塞来昔布对人肺腺癌细胞株A549的放射增敏效应及细胞迁移力的影响

目的 观察选择性COX-2抑制剂塞来昔布(celecoxib)对人肺腺癌细胞株A549的放射增敏效应及抑制细胞迁移力的作用。方法 选用人肺腺癌细胞株A549作为研究对象。选择适当浓度的塞来昔布,设置对照组、药物组、单纯放射组和放射加药组,成克隆分析法测定塞来昔布对细胞的放射增敏效应,细胞划痕试验观察A549细胞的迁移力,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2的含量。结果 细胞划痕试验结果显示,放射加药组比单纯放射组和药物组的无细胞划痕区均增宽,细胞迁移力均明显下降,且随着药物浓度的增加,抑制细胞迁移的能力增强。30和50 μmol/L 塞来昔布对A549细胞显示出浓度依赖性放射增敏作用,放射加药与单纯放射组相比, SF₂、D₀、D\-q出现不同程度的下调。ELISA检测发现,细胞培养上清液中MMP-2的含量,药物组较对照组,放射加药组较单纯放射组均明显下降(t=3.78、5.79,P<0.05),但单纯放射组和对照组对细胞分泌MMP-2的抑制效应不明显(t=2.73、2.38,P>0.05)。结论 塞来昔布在体外试验中对肺腺癌细胞株A549具有浓度依赖性放射敏感性,机制可能为降低了细胞对放射的亚致死损伤修复能力。塞来昔布可能通过抑制A549细胞分泌MMP-2,从而抑制细胞的迁移能力。     

血管内皮抑素联合照射对肺癌H-520细胞周期及信号传导通路的影响

目的 探讨血管内皮抑素对肺鳞癌细胞系H-520细胞放射增敏作用的机制。 方法 重组人血管内皮抑素联合⁶⁰Co γ线作用于H-520细胞后,集落形成实验检测重组人血管内皮抑素对H-520细胞的放射增敏作用;流式细胞术检测细胞周期变化及磷酸化p38-MAPK蛋白的表达水平;RT-PCR检测周期相关基因cyclin D1、cdk2、cdk4及凋亡相关基因survivin的表达情况;Western-blotting检测磷酸化Akt蛋白表达情况。结果 血管内皮抑素可以增加细胞对⁶⁰Co γ射线的放射敏感性,联合组D₀、D_q、N、D₁₀、 SF₂较照射组低,放射增敏比为1.45;200 μg/ml血管内皮抑素处理后H-520细胞发生G₀/G₁期阻滞,周期相关基因cyclin D1、cdk2、cdk4及凋亡相关基因survivin表达下降;血管内皮抑素联合照射后磷酸化p38-MAPK蛋白及磷酸化Akt蛋白表达下降。结论 血管内皮抑素可能通过抑制H-520细胞增殖,诱导细胞发生G₀/G₁期阻滞,促进细胞凋亡及阻断p38-MAPK和PI3K/Akt信号通路传导,发挥放射增敏作用。     

西妥昔单抗对人食管癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R放射敏感性的研究

目的 观察西妥昔单抗(C225)对人食管鳞癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R的影响。方法 分次照射建立人食管鳞癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R;相差显微镜下观察细胞的形态学差异;G显带法进行染色体分析;克隆形成实验验证KYSE-150和KYSE-150R细胞的不同放射敏感性;采用不同浓度的C225处理KYSE-150R细胞,研究对KYSE-150R细胞放射敏感性的影响。结果 KYSE-150R细胞的群体倍增时间为(25.9±0.6)h,长于亲代细胞的KYSE-150(23.6±0.2) h(t=6.6,P＜0.01);KYSE-150R细胞的染色体数目由69.3±1.9 增加到73.7±1.2(t=-8.83,P<0.01),并且观察到有染色体畸变;KYSE-150R细胞SF₂、D₀、D_q及N 值均高于KYSE-150细胞, 加入5 μg/ml的C225后,其SF₂、D₀、D_q、N与单纯照射组KYSE-150R细胞相比有显著降低;加入C225后KYSE-150R细胞G₀/G₁、G₂/M期比例增加,S期比例减少(t=-4.478~4.308, P<0.05)。结论 C225对人食管鳞癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R有放射增敏作用。     

