肝细胞生长因子对心肌细胞及血管平滑肌细胞、血管内皮细胞生长因子分泌的作用

观察肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的牛冠状动脉血管内皮细胞 (BCAEC)、牛冠状动脉血管平滑肌细胞 (BCASMC)和小鼠心肌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)分泌的影响。BCAEC对照组与HGF组 12hVEGF浓度分别为 10 5 1± 2 90和 9 31± 2 78pg/ml;BCASMC对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 3 35倍和 3 93倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 0 6倍和 2 4 2倍 ;心肌细胞对照组和HGF组 12hVEGF浓度分别为 3h的 5 4 3倍和 4 0 9倍 ,HGF组 3h和 12hVEGF浓度分别为对照组的 2 74倍和 2 0 6倍。提示BCAEC、BCASMC及小鼠心肌细胞均具有自分泌VEGF的作用 ,HGF促进BCASMC和心肌细胞VEGF的分泌 ,对BCAEC无影响     

肝细胞生长因子对后肢固定大鼠腓肠肌细胞凋亡的影响

目的：观察肝细胞生长因子对后肢固定大鼠腓肠肌细胞凋亡的影响。方法：按照Jozsa的方法制作模型，实验组将肝细胞生长因子注射人大鼠腓肠肌；模型组注射等量生理盐水。观察骨骼肌组织的病理改变及骨骼肌细胞凋亡的改变。结果：实验组肌纤维塑形良好，线粒体形态较正常，见新生肌纤维；Bcl-2呈强阳性表达且TUNEL显示为低表达，均较模型组明显改变（P〈0.01）。结论：肝细胞生长因子能够显著降低骨骼肌细胞凋亡，有效抑制骨骼肌废用性萎缩的发生     

肝细胞生长因子在心血管疾病中的作用机制及应用研究进展

肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)是由69kD的α链及34kD的β链组成的异二聚体蛋白[1-2],因最初发现其活性与肝细胞再生有关,故名肝细胞生长因子,后研究发现HGF是一种可以作用于多种组织与细胞的生长因子,具有促进细胞增殖、细胞运动、形态发生、血管新生、抑制凋亡等作用.HGF的主要来源有成纤维细胞、平滑肌细胞、肥大细胞、巨噬细胞和白细胞等[3].IL-1、PDGF、bFGF和G-CSF等可诱导HGF的表达,TGF和糖皮质激素等则抑制其表达[3].     

酸性成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子在肝干细胞分化成熟中的作用

目的　初步探讨了酸性成纤维细胞生长因子 (aFGF)及肝细胞生长因子 (HGF)对大鼠胎肝干细胞分化成熟的影响。方法　采用胶原酶消化法分离胎龄 13d的SD大鼠胎肝细胞 ,分别接种于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组细胞培养瓶中进行体外培养。Ⅰ组 :培养液中含酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和肝细胞生长因子 (HGF) ;Ⅱ组 :培养液中含aFGF ;Ⅲ组 :培养液中含HGF ;Ⅳ组培养液中无细胞因子 ,此组作为对照组。检测在相同培养时间 (第 3、5、7、9、11天 )细胞培养上清液中甲胎蛋白(AFP)和白蛋白 (ALB)的含量 ;并用免疫细胞化学法鉴定在无细胞因子干预培养 3d后 ,胎肝干细胞对细胞角质素 19(CK 19)的表达。结果　Ⅰ组、Ⅱ组及Ⅲ组分别与Ⅳ组比较 ,在相同培养时间的培养上清液中AFP的含量均较少 ,而ALB的含量均较多 ,且差异均有显著性意义 (AFP :t=6 2 6 4 ,3 2 2 1,2 5 91,P <0 0 5 ;ALB :t=6 32 4 ,2 14 5 ,2 95 4 ,P <0 0 5 ) ;Ⅱ组和Ⅲ组相同培养时间的培养上清液中AFP及ALB的含量差异均无显著性意义 (AFP :t =0 5 0 1,P >0 0 5 ;ALB :t =0 6 16 ,P >0 0 5 ) ;而Ⅳ组分别与Ⅱ组和Ⅲ组比较 ,在相同培养时间的培养上清液中ALB的含量均较少 ,而AFP的含量均较多 ,差异也均有显著性意义 (AFP :t =3 2 2 1,2 5 91,P <0     

