2009甲型H1N1亚型流感病毒抗原性及遗传特性研究

当人群体缺乏对某种流感病毒的免疫力或免疫力低下,而该病毒在人群中存在且能在人与人之间有效传播时,极易引起全球流感大暴发.历史上引起3次流感大暴发的流感病毒(1918年H1N1、1957年H2N2和1968年H3N2)(H或HA:hemagglutinin,血凝素;N或NA:neuraminidase,神经氨酸酶)全部或部分基因组均来源于动物流感病毒,特别是病毒HA基因最终均可追溯到禽流感病毒.     

甲型H1N1流感的病原学及其治疗药物

目的介绍甲型H1N1流感[Influenza A（H1N1）]的病原学特征及其治疗药物,为甲型H1N1流感的临床治疗提供依据。方法收集专业书刊和网站资料,介绍卫生部制定的甲型H1N1流感诊疗方案,综合分析抗甲型H1N1流感病毒药物。结果此次疫情是由变异后的甲型H1N1流感病毒[Influenza virus A（H1N1）]引起,该毒株是猪流感、禽流感和人流感3种病毒的基因重组;只要及时服用抗流感病毒药物达菲（Tamiflu）,患者可以基本治愈。结论甲型H1N1流感远没有非典和禽流感那么可怕,我们即有防控非典的经验,又有疗效确切的抗病毒药,所以甲型H1N1流感是可防、可控、可治的。     

大流行甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染实验研究

目的对甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染特征进行观察。方法经过体外鸡胚/MDCK细胞传代和筛选,获得1株甲型H1N1流感病毒变异株（vCA07）;使用不同剂量流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠后,计算半数致死量和半数感染量,观察小鼠感染后的体质量变化、肺部病毒增殖、肺部组织病理变化等。结果与野生型毒株相比,甲型H1N1流感病毒变异株对BALB/c小鼠的致病性显著提高,其可在小鼠肺组织中高效增殖,并导致显著的病理损伤。结论甲型H1N1流感病毒变异株感染特征得以明确,为进一步建立高致病性甲型H1N1流感病毒的小鼠感染模型以及大流行甲型H1N1流感病毒致病机制的研究奠定了基础。     

新甲型H1N1流感病毒分子生物学研究进展

甲型流感是由甲型流感病毒引起,可致人或其他动物宿主发生不同程度呼吸道症状的疾病。2009年3月新甲型H1N1流感突然在墨西哥暴发,由于疫情迅速扩散,世界卫生组织（WHO）于2009～06—11将流感流行级别调整为最高级六级,即宣布新甲型H1N1流感发生全球流行。现病毒已传播至212个国家和地区,并处于继续扩散的状态,由于感染人数巨大,目前世卫组织已无法统计罹患人数,仅统计报告确诊死亡人数（至2010—02—19死亡15921人）。     

人类流感病毒多重PCR分型方法的建立

目的建立一种可以同时检测人类A型流感病毒,B型流感病毒及A型流感病毒H1,H3,H5亚型的多重RT-PCR方法。方法根据人类流感病毒的特异性基因设计并合成多对特异性引物,建立可同时扩增出人类流感病毒亚型特异性片段的多重PCR的方法。同时,对该方法的特异性和敏感性进行了评价,并利用该方法对39份疑似swineH1N1的临床标本进行检测。结果该方法可同时扩增出A型流感病毒M基因203bp,B型流感病毒M基因296bp,A型流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为362bp（H1）,112bp（H3）,188bp（H5）,494bp（swineH1）。该实验最低可检测新甲型H1N1（A/Beijing/501/2009）病毒RNA0.5TCID50。该方法的特异性实验结果显示,在多重PCR检测中未检出非特异扩增的PCR产物。同时,使用该方法从39份疑似新甲型H1N1的临床咽拭子标本中检测出新甲型H1N1阳性的标本4份（10.2%）,季节性H1N1亚型2份（5.1%）,H3N2亚型12份30.7%,本次实验结果与WHO通过实时PCR方法检测的结果一致。结论本研究建立的多重PT-PCR方法快速、敏感,特异性强,可用于人类流感病毒的分型检测。     

甲型H1N1流感病毒抗原表位区段的克隆和表达

据统计,全世界每年流感流行都会造成10％～20％的人感染流感病毒,给整个社会带来极大的经济负担。2009年4月在墨西哥、美国暴发的甲型H1N1流感,其病毒是一种与猪流感病毒高度同源的新型变异毒株,它包含禽流感、猪流感和人流感3种流感病毒的基因片段,同时拥有亚洲猪流感病毒和非洲猪流感病毒的特征,是一种“杂交型”流感病毒。与传统的猪流感病毒不同,该病毒能在人和人之间快速传播。到目前为止,全球40多个国家均发现有甲型H1N1流感病毒感染的存在,国内外高度关注该病毒诊断试剂和疫苗的研制。     

