γ射线胸部照射小鼠早期肺组织的免疫细胞反应

目的 探索γ射线胸部照射小鼠早期肺组织免疫相关T淋巴细胞反应。 方法 将112只C57BL/6 雄性小鼠[6~8 周龄,（20±2） g]采用随机数字表法随机分为14组（照射组和对照组各7组）,每组8只。照射组小鼠进行单次20 Gy 60Co γ射线胸部照射,分别在照射后第3 、12 小时和第1 、2 、3 、7 、14 天用流式细胞仪检测肺组织的白细胞、T淋巴细胞（CD3+）及其CD4+和CD8+亚群、调节性T细胞（Treg）等免疫细胞比例的变化。两组间比较采用 t 检验。 结果 照射后的小鼠肺组织白细胞显著降低（t=3.446~7.781,均P<0.01）;CD3+T细胞在照射后早期（第3小时至第2天）降低明显（t=4.413~15.430,均P<0.01）;Treg （CD4+CD25+Foxp3+）显著升高（t=2.813~4.406,均P<0.05）;CD4+在照射后早期（第3小时和第12小时）减少（t=5.019、4.912,均P<0.01）,1 d后恢复至对照组水平;CD8+在照射后早期（第3小时和第12小时）无明显变化,第1天和第3天降低明显（t=6.736、4.738,均P<0.01）,第7 天后升高（t=7.537、3.903,均P<0.01）;CD4+/CD8+比值在照射后12 h内降低（t=5.624、4.083,均P<0.01）,第1天和第3天升高明显（t=13.410、5.702,均P<0.01）,但7 d后又下降（t=5.505、3.928,均P<0.01）。 结论 胸部照射小鼠早期肺组织免疫相关细胞呈现各种不同变化,这可能与辐射导致免疫细胞损伤以及机体应激反应产生的免疫应答有关。     

PLC/PIP2信号通路在辐射诱导NRP1+Treg 细胞中的作用机制

目的 观察X射线照射后小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞数量及TGF-β1分泌量的变化,并探索PLC/ PIP2信号通路在其中的作用机制.方法 36只ICR小鼠按随机数字表法分为假照组、0.5、1.0、2.0、4.0和6.0 Gy的不同剂量组,X射线深部治疗机进行全身照射,于照射后16 h应用流式细胞仪分析小鼠胸腺细胞中CD4+ CD25+ NRP1+ Treg细胞的变化,ELISA法检测胸腺细胞TGF-β1含量的变化.EL-4细胞株经PKC激动剂(PMA)、Ca2+阻断剂(TMB-8)作用2h后并经4 GyX射线照射,于照射后48 h应用流式细胞术及ELISA法分别检测CD4+CD25+ NRP1+ Treg细胞及TGF-β1含量的变化.结果 小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg在0.5 GyX射线作用后稍有下降,于1.0 Gy降至最低(t=6.96,P＜0.01),而后呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy升至最高(t =6.70,P＜0.01);胸腺细胞TGF-β1在0.5 GyX射线照射后显著下降(t=12.53,P＜0.01),而1.0～4.0 Gy照射后则呈剂量依赖性升高,于6.0 Gy仍保持高水平(t=10.40 ～ 15.30,P＜0.01).PMA作用后,与假照组相比,单独PMA组NRP1+ Treg细胞表达显著降低(t=3.06,P＜0.01),而联合照射后表达则明显上调(t=8.27,P＜0.01),TGF-β1无论受照与否,其含量均明显降低(t=10.46 ～39.69,P＜0.01);而TMB-8作用后,无论受照与否CD4+ CD25+ NRP1+ Treg的表达及TGF-β1的分泌量均显著上调(t=5.53～44.26,P＜0.01).结论 高剂量电离辐射可以诱导小鼠胸腺细胞中NRP1+ Treg细胞表达并增加TGF-β1的含量,此现象可能与启动PLC/PIP2信号通路有关.     