氮氧自由基R-1对人肝细胞L-02的辐射防护作用

目的 探讨氮氧自由基R-1(简称R-1)对人肝细胞L-02的辐射防护作用.方法 在L-02细胞培养液中,加入终浓度为0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32μmol/L的R-1,作用24、48和72 h.用MTT法测定R-1的毒性作用,以筛选合适的R-1浓度.后续实验选择0.125、0.25、0.5、1 μmol/L 4个浓度组检测其防护作用.设终浓度4 mmol/L的细胞保护剂WR2721为阳性对照组.采用60Coγ射线照射,吸收剂量为0、1、2、4、8 Gy,照射72 h后,进行MTT比色法.L-02细胞分为2组:照射前30 min加药组和照射后立即加药组.终浓度均为0.25 μmol/L,吸收剂量为4 Gy,照射后72 h进行MTT比色实验.照射后10 d,用克隆形成实验检测不同浓度的R-1对L-02细胞活力的影响.选用防护效果最佳的0.25μmol/L浓度对细胞进行预处理,分别在4 Gy照射后的24、48和72 h,用倒置显微镜观察细胞形态的变化,Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 当R-1浓度低于1 μmoL/L时,与0 μmol/L组相比,L-02细胞各时间点的吸光度(A)值无明显变化;而浓度高于2 μmol/L时,与0 μmol/L组相比,其A值随浓度的增高而下降.选用0、0.125、0.25、0.5、1μmol/L的浓度组.与照射组相比,R-1各浓度组的A值和克隆形成率明显提高,其中0.25μmol/L组的作用最明显.与照射组相比,0.25 μmol/L预处理组的L-02细胞贴壁好,折光性强,轮廓清晰,凋亡细胞和死亡细胞明显较少.结论 R-1能有效地防护60Coγ射线对L-02细胞的辐射损伤,其防护作用可能与减少细胞凋亡有关.

Abstract：

Objcetive To investigate the protective effects of the nitroxides R-1 on human liver cells exposed to ionizing radiation.Methods Human liver cells L-02 were cultured and irradiated with 60Co γ-rays at the doses of 0,1,2,4,and 8 Gy,in order to screen the proper irradiation dose.WR2721 at the terminal concentration of 4 mmol/L was used as positive control.L-02 cells irradiated with 4 Gy were added with R-1 at the terminal concentration of 0.25 μmol/L at 30 min before irradiation or immediately after irradiation.MIT method was used to screen the proper conditions for follow-up experiment 72 h later.L-02 cell culture fluid was added with R-1 at the concentrations of 0,0.125,0.25,0.5,and 1 μmol/L,respectively for 30 min before irradiation at the doses of 0,1,2,4,and 8 Gy to ealculate clone formation rate at 10 d post-irradiation.L-02 cells were cultured and divided into 4 groups:control group without any treatment.drug group pretreated by 0.25 μmol/L R-1 only,irradiation group,irradiated at 4 Gy only,and drug + irradiation group with combination of 0.25 μmol/L R-01 and 4 Gy irradiation.The inverted microscopy and Hoechst 33258 staining and flow eytometry were used to observe the apoptosis of the cells at 24,48,and 72 h later.Results Nitroxides R-1 did not inhibit the viability of L-02 cell when its concentration was less than 1 μmol/L and it inhibited the L-02 cell growth when the concentration wu higher than 2 μmoL/L.The A value and colony formation rate of different concentration of R-1 groups were all higher than those of the irradiation group,and the effect of the 0.25 μmol/L drug concentration group was the most significant.Consequently,the concentration 0.25 μmoL/L was selected for follow-up experiment.Compared with the irradiation group,the L-02 cells of the pretreatment group showed solid adherence, increased refraction,clear outline,less apoptotic and dead cells at 4 Gy post-irradiation.Conclusions Nitroxides R-1 can protect the human liver cells from 60Coγ-ray induced injury effectively.The mechanism of its protective effect may be the reduction of apoptosis.     