禽流感病毒的传播、致病机制及其防治

高致病性禽流感病毒(H5N1)可导致严重的致死性疾病,已给全球禽类养殖及相关产业造成了巨大损失,并对人类健康造成了极大威胁.近30年来,H5N1病毒已在东南亚、中国、欧洲和非洲等地呈区域性流行.尽管目前还未发生人际传播,但该病毒一旦与人流感病毒重组,将会转变为町人问传播的高致死性流感病毒,从而导致新的流感大流行.直接接触感染禽流感病毒的禽类或其含病毒的排泄物是人类感染禽流感病毒的主要途径.禽流感病毒经过不断变异后有可能突破种属屏障而传播给哺乳动物及人类,从而进一步在病毒和宿主的多种因素作用下导致宿主发病乃至死亡.目前,疫苗接种仍是预防人禽流感的有效手段,同时神经氨酸酶抑制剂等抗病毒药物在禽流感的治疗中也发挥着重要作用.     

普通病房甲型H1N1流感的防控措施

2009年流行的新型A（H1N1）型病毒与人类流感病毒H1N1的抗原性有明显不同,故人类对其缺乏免疫力,人群普遍易感。病例大多为青壮年,年幼和年老人群未受到严重影响。新型A（HIN1）病毒主要通过呼吸道传播,有气溶胶和飞沫2种形式。潜伏期1～7d,症状出现前1d到症状出现后7d的病人为该病的传染源。在人际传播时,     

高原地区重、危重症甲型H1N1流感胸部影像表现动态变化特点

<正> 甲型H1N1流感是甲型(A型)流感病毒引起的一种急性、人畜共患呼吸道传染性疾病。2009年3月中旬,发生在墨西哥、美国的甲型H1N1流感,原称人感染猪流感疫情,世界卫生组织指出,墨西哥和美国感染的病例属于H1N1亚型猪流感病毒的一个相同毒株。该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片断,是一种新型流感病毒,可以人传染人。新型的甲型H1N1流感和现     

高原地区重、危重症甲型HIN1流感胸部影像表现动态变化特点

甲型H1N1流感是甲型（A型）流感病毒引起的一种急性、人畜共患呼吸道传染性疾病。2009年3月中旬,发生在墨西哥、美国的甲型H1N1流感,原称人感染猪流感疫情,世界卫生组织指出,墨西哥和美国感染的病例属于H1N1亚型猪流感病毒的一个相同毒株。该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片断,是一种新型流感病毒,可以人传染人[1]。     

一株新型甲型H1N1流感病毒H275Y的奥司他韦耐药变异分析

目的 探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶(NA)基因的进化规律,分析NA蛋白酶活性位点以及糖基化位点变化情况.方法 从NCBI检索获得110株不同年代、不同地域甲型流感病毒NA基因序列,用MEGA 4.0软件进行基因进化分析,并用NJ法构建进化树;对NA基因核苷酸序列同源性及编码蛋白氨基酸序列进行分析.结果 2009年新型甲型H1N1流感病毒世界各地不同毒株间的NA基因同源性极高,达到99.5%～100%,但与以往甲型H1N1人流感病毒的NA基因差异较大.2009年新型甲型H1N1流感病毒与欧洲A/swine/H1N1的NA基因同源性高,达到89.6%～92.9%,且糖基化位点分布一致,分别在50、58、63、68、88、146、235和386位存在糖基化现象.另外2009年新型甲型H1N1流感病毒与A/chicken/H5N1的NA基因同源性也较高,达到83.6%～85.3%.绝大部分2009年新型甲型H1N1流感病毒的NA蛋白酶活性中心及周围相关位点氨基酸组成保守,仍然表现为R118、D151、R152、R225、E277、R293、R368、Y402、E119、R156、W179、S180,D199、1223、E228、H275、E278、N295和FA25,但丹麦、日本、我国香港及湖南分离到的4株病毒出现H275Y突变.2009年新型甲型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧洲A/swine/H1N1流感病毒,并与A/chicken/H5N1病毒有较近的亲缘关系.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒并非由以往人H1N1流感病毒逐渐进化而来,而是一种新型重排病毒,我国湖南地区发现的一株新型甲型H1N1流感病毒具有H275Y奥司他韦耐药变异.     