辐射合并减压暴露致大鼠急性肺损伤的效应观察

目的 探讨不同剂量辐射暴露对快速上浮脱险致大鼠减压病急性肺损伤及死亡率的影响。 方法 53只SD大鼠按体重分层后以随机数表法分为5组:空白对照组（10只）、单纯减压组（10只）、4 Gy照射+减压组（11只）、6 Gy照射+减压组（11只）以及8 Gy照射+减压组（11只）。照射组大鼠先进行4、6、8 Gy不同剂量60Co γ射线全身照射,空白对照组及单纯减压组大鼠在相同环境下不进行照射;照射结束后1 h各减压组再进行减压处理实验（57 m停留45 min后,37 s快速减压至大气压）,观察各组大鼠死亡率、肺湿干重比、肺组织病理损伤程度以及肺泡灌洗液中炎症因子和氧化应激相关分子水平的变化。各组大鼠死亡率的比较采用卡方检验,其他指标的比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果 与空白对照组比较,各实验组大鼠死亡数量和肺湿干重比均增加,6 Gy照射+减压组和8 Gy照射+减压组大鼠肺湿干重比显著增加,且差异有统计学意义（F=3.096,LSD-t=2.758、2.959;均P<0.05）;各实验组大鼠肺组织病理损伤明显,其中6 Gy照射+减压组和8 Gy照射+减压组更为显著;各实验组大鼠肺泡灌洗液中白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和丙二醛（MDA）水平显著增加,且差异有统计学意义（F=45.680~78.270,均P<0.01）,超氧化物歧化酶（SOD）活力和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平显著下降,且差异有统计学意义（F=35.720、51.370,均P<0.01）。与单纯减压组比较,4 Gy照射+减压组和8 Gy照射+减压组大鼠死亡数量增加,但死亡率的差异无统计学意义（χ2=7.925,P>0.05）;各照射组大鼠肺湿干重比虽有上升趋势,但差异无统计学意义（LSD-t=0.901、1.818、2.020,均P>0.05）;各照射组大鼠肺组织病理损伤有不同程度的加重,其中8 Gy照射+减压组损伤程度最重;各照射组大鼠肺泡灌洗液中炎症因子（IL-1β、IL-6、TNF-α）和氧化应激相关分子（SOD、GSH-Px、MDA）均变化显著（LSD-t=3.081~8.265,均P<0.01）,其中6 Gy照射+减压组变化最为显著。 结论 辐射会加重快速上浮脱险造成的肺组织炎症和氧化应激损伤,表现为肺组织病理损伤程度加重及死亡率增加,从而增加快速上浮脱险致减压病发生的风险。     

西咪替丁对胸部分割照射小鼠脾脏损伤的治疗作用

目的探究西咪替丁(CMTD)对局部分割照射小鼠的治疗作用。方法雄性C57BL/6小鼠30只,随机单位组设计分为对照组、单纯照射组和照射给药组(CMTD,100 mg/kg),每组10只;采用X射线局部分割照射小鼠右胸腔,8 Gy/d照射,连续3 d,累积照射剂量为24 Gy,剂量率为0.883 Gy/min。照射后连续7 d给予照射给药组小鼠灌胃CMTD(100 mg·kg^-1·d^-1),对照组和单纯照射组给予生理盐水。照射后第7天检测小鼠体重、脏器指数、脾脏T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群、NK细胞亚群变化以及脾脏组织病理学改变。结果分割照射对小鼠体重影响不大,但可诱发远端效应,使脾脏脏器指数降低为(0.369±0.011),与对照组的(0.396±0.022)比较,差异有统计学意义(t=2.978,P<0.05);改变脾脏病理结构,脾脏CD3+、CD4+、CD8+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞比例显著降低(t=5.754、3.570、4.442、5.281、4.570,P<0.05)。而照射给药组小鼠体重恢复明显,脾脏组织损伤缓解,脾脏淋巴细胞亚群比例恢复,CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+淋巴细胞显著升高(t=3.523、2.706、2.520,P<0.05),但仍低于正常水平。结论CMTD可有效改善X射线分割照射对小鼠脾脏的损伤,提高照后小鼠的免疫功能,可作为潜在的抗辐射治疗药物。     

辐射损伤后小鼠T细胞功能亚群及其IL-4和IFN-γ的变化

目的 观察不同剂量辐射损伤后小鼠T细胞功能亚群、细胞因子IL-4和IFN-γ的变化。方法 C57BL/6j小鼠分为假照射组和辐射损伤模型组。采用⁶⁰Coγ线照射诱导辐射损伤模型。吸收剂量分别为0.7、1.4、2.8及5.6 Gy。应用细胞表面标志和细胞内因子标记结合流式细胞仪分析急性照射损伤和损伤恢复期小鼠脾CD3+、CD4+、CD8+T细胞功能亚群,以及细胞因子IL-4和IFN-γ的变化。结果 1 辐射损伤后CD3+、 CD4+及 CD8+有明显的减低,其改变幅度与受照剂量有关。2 照射后1 d, IFN-γ降低幅度明显高于IL-4,受照剂量大于2.8 Gy组,IL-4/IFN-γ比值较空白对照组明显升高。3 辐射对淋巴细胞功能亚群、细胞因子IL-4和IFN-γ的损伤在照射后25 d有不同程度的恢复,但与假照射组比较仍有明显差别。 结论 电离辐射可使淋巴细胞亚群CD3+,CD4+,CD8+、 CD4+/CD8+、细胞因子IL-4和IFN-γ发生改变,并诱发受照小鼠免疫功能低下,特别是使细胞因子IL-4和IFN-γ发生失衡,再次证实辐射损伤后小鼠脾Th1/Th2模式向Th2免疫反应漂移的现象。     