肺癌A549放射抗拒细胞亚系的建立及抗拒机制的研究

目的 建立肺癌细胞系A549的放射抗拒模型并探讨放射抗拒的机制。方法 应用两种方案对非小细胞肺癌A549细胞系进行X射线照射:一组照射5次,每次剂量600 cGy;另一组照射15次,每次剂量200 cGy。照射完成后对存活细胞单克隆化分别命名为A549-S1和A549-S2,采用克隆形成实验测定两种细胞亚系及亲本A549细胞的放射敏感性,流式细胞术检测细胞周期特征,RT-PCR和Western blot分别测定3种细胞Notch1的表达。结果 与亲本A549细胞相比,A549-S1细胞显示出明显放射抗性,D₀、D_q及N值增大,细胞存活曲线肩区增宽,在SF₂水平上,放射抗性是A549的1.38倍,细胞的S期比例较A549细胞明显增高, G₀/G₁期比例下降(P<0.05),Notch1的表达较A549细胞明显增强。而A549-S2的放射敏感性与亲本细胞相比稍增强,D₀、D_q及N值均减小,细胞存活曲线肩区变窄,在SF₂水平上,放射抗性是A549细胞的0.84倍,细胞S期、G₀/G₁期比例较A549细胞减少,而G₂/M期比例明显增加(P<0.05),Notch1表达与亲本A549细胞相比无明显变化。结论 A549细胞亚系放射抗拒的形成与不同照射方案有一定关系,得出的放射抗拒细胞亚系显示出与亲本不同的细胞周期特征,而细胞特征的变化可能与Notch1的表达增强有关。     

沙利度胺对食管癌TE1细胞DNA合成抑制作用和辐射敏感性的影响

目的 探讨不同浓度沙利度胺联合X线照射对食管癌TE1细胞放射敏感性的影响。方法 采用细胞划痕实验检测沙利度胺对细胞浸润转移能力的影响,H³-TdR掺入法研究沙利度胺单用及联合X射线对TE1细胞DNA合成抑制作用,用克隆形成法研究对TE1细胞辐射敏感性的影响。结果 沙利度胺对食管癌TE1细胞的浸润转移能力、DNA合成、克隆形成均有明显的抑制作用,并随药物浓度的升高而增强。TE1细胞的D₀、D_q、SF₂值随着沙利度胺浓度的增加而减小:沙利度胺100 μg/ml时放射增敏比SER_D0和SER_Dq分别为1.4±0.2和1.5±0.1;150 μg/ml时的放射增敏比分别为1.4±0.2和1.8±0.2。结论 沙利度胺能够抑制TE1细胞的浸润转移、DNA合成能力,显著提高TE1细胞的辐射敏感性。     

对乙酰氨基酚对不同脑胶质瘤细胞的放射增敏作用及其机制研究

目的 探讨对乙酰氨基酚联合放射对人恶性脑胶质瘤细胞2种细胞的放射增敏效应及其可能的机制。 方法 以人恶性脑胶质瘤细胞株SHG-44及其接受10Gy 6MV X射线照射后的存活后代细胞SHG-44_10Gy为研究对象,采用免疫细胞化学和RT-PCR检测2株细胞COX-2的表达,集落形成实验测定对乙酰氨基酚对细胞的放射增敏作用。结果 HG-44_10Gy较SHG-44的放射敏感性低(P<0.01);免疫细胞化学染色SHG-44和SHG-44_10Gy细胞的胞质及胞膜均有COX-2蛋白的表达,且后者明显高于前者;RT-PCR检测SHG-44_10Gy中COX-2 mRNA表达水平明显高于SHG-44细胞,与放射敏感性有显著的相关性(r=0.976,P<0.01);对乙酰氨基酚联合放疗分别作用于SHG-44和SHG-44_10Gy细胞,与单纯照射组相比,显示了放射增敏作用,SHG-44细胞D₀值和D_q值增敏比分别为1.09和1.11,SHG-44_10Gy的SER分别为1.12和3.01。结论 人恶性脑胶质瘤细胞株SHG-44及其照射存活后代细胞均有COX-2表达,且对辐射耐受的存活后代细胞中COX-2明显增高;对乙酰氨基酚可通过抑制COX-2的表达增加人脑胶质瘤SHG-44细胞尤其是其照射后代细胞的放射敏感性。     