大鼠心肌缺血再灌注损伤中的心肌细胞凋亡

 目的 观察MIRI时心肌细胞凋亡现象及其病理组织学改变,探讨细胞凋亡在MIRI中的意义.方法 采用SD大鼠MIRI模型,用原位末端标记染色检测心肌细胞凋亡和HE染色法检测心肌病理组织学改变.结果 假手术组及MIRI大鼠左室非缺血心肌组织中均末发现凋亡细胞出现,MIRI60 min、90 min和120 min大鼠缺血心肌中均可见凋亡细胞,且凋亡细胞的个数随再灌注时间的延长而增多,分别为36.3±8.76个/视野,38.41±14.21个/视野和48.01±23.87个/视野..结论 缺血后再灌注损伤可诱发心肌细胞凋亡.     

氮氧自由基R-1对人肝细胞L-02的辐射防护作用

Objcetive To investigate the protective effects of the nitroxides R-1 on human liver cells exposed to ionizing radiation.Methods Human liver cells L-02 were cultured and irradiated with 60Co γ-rays at the doses of 0,1,2,4,and 8 Gy,in order to screen the proper irradiation dose.WR2721 at the terminal concentration of 4 mmol/L was used as positive control.L-02 cells irradiated with 4 Gy were added with R-1 at the terminal concentration of 0.25 μmol/L at 30 min before irradiation or immediately after irradiation.MIT method was used to screen the proper conditions for follow-up experiment 72 h later.L-02 cell culture fluid was added with R-1 at the concentrations of 0,0.125,0.25,0.5,and 1 μmol/L,respectively for 30 min before irradiation at the doses of 0,1,2,4,and 8 Gy to ealculate clone formation rate at 10 d post-irradiation.L-02 cells were cultured and divided into 4 groups:control group without any treatment.drug group pretreated by 0.25 μmol/L R-1 only,irradiation group,irradiated at 4 Gy only,and drug + irradiation group with combination of 0.25 μmol/L R-01 and 4 Gy irradiation.The inverted microscopy and Hoechst 33258 staining and flow eytometry were used to observe the apoptosis of the cells at 24,48,and 72 h later.Results Nitroxides R-1 did not inhibit the viability of L-02 cell when its concentration was less than 1 μmol/L and it inhibited the L-02 cell growth when the concentration wu higher than 2 μmoL/L.The A value and colony formation rate of different concentration of R-1 groups were all higher than those of the irradiation group,and the effect of the 0.25 μmol/L drug concentration group was the most significant.Consequently,the concentration 0.25 μmoL/L was selected for follow-up experiment.Compared with the irradiation group,the L-02 cells of the pretreatment group showed solid adherence, increased refraction,clear outline,less apoptotic and dead cells at 4 Gy post-irradiation.Conclusions Nitroxides R-1 can protect the human liver cells from 60Coγ-ray induced injury effectively.The mechanism of its protective effect may be the reduction of apoptosis.     