分割照射对肝癌移植瘤小鼠脾脏免疫细胞的影响

目的探讨肝癌皮下移植瘤小鼠的分割照射对远端脾脏组织的影响。方法构建荷瘤C57BL/6 J小鼠模型,取对数期生长的小鼠肝癌细胞Hepa 1-6接种于小鼠右侧皮下(1×10^7/只),荷瘤小鼠按随机数表法分为荷瘤对照组和照射组,每组20只。另设10只健康小鼠作为健康对照组。照射组皮下肿瘤给予8 Gy×3次X射线局部照射,剂量率为0.883 Gy/min。照射后第7、14天检测小鼠肿瘤脏器指数、脾脏脏器指数、脾脏病理学改变,以及脾脏T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞亚群、NK细胞的变化。结果与荷瘤对照组相比,照后7、14 d,照射组小鼠肿瘤脏器指数显著降低(t=4.649、26.34,P<0.05),脾脏中NK细胞显著升高(t=3.952、3.633,P<0.05),CD3+、CD4+、CD3+CD4+淋巴细胞以及CD4+/CD8+比值在照后7 d显著降低(t=3.193、3.656、3.219、2.641,P<0.05),CD3+淋巴细胞在照后14 d显著降低(t=3.031,P<0.05),其余指标脾脏脏器指数、B淋巴细胞、CD3+CD4+淋巴细胞、CD8+淋巴细胞变化不显著。结论肿瘤局部照射可引起远隔器官内淋巴细胞比例失衡,导致机体免疫力下降,为放疗免疫损伤提供了新的诠释。     

严重烧伤后调节性T细胞免疫活性变化及其与患者预后的关系

目的 探讨严重烧伤后患者外周血调节性T细胞(Treg)免疫活性的变化规律,并探讨其在MODS和患者不良预后中的临床意义. 方法对106例烧伤总面积(TBSA)≥30%的患者进行动态观察.试验分组:(1)按烧伤面积将患者分为三组:Ⅰ组41例(TBSA 30%～49%),Ⅱ组34例(TBSA 50%～69%),Ⅲ组31例(TBSA 70%～99%);(2)根据MODS诊断标准,将患者进一步分为MODS组(21例)和非MODS组(85例);(3)根据MODS患者的预后情况,将其分为死亡组(16例)和生存组(5例);同时设正常对照组.分别于伤后1,3,7,14,21 d采集患者外周静脉血,采用免疫磁性分离系统对外周血CD4+CD25+Treg进行分离纯化,采用流式细胞术检测Treg表面分子T淋巴细胞毒性相关抗原4(CTLA-4)的表达情况,ELISA法检测Treg孵育液上清中IL-10的分泌水平. 结果 (1)与正常对照组比较,严重烧伤患者各烧伤面积组CD4+CD25+Treg表面分子CTLA-4表达水平及IL-10分泌水平均明显增强(P＜0.01),烧伤患者各组间差异有统计学意义(P＜0.05或＜0.01);(2)严重烧伤患者伤后不同时相点CTLA-4阳性表达水平及IL-10分泌水平均明显升高,MODS组CTLA-4阳性表达率及IL-10分泌水平在伤后3～21 d显著高于非MODS组(P＜0.01);(3)MODS患者死亡组CTLA-4阳性表达率及IL-10分泌水平在伤后3～21 d均显著高于生存组(P＜0.05或＜0.01). 结论严重烧伤后CD4+CD25+Treg表面分子表达及细胞因子分泌在不同烧伤面积、是否并发MODS及是否生存等不同组间存在显著差异,CD4+CD25+Treg可通过分泌抑制性细胞因子参与严重烧伤后机体免疫失衡、诱发多脏器功能障碍发生甚至最终造成患者死亡的病理过程.     

大剂量γ射线照射对小鼠免疫系统损伤远期影响的研究

目的 探讨亚致死剂量6Gyγ射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对脂多糖刺激反应性的远期影响.方法 将实验小鼠分为假照射组和照射组,假照射组不接受照射,照射组给予6 Gyγ射线照射.照射后10周,分别将假照射组和照射组小鼠按组别腹腔注射脂多糖(20 mg/kg),对照组注射等量的生理盐水.分别于24 h和1 h后取材,进行外周血白细胞计数及CD4、CD8、B220细胞比例检测.取脾脏和胸腺称重,计算脏器指数.冲洗单侧股骨进行有核细胞计数.结果 与假照射刘照组小鼠相比,照射对照组小鼠的CD4细胞比例显著升高(t=2.940,P＜0.05),CD8和B220细胞比例显著下降(t=6.485和4.351,P均＜0.01).照射+脂多糖1h组小鼠的CD4 (t=2.510,P＜0.05)、CD8(t=2.862,P＜0.05)和B220(t=7.074,P＜0.01)细胞比例较假照射+脂多糖1h组小鼠显著降低,差异有统计学意义.与假照射+脂多糖24 h组小鼠相比,照射+脂多糖24 h组小鼠单侧股骨有核细胞计数显著升高,差异有统计学意义(t=2.078,P＜0.05).结论 6 Gyγ射线一次性全身照射后10周,小鼠免疫系统尚未完全恢复;与假照射组相比,在接受脂多糖刺激后照射组小鼠胸腺指数和外周血中CD8和B220细胞比例未见显著变化.辐射对小鼠免疫系统损伤的远期影响有待进一步研究.     