咖啡酸苯一酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用

目的 探讨咖啡酸苯一酯(CAPE)对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用。方法 将宫颈癌HeLa细胞经不同浓度的CAPE作用24 h,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测细胞抑制效应与CAPE浓度的关系。将HeLa细胞设对照组和药物组,两组均经⁶⁰Coγ射线照射0、2、4、6和8 Gy,计数细胞克隆;另将HeLa细胞设对照组、CAPE组、单纯照射组、照射+CAPE组,流式细胞检测技术分析CAPE对细胞周期的影响。结果 CAPE对HeLa细胞的抑制率呈剂量依赖性增加(F=126.49~3654.88,P<0.01);细胞经⁶⁰Coγ射线照射后,HeLa细胞克隆存活率随着照射剂量的增加而降低(F=174.42~9422.81,P<0.01);相同剂量下,药物组的HeLa细胞克隆存活率低于对照组(F=120.14~251.91,P<0.01);药物组和对照组HeLa细胞的平均致死剂量(D₀)为1.45和1.82 Gy、准阈剂量(D_q)为1.89和3.21 Gy, 药物组较小,放射增敏比(SER)为1.26>1;与对照组相比, CAPE组及单纯照射组G₂/M期的细胞比例升高(P<0.01),而在照射+CAPE组则降低(P<0.01)。结论CAPE通过对人宫颈癌HeLa细胞G₂/M期的阻滞及可能抑制细胞亚致死性损伤修复能力,发挥放射增敏作用。     

重组人血管内皮抑素对食管癌细胞的放射增敏作用及其机制

目的 观察重组人血管内皮抑素(rhES)对食管鳞癌KYSE-150细胞的放射敏感性的影响及其机制的初步探讨。方法 将食管鳞癌KYSE-150细胞分为空白对照组、rhES组、X射线照射组和rhES联合X射线照射组。细胞克隆形成法测定细胞存活分数;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比(SER);流式细胞术检测rhES联合X射线照射对细胞周期及凋亡的影响;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclin B₁、Cyclin D₁、Bcl-2、Bax mRNA表达水平,Western blot检测HIF-1α、VEGF、VEGFR蛋白的表达水平。结果 KYSE-150细胞的D₀、D_q、SF₂值随着rhES浓度的增加逐渐减小,当达到D₀照射剂量时,100和200 μg/ml rhES的放射增敏比分别为1.14、1.27;rhES联合X射线照射组与X射线照射组比较,细胞凋亡率增加、凋亡相关基因bax的表达增加、细胞VEGF蛋白及HIF-1α蛋白的表达水平降低(t=7.97、3.02、117.55、7.22,P<0.05)。结论 rhES对体外食管癌细胞具有明显的辐射增敏作用,其机制与其抑制细胞HIF-1α、VEGF蛋白表达以及对细胞凋亡相关基因bax的表达调控、诱导细胞凋亡密切相关。     

EGFR抑制剂C225对人前列腺癌细胞的放射增敏作用

目的 探讨表皮生长因子抑制剂C225对人前列腺癌细胞株(DU145) 放射敏感性的影响。方法 实验组用表皮生长因子抑制剂C225(100 nmol/L)处理后,⁶⁰Co γ射线(吸收剂量率1.953 Gy/min)对体外培养的DU145细胞进行0、2、4、6 和8 Gy 照射,用MTT法、集落形成法检测细胞增殖和细胞存活率;用单击多靶模型拟合剂量存活曲线;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡。结果 C225对照射后DU145细胞增殖有明显抑制作用。C225组的放射生物学参数值(D₀、D_q、N、SF₂)较对照组低。C225组和对照组的RBE 比值为1.39。C225组处于S期的细胞比例降低,出现明显的G₀/G₁期阻滞。C225组细胞的早期凋亡率在照射剂量达4 Gy后明显高于对照组(t=-14.55,P＜0.05)。结论 表皮生长因子抑制剂C225通过抑制细胞增殖、G₀/G₁ 期阻滞和诱导凋亡来增加人前列腺癌细胞放射敏感性。     

青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用

目的 探讨青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的放射增敏作用。方法 应用⁶⁰Co γ射线照射细胞,吸收剂量率为0.635 Gy/min,照射剂量为0、1、2、4和6 Gy。采用MTT法检测青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用,确定青蒿琥酯的最适实验作用浓度。克隆形成法检测青蒿琥酯对HeLa细胞放射敏感性的影响;采用"多靶单击数学模型"拟合HeLa细胞的剂量-存活曲线,得出平均致死剂量、准阈剂量及放射增敏比,评价其增敏效果。用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡率,进一步检测青蒿琥酯对HeLa细胞的放射增敏性。结果 青蒿琥酯对HeLa细胞的抑制作用随药物浓度的增加而增加,单纯照射1、2、4和6 Gy细胞的克隆形成率分别为91.67%、82.02%、58.60%和25.01%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下克隆形成率分别降低为74.93%、60.53%、22.38%和5.05%;单纯照射组与药物+照射组的平均致死剂量(D₀)分别为2.95和2.07 Gy,准阈剂量(D_q)分别为2.01和1.24 Gy,放射增敏比(SER)为1.43。单纯2和6 Gy照射组细胞凋亡率分别是12.26%和40.08%,加入青蒿琥酯后,相同照射剂量下细胞凋亡率分别上升至22.71%和59.92%。结论 青蒿琥酯对人宫颈癌HeLa细胞的抑制作用成药物浓度依赖性;青蒿琥酯对HeLa细胞具有一定的放射增敏作用。     