肝细胞生长因子基因转染大鼠急性脑卒中模型的生物效应

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）基因转染大鼠急性脑卒中模型后的表达情况及其生物学效应。方法39只实验用大鼠，线栓法制备成可控性急性大鼠脑卒中模型。利用基因重组技术将HGF基因与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因标记的真核表达载体PIRES2-EGFP进行融合，构建真核细胞表达质粒。通过脂质体介导法，立体定向下多点注射到大鼠急性脑卒中模型的缺血半暗带区域行基因转染，转染7d后断头取大鼠脑组织，切片观察HGF基因在大鼠脑内的表达情况；并采用兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体对大鼠脑组织进行免疫组化染色，显微镜下随机检测5个高倍视野下缺血半暗带区血管数量；同时在基因转染前及转染后7d，应用CT灌注扫描对实验鼠脑血流量进行监测，观察基因转染对脑血流量的影响。将大鼠脑卒中模型随机分成3组（每组13只）：（1）注射脂质体／pIRES2-EGFP-HGF质粒的实验组；（2）注射脂质体/PIRES2-EGFP空载质粒的空载体对照组；（3）空白对照组（未进行注射）。结果酶切鉴定及基因测序证实，HGF基因片段已克隆到PIRES2-EGFP的BamH Ⅰ和SalⅠ位点之间。HGF基因转染大鼠缺血半暗带区7d后，利用荧光显微镜观察可见到绿色荧光蛋白的表达，用免疫组化方法进一步证实了HGF的表达。实验组大鼠转染局部血管数量（46．71±7．11）条／5个高倍视野，明显多于对照组的（20．43±3．21）条／5个高倍视野和空白对照组的（18．00±3．27）条／5个高倍视野（F=74．447；P＜0．01）；CT灌注显示其梗死侧大脑半球的脑血流量（63．82±6．08）％也高于对照组（53．58±4．19）％和空白对照组（52．46±4．93）％（F=10．445；P＜0．01）。结论脂质体转染HGF基因能够在缺血半暗带区表达，表达产物能够发挥生物学效应，促进局部血管侧支循环形成。     

肝细胞生长因子对大鼠移植小肠粘膜形态及功能的作用

使用近交系Ｗｉｓｔａｒ大鼠行异位全小肠移植。术后第２天开始给予肠外营养至第１０天,对照组行常规全胃肠外营养（ＴＰＮ）支持,肝细胞生长因子（ＨＧＦ）组行常规ＴＰＮ支持的同时加用ＨＧＦ〈观察移植肠形态学及吸收功能。ＨＧＦ组移植肠绒毛高度、隐窝深度、粘膜厚度及绒毛表面积均明显大于对照组,肠上皮细胞超微结构基本保持完好,对照组则出现明显线粒体肿胀,嵴短小紊乱和微绒毛萎缩。ＨＧＦ组小鼠移植大鼠血浆＾１５Ｎ－     

Pax-8基因在大鼠心肌细胞凋亡中的作用

),而后两者间无显著差异(P>0.05).Pax-8 siRNA组的细胞增殖抑制率明显高于NC siRNA组(P<0.01).结论 Pax-8 siRNA能选择性下调心肌细胞中Pax-8的表达,并促进细胞凋亡、抑制细胞增殖.     

肝细胞生长因子与表皮细胞生长因子联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为类肝细胞

目的探讨肝细胞生长因子（HGF）与表皮细胞生长因子（EGF）联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）分化为类肝细胞的可行性。方法取大鼠股骨骨髓,用直接贴壁法分离纯化Mats并体外传代,实验组用HGF（20mg／m1）＋EGF（10mg／m1）对体外培养的Mscs进行诱导分化。细胞免疫化学法及流式细胞仪对培养的MSCS进行鉴定。RT-PCR检测诱导后慨的AFP、AIb、CK-18的mRNA表达。电镜观察诱导细胞的超微结构。结果贴壁的MSCs单个存在或形成克隆,细胞形态比较均一,为长梭形,7～10天达汇合。免疫细胞化学及流式细胞仪均证明培养的细胞为MSCs。实验组MSCS在培养21天时表现为类肝细胞的形态特点。RT-PCR：AFP mRNA在第7天呈阳性表达,AIb mRNA及CK-18 mRNA开始即有表达,21天增强。电镜观察见诱导21天的Mats形态结构与肝细胞相吻合。结论Mats在体外容易分离培养和扩增,HGF＋EGF可诱导MSCs向类肝细胞分化,为细胞移植治疗肝衰竭提供新的探索思路。     