CD4+CD25+CD127-调节性T细胞在Graves病中的变化及临床意义

目的 通过观察Graves病患者外周血中CD4+CD25+CD127-调节性T细胞(Treg)数量的变化,探讨Graves病发生的免疫学机制.方法 采用流式细胞术检测90例Graves病患者和50名正常人外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的比例,同时测定甲状腺功能指标及甲状腺自身抗体水平.采用t检验进行组间比较,采用线性相关分析法分析CD4+CD25+CD127-Treg与甲状腺功能指标的关系.结果 90例Graves病患者与50名正常人外周血中CD4+CD25+CD127-Treg的比例分别为1.39％±1.09％和4.59％±1.14％,两者间差异有统计学意义(t=16.4,P＜0.01).CD4+CD25+CD127-Treg数量与促甲状腺激素受体抗体水平呈负相关(r=-0.24,P＜0.05),与总三碘甲状腺原氨酸、总甲状腺素、游离三碘甲状腺原氨酸、游离甲状腺素、甲状腺球蛋白抗体、甲状腺微粒体抗体水平呈负相关(r=-0.62、-0.65、-0.56、-0.71、-0.50、-0.15,P均＜0.01).结论 Graves病患者CD4+CD25+CD127-Treg 数量减少,且CD4+CD25+CD127-Treg数量与甲状腺功能指标及甲状腺自身抗体水平关系密切,提示CD4+CD25+CD127-Treg数量减少可能与Graves病的发病有关.CD4+CD25+CD127-可能是人CD4+T 细胞中Treg的特异性标志物.     

白藜芦醇对辐射诱导调节T细胞紊乱的调节作用

目的观察电离辐射及白藜芦醇对调节T细胞的影响,探讨其对细胞因子TGF-β及IFN-γ的影响,阐明白藜芦醇对辐射诱导免疫抑制的改善作用。方法将24只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、照射组和照射给药组,每组8只。照射组和照射给药组接受137Cs源γ射线全身照射(6.0 Gy),对照组小鼠接受伪照射。照射前7 d及照射后28 d,每日予白藜芦醇(20 mg/kg)灌胃。末次给药后1 d,检测各组小鼠外周血CD4+CD25+细胞数量,CD4+CD25+细胞内Fox P3表达水平,脾淋巴细胞TGF-β分泌水平,以及CD8+细胞及脾淋巴细胞TNF-γ表达水平。采用单因素方差分析对3组间的细胞比例及细胞因子表达水平进行比较,组间多重比较采用LSD-t检验。结果与正常小鼠比较,电离辐射可以增高CD4+CD25+细胞在外周血单核细胞和CD4+中的比例125.0%和57.2%,增高脾细胞TGF-β水平31.4%,降低脾细胞IFN-γ表达水平26.9%,组间差异均具有统计学意义(均P0.05);白藜芦醇干预可以降低单纯照射组小鼠调节T细胞在外周血单核细胞和CD4+中的比例32.3%和27.8%,降低CD4+CD25+细胞的Fox P3阳性比例26.6%,以及脾淋巴细胞TGF-β水平62.9%,增加CD8+T细胞及脾淋巴细胞生成的IFN-γ水平133.0%和87.4%,组间差异均具有统计学意义(均P0.05)。结论白藜芦醇可以抑制调节T细胞,改善受照小鼠的免疫功能。     

γ射线照射后小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其意义

目的 观察γ射线照射对小鼠CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)亚群的影响,探讨辐射诱发的免疫损伤作用机制.方法 C57BL/6小鼠经6 Gy γ射线照射后1～28 d取胸腺、脾脏称重并计算脏器系数,测量外周血WBC总数,流式细胞仪检测外周血和脾脏CD4+T细胞、Tregs细胞亚群的变化.结果 照射后1 d,胸腺和脾脏系数即明显下降,7 d降至最低,至照后28 d仍未恢复到对照组水平.WBC于照后1～7 d持续降至最低,14 d开始恢复,至28 d仍显著低于对照组.外周血CD4+T细胞在照后1 d-过性降低后逐渐增高,照后28 d基本接近对照水平;脾脏CD4+T细胞在照后7 d虽略有降低,但在14和28 d基本维持在对照水平.外周血Tregs细胞在照后1 d即开始升高,7 d达峰值,14和28 d仍明显高于对照组;脾脏Tregs于照后1 d即显著增至最高,而后缓慢降低,至照后28 d出现有统计学意义的降低(t=2.731,P＜0.05).结论 小鼠经6 Gy γ射线全身照射后胸腺和脾脏免疫组织严重受损,免疫细胞数量减少;而具有免疫抑制作用的Tregs细胞比例照后明显增高,揭示该亚群与辐射所致的小鼠免疫功能受抑和免疫调节失衡密切相关.