七氟醚上调PI3K/Akt/mTOR活性对小鼠心肌缺血再灌注损伤中自噬水平的影响

 目的 从PI3K/Akt/mTOR通路角度,探讨七氟醚对小鼠心肌缺血再灌注损伤中自噬水平的影响。方法 小鼠24只随机分4组(n=6):假手术组,只开胸不结扎;缺血再灌注组,戊巴比妥钠麻醉下结扎冠状动脉左前降支行缺血/再灌注手术;七氟醚组,七氟醚麻醉下手术;七氟醚+LY294002组,术前一周每日注射PI3K阻断剂LY294002,余同七氟醚组。收集血浆检测心肌损伤标志物肌酸激酶-MB(CK-MB)和心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)水平。心肌组织用免疫印迹法检测自噬标志物 LC3、Beclin1,及信号通路磷脂酰肌醇3-磷酸激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素(mTOR) 总蛋白及磷酸化蛋白水平。结果 与假手术组相比,其余3组的血浆CK-MB、cTnI、心肌自噬标志蛋白LC3和Beclin1水平均增高(P<0.05),磷酸化PI3K、Akt、mTOR与总蛋白比值降低(P<0.05)。与假手术组相比,七氟醚组的PI3K、Akt、mTOR总蛋白水平差异无统计学意义;而缺血再灌注组PI3K、Akt水平增高(P<0.05),且mTOR蛋白水平降低(P<0.05);七氟醚+LY294002组PI3K水平增高(P<0.05),且Akt、mTOR蛋白水平降低(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,七氟醚组和七氟醚+LY294002组血浆CK-MB和cTnI、LC3和Beclin1水平均降低(P<0.05)。与缺血再灌注组相比,七氟醚组的磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白与总蛋白比值升高(P<0.05)。与七氟醚组相比,七氟醚+LY294002组血浆CK-MB、cTnI降低,LC3和Beclin1水平均增高(P<0.05);七氟醚+LY294002组的磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白与总蛋白比值均降低(P<0.05)。结论 七氟醚抑制了缺血再灌注引发的过度自噬,可能的机制是上调了PI3K/Akt/mTOR通路蛋白磷酸化水平。     

Ghrelin对骨髓源性内皮祖细胞迁移能力的影响

目的 探讨ghrelin对体外培养的内皮祖细胞(EPCs)迁移能力的影响及相关的信号转导途径.方法 密度梯度离心法获取大鼠骨髓单个核细胞层,接种至纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7～ 10d后观察细胞形态学改变,以免疫组织化学染色法检测Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL),FITC标记的荆豆凝集素1(FITC-UEA-1),以及CD34、CD133、人血管性血友病因子(vWF)和血管内皮细胞生长因子(VEGF)特异的酪氨酸激酶受体(Flk-1),鉴定细胞种类后传代培养.采用不同浓度(10-9～10-6mol/L)的ghrelin干预EPCs后,通过Transwell小室迁移实验检测EPCs迁移能力的变化.用不同浓度(10-9～10-6mol/L)的ghrelin干预EPCs l5min或10-7mol/L的ghrelin干预0～ 60min,Western blotting 检测蛋白激酶B(Akt)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及其磷酸化状态的表达;分别用磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)的特异性抑制剂LY294002和eNOS的特异性抑制剂L-NAME预处理EPCs,检测ghrelin对EPCs迁移及Akt、eNOS及其磷酸化蛋白表达的变化.结果 新分离24h内的EPCs近似圆形,培养第4～7天转化为梭形贴壁细胞,培养至第9天后梭形细胞呈条索样排列生长.Dil-acLDL和FITC-UEA-1双染色阳性,CD34、CD133、vWF和flk-1免疫组织化学染色均呈阳性反应.分别用10-9～10-6mol/L的ghrelin干预内皮祖细胞,发现10-8、10-7mol/L的ghrelin可明显促进内皮祖细胞的迁移(P＜0.001),而更高浓度( 10-6mol/L)的ghrelin则可显著抑制EPCs的迁移(P＜0.05).Ghrelin呈时间和剂量依赖性地促进EPCs表达磷酸化Akt和eNOS;PI3K特异性抑制剂LY294002能明显抑制ghrelin诱导的Akt、eNOS的磷酸化表达(P＜0.05);eNOS的特异性抑制剂L-NAME能明显抑制ghrelin诱导的eNOS磷酸化表达(P＜0.05),但对Akt的磷酸化表达无影响.LY294002和L-NAME均能显著抑制ghrelin诱导的内皮祖细胞迁移(P＜0.05).结论 Ghrelin可通过激活PI3K/Akt/eNOS信号途径促进骨髓源性EPCs迁移,但其效应呈现一定的浓度依赖性.     