2009年新型甲型H1N1流感病毒全基因组序列重组分析及同源性比对

目的 分析2009年新型甲型H1N1流感爆发以来流感病毒的全基因组进化变异及重组情况.方法 从NCBI基因数据库下载2009年新型甲型H1N1流感病毒(A/H1N1)代表性全基因组序列,先用MEGA4.0软件对8个基因序列片段进行比对和拼接;然后将历史上流行的H1N1、H5N1、H3N2等不同宿主(人、禽、猪)的流感病毒全基因组序列用MEGA做比对拼接,并用NJ法构建进化树.采用Simplot 3.5.1软件分析2009年新型甲型H1N1流感病毒基因重组情况.结果 自2009年3月爆发新型甲型H1N1流感以来,截至9月,病毒基因没有出现变异,同源性为99.69%～99.93%.基因重组分析显示,新型甲型H1N1病毒株PIE、PBI、PA、HA、NP和NS基因来源于近年来北美地区猪源人H1N1,同源性分别为95.25%,95.08%,95.21%,93.52%,95.23%,94.78%;NA和MP与欧洲地区猪H1N1同源性较高,分别为90.21%,94.43%.全基因序列同源性分析发现2009年新型甲型H1N1流感病毒与北美地区猪H1N1病毒同源性最高,为92.22%.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒是由2005年北美地区猪H1N1病毒与欧洲猪H1N1的NA和MP片段重排进化而成,新病毒暂未发生变异,H1N1新流感疫苗具有保护作用.     

2009年新型甲型H1N1流感病毒基质蛋白基因进化的新探讨

目的 探讨甲型H1N1流感病毒基质蛋白(M)基因的进化规律及M2蛋白的氨基酸替代情况.方法 从NCBI数据库下载甲型H1N1病毒M基因179条进行预分析,最终选取50条采用MEGA 4.0软件对其进行比对,采用NJ法构建进化树,同时采用MEGA 4.0软件对M2蛋白氨基酸序列进行比对.结果 不同地区新型甲型H1NI流感病毒M基因同源性高,达99.6%～100.0%,但与历史上流行的H1N1和H3N2流感病毒M基因差异较大,仅与1999-2002年间香港地区流行的H3N2亚型猪流感病毒同源性较近,为96.7%~97.7%.2009年流行的新型甲型H1N1流感病毒与历年来流行的H1N1人流感病毒相比,在第11、13、14、16、20、28、31、43、54、57、77、78、82、86、89、93位氨基酸位点发生了变异;与历年来流行的H1N1禽流感病毒相比,在第13、14、16、31、43、55、77、89位氨基酸位点发生了变异;与H1N1猪流感病毒相比,在第13、14、19、43、55位氨基酸位点发生了变异.2009年流行的甲型H1N1流感病毒与历年来流行的H3N2人流感病毒相比,在第11、13、16、20、28、31、43、54、57、77、78、82、86、89、93位氨基酸位点发生了变异;与历年来在欧亚大陆流行的猪流感病毒相比,所比较的19个位点均有部分毒株发生变异;而与1999-2002年间在香港流行的H3N2猪流感病毒相比,仅在第13、14、21、43位氨基酸位点发生变异.结论 此次新型甲型H1N1流感病毒M基因可能由香港地区流行的H3N2猪流感病毒重组而来.M2蛋白胞外编码区氨基酸位点发生变异,提示在疫苗研制方面应注意由此带来的影响.跨膜区的突变可能是导致此次新型甲型H1N1流感病毒对金刚烷胺类特异性抗病毒药物产生耐药性的原因,第43位氨基酸位点可能为引起此次耐药的主要位点.     

2009年新型甲型H1N1流感病毒的进化趋势及未来防控中应考虑的问题

2009年流行的新型甲型H1N1流感病毒的8个功能基因各自有一定的进化特点,其主要免疫原性基因--血凝素(HA)基因源于北美猪流感病毒.2005年在美国衣阿华(Iowa)州分离的感染人的猪H1N1的HA基因、病毒聚合酶(PB2、PBl和PA)基因、核蛋白基因(NP)和非结构基因(NS)与此次新型甲型HlNl病毒高度同源(同源性超过90%),可能是此次新型甲型H1N1病毒进化过程中的中间步骤.神经氨酸酶(NA)基因源于欧洲H1N1猪流感病毒,基质蛋白(M1和M2)基因来自欧洲H3N2亚型猪流感病毒,两段基因可能在猪体内与Iowa株发生重排而进化成此次新型甲型H1N1病毒.本文分析了新型甲型H1N1流感病毒可能的进化过程,并提出了未来防控工作中需要注意的几个科学问题.     