HGF基因修饰增强间充质干细胞的免疫抑制作用

目的：探讨HGF基因在间充质干细胞（mesenehymal stem cell，MSC）中过表达对细胞生物学的影响，为扩充MSC临床应用范围提供依据。方法：用携带HGF基因的重组腺病毒感染人骨髓来源的间充质干细胞后。与对照细胞相比，进行以下项目的检测：FCM测定细胞表型；MTT法测定细胞增殖能力；ALP和钙定量以及组织化学染色检测细胞体外成骨和成脂肪能力；^3H—TdR掺入法测定MSC—HGF对混合淋巴细胞反应中效应细胞增殖活性的抑制作用。结果：HGF基因转染后MSC表型、体外增殖和分化能力无改变；混合淋巴细胞反应中，MSC—HGF对异基因抗原诱导的淋巴细胞增殖活性的抑制效应存在剂量依赖关系；MSC—HGF／MSC与效应细胞比例为1：80时，MSC组淋巴细胞增殖活性（cpm值）降低19．8％，MSC—HGF组降低68．3％，抑制率是MSC组的3．45倍。结论：HGF基因转染的人骨髓MSC仍维持固有的增殖和分化能力，而对体外细胞免疫反应具有更强的抑制效果，提示MSC—HGF在造血干细胞移植和器官移植中的潜在应用价值。     

New insight into mitochondrial changes in vascular endothelial cells irradiated by gamma ray

Purpose: To investigate alterations of mitochondria in irradiated endothelial cells to further elucidate the mechanism underlying radiation-induced heart disease.

Materials and methods: Experiments were performed using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). HUVECs were irradiated with single gamma ray dose of 0, 5, 10 and 20?Gy, respectively. Apoptosis was assessed by flow cytometry at 24, 48 and 72?h post-irradiation, respectively. The intracellular reactive oxygen species (ROS) was measured with 2′,7′-dichlorofluorescein-diacetate (DCFH-DA) at 24?h post-irradiation. Mitochondrial membrane potential (ΔΨm) by JC-1 and the opening of mitochondrial permeability transition pore (mPTP) by a calcein-cobalt quenching method were detected at 24?h post-irradiation in order to measure changes of mitochondria induced by gamma ray irradiation.

Results: Gamma ray irradiation increased HUVECs apoptosis in a dose-dependent and time-dependent manner. Irradiation also promoted ROS production in HUVECs in a dose-dependent manner. At 24?h post-irradiation, the results showed that irradiation decreases ΔΨm, however, paradoxically, flow cytometry showed green fluorescence instensity higher in irradiated HUVECs than in control HUVECs in an irradiation dose-dependent manner which indicated gamma ray irradiation inhibited mPTP opening in HUVECs.

Conclusions: Gamma ray irradiation induces apoptosis and ROS production of endothelial cells, and decreases ΔΨm meanwhile contradictorily inhibiting the opening of mPTP.     

利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响

 目的 研究利拉鲁肽对缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载和细胞凋亡的影响。方法 采用原代培养的乳鼠心肌细胞,建立缺氧和高糖模型。实验分为:正常对照组、利拉鲁肽对照组、缺氧和高糖模型组、利拉鲁肽处理组、胰高血糖素样肽-1 (glucagon like peptide-1, GLP-1)受体抑制剂组、高渗对照组6组。采用荧光分光光度法检测心肌细胞内钙离子变化,化学荧光法检测活性氧族(reactive oxygen species, ROS)水平、利用生化方法检测Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性、RT-PCR技术检测钙敏感的钙蛋白酶(μ-calpain)基因表达、流式细胞仪测定细胞凋亡率、ELISA法检测细胞caspase-3活性。结果 与正常对照组相比,缺氧高糖模型组细胞内ROS水平、μ-calpain mRNA表达量、caspase-3活性均显著升高(P<0.01);Ca²⁺-ATP 和Na⁺-K⁺-ATP酶活性显著降低(P<0.01);游离钙离子浓度由(117.19±15.04)nmol/L增加至(508.53±26.11)nmol/L,细胞凋亡率由(3.95±0.12)%增加至(31.03±4.30)%(P<0.01)。利拉鲁肽处理组细胞较缺氧高糖模型组上述参数均明显改善,游离钙离子浓度和细胞凋亡率显著降低(P<0.01);GLP-1R抑制剂exendin(9-39)可拮抗利拉鲁肽的上述作用(P<0.05)。结论 利拉鲁肽可明显抑制缺氧和高糖所致心肌细胞钙超载及μ-calpain基因的上调,降低caspase-3水平,减少心肌细胞凋亡,对心肌细胞具有保护作用。     