GDF11对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞细胞凋亡的影响及其信号机制

 目的 探讨生长分化因子11(GDF11)对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞凋亡的影响及其信号机制。方法 复苏BMSCs并将其分为4组:正常小鼠BMSCs组(Nor),糖尿病小鼠BMSCs组(DB),GDF11干预组(DB+GDF11;GDF11),抑制剂组(DB+GDF11+ LY294002;LY)。各组细胞培养3 d后,台盼蓝染色观察细胞凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和磷酸化(p)-PI3K、p-Akt的表达水平。结果 与正常小鼠BMSCs相比,糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率显著升高[(36.2±3.3)% vs. (3.1±1.1)%,P＜0.05];GDF11可降低糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率[(18.9±1.9)% vs. (36.2±3.3)%,P＜0.05],提高Bcl-2/Bax的蛋白表达比[(1.63±0.10) vs. (0.26±0.09);P＜0.05],同时激活PI3K[p-PI3K/PI3K:(0.98±0.08) vs. (0.42±0.11);P＜0.05]/Akt[p-Akt/Akt:(0.94±0.10) vs. (0.32±0.15);P＜0.05]信号通路。而且,当抑制PI3K/Akt信号通路后,GDF11抑制糖尿病小鼠BMSCs凋亡的作用明显减弱[细胞凋亡率:(41.1±3.9)% vs. (18.9±1.9)%,P＜0.05]。结论 GDF11可通过激活PI3K/Ak信号通路抑制糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡。     

京尼平苷调节胰腺β细胞增殖的细胞信号机制研究

目的考察京尼平苷（Gen）对胰腺β细胞增殖的影响及其细胞信号转导机制。方法将INS-1细胞（一种胰腺β细胞）用Gen处理一定时间之后,用MTT方法测定活细胞的数量,用BrdU标记的方法分析细胞增殖的情况,Western印迹分析Gen对于细胞增殖相关的Akt和FoxO1磷酸化的影响。结果Gen处理INS-1细胞可将活细胞数量提高45%（P〈0.01）,并且BrdU标记的阳性细胞数量明显增加（P〈0.01）。另外,Gen还能显著上调INS-1细胞中Akt308丝氨酸位点和叉头转录因子FoxO1的磷酸化（P〈0.01）,而且这种作用可被PI3K的抑制剂LY294002阻断。结论Gen能够促进胰腺β细胞增殖,而且这种作用可能与其激活PI3K激酶途径、增强FoxO1的磷酸化有关。     

塞来昔布对肝癌细胞放疗增敏作用研究

目的：探讨塞来昔布（celecoxib）对肝癌细胞放疗增敏作用。方法：用Western blot法检测COX-2在肝癌细胞HepG2中的表达;运用克隆形成试验检测单纯射线照射组和射线联合celecoxib组在不同放射剂量下的细胞存活率,制作细胞生存曲线,比较两组间的放疗敏感性;以流式细胞术检测射线处理后细胞周期变化情况。结果：COX2在肝癌细胞中明显高表达,较正常细胞差异有统计学意义,celecoxib能明显下调COX2的表达。射线联合celecoxib组的细胞存活率、放疗敏感性指标Do、Dq、SF2较单纯射线处理组明显降低,联合组HepG2细胞停滞在G1期者明显增多,而S1期细胞则明显减少,差异有统计学意义。结论：celecoxib能增加肝癌HepG2细胞的放疗敏感性,其机制与celecoxib通过特异性抑制COX-2以影响肝癌细胞亚致死性放射损伤修复和调节细胞周期有关。     

