肝星状细胞的激活在纤维化大鼠小肝移植供肝损伤中的作用

目的:在建立大鼠纤维化肝移植模型的基础上,检测肝星状细胞的激活, 探讨其在小肝移植后供肝损伤中所起的作用.方法:建立大鼠纤维化肝移植模型,纤维化肝脏切片Masson染色以观察纤维化程度.分全肝移植组和小肝移植组,观察两组7 d生存率.分别于术后6,48 h处死大鼠,取下肝脏标本,应用α-SMA抗体进行免疫组织化学染色以测定肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的激活程度.结果与结论:成功建立了大鼠纤维化肝移植模型.全肝移植组和小肝移植组7 d生存率分别为58.3%(7/12)和8.3%(1/12)(P=0.027);在同一组内不同时间点上,α-SMA的表达呈上升趋势;通过两组间比较,在各时间点上,小肝移植组α-SMA的表达均高于同一时间点全肝移植组α-SMA的表达,表明小肝移植组HSC激活的程度总体上高于全肝移植组.HSC的激活与肝硬变大鼠小肝移植中供肝损伤密切相关.     

胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中PTEN表达与肝星状细胞凋亡的关系研究

目的 探讨胆汁淤积性肝纤维化大鼠肝组织中磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)的动态表达与在体肝星状细胞(HSC)凋亡的关系.方法 健康雄性SD大鼠50只,随机分为模型组(n=40)及假手术组(n=10).模型组采用胆总管结扎法建立胆汁淤积性大鼠肝纤维化模型,并分别于结扎后1、2、3、4周(每个时间点取10只)麻醉后留取肝组织.假手术组大鼠亦于相应时间麻醉后留取肝组织.采用免疫组化法测定大鼠肝组织中PTEN蛋白的表达;采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)及α-SMA免疫组化双染法检测在体活化HSC的凋亡情况.结果 正常大鼠肝组织未见凋亡的HSC.随着肝纤维化程度加重,肝组织中PTEN蛋白的表达量逐渐减少(P<0.01),而活化HSC增多,凋亡HSC也增多.造模1、2、3、4周,大鼠肝组织的HSC凋亡指数(分别为4.57%±0.41%、4.02%±0.48%、3.45%±0.37%、2.88%±0.50%)逐渐减少(P<0.01).大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达量与在体HSC的凋亡呈显著正相关(r=0.76,P＜0.01).结论 胆汁淤积性大鼠肝纤维化组织中PTEN的蛋白表达下调与在体活化HSC的凋亡减少相一致.     

高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α—SMA和CTGF表达的影响

目的探讨高血糖对肝纤维化大鼠肝组织α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA反映肝星状细胞HSC活化）和结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。方法将52只SD雄性大鼠随机分为糖尿病肝纤维化组、正常血糖肝纤维化组与正常对照组。通过链脲佐菌素（streptozocin,STZ）诱导糖尿病,后用四氯化碳诱导肝纤维化。肝组织HE染色检测病理改变。免疫组化法检测肝组织α－SMA、CTGT蛋白表达。结果高血糖肝纤维化组α—SMA（灰度值142．5±3．67）和CTGF（灰度值144．2±5．01）表达水平较正常血糖肝纤维化组（α—SMA灰度值158．9±2．18,CTGF灰度值157．7±6．80）显著升高（P〈0．05）。结论高血糖可通过诱导肝脏α—SMA、CTGF表达,加重大鼠肝纤维化的程度,促进肝纤维化的形成。其机制与促进肝星状细胞的增殖活化及细胞外基质的合成分泌等有关。     