改构型aFGF减轻大鼠小肠缺血再灌注所致肠道细胞凋亡

目的研究改构型酸性成纤维细胞生长因子(m aFGF)对大鼠肠缺血再灌注损伤所致肠道细胞凋亡的影响。方法将54只大鼠随机分为假手术组、生理盐水对照组和m aFGF治疗组。假手术组大鼠暴露肠系膜上动脉(SMA),不夹闭。生理盐水对照组和m aFGF治疗组大鼠以SMA夹闭造成肠缺血45分钟,松夹形成缺血再灌注,于再灌注即刻分别静脉注射生理盐水0.1m l和m aFGF 4μg,缺血再灌注2、6、12、24小时,取小肠组织观察组织学改变,用末端脱氧核糖转移酶介导的生物素化脱氧尿嘧啶缺刻标记技术(TUNEL)检测肠道细胞凋亡率。结果组织学检查显示生理盐水对照组缺血再灌注2~24小时肠道损伤严重,m aFGF治疗组肠道损伤较生理盐水对照组有所减轻。细胞凋亡检测结果假手术组肠道细胞凋亡率很低,生理盐水对照组和m aFGF治疗组细胞凋亡率明显高于假手术组。缺血再灌注12小时,生理盐水对照组细胞凋亡率高达(62.8±1.7)%,而m aFGF治疗组为(42.5±2.6)%,两者有统计学差异(P<0.05)。结论m aFGF能减轻大鼠肠缺血再灌注所致的肠道细胞凋亡。     

人类解旋酶样转录因子过表达促进辐射诱导的A549细胞凋亡

目的 探讨人类解旋酶样转录因子(HLTF)对辐射诱导细胞凋亡的影响及其机制。方法 将空质粒和带FLAG标签的HLTF表达质粒分别转染人肺癌细胞A549,⁶⁰Co γ射线照射观察细胞凋亡变化。用Western blot 检测HLTF在细胞核和胞质内水平的变化及线粒体细胞色素C的释放。结果 HLTF转染可促进γ射线诱导的细胞凋亡,凋亡率为(32.2±2.1)%,高于空载体转染组(11.4±2.3)%和Mock转染组(11.1±1.8)%(F=101.85,P<0.01)。辐射后HLTF在胞质内的表达水平显著提高。HLTF转染组胞质内细胞色素C的水平亦显著提高。结论 HLTF可促进辐射损伤诱导的细胞凋亡, 其部分机制可能是通过提高核质转位以及影响线粒体细胞色素C的释放来实现的。     

葛根素对火药烟雾诱导支气管上皮细胞凋亡的防护作用

目的 探讨葛根素对火药烟雾诱导的支气管上皮细胞(BEAS-2B)凋亡的保护作用及其机制.方法 体外培养BEAS-2B细胞,随机分为对照组(不加任何干预)、烟熏组(火药烟雾4g,作用10min)、烟熏+葛根素组(12.5、25、50、100μg/ml).细胞接种12h后加入葛根素,继续培养至24h后烟雾作用10min,继续培养2h后进行检测.采用CCK-8试剂盒检测细胞活力,Hoechst染色观察细胞凋亡情况,流式细胞仪检测Annexin V-PI双染细胞及caspase-3阳性率.结果 与对照组相比,烟熏组BEAS-2B细胞活力明显下降(P＜0.01),不同浓度葛根素能够不同程度地对抗烟熏的作用,其最佳保护浓度为25μg/ml.与烟熏组相比,烟熏+葛根素组Hoechst染色细胞凋亡率、Annexin V-PI双染细胞凋亡率及caspase-3阳性率均明显降低(P＜0.05,P＜0.01).结论 火药烟雾可致体外BEAS-2B细胞凋亡,而葛根素对火药烟雾诱导的BEAS-2B气管上皮细胞凋亡具有一定防护作用.     