Abstract：

Objective To observe the effect of γ-ray irradiation on CD4 + CD25 + regulatory T cells (Tregs),and to investigate the mechanism of immune injury induced by irradiation.Methods The thymus and spleen of C57BL/6 mice were taken and weighted 1-28 d after γ-ray irradiation,and the organ coefficients were calculated.The amount of mouse peripheral WBC measured,CD4 + T cells and Tregs in peripheral and splenic were analyzed by flow cytometry.Results Coefficients of mouse thymus and spleen decreased significantly 1 d post irradiation,and reached to the bottom at 7 d.Coefficients did not recover to control level 28 d after radiation.Peripheral WBC continuously decreased and reached the bottom at 7 d,and did not recover to control level up to 28 d postirradiation.Peripheral CD4 + T lymphocyte temporally reduced at 1 d,while it increased at 7 d,and it approached to control level at 28 d after radiation.Splenic CD4 + T cells slightly reduced at 7 d however,they basically maintained as the same level as control 14 d and 28 d after radiation.Peripheral Tregs ascended at 1 d and reached the peak at 7 d,and reduced at 14 d and 28 d postirradiation,although they still were significantly higher than those of control group.At the same time,splenic Tregs increased significantly and achieved peak value at 1 d,and then gradually decreased and reached the minimum at 28 d after irradiation,which were significantly lower than those of control group( t =2.731,P ＜ 0.05).Conclusions Mouse thymus and spleen were injured severely,and the number of immunocytes decreased after 6 Gy whole body γ-ray irradiation.However,Tregs with immunosuppressive action increased significantly postirradiation,revealing that Tregs were closely correlated with immune function depression and immunomodulation imbalance induced by ionizing radiation.     

乳铁蛋白通过调节HMGB1/TLR4炎症反应改善放射性肺损伤

目的研究乳铁蛋白对放射性肺损伤的防护作用。方法将15只C57BL/6 J小鼠按随机数表法分为健康对照组、15 Gy照射组(单纯照射组)和乳铁蛋白联合15 Gy照射组(联合组),每组5只。联合组全程饮用10 mg/ml乳铁蛋白水溶液,3 d后单纯照射组和联合组给予单次15 Gy X射线全胸照射。于照后14 d处死,苏木素-伊红(HE)染色观察肺病理组织学改变、酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清炎症因子高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)及IL-6的水平,免疫组织化学染色和Western blot法检测肺组织中HMGB1、Toll样受体4(TLR4)、MyD88及核转录因子κB(NF-κB)炎症因子蛋白表达。结果与健康对照组比较,单纯照射组小鼠肺重明显增加(t=3.20,P<0.05)、肺充血水肿并伴有炎性细胞浸润,血清促炎因子TNF-α健康对照组为(291.80±5.49)pg/ml,单纯照射组为(332.25±22.18)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(t=3.07,P<0.05);免疫组织化学染色显示HMGB1和NF-κB阳性明显增多。肺组织中HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白的表达明显增加,差异有统计学意义(t=4.04、4.78、3.77、6.14,P<0.05);与单纯照射组相比,乳铁蛋白干预能显著降低受照小鼠肺重(t=2.18,P<0.05)、HMGB1、TNF-α和IL-1β水平(t=4.67、2.97、3.49,P<0.05)。联合组肺组织中HMGB1和NF-κB表达阳性细胞数减少,并下调HMGB1、TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平,差异有统计学意义(t=8.06、9.80、3.07、5.56,P<0.05)。结论乳铁蛋白能够减轻放射性肺损伤,其机制可能与下调炎症相关的HMGB1/TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。     