结缔组织生长因子在放射性肝纤维化大鼠中的动态表达及其与肝星状细胞活化的关系

目的：探讨结缔组织生长因子（CTGF）在放射性肝纤维化大鼠中的动态表达及其与转化生长因子β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的相关性,了解CTGF与肝星状细胞（HSC）活化的关系。方法：雄性SD二级大鼠40只,用数字表法随机分为模型组（30只）和对照组（10只）。模型组大鼠右半肝接受单次6 MV X射线25 Gy照射,于照射后2、4和6个月,分别用数字表法随机抽取模型组大鼠10只,对照组予以假照射后6个月,均采用HE染色观察肝组织病理变化及大鼠肝纤维化半定量积分,免疫组织化学法、RT-PCR法检测肝组织中CTGF、TGF-β1、α-SMA及其mRNA表达,并对其进行相关性分析。结果：与对照组相比,模型组于照射后2、4和6个月,肝纤维化半定量积分逐渐增加（F=25.82,P<0.05）,模型组大鼠CTGF、TGF-β1、α-SMA蛋白的表达逐渐增多（F=55.44、16.22、121.12,P<0.05）。对照组肝组织中,CTGF、TGF-β1、α-SMA的mRNA仅有少量表达;模型组在照射2、4和6个月CTGF、TGF-β1、α-SMA的 mRNA均逐渐升高（F=177.11、133.85、217.46,P<0.05）。相关性分析表明,大鼠肝组织中CTGF与α-SMA、TGF-β1与α-SMA均存在正相关（r=0.638、0.715,P<0.05）。结论：CTGF的表达随着肝纤维化程度的加重而升高,在放射性肝纤维化过程中CTGF可能参与了激活TGF-β信号通路,从而促进HSC的活化与增殖。     

水芹总酚酸抗四氯化碳所致肝纤维化作用的实验研究

目的探讨水芹总酚酸对四氯化碳所致大鼠慢性肝纤维化模型的保肝和抗肝纤维化作用及其可能机制。方法采用四氯化碳复制慢性肝损伤动物模型（40%四氯化碳橄榄油溶液,皮下注射,首次剂量按0.5ml/100g,以后按0.3ml/100g体质量,3天1次,共42d）。自造模之日开始,灌胃给药,1次/d,连续42d。末次给药后禁食24h,取大鼠血和肝脏,检测血清肝功能（ALT、AST、ALB、ALP、TP、ChE、LDH）指标、肝纤维化指标（HA、LN、Ⅲ-C、Ⅳ-C）和肝组织中SOD活力与MDA含量及免疫组化法测α-SMA、TGF-β1、TIMP-1的表达量和光镜下观察肝脏组织学变化。结果模型组大鼠有明显肝损伤和慢性纤维化表现;各给药组肝功能和肝纤维化均有不同程度的改善,病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度均较模型组明显减轻。结论水芹总酚酸对慢性肝纤维化大鼠具有明显的保肝和抗纤维化作用,其机制可能与清除自由基和抗氧化作用以及抑制肝星状细胞的活化有关。     

软肝胶囊对四氯化碳所致慢性肝纤维化大鼠的肝保护作用

目的验证软肝胶囊对四氯化碳(CCl4)所致大鼠慢性肝纤维化模型的肝保护作用及抗纤维化作用。方法模型组及各给药组首次皮下注射40%CC145ml/kg,以后每3d注射1次40%CCl43ml/kg,正常对照组给予等容积橄榄油,持续9周,给药自造模之日开始。结果四氯化碳所致慢性肝纤维化大鼠有明显肝损伤及慢性纤维化的表现,软肝胶囊三个剂量组肝功能指标均有不同程度的改善;1.4,2.8g/kg组肝组织胶原蛋白含量较模型组均明显降低;0.7g/kg组HA的值较模型组显著降低;病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度均较模型组明显减轻。结论软肝胶囊对慢性肝纤维化大鼠具有肝保护作用及抗肝纤维化作用。     

