高功率微波对原代培养心肌细胞的影响

目的：观察高功率微波(high Power microwave，HPM)对心肌细胞的影响及细胞内钙高于浓度的变化，探讨HPM对心肌细胞损伤的发生机制。方法：以功率密度950mW／cm^2的HPM辐照心肌细胞后，用荧光染料Fluo—3／AM负载，于激光扫描共聚焦显微镜下观察心肌细胞形态和[Ca^2 ]i的变化；用FITC—膜联蛋白(annexin)V／PI双染色法，于流式细胞仪检测心肌细胞的坏死和凋亡。结果：HPM辐照后，细胞内钙高于浓度明显降低，与对照组相比差异显著(P＜0．01)。心肌细胞发生坏死和凋亡，与对照组相比差异显著(P＜0.01)。结论：HPM辐照可引起心肌细胞[Ca^2 ]i明显降低，提示HPM辐照可引起心肌细胞膜的损伤，从而造成[Ca^2 ]i的大量漏出和细胞的死亡。     

高功率微波辐射对大鼠心肌、血浆心钠素和内皮素的影响

探讨高功率微波（HPM）辐射后大鼠心肌、血浆心钠素和内皮素的改变及其意义。方法：采用平均功率密度为10—100mW／cm^2的HPM模拟源辐射90只二级Wiatar雄性大鼠，应用光镜、图像分析技术和放射免疫法检测HPM辐射后6h，1、3、7及14d大鼠变性心肌、血浆心钠素和内皮素变化。结果：HPM辐射后6h～7d内变性心肌范围呈进行性扩大并加重，7d见心肌肌浆凝聚，横纹消失，且随辐射剂量增加，损伤效应加重，14d病变减轻。大鼠血浆心钠素浓度于1～7d升高（P〈0．01或P〈0．05），且与辐射剂量呈正相关，即辐射剂量越大，效应越明显，14d恢复正常水平。血浆内皮素浓度于辐射后7d内呈升高趋势，10和100mW／cm^2组1d升高有统计学差异（P〈0．01或P〈0.05），14d恢复正常水平。结论：一定功率密度的HPM辐射可造成心肌纤维变性，心脏内分泌功能受损。参与了HPM辐射所致心脏损伤的病理生理过程。     

高功率微波辐射后大鼠心脏β1肾上腺素能受体表达及其意义

目的探讨高功率微波（HPM）辐射后心脏β1肾上腺素能受体（β1-AR）表达的变化及其意义.方法采用平均功率密度为50 mW/cm^2的S波段HPM模拟源辐射45只二级Wistar雄性大鼠,应用光镜、免疫组织化学、RT-PCR和图像分析技术,定量研究HPM辐照后大鼠心脏组织结构改变及β1-AR蛋白及mRNA变化规律.结果50 mW/cm^2 HPM辐射后大鼠心肌纤维排列紊乱,颗粒变性甚至肌浆凝聚,7 d内进行性加重,14 d后减轻;辐射后1 d,β1-AR蛋白于心内膜下及肌层心肌细胞膜及胞浆表达增强,3 d达高峰（P＜0.05）,7 d仍有较强的表达（P＜0.05）,14 d恢复至正常水平;β1-AR mRNA于6 h～28 d均见升高（P＜0.01）,除7 d外,随时间延长,增强更加明显.结论50 mW/cm^2的HPM辐射可造成心脏组织结构的损伤,心肌β1-AR表达增强,参与了HPM辐射致心脏损伤的病理生理过程.     

金钠多对缺氧所致内皮细胞内钙离子浓度和线粒体膜电位改变保护作用的研究

目的：观察缺氧对血管内皮细胞[Ca^2＋]i和线粒体膜电位的变化及金钠多的保护作用。方法：血管内皮细胞分为6组，用激光共聚焦显微镜测量各组细胞内[Ca^2＋]i和线粒体膜电位。结果：①单纯缺氧组同对照组比较细胞内[Ca^2＋]i明显升高（P〈0．01）、线粒体膜电位明显降低（P〈0．01）；②缺氧加金钠多组同单纯缺氧组比较[Ca^2＋]i显著降低（P〈0．01）、线粒体膜电位显著升高（P〈0．01）。结论：缺氧可导致血管内皮细胞[Ca^2＋]i升高、线粒体膜电位降低；金钠多对缺氧所致的[Ca^2＋]i和线粒体膜电位的损伤具有保护作用。     