阻断PI3K信号通路显著抑制成骨前体细胞MC3T3-E1的分化

目的：研究PI3K信号通路对成骨前体细胞MC3T3-E1分化的调控作用。方法：首先通过Western印迹试验检测到PI3K信号通路参与成骨细胞分化的调控。应用PI3K激酶的特异性抑制剂LY294002药物阻断PI3K信号通路的活化，通过碱性磷酸酶(ALP)和von Kossa染色观察成骨前体细胞MC3T3-E1分化的改变。结果：Western印迹试验显示，成骨细胞分化过程中PI3K信号通路明显活化。阻断该信号通路的活化显著抑制成骨细胞碱性磷酸酶的活性，同时降低成骨细胞体外形成骨结节结构的能力。结论：PI3K信号通路参与了成骨细胞分化的调控，而这种调控作用是成骨细胞分化所必需的。     

PI3K/Akt与胶质瘤辐射抗性

恶性脑胶质瘤的术后治疗是患者预后生存期延长的关键,如何提高肿瘤组织的辐射敏感性,增强正常组织的辐射抗性是当前肿瘤放射生物学及临床放疗研究的热点。研究资料表明,PI3K/Akt抗细胞凋亡通路的激活提高了部分细胞的辐射抗性,特别在表皮细胞受紫外线照射的研究中提示,辐射产生的活性氧可能是该通路激活的原因之一;电离辐射可能诱导相关的细胞因子通过激活PI3K/Akt通路介导胶质瘤细胞的辐射抗性;PI3K及其相关酶可能通过DNA修复途径发挥抗辐射作用。PI3K/Akt通路的研究可为放射治疗胶质瘤提供新型的增敏药。     

Influence and mechanism of 5-aminolevulinic acid-photodynamic therapy on the metastasis of esophageal carcinoma

BackgroudPhotodynamic therapy (PDT) for the treatment of esophageal cancer was more and more popularly used since it was approved for the treatment of advanced esophageal cancer in 1996. It has been reported to influence the tumor growth and metastasis via a variety of signaling pathways, but its mechanism remains to be further studied. This research studied the effects of ALA-PDT on esophageal carcinoma in vitro and in vivo, discovering its molecular regulating mechanism and the way to enhence the PDT effect.MethodsEca-109 cells were incubated with a medium containing EGFR tyrphostin AG1478 or PI3K inhibitor LY294002, then with ALA, and the cells were irradiated with the laser 6 h later. The cell viability was measured with MTT assay, and the migration ability was detected by transwell experiments 24 h post-ALA-PDT. The gene and protein expression on EGFR/PI3K/AKT signaling pathway was analyzed by realtime PCR and Western blotting respectively. Then, RFP-Eca-109 burdened nude mice model was constructed, and were treated with ALA-PDT when the tumor volume reached 150–350 mm³. The gene and protein expression were analyzed 24 h and 50 days post-ALA-PDT.ResultsOur study showed that ALA-PDT respectively combined with AG1478, LY294002 could synergistically reduce the growth and migration ability of the Eca-109 cells in vitro and significantly down-regulate the protein expression of EGFR/PI3K and PI3K/AKT, meanwhile, significantly down-regulate the gene expression of EGFR when combining with AG1478. Forthermore, ALA-PDT could significantly decrease the tumor growth and metastasis and down-regulate the gene expression of EGFR and the protein expression of EGFR and PI3K in the tumor of mice.ConclusionThis study revealed a molecular mechanism of ALA-PDT and developed a new modality application of therapy, by combining ALA-PDT with small molecular inhibitors, for better effect in the clinical practice of esophageal carcinoma.     

选择性COX-2抑制剂celecoxib对子宫肌瘤细胞的增殖抑制及其分子机制

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）选择性抑制剂塞来昔布（celecoxib）对子宫肌瘤细胞的增殖抑制作用和分子机制。方法给予原代培养的子宫肌瘤细胞不同浓度的celecoxib处理,MTT法测定细胞生长抑制率;半定量RT-PCR法检测子宫肌瘤细胞Wnt信号通路的关键基因Wnt5b、β-catenin、c-myc的表达及塞来昔布对子宫肌瘤细胞增殖活化的影响。结果塞来昔布可显著抑制体外培养的人子宫肌瘤细胞增殖,随着药物剂量的增加和时间的延长,子宫肌瘤细胞的增殖和活化明显抑制,呈剂量和时间依赖性,而这种作用是通过抑制Wnt信号通路实现的。结论子宫肌瘤细胞中存在Wnt信号通路且celecoxib在体外能抑制此通路活化,从而抑制肌瘤细胞的增殖。