富天冬酰胺蛋白增强拟南芥辐射抗性的研究

目的 研究富天冬酰胺蛋白（NRP）对拟南芥辐射抗性的影响。 方法 选取野生型(WT)、NRP过表达型(Pro35S:NRP-GFP)、NRP突变型(nrp) 3种拟南芥种子,分别分为照射组（120 Gy γ射线照射）和对照组（不照射）。（1）3种基因型拟南芥种子培养至第3天进行照射,照射后继续培养至第7天,统计各组根长。（2）3种基因型拟南芥种子于MS培养基中培养至第7天进行照射,照射后分别移栽至基质土中继续培养至第30天,观察各组植株的生长和形态。（3）WT拟南芥种子培养至第7天进行照射,照射后继续培养24 h,采用实时定量PCR分析WT植株中NRP和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶2（PARP2）2种基因在照射前后的相对表达量的变化。（4）Pro35S:NRP-GFP拟南芥种子培养至第7天进行照射,分别于照射后不同时间取幼苗进行荧光共聚焦显微观察。组间比较采用独立样本t检验。 结果 （1）辐射导致WT和nrp幼苗的根长缩短,分别为（2.73±0.43） cm和（1.31±0.53） cm,与对照组[（4.56±0.41） cm和（2.89±0.60） cm]相比,差异均有统计学意义（t=9.212、6.490,均P=0.000）;而Pro35S:NRP-GFP幼苗的根长在照射前后无明显差异[（3.01±0.34） cm vs.（2.96±0.34） cm,t=0.253,P=0.801]。（2）辐射导致WT和nrp幼苗植株的发育不良、生长受限,其中株高和莲座叶直径分别与对照组相比,差异均有统计学意义（t=6.361~12.250,均P=0.000）,而Pro35S:NRP-GFP幼苗植株则维持正常形态。（3）辐射导致WT植株中NRP和PARP2的相对表达量均升高,与对照组相比,差异有统计学意义（t=4.447、7.776,P=0.002、0.000）。（4）Pro35S:NRP-GFP幼苗在照射后各时间点均出现NRP入核现象。 结论 NRP可能对拟南芥辐射抗性的发挥起到重要作用,可作为植物辐射抗性靶点进行深入研究。     

粒细胞集落刺激因子对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞亚群及其近期输出功能的影响

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠胸腺细胞亚群重建及近期输出功能的影响。方法 雌性BALB/c小鼠50只给于6 Gy ⁶⁰Co 1次性全身照射后随机均分为GCSF组和对照组。GCSF组小鼠给予重组人G-CSF 100 μg·kg^-1·d^-1皮下注射,连续14 d,对照组小鼠给予等体积磷酸盐缓冲液(PBS)皮下注射,连续14 d。照后7、14、21 和28 d颈部脱臼处死小鼠,取出胸腺制成单个核细胞悬液,使用流式细胞仪检测胸腺双阴性细胞发育4阶段(DN1~4)细胞比例的变化,以及CD4 +CD8 +、CD4 +CD8-、CD4-CD8 +细胞亚群的比例。使用荧光定量PCR的方法检测照后30 和60 d 10⁵个胸腺细胞中T细胞受体重排删除环(sjTREC)拷贝数,判断胸腺输出功能。结果 照后7 d,胸腺DN细胞大量增殖,DN1细胞比例下降,DN4细胞比例增高,GCSF组DN1细胞比例在此时间点明显高于对照组(t=9.59,P＜0.05)。照后21 d GCSF组DN3、 DN4细胞比例均分别高于对照组(t=16.37、 7.6, P＜0.05)。照后7 d CD4 +CD8 +细胞比例降至最低,14 d出现反弹,21 d再次下降,以后逐渐恢复,照后28 d GCSF组CD4 +CD8 +细胞比例恢复正常并明显高于对照组 (t=12.22, P<0.05)。G-CSF对胸腺CD4 +CD8-细胞比例影响不大。照后21 d GCSF组CD4-CD8 +细胞比例明显高于对照组(t=3.77, P<0.05)。荧光定量PCR结果提示照后30 d GCSF组胸腺细胞sjTREC拷贝数明显高于对照组(t=5.95,P＜0.01),但照后60 d 两组胸腺细胞sjTREC拷贝数差异无统计学意义。结论 G-CSF可促进急性辐射损伤小鼠胸腺双阴性及双阳性细胞的增殖、分化,提高胸腺输出功能,加快中枢免疫重建。     

内毒素作用下淋巴细胞中CD4＋CD25＋调节性T细胞变化及连翘对其的影响

目的探讨不同时间点内毒素（LPS）对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋regulatory T cell,Treg）的影响及连翘（forsythia suspensa,FS）干预后CD4＋CD25＋调节性T细胞的变化。方法体外培养Wistar大鼠脾脏淋巴细胞,分为对照组、LPS（10ng/ml）组、LPS（10ng/ml）＋多黏菌素B组（10ng/ml）、LPS（10ng/ml）＋连翘（12．5、25、50mg／ml）组,分别于3、6、12h收集标本．流式细胞术检测CD4＋CD25＋调节性T细胞在淋巴细胞中的百分比,荧光定量RT—PCR法检测Foxp3mRNA表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测TNF—a、IL-10分泌水平。结果脾脏淋巴细胞中CD4＋CD25＋Treg的百分比和Foxp3mRNA的表达在12h较3、6h明显升高（P〈0．01）;TNF—a、IL-10的分泌随时间点的延长均显著升高（P〈0．01）;随连翘剂量增加,TNF-a、IL-10分泌水平,Foxp3mRNA表达和CD4＋CD25＋Treg百分比均明显降低（P〈0．05）。结论内毒素参与并诱导了CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的变化,其随内毒素作用时间延长呈上升趋势。连翘能显著降低CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的百分比。     