高功率微波对大鼠下丘脑和垂体中糖皮质激素受体影响

目的探讨高功率微波（high power microwave，HPM）辐照后下匠脑与垂体中糖皮质激素受体（glucocorticoid receptor，GR）的变化及其意义。方法采用2～90mW／cm^2的HPM辐照130只二级雄性Wistar大鼠，分别于照后6h、1、3、7、14d、28d与3月活杀动物，取下丘脑与垂体，采用免疫组化和图像分析技术研究GR在辐照后大鼠下丘脑与垂体中的表达。结果辐照后下丘脑神经元中GR表达减弱。10mW／cm^2组在6h与1d时较对照组有显著下降（P〈0．05），7d后呈恢复趋势；50mW／cm^2绀在1d时有显著下降（P〈0．05）。辐照后垂体远侧部内分泌细胞GR表达增强。10mW／cm^2组在6h时有显著升高（P〈0．01），7d后呈恢复趋势；50mW／cm^2组在1、3d时均有显著升高（P〈0．01）。结论一定功率密度的HPM辐照后，下丘脑GR表达下降；垂体GR表达增强；HPA轴负反馈调控紊乩；表明GR参与rHPM辐照后下丘脑．垂体．肾上腺轴病变的病理生理过程。     

蒺藜总皂苷对缺氧复氧损伤心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2与bax表达的影响

目的观察蒺藜总皂苷（GSTT）对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax表达的影响。方法利用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注（M1／R）模型，分正常培养组、模型组和蒺藜总皂苷大、小剂量组。流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率，免疫组化检测心肌细胞凋亡基因bcl-2、bax的表达。结果GSTT大、小剂量组均可显著降低细胞凋亡率（P〈0．05）。GSTT大剂量组可显著上调bcl2表达（P〈0．01）、下调bax表达（P〈0．05），而GSTT小剂量组可上调bcl—2表达（P〈0．05），但对bax表达无明显影响。结论GSTT可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡，其作用可能是通过上调bcl-2、下调bax表达实现的。     

高功率微波辐照对大鼠卵巢显微和亚显微结构的影响

目的：研究高功率微波(high power microwave，HPM)对大鼠卵巢组织显微和亚显微结构的影响。方法：健康成年雄性SD大鼠65只，随机分为实验组和对照组(5只)。以S波段平均功率密度分别为20，40和80mW／cm^2的HPM辐照实验组大鼠，辐照时间分别为1，5，10和20min。于辐照后6h取材，应用光镜和透射电镜观察其病理形态变化。结果：光镜下，与对照组相比，从40mW／cm^2 5min亚组开始出现组织水肿、充血和炎细胞浸润，10min亚组开始见卵泡细胞分离明显，20min亚组及80mW／cm^2 1min亚组，5min亚组和10min亚组出现卵泡内层细胞变性，发育不同阶段的卵泡发生卵泡闭锁。黄体细胞发生凋亡。20min亚组则出现组织出血和部分内层细胞坏死崩解。随照射功率密度增加照射时间延长上述病理变化更明显。透射电镜下超微结构发生轻度线粒体水肿、内质网扩张，间质内炎细胞浸润是从40mW／cm^2 5min亚组开始，随照射时间延长，功率密度增加，各组均可见生殖细胞发生变性、凋亡改变；80mW／cm^2 20min亚组可见卵母细胞内次级溶酶体增多，微绒毛发生肿胀。间质细胞凋亡、裂解。20mW／cm^2各亚组，40mW／cm^2 1min亚组及对照组无改变。结论：HPM可导致大鼠卵巢发生明显的病理性改变，当达到80mW／cm^2辐照20min对大鼠卵巢组织有致死效应。     

血管紧张素-2对血管内皮细胞[Ca~(2+)]i的影响及合贝爽的保护作用

目的：观察血管紧张素-2（A增-2）对血管内皮细胞[Ca^2＋]i的影响及合贝爽的保护作用。方法：将血管内皮细胞分为空白对照组、Ang-2组、Ang-2＋合贝爽组。Ang-2组加入10^-7mogl/L Ang-2，Ang-2组＋合贝爽组加入10^-7mol／L Ang-2和1mg／L合贝爽。各组在药物作用60min后，用激光共聚焦显微镜测量各组细胞的[Ca^2＋]i。结果：①Ang-2组的细胞内[Ca^2＋]i显著高于空白对照组（P〈O．01）；②Ang-2＋合贝爽组的细胞内[Ca^2＋]i显著低于Ang-2组（P〈0．01）。结论：Ang-2可引起细胞内[Ca^2＋]i的显著增加，而合贝爽对Ang-2所致的[Ca^2＋]i增加具有保护作用。     