PFD对二甲基亚硝胺诱导的大鼠肝纤维化治疗疗效和CTGF表达的影响

目的观察不同剂量PFD对二甲基亚硝胺（Dimethylnitrosamine DMN）诱导大鼠肝纤维化的治疗作用和CTGF表达的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法健康雄性Wistar大鼠105只随机分为正常组21只,给予生理盐水10 mg/kg体重腹腔内注射,每周前三天连续给药,1次/日,连续注射3周;造模组84只,给予1%DMN溶液10 mg/kg体重腹腔注射,每周前三天连续给药,1次/日,连续注射3周。两周末将造模组随机分为4组,每组21只,分别是：模型组、IFN-α治疗组、PFD 120 mg、PFD 240 mg治疗组。各组大鼠均于造模第3周第一天给予药物治疗,每周七天,1次/日,治疗共4周。各组给药剂量及方法如下：正常组、模型组予以0.5%CMCNa 6 m L/kg灌胃;PFD不同剂量组予以相应剂量PFD灌胃;IFN-α组予以IFN-α10万单位/只,皮下注射。治疗四周后处死所有大鼠,留取肝组织行Masson染色,免疫组织化学法测Ⅰ型胶原,CTGF表达。结果 （1）Masson染色SSS半定量评分,模型组与正常组比较显著升高（P〈0.05）。IFN-α组、PFD组SSS半定量评分较模型组显著降低（P〈0.05）。免疫组化法检测肝组织Ⅰ型胶原的表达,模型组与正常组比较显著升高（P〈0.05）,PFD组与模型组比较显著降低（P〈0.05）,IFN-α组与模型组比较无统计学差异（P〉0.05）,（2）免疫组化法检测肝组织CTGF的表达,模型组与正常组比较显著升高（P〈0.05）。PFD 120 mg、PFD 240 mg各组与模型组比较显著降低（P〈0.05）。结论 （1）PFD具有治疗DMN诱导的大鼠肝纤维化的作用,与α-IFN无明显差别。（2）PFD抗DMN诱导大鼠肝纤维化的作用机制可能与下调CTGF的表达,抑制促纤维化因子有关。     

苦参素抗大鼠肝纤维化作用的实验研究

目的　研究苦参素对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织Smad基因表达的影响。方法　 90只SD大鼠分为 3组 ,正常对照组 (C组 )、模型组 (M组 )和苦参素干预组 (T组 )。以CCl4皮下注射法诱导大鼠肝纤维化 ,干预组大鼠在造模的同时给予苦参素注射液腹腔注射 ,正常对照组给予液体石蜡皮下注射和生理盐水腹腔注射 ,8周实验结束时处死动物。酶联免疫吸附法检测血清TGFβ1水平 ,HE和Masson染色观察大鼠肝组织病理学变化和胶原沉积 ,免疫组化法检测Smad3基因表达情况。结果　苦参素干预组大鼠血清TGFβ1水平下降 (32 .6 5± 8.71)vs(96 .37± 16 .5 4 )mg/L ,P <0 .0 5 ) ,肝组织组织学积分 (1.9± 0 .3vs3.6± 0 .8,P <0 .0 5 )和胶原面积 ((94 .4 1± 37.2 6 )vs(6 90 .86± 188.71) μm2 ,P <0 .0 5 )明显减少 ;Smad3蛋白表达阳性率减少 ((2 .33± 1.6 4 )vs(9.5 6± 1.34) % ,P <0 .0 5 )。结论　苦参素干预性治疗能够有效地减少大鼠肝组织胶原沉积 ,使其血清TGFβ1水平下降 ,并抑制Smad3基因表达 ,干扰TGFβ介导的肝纤维化信号转导     

复方红景天干预大鼠胶原合成机制的初步探讨

目的 从分子水平初步探讨复方红景天干预大鼠肝纤维化可能的机制,为进一步研究开发红景天制剂提供理论依据。方法 用四氯化碳皮下注射法诱导SD大鼠肝纤维化模型,同时给予复方红景天颗粒口服进行干预性治疗,观察复方红景天对大鼠肝组织TGFβ1、Ⅰ型前胶原mRNA表达水平的影响。结果 口服复方红景天可能通过抑制大鼠肝组织TGFβ1、Ⅰ型前胶原mRNA的表达。结论 复方红景天可能通过抑制TGFβ1、Ⅰ型前胶原MRNA表达,从而减少胶原合成等机制有效干预CCl_4诱导的大鼠肝纤维化,值得深入研究。     