Effects of IL-4 on pulmonary fibrosis and the accumulation and phenotype of macrophage subpopulations following thoracic irradiation

Purpose: Thoracic irradiation injures lung parenchyma, triggering inflammation and immune cell activation, leading to pneumonitis and fibrosis. Macrophage polarization contributes to these processes. Since IL-4 promotes pro-fibrotic macrophage activation, its role in radiation-induced lung injury was investigated.

Materials and methods: Lung macrophage subpopulations were characterized from 3–26 weeks following exposure of WT and IL-4?/? mice to 0 or 12.5 Gray single dose thoracic irradiation.

Results: Loss of IL-4 did not prevent fibrosis, but blunted macrophage accumulation within the parenchyma. At 3 weeks following exposure, cell numbers and expression of F4/80 and CD206, an alternative activation marker, decreased in alveolar macrophages but increased in infiltrating macrophages in WT mice. Loss of IL-4 impaired recovery of these markers in alveolar macrophages and blunted expansion of these populations in infiltrating macrophages. CD206+ cells were evident in fibrotic regions of WT mice only, however Arg-1+ cells increased in fibrotic regions in IL-4?/? mice only. Radiation-induced proinflammatory Ly6C expression was more apparent in alveolar and interstitial macrophages from IL-4?/? mice.

Conclusions: IL-4 loss did not prevent alternative macrophage activation and fibrosis in irradiated mice. Instead, a role is indicated for IL-4 in maintenance of macrophage populations in the lung following high single dose thoracic irradiation.     

粒细胞集落刺激因子对急性辐射损伤小鼠中枢及外周血淋巴细胞亚群重建的影响

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性辐射损伤小鼠中枢及外周血淋巴细胞亚群重建的影响.方法 雌性BALB/c小鼠60只经6 Gy照射后随机分为照射组、G-CSF+照射组.G-CSF+照射组小鼠给与重组人G-CSF 100μg·kg-1·d-1皮下注射,连续14 d,照射组小鼠给与等体积磷酸盐缓冲液(PBS)皮下注射,连续14 d,另设空白对照组小鼠20只.照后7、14、21和28d颈部脱臼处死小鼠,取出胸腺制成单个核细胞悬液,使用流式细胞仪检测胸腺CD4+CD8+、CD4+CD8-、CD4-CD8+、CD4-CD8-细胞亚群的比例.使用全血细胞计数仪进行外周血白细胞计数及淋巴细胞绝对值测定,流式细胞仪检测照后14、28、60 d外周血淋巴细胞亚群比例,CCK-8法检测脂多糖(LPS)、刀豆蛋白A(ConA)刺激后脾脏淋巴细胞增殖指数.结果 照后7 d胸腺CD4+CD8+细胞比例降至最低,14 d出现反弹,21 d再次下降,以后逐渐恢复.照后28 d G-CSF+照射组CD4+CD8+细胞比例恢复正常并高于照射组(t=12.22,P＜0.05).照后21 d G-CSF+照射组CD4-CD8+细胞比例亦明显高于照射组(t=3.77,P＜0.05).照后7 d外周血白细胞及淋巴细胞绝对值降至最低,照后14和60 d,G-CSF+照射组CD3+CD8+T细胞比例明显高于照射组(t=4.31,5.78,P＜0.05),但两组间CD3+CD4+T细胞比例在各时间点无明显差异.G-CSF+照射组B淋巴细胞比例在照后14 d明显低于照射组(t=7.3,P＜0.05),但很快恢复,照后28和60 d两组B淋巴细胞比例差异无统计学意义.照后14 d,G-CSF+照射组脾脏淋巴细胞对LPS、ConA刺激的增殖指数分别为照射组的4.37和2.98倍.结论 G-CSF可促进照后胸腺细胞亚群的恢复,提高外周血淋巴细胞数量,调节外周血淋巴细胞亚群比例,提高淋巴细胞增殖功能,促进急性辐射损伤后中枢及外周免疫重建.