高功率微波辐照对心肌细胞和心脏间质细胞生存能力和细胞活力影响的研究

目的：研究HPM对心肌细胞和心脏间质细胞生存能力和细胞活力的影响。方法：HPM辐照体外培养乳鼠心肌细胞和心脏间质细胞，用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死；用MTT实验测定细胞活力。结果：HPM可以对心肌细胞和间质细胞的功能和形态产生明显影响，引起二者的凋亡和坏死。结论：心脏可能是HPM损伤的易感器官之一，并提示在探讨HPM对心脏的损伤时，应同时关注对心脏间质细胞的研究。     

LPS和TNFα对肺微血管内皮细胞内游离钙的影响

目的探讨脂多糖（LPS）、肿瘤坏死因子α（TNFα）对大鼠肺微血管内皮细胞（RPMVEC）内游离钙浓度（[Ca^2＋]i）的影响。方法将细胞接种于盖玻片上,细胞单层汇合后进行实验。实验分组：LPS组（用10ug/mlLPS）,LPS＋山莨菪碱组（用10ug／mlLPS＋10ug/ml山莨菪碱）,TNFα组（用5000u／mlTNFα）,TNFα＋山莨菪碱组（用5000u／mlTNFα＋10ug／ml山莨菪碱）,正常对照组加等量稀释液。作用15、90min后按照试剂盒提供的方法,并参照文献测定[Ca^2＋]i。结果与正常对照组比较,LPS组、LPS＋山莨菪碱组15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i均显著升高（P〈0．01）;LPS组与LPS＋山莨菪碱组比较,15min和90min两个时相点[Ca^2＋]无明显差异（P〉0．05）。同样,与正常对照组比较,TNFα组、TNFα＋山莨菪碱组15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i均显著升高（P〈0．01）;TNFα组与TNFα＋山莨菪碱组比较,15min和90min两个时相点[Ca^2＋]i无明显差异（P〉0．05）。结论LPS、TNFα作用可使RPMVEC[Ca^2＋]i显著升高,山莨菪碱对LPS、TNFα诱导的RPMVEC[Ca^2＋]i升高无显著抑制作用;LPS、TNFα引起的[Ca^2＋]i浓度升高与β—AR介导的信号转导通路无关;[Ca^2＋]i升高可能参与了G蛋白偶联受激酶的活性调节。     

高功率微波辐射对小鼠心肌氧化应激及ATPase的影响

目的观察高功率微波辐射(high power microwave radiation,HPM)对小鼠心肌氧化应激及ATPase活性的影响。方法雄性ICR小鼠32只,随机分为4组(n=8):假照组、微波辐射10 min组、微波辐射20 min组、微波辐射30 min组。采用S波段,平均表面功率为10 mW/cm2微波;照射时间分别为0,10,20,30 min/次,每周2次,共2周。末次辐射完毕,立即处死小鼠,取心脏、冰冷生理盐水冲洗后,加入匀浆液制作匀浆。采用试剂盒测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)活性、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)的含量以及Na+K+-ATPase和Ca2+Mg2+-AT-Pase活性。结果微波辐射后,与假照组比,微波辐射20 min组和微波辐射30 min组SOD活性降低(P<0.05)、GSH-px活性增加(P<0.05);而微波辐射20 min组GSH含量明显增加(P<0.01);微波辐射30 min组Ca2+Mg2+-ATPase活性明显降低(P<0.01),其他指标变化无明显统计学差异。结论微波辐射可能引起小鼠心脏氧化应激平衡状态以及Ca2+转运的改变。     

高功率微波辐照后大鼠卵巢组织Bcl-2及C-myc蛋白的表达

 目的检测高功率微波(High power microwave,HPM)与细胞凋亡相关基因Bcl-2和C-myc蛋白的关系.方法健康成年雌性SD大鼠100只,随机分为20组,每组5只.以S波段平均功率密度分别为20 mW/cm2的HPM辐照实验组大鼠10min,40mW/cm2辐照5min、10min.照后6 h、24h、48h、72 h、5 d取卵巢组织,应用免疫组织化学S-P法检测Bcl-2和C-myc蛋白表达的改变.结果HPM辐照后,24h组Bcl-2和C-myc蛋白表达升高,40mW/m2组二者升高较20mW/cm2组升高明显,差异有显著性意义(P＜0.01),正常对照组无表达.结论HPM辐照可促进Bcl-2和C-myc蛋白的活化和表达,可能是HPM诱导凋亡的机制之一.     