血管内皮细胞生长因子对体外大鼠椎间盘细胞代谢的影响

目的 观察血管内皮细胞生长因子(vasctdar endothelial cell growth factor,VEGF)对体外培养大鼠椎间盘细胞及基质代谢的影响. 方法 建立大鼠椎间盘细胞培养体系,体外单层培养大鼠椎间盘细胞,取生长良好的第2代细胞,使用抗- Fas抗体诱导凋亡,加入不同浓度(10,100,1 000μg/L)的VEGF,影响椎间盘细胞的凋亡及代谢过程.利用流式细胞仪PI标记法检测椎间盘细胞凋亡情况;利用氯胺-T法和DMB比色法分别检测细胞培养液中羟脯氨酸和蛋白多糖的含量. 结果 (1)加入不同浓度VEGF(10,100,1 000μg/L)后,椎间盘细胞凋亡率为(87.62±11.06)％、(53.30 ±9.23)％和(16.75±4.21)％,与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).(2)随着VEGF浓度的增加(10,100,1 000 μg/L),羟脯氨酸含量[(6.71±0.33) μg/L、(9.12±0.41) μg/L、(11.58±0.12)μg/L]、蛋白多糖含量[(23.21±2.87)μg/L、(32.45±5.23) μg/L、(37.18±3.22) μg/L]明显增加.加入不同浓度VEGF后,羟脯氨酸和蛋白多糖的含量与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).羟脯氨酸含量、蛋白多糖含量与VEGF浓度呈正相关( ra=0.972,P＜0.01;rb=0.907,P＜0.01).结论 VEGF可以抑制体外培养的椎间盘细胞凋亡,促进椎间盘细胞基质中胶原及蛋白多糖的合成.     

氧化苦参碱对H9c2心肌细胞损伤的保护作用

 目的 探讨氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对H9c2心肌细胞氧化应激条件下的保护作用。方法 建立H9c2心肌细胞氧化应激模型,加入OMT进行预处理。取对数生长期细胞,分为:对照组,不给于任何处理;模型组,在细胞培养液中加入终浓度为100 μmol/L的H₂O₂培养4 h;2个OMT预处理组,分别用含有10 μmol/L和50 μmol/L OMT且不含有血清的DMEM完全培养液预处理12 h,再向其加入终浓度为100 μmol/L的H₂O₂培养4 h。通过MTT法检测细胞代谢活力;HE染色观察细胞形态;收集细胞上清液检测乳酸脱氢酶(LDH)含量,检测细胞内丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)与超氧化物歧化酶(SOD)含量;Hoechst染色检测细胞凋亡率;通过RT-PCR检测细胞中Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、Casepase3 mRNA、Nrf2 mRNA、HO-1 mRNA表达水平;Western blot法检测Nrf2、HO-1蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组细胞存活率(39.53%±0.25%)下降,LDH漏出量[(472.22±15.54)U/L]增加,SOD[(64.51±5.37)U/mgprot]等含量降低,MDA[(6.70±0.05)nmol/mgprot]含量升高;RT-PCR与Western blot 结果均显示Nrf2、HO-1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,OMT低、高浓度预处理组细胞存活率(57.40%±0.12%、77.51%±0.23%)升高,LDH漏出量[(367.72±12.53)U/L、(275.35±12.48)U/L]降低,细胞内SOD[(90.55±2.27)U/mgprot、(130.52±5.94)U/mgprot]等含量增加,MDA[(4.75±0.09)nmol/mgprot、(3.22±0.03)nmol/mgprot]含量下降;RT-PCR与Western blot 结果均显示Nrf2、HO-1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 氧化苦参碱通过抑制线粒体凋亡途径和激活Nrf2/HO-1信号通路,保护氧化应激损伤的H9c2心肌细胞。