肝脏原位注射新生大鼠肝细胞构建的工程化肝组织对大鼠肝纤维化的影响

目的观察原位注射新生大鼠肝细胞构建的工程化肝组织对实验性肝纤维化大鼠血清和肝组织学的影响,探讨其抗肝纤维化的作用。方法用四氯化碳制成实验性肝纤维化造模大鼠,肝脏原位多点注射工程化肝组织,3周后测定血清肝功能并行肝组织学检查。结果原位注射组大鼠肝功能较单纯假手术组大鼠有改善,且具有显著差异（P〈0．05）,HE染色提示纤维化明显改善。结论肝脏原位多点注射新生大鼠肝细胞的工程化肝组织能改善大鼠肝纤维化进程,有一定抗肝纤维化作用。     

复方硫磺软肝丸抗慢性肝纤维化作用研究

目的探讨复方硫磺软肝丸对改良方法所致大鼠慢性肝纤维化模型的保肝及抗纤维化作用。方法采用配方饲料加腹腔注射CCl4橄榄油溶液的改良方法复制大鼠慢性肝纤维化模型。造模结束后,灌胃给药,每天2次,连续给药1 个月。末次给药后禁食12 h,留取大鼠血清及肝组织,检测血清中转氨酶（ALT、AST）指标、血清肝纤维化（HA、LN、Col-Ⅳ）指 标的变化,观察肝组织病理切片的变化。结果模型组大鼠有明显的肝损伤及肝纤维化病变;各给药组肝功能和肝纤维化程 度均有不同程度的改善,病理组织学检查结果表明其肝脏病变程度较模型组明显减轻（P〈0.05）。结论复方硫磺软肝丸 对慢性肝纤维化大鼠有明显的保肝及抗肝纤维化作用。     

Assessment of diffusion-weighted MR imaging in liver fibrosis

PURPOSE: To assess whether hepatic fibrosis is associated with a restriction in the diffusion of water that can be analyzed with diffusion-weighted MR imaging (DWI) of the liver. MATERIALS AND METHODS: DWI was performed in 10 normal rats and 15 rats with liver fibrosis. Echo-planar DWI was performed in the living rats at 1.5 T and repeated immediately after the animals were killed. Afterwards the livers were explanted, fixed in Bouin solution, and imaged with a DW spin-echo sequence at 4.7 T. Fibrosis was quantified by densitometry on Sirius red-stained histological sections. RESULTS: In living rats the apparent diffusion coefficient (ADC) decreased with the severity of liver fibrosis (controls: 1535 +/- 294 mm(2)/second; CCl(4) (5 weeks) 1129 +/- 273 mm(2)/second; CCl(4) (9 weeks): 943 +/- 132 mm(2)/second; P = 0.002). An inverse correlation between ADC and liver fibrosis volume density was observed (r = -0.712, P < 0.001). In contrast, these findings were not observed in the rats after they were killed or in the fixated livers. CONCLUSION: Decreased ADC correlated with increased liver fibrosis in living rats, but not after death. These results suggest that restricted water diffusion cannot be assessed by DWI in liver fibrosis. Other factors, such as a decrease of perfusion, may explain the decrease of the hepatic ADC measured in vivo in rats with liver fibrosis.     