肝细胞生长因子在大鼠心肌细胞放射损伤中的抗凋亡作用

目的 研究肝细胞生长因子(HGF)对60Co γ射线照射诱导的体外培养心肌细胞凋亡的保护作用.方法 体外培养新生Wistar大鼠心肌细胞,分为未照射组(A组)、单纯照射组(B组)、HGF(20ng/ml)处理照射组(C组)、HGF(40ng/ml)处理照射组(D组).B、C、D组分别用60Co γ射线20Gy单剂量照射心肌细胞,C、D组细胞在照射前3h分别用终浓度为20、40ng/ml的HGF孵育.照射后48h检测培养上清中的LDH浓度,用流式细胞仪检测心肌细胞生长周期及细胞凋亡率变化.结果 照射后48h,B、C、D组细胞培养上清中的LDH浓度较A组升高,C、D组的LDH浓度较B组下降;B、C、D组细胞生长周期较A组无明显变化,但凋亡细胞比例较A组升高,经HGF孵育的心肌细胞凋亡率则呈下降趋势.结论 60Co γ射线单剂量照射可造成体外培养的心肌细胞损伤,促进心肌细胞凋亡,HGF可抑制60Co γ射线对体外培养的大鼠心肌细胞的促凋亡作用,其机制仍需进一步研究.     

利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响

 目的 研究利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响。方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧和高糖模型。实验分为:正常对照组、利拉鲁肽对照组、缺氧和高糖模型组、利拉鲁肽处理组、胰高血糖素样肽-1 (glucagon like peptide-1, GLP-1)受体抑制剂组、高渗对照组6组。采用荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子变化,化学荧光法检测活性氧族(reactive oxygen species, ROS)水平、利用生化方法检测Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性、RT-PCR技术检测钙敏感的钙蛋白酶(μ-calpain)基因表达、流式细胞仪测定细胞凋亡率、ELISA法检测细胞caspase-3活性。结果 与正常对照组相比,缺氧高糖模型组细胞内ROS水平、μ-calpain mRNA表达量、caspase-3活性均显著升高(P<0.01);Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.01);游离钙离子浓度由(117.19±15.04)nmol/L增加至(508.53±26.11)nmol/L,细胞凋亡率由(3.95±0.12)%增加至(31.03±4.30)%(P<0.01)。利拉鲁肽处理组细胞较缺氧高糖模型组上述参数均明显改善,游离钙离子浓度和细胞凋亡率显著降低(P<0.01);GLP-1R抑制剂exendin(9-39)可拮抗利拉鲁肽的上述作用(P<0.05)。结论 利拉鲁肽可明显抑制缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载及μ-calpain基因的上调,降低caspase-3水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

基于神经细胞活性评价高功率微波照射安全性研究

目的研究平均功率密度5mW／cm^2的高功率微波（HPM）对神经细胞活性的影响，为制定微波照射的安全标准提供参考数据。方法出生后12h内Wistar大鼠乳鼠皮层神经细胞常规培养7d后，进行HPM照射。采用细胞内ATP酶活性测定法，检测HPM对原代培养神经细胞总ATP酶、钙镁ATP酶和钠钾ATP酶活性的影响，并用MTT法检测照射后细胞琥珀酸脱氢酶（SDH）活性的变化，观察时间点分别为HPM照射后1和6h，1、3和7d。结果原代培养神经细胞经平均功率密度5mW／cm^2的HPM连续照射6min后，同一时间点内HPM照射组和对照组之间细胞SDH活性和各ATP酶活性均无显著差异。结论平均功率密度为5mW／cm^2的HPM照射对原代神经细胞的活性无显著影响，提示就神经细胞活性而言，该功率密度的HPM照射是安全的。