人禽流行性感冒肺炎的影像学表现

人禽流感（avian influenza）是人禽流行性感冒的简称，是由甲型流感病毒株的某些亚型引起的急性呼吸道传染病。通常情况下，禽流感病毒（avian influenzavirus，AIV）并不感染人类，但现已发现高致病性禽流感病毒的一些亚型可感染人类。禽流感病毒依据其外膜血凝素（hemagghtinin，H）和神经氨酸酶（neuraminidase，N）抗原性的不同，目前可分为15个H亚型（H1-H15）和9个N亚型（N1N9）。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化及变异特征分析

目的 了解自2009年3月新型甲型H1N1流感流行以来,其主要免疫原件基因-HA基因的进化及氨基酸变异特性.方法 从NCBI下载2009年新型甲型H1N1流感病毒以及北美地区、欧洲地区、亚洲地区以往流行的甲型H1N1流感病毒HA基因序列,利用MEGA 4.0软件对所选序列进行基因进化系统发育树分析;对2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因的核苷酸同源性及氨基酸特异性进行分析,并与北美地区、欧洲地区、亚洲地区分离株进行比较.结果 2009年新型甲型HlNl流感病毒HA基因与2006-2007年美国A/swine/H1N1流感病毒同源性最高,核苷酸序列差异为0%～0.8%;与美国各州1930-2007年分离的A/swine/H1N1流感病毒具有明显的时间上的进化关系;与欧洲及亚洲地区A/swine/H1N1流感病毒进化无关.其重要的抗原性位点与A/human/H1N1流感病毒及流感疫苗株存在较大差异.全球流行半年多以来该病毒株没有发生明显变异.结论 2009年新型甲型H1N1流感病毒HA基因是北美A/swine/H1N1流感病毒长期进化的结果,目前尚未发现明显抗原位点的变异.     

流感病毒快速检测法对甲型H1N1流感的临床诊断价值

目的 评价国产（A型）流感病毒快速检测试剂盒（广州万孚生物技术有限公司,中国）对甲型H1N1流感的临床诊断价值.方法 对2009年10月20日～11月23日本院发热门诊的符合流感样病例的患者35例,使用国产（A型）流感病毒快速检测试剂盒进行鼻拭子甲型H1N1流感病毒快速检测（简称快速试纸法）,同时取咽拭子行聚合酶链式反应（PCR）检测.结果 快速试纸法检测病毒阳性率为68.5%,PCR法流感病毒检出率为60%.与PCR法相比,前者的敏感性为90.4%,特异性为64.2%,阳性预测值79.1%,阴性预测值为81.8%.结论 快速试纸法检测有较高的敏感性,可以满足临床快速诊断甲型H1N1流感的需要.     

人源H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性和致病性研究

目的观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑特性,对比研究不同空斑类型H5N1病毒致病性和复制能力差异。方法将不同稀释度的H5N1亚型禽流感病毒株分别接种于MDCK单层细胞,加盖营养琼脂,合适时间染色,观察不同H5N1亚型禽流感病毒株空斑形成特点,按照DullbeccoR的方法计算病毒PFU数;根据空斑大小进行挑选、纯化、筛选不同类型空斑病毒,测定这些病毒对Balb/c小鼠致病性差异和在MDCK细胞上复制差异。结果野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,空斑大小、形状差异明显:A/Vietnam/1194/2004(H5N1)以大圆形斑为主,夹杂少量小点状斑。A/Beijing/01/03(H5N1)大多数为中等大小空斑,并有少数针尖状斑。野生A/Vietnam/1194/2004经过分离纯化后,得到的两种空斑类型病毒在致病性和复制能力存在明显差异。结论野生的人源H5N1禽流感病毒株在空斑形成上都存在不同程度的不均一性,从野生病毒株中分离、纯化的大小斑病毒在致病性和复制能力上存在明显差异。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒聚合酶编码基因的遗传特性及重要功能位点变异分析

目的 分析2009年新型甲型H1N1流感病毒聚合酶PA、PB1和PB2编码基因序列遗传的进化特征及重要功能位点变异.方法 从NCBI流感数据库中获取此次流行株的PA、PB1和PB2聚合酶编码基因序列以及不同年代、不同地区、不同宿主、不同亚型的参考序列,运用MEGA4.0软件比对和修剪此次流行株的代表序列和所有参考株序列.并用NJ法构建进化树,同时比对此次流行株的代表序列、各年代人的A/H1N1以及禽流感病毒参考序列等编码的PB2蛋白质序列.结果 不同地区、不同时间分离的2009年新型甲型H1N1流感病毒的聚合酶PA、PBl和PB2编码基因同源性均>99.8%,且聚集在一枝独特的进化枝上,与禽流感病毒接近.进化树显示三者来源皆为禽类,目前仍未发生突变;PB2的重要功能位点第627位氨基酸为谷氨酸,具有禽流感病毒的特点.结论 本次流感大流行为新型甲型H1N1病毒导致的同源爆发.但还不具备典型的高致病性,禽流感病毒可能参与了聚合酶基因的重排过程.     

重症甲型H1N1流感肺炎的胸部影像学表现

自2009年3月在墨西哥等国家爆发并迅速在全球蔓延的甲型H1N1流感是由变异后的新型甲型H1N1流感病毒所引起的急性呼吸道传染病。少数病例病情重,进展迅速,可出现病毒性肺炎,合并呼吸衰竭、多脏器功能损伤,危重患者可以导致死亡^[1]。