四氯化碳致肝纤维化动物模型实验条件的优化

目的优化四氯化碳（carbon tetrachloride,CCl4）肝纤维化动物模型的造模方法。方法对肝纤维化模型从CCl4剂量、造模途径和动物种属等方面进行优化。造模剂量优化时采用昆明小鼠,腹腔注射CCl40.5、0.75、1.0ml/kg,2次/周,共8周,于第9周开始停止注射CCl4,观察至第12周;造模方式优化时采用ICR小鼠,CCl4腹腔注射或灌胃,2次/周,共12周;动物种属优化时,选择ICR小鼠和SD大鼠,CCl4灌胃,2次/周,共12周。行苏木精-伊红染色和马松三色染色观察动物的肝脏病理学改变。结果选用不同剂量的CCl4腹腔注射后,在第10周,0.5ml/kgCCl4造模仅在汇管区形成纤维化,0.75ml/kgCCl4则形成了纤维间隔,而1ml/kgCCl4造模可以形成早期肝硬化,提示适当的CCl4剂量为1ml/kg。灌胃和腹腔注射的方式均能导致明显的肝纤维化,其中灌胃方式死亡率在10%以下,而腹腔注射方式造模死亡率在80%以上,提示灌胃造模动物耐受性较好。应用CCl4后,大鼠和小鼠肝纤维化的各指标变化趋势一致,大鼠变化更为明显。结论 CCl4致肝纤维化模型的建立宜采用1ml/kgCCl4灌胃的方法,可根据实验目的选用不同种属的动物。     

血小板活化因子与大鼠肝脏病变的关系及银杏制剂的治疗作用

目的探讨血小板活化因子（PAF）与实验大鼠肝脏病变的关系及银杏制剂的治疗作用。方法将实验用Wistar大鼠60只,随机分成正常对照组（12只）、肝纤维化模型组（16只）、银杏制剂低剂量治疗组（16只）及银杏制剂高剂量治疗组（16只）4组。除正常对照组外,余3组应用CCl4皮下注射造模,2次/w,共12 w。正常对照组及模型组每日用生理盐水灌胃,而治疗组则每日用银杏制剂灌胃。12 w后,将全部大鼠处死,留取血清、肝组织,测定肝功能（ALT、ALB）、血清PAF及各种肝纤维化指标（HA、PⅢP、C-Ⅳ、LN）,同时行组织病理学检查,并行胶原纤维增生程度半定量分析。结果模型组与正常对照组比较,除白蛋白降低外,血清PAF、ALT及各种肝纤维化指标均升高;各治疗组与模型组间比较,除白蛋白升高外,余各项指标均下降,同时肝脏炎症及肝纤维化程度减轻,上述指标差异均有统计学意义。结论 PAF与肝脏损伤及肝脏纤维化的发生有明显关系,PAF拮抗剂——银杏制剂有明显抑制和逆转肝纤维化的作用。     

Hepatic viscoelastic parameters measured with MR elastography: correlations with quantitative analysis of liver fibrosis in the rat

PURPOSE: To determine the correlations between the viscoelastic parameters of the liver measured with in vivo MR elastography and quantitative analysis of liver fibrosis. MATERIALS AND METHODS: MR elastography of the liver was performed in 10 rats with hepatic fibrosis induced by intraperitoneal carbon tetrachloride (CCl(4)) injections and five normal rats. Longitudinal waves of 200 MHz were transmitted into the liver with a mechanical transducer. Wave propagation into the liver was analyzed with a phase-locked spin-echo sequence at 1.5 T. The viscoelastic parameters, obtained with the Voigt model, were correlated with automatic image analysis of the fibrotic areas and with analysis of the hydroxyproline content of the liver. RESULTS: Substantial correlations were observed between the shear viscoelastic parameters and the percentage of fibrosis at automatic image analysis (r = 0.7, P = 0.005 for the elasticity, and r = 0.8, P = 0.001 for the viscosity) and moderate correlations were seen between the shear viscoelastic parameters and the hydroxyproline content (r = 0.6, P = 0.016 for the elasticity and r = 0.5, P = 0.041 for the viscosity). CONCLUSION: The viscoelastic parameters of the liver measured with in vivo MR elastography correlate with quantitative analysis of liver fibrosis. These results suggest that MR elastography is a promising noninvasive method to quantify liver fibrosis.     