Abstract：

Objective To investigate the effects of recombinant human granulocyte colonystimulating factor(G-CSF) on central and peripheral lymphocyte subset reconstitution after a sublethal dose of irradiation. Methods Sixty female BALB/c mice were given a 6.0 Gy γ-ray total body irradiation (TBI) and randomly divided into 2 equal groups. The mice in G-CSF + TBI group were injected subcutaneously with recombinant human G-CSF 100 μg·kg-1·d-1 for 14 d and the mice in TBI group were injected subcutaneously with the same volume of phosphate buffered solution (PBS) once daily for 14 d. 7,14,21, and 28 d later the mice were killed and their thymus were taken out to prepare of the mononuclear cell suspension to analysis the percentage of thymic CD4 + CD8 + double positive, CD4 +CD8 - single positive, CD4 - CD8 + single positive and CD4 - CD8 - double negtive cells by flow cytometry. Peripheral blood samples were collected from the caudal vein twice a week, and the white blood cell(WBC) counts and absolute number of lymphocytes were assessed by automatic hemocyte analyzer. 14,28, and 60 d later blood samples were collected from angular vein to examine the peripheral lymphocyte subsets by flow cytometry. Cell counting kit-8 was used to detect lipopolysaccharide (LPS) or concanavalin A (ConA) stimulated splenic lymphocyte proliferation. Results The percentage of thymic CD4 + CD8 +double positive cells decreased 7 d after irradiation, rebounded at 14 d, decreased again at 21 d, and then got a permanent recovery. 28 d after irradiation the percentage of thymic CD4 + CD8 + double positive cells in the G-CSF + TBI group recovered to normal and was significantly higher than that of the TBI group (t =12. 22, P < 0. 05). 21d after irradiation the percentage of thymic CD4-CD8 + single positive cells of the G-CSF + TBI group was significantly higher than that of the TBI group (t = 3.77, P < 0. 05). The peripheral WBCs and lymphocytes decreased to the lowest levels 7 d after irradiation and then gradually increased, however, WBCs and lymphoeytes of the G-CSF + TBI group began to recover earlier and faster than the TBI group. The proportion of CD3 + CD8 + T cells of the G-CSF + TBI group was significantly higher than that of the TBI group 14 and 60 d after irradiation (t =4. 31,5.78, P <0.05). But there was no significant difference in the proportion of CD3 + CD4 + T cells between the two groups. The proportion of B lymphoeytes of the G-CSF + TBI group was significantly lower than that of the TBI group 14 d after irradiation(t =7.30, P <0.05), but it recovered quickly, and there were no significant differences in the proportion of B lymphoeytes between the two groups 28 and 60 d after irradiation. The proliferation indexes of splenic lymphocytes in response to LPS and ConA in the G-CSF + TBI group were 4. 37 and 2.98 times higher than those in the TBI group 14 d after irradiation. Conclusions G-CSF could accelerate the recovery of central and peripheral lymphocyte subsets, raise the absolute number of lymphocytes, and enhance their proliferative function, which contributes to the central and peripheral immune reconstitution after acute irradiation.     

腹腔镜微创手术与开腹手术对结直肠癌患者免疫功能、应激反应及疗效的影响

目的对比研究腹腔镜微创手术与开腹手术对结直肠癌患者免疫功能、应激反应及疗效的影响。方法选取2015年5月至2019年5月周口市中医院普外科收治的43例结直肠癌患者作为研究对象,并按照随机数表法将其随机分为研究组(22例)与对照组(21例),其中研究组患者采用腹腔镜微创手术予以治疗,对照组患者采用开腹手术予以治疗,对比观察两组患者的临床疗效以及手术前后CD3^+、CD4^+、CD8^+等免疫功能相关指标水平,白细胞介素-6(IL-6)、C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等炎症因子水平与卡氏功能状态(karnofsky performance status,KPS)评分。结果研究组患者手术时间明显长于对照组(t'=4.431,P=0.000),术中出血量明显少于对照组(t'=10.323,P=0.000),肠蠕动恢复时间及住院时间明显短于对照组(t/t'=7.129、6.220,P均=0.000);术后3、7 d,两组患者CD3^+、CD4^+水平均呈先降低后升高的趋势,且研究组患者CD3^+、CD4^+水平均明显高于对照组(3 d:t/t'=2.251、4.795,P=0.031、0.000;7d:t=2.353、3.100,P=0.023、0.003),而CD8^+水平呈先升高后降低的趋势,且研究组患者CD8^+水平明显低于对照组(3d:t=2.068,P=0.045;7 d:t=2.714,P=0.010);术后3、7 d,两组患者IL-6、CRP与TNF-α水平均呈先升高后降低的趋势,且研究组患者IL-6、CRP与TNF-α水平均明显低于对照组(3 d:t/t'=3.430、2.188、3.670,P=0.002、0.034、0.001;7 d:t/t'=2.529、2.971、2.127,P=0.016、0.006、0.041);术后2周,研究组患者KPS评分明显高于对照组(t=3.361,P=0.002)。结论腹腔镜微创手术治疗结直肠癌可有效缩短患者的术后恢复时间,减轻机体应激反应,提高患者免疫功能及生存质量,疗效显著,临床应用价值较高。