现象,探讨其影响因素。方法通过本研究建立的光敏剂荧光分析系统,应用光学多通道分析仪对生理盐水溶液中HMME介导的光动力反应过程中光漂白的情况进行监测。HMME的浓度分别为1、10μg/ml。Nd∶YAG倍频532nm激光作为光动力的照射光源,同时利用其作为荧光激发光源。在光动力反应过程中采集溶液的荧光光谱,并进行分析处理。结果光敏剂HMME在一定的浓度范围内,初始浓度越高,光漂白的速率越快。在HMME的光漂白过程中于639nm处出现新的荧光峰。根据漂白造成的自体背景的变化,HMME的光漂白可以分为两个阶段:(1)在0～45min阶段,随着照光过程的持续,HMME在613nm与674nm处的荧光特征峰强度下降,同时在639nm处出现新的荧光峰,且其强度持续增强,自体背景强度起伏很小,稳定在HMME初始荧光强度的0.16倍左右;(2)而45～90min阶段,随着照光时间延长,在613、674和639nm处荧光峰的强度均下降,自体背景强度呈接近于线性持续增强,到照光结束时增至HMME初始荧光强度的约0.45倍。结论HMME的光漂白是一个较复杂的过程,初始浓度影响其漂白的速度,并伴有光漂白产物的生成及其再漂白的现象。     

HPLC 法测定乐脉胶囊中芍药苷和丹酚酸 B 的含量

目的建立HPLC法测定乐脉胶囊中芍药苷和丹酚酸B的含量。方法芍药苷和丹酚酸B均采用C18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱;流动相分别为乙腈-0．05％磷酸（13：87）和乙腈-甲醇-1．7％甲酸溶液（4：27：69）;检测波长分别为230和286nm,柱温为30℃,流速为1．0ml·min^-1。结果芍药苷在0．20403—4．0806μg范围内得芍药苷回归方程Y=1×10^6X＋2631（r=0．9999）;丹酚酸B在0．12573～2．5147μg范围内得回归方程Y=937308X＋560947（r=0．9996）,两组分分别与峰面积呈良好的线性关系。芍药苷的平均回收率为98．9％,RSD为1．8％;丹酚酸B平均回收率为100．4％,RSD为2．8％。结论该方法结果准确,重复性好,可作为乐脉胶囊质量控制的定量方法。     

高效液相色谱法测定通关藤药材中绿原酸的含量

目的 建立通关藤药材中绿原酸的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法测定绿原酸的含量[分析柱Agilent ZORBAX SB C18(5μm,4.6 mm×250 mm)],流动相:乙腈-水-冰醋酸(8:92:1),检测波长:327 nm.结果 绿原酸进样浓度在8.01～32.03μg/ml范围内线性关系良好(r=0...     

HPLC法同时测定残黄片中靛蓝和靛玉红的含量

目的建立残黄片中靛蓝和靛玉红的含量测定方法。方法采用HPLC法,色谱柱：Alltima C18（5μm,250mm×4.6 mm）反相柱;流动相：甲醇-水（80∶20）;流速：1.0 ml·min-1,检测波长：287 nm;柱温：30℃。结果靛蓝和靛玉红含量分别在4.34～17.34μg（r=0.9999）和2.32～9.28μg（r=0.9998）范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.50%和100.34%,RSD分别为1.27%和0.63%（n=6）。结论该方法操作简便,准确可靠,专属性强,重复性好,能同时测定残黄片中靛蓝和靛玉红的含量,可用于残黄片的质量控制。     

褐藻糖胶对60Co-γ射线照射引起的人外周血淋巴细胞微核率的影响

目的 本研究通过60Co-γ射线体外照射人外周血淋巴细胞观察微核率,研究褐藻糖胶的辐射防护作用.方法 抽取4名从未接触过有害化学物质的健康男性志愿者的静脉血,按常规微量血培养方法体外培养外周血淋巴细胞以及微核细胞.实验分为对照组、照射组及加药组(照射前lh、照射后1h加入20、40、80、160、320μg/ml褐藻糖...     

高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑含量

目的建立高效液相色谱法测定人血浆中伏立康唑的含量。方法血浆样品经乙酸乙酯-环己烷萃取,以双嘧达莫为内标,采用AgilentZORBAXSB-C18色谱柱（4.6mm×150mm,5μm）为分析柱,以三乙胺-冰醋酸-水-乙腈（1：1：65：35）为流动相,检测波长为254nm,柱温为30℃,流速为1.0ml/min。结果伏立康唑及内标双嘧达莫的色谱峰分离良好,伏立康唑在0.1～10μg/ml范围内线性关系良好,r=0.9981（n=6）,平均方法回收率为93.55%,RSD小于2%,日内日间RSD均小于15%,定量限为0.1μg/ml。结论本方法简便快速,准确灵敏,适用于人血浆中伏立康唑的血药浓度监测。     

壬苯醇醚-9胶囊在比格犬体内的药代动力学研究

目的 建立一种快速、专属的反相高效液相色谱法测定比格犬血浆中壬苯醇醚-9的浓度,研究壬苯醇醚-9在比格犬体内的药代动力学.方法 6只健康♀比格犬,体质量9.5～10.0 kg,单剂量(192mg/只)口服给药壬苯醇醚-9自制胶囊,采用DiamonsilTM(钻石)ODS柱(200 mm ×4.6 mm,5μm,ID),...