重组人肝再生增强因子可预防免疫损伤性肝纤维化的形成

观察重组人肝再生增强因子（ｒｈＡＬＲ）对免疫 务性肝纤维化的预防作用。建立人血白蛋白免疫损伤性大鼠肝纤维化模型。在造模的同时子ｒｈＡＬＲ腹腔注射。观察大鼠存活率,观察大鼠存活率,血清ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平,肝组织胶原蛋白含量及肝脏病理学改变。结果：ｒｈＡＬＲ可提高人血白蛋白损伤生肝纤维化大鼠存活率氏肝纤维化大 ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＬＤＨ水平,病理检查显示ｒｈＡＬＲ有明显减轻大鼠肝纤维化形成的作用;     

黄蜀葵花黄酮成分F-6对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的观察黄蜀葵花黄酮成分F-6对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法实验分为6组:空白对照组、四氯化碳模型组、联苯双酯阳性对照组、F-6低、中、高剂量组。连续给药7 d后,用四氯化碳制备小鼠急性肝损伤模型。测定各组小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性,测定肝组织匀浆中丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性;HE染色观察肝组织病理形态学的改变。结果 F-6能显著降低四氯化碳所致肝损伤小鼠血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性及肝组织中丙二醛含量,提高超氧化物歧化酶活性;F-6能减轻四氯化碳引起小鼠肝、脾肿大程度;F-6治疗组小鼠肝组织受损程度显著减轻。结论 F-6对四氯化碳所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用,其保肝降酶作用显著,其机制可能与清除自由基、抑制脂质过氧化反应有关。     

芍药苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用和机制研究

目的探讨芍药苷对大鼠放射性肝纤维化的保护作用及机制。方法建立雄性SD大鼠放射性肝纤维化实验动物模型,将大鼠随机分为正常对照组、模型组、芍药苷治疗组(20、40、80 mg·kg-1),每组10只。除正常对照组外,其余各组均制备成放射性肝纤维化模型,造模后各组每天给予相应药物灌胃。于照射后第26周末处死大鼠,检测大鼠血清中AST、ALT的活性,ELISA法测血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量;光镜下观察肝脏HE染色、MASSON染色病理改变;碱水法检测大鼠肝脏组织中羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组化法测肝脏组织TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达情况。结果与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏损伤和胶原纤维增生明显,其血清中AST、ALT活性明显升高,血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN含量明显增加,大鼠肝脏组织中Hyp含量增加,另外大鼠肝脏组织中TGF-β1、Smad3/4/7蛋白表达增加。与模型组比较,芍药苷治疗组可明显抑制大鼠血清中AST、ALT活性的升高,降低血清中TGF-β1、HA、PC-Ⅲ、LN的含量,降低肝脏组织中Hyp含量,减轻肝脏损伤程度及胶原纤维增生程度;芍药苷治疗组可减少大鼠肝脏组织中TGF-β1和Smad3/4/7蛋白表达。结论芍药苷具有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与其阻断TGF-β1/Smad信号传导通路有关。     

灵五颗粒对四氯化碳致小鼠肝损伤的保护作用

目的观察灵五颗粒对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 108只小鼠随机分为正常组、四氯化碳模型组、灵五颗粒低、中、高(2.5、5.0、10 g/kg)剂量组和阳性药联苯双酯(0.15 g/kg)组。除正常组、四氯化碳模型组给予生理氯化钠溶液外,给药各组均分别给药7 d,于末次给药1 h后,各组小鼠(正常组除外)分别腹腔注射0.12%四氯化碳橄榄油溶液,造成急性肝损伤,在中毒后16 h取血和肝脏,分别检测各组动物肝功能等指标,并做肝脏病理组织学检查。结果四氯化碳模型组小鼠肝功能明显异常,谷丙转氨酶、谷草转氨酶显著升高,病理性观察肝组织变性、坏死严重;肝、脾肿大明显。灵五颗粒中、高剂量组小鼠血清中谷丙转氨酶的水平均非常显著低于模型组,并呈良好的剂量依赖性。高剂量组小鼠血清中谷草转氨酶的水平显著低于模型组,并显著降低肝损伤小鼠血清丙二醛的含量,显著升高超氧化物歧化酶活力和谷胱甘肽含量。结论灵五颗粒对四氯化碳致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与清除过氧化产物丙二醛,升高超氧化物歧化酶活力有关。