血管内皮生长因子转基因治疗小鼠辐射损伤的实验研究

目的 通过构建血管内皮生长因子(VEGF)基因的真核表达质粒,并将其转入受照小鼠机体,研究VEGF蛋白表达对放射损伤的救治作用及其分子机制。方法 昆明种小鼠通过随机化分组表法随机分为正常对照组、单纯照射组和转基因组。转基因组应用VEGF重组质粒进行肌肉注射,注射后24 h接受8 Gy X射线照射,进行小鼠临床表现和死亡率观察。并于照后不同时间处死动物,进行组织器官病理学和原位胸腺和脾细胞凋亡检测。结果 用PCR方法从pSP73/H_VEGF165质粒扩增得到VEGF₁₆₅基因片段,经双酶切后与酶切的pcDNA3.1载体连接,构建重组质粒pcDNA3.1/ VEGF₁₆₅,经电泳和测序表明序列与GeneBank完全一致。X射线8 Gy照射小鼠,单纯照射组14 d内死亡率为64%,而转基因组为36%,两组比较差异有统计学意义(t=3.92,P＜0.05)。转基因组小鼠胸腺和脾组织的细胞凋亡率显著降低(t=3.11、3.53,P＜0.05),放射病理损伤明显改善。结论 成功构建了重组质粒pcDNA3.1/ VEGF₁₆₅,重组质粒转基因治疗可显著降低严重辐射损伤小鼠的死亡率,显著减低胸腺和脾脏细胞凋亡率,明显改善免疫器官的病理变化。     

溴酮醚对急性放射病犬的治疗效果

溴酮醚雌活力较低,副作用小。按1.25～2.5毫克/公斤体重照后6小时一次肌注,对300拉德照射犬有一定疗效。与银耳制剂合用,有明显的相加作用,可提高300和320拉德照射犬活存率72.9%和70%,两者与抗感染药物相伍用,也有明显的叠加作用,初步发现也可提高400拉德照射犬的活存率(5/7)。溴酮醚对照射犬睾丸组织的修复有暂时的抑制作用,后期却有利于其恢复.     

培养小鼠骨髓细胞半同系移植研究的补充材料

用体外培养不同时间的C57BL/6雄性小鼠骨髓细胞移植到受致死剂量γ线照射的DBF_1雌性小鼠,记录受照射小鼠30天和60天的活存率,并分析造血和免疫功能的主要指标.对部分长期活存小鼠(60～110天)的骨髓细胞和淋巴细胞的染色体核型作细致观察,了解移植进去的造血细胞是否已被植入,结果表明移植培养骨髓细胞的受照射小鼠活存率远较照射对照组为高,造血与免疫功能明显地重建,这无疑是由于移植骨髓在照射动物中形成稳定的辐射嵌合体所致.     

信号因子对辐射诱导胸腺淋巴细胞凋亡的影响

目的　观察信号因子皮质酮 (CS)、cAMP、cGMP、Ca2 和蛋白激酶C(PKC)对体外 4GyX射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡的影响。方法　应用荧光发光分光光度仪检测胸腺淋巴细胞DNA裂解率。结果　 2～ 8Gy照射后 4～ 8h ,胸腺淋巴细胞DNA裂解率均明显高于对照组 (P <0 0 1)。与对照组比较 ,加入 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 0 5～ 0 4 μg mlCa2 结合载体离子霉素(Iono)和 0 0 5～ 0 4ng mlPKC激活剂豆蔻酰佛波醇乙酯 (PMA)均明显增加淋巴细胞DNA裂解率 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而加入 5 0ng mlcGMP与对照组比较 ,无明显作用。对 0 0 1μmol LCS、5 0ng mlcAMP、0 2和 0 4 μg mlIono及 0 2和 0 4ng mlPMA分别加 4Gy照射 ,其DNA裂解率均明显高于单纯 4Gy照射组 ,P <0 0 5或 <0 0 1,而 5 0ng mlcGMP加 4Gy照射与单纯 4Gy照射组比较无明显差异。结论　在一定剂量范围内 ,信号因子CS、cAMP、Ca2 和PKC对大剂量X射线照射诱导小鼠胸腺淋巴细胞凋亡具有促进作用     

小牛胸腺素F5对小鼠骨髓造血干细胞辐射损伤的防护作用

小鼠受200～100拉德γ线一次全身照射后连续7天注射胸腺素F₅50微克一天,测定多向性造血干细胞(CFU-S),实验组D₀值为300拉德,对照组为150拉德,根据D₃₇求得的剂量递减系数为2,表明胸腺素对CFU-S有保护作用。小鼠一次全身照射100～400拉德后,骨髓细胞经胸腺素1微克/平皿体外培养48小时,其粒系造血干细胞(CFU-S)存活率高于对照组,说明胸腺素对CFU-S有一定保护作用。如在照射上述剂量后,注射胸腺素140微克/天,连续7天,其CFU-S存活率比对照组明显增高,说明胸腺素对CFU-S有促进增殖、分化,即一定的治疗效果。如给小鼠注射胸腺素100微克/天连续7天后,经125拉德照射,CFU-S的活存率比对照组明显提高;但当剂量增人到375及625拉德时,未见有保护作用。     

EGFR抗体对持续低剂量率照射CL187细胞的放射增敏研究

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)抗体对放射性¹²⁵I粒子持续低剂量率照射大肠癌细胞CL187的增敏作用。方法 采用CL187大肠癌细胞系体外培养,实验分空白对照组、单纯抗体组、单纯照射组、照射加不同浓度抗体组。用克隆形成方法评价不同处理方式对CL187细胞的杀伤效应。应用流式细胞仪检测细胞凋亡和周期的改变。结果 EGFR与射线联合作用细胞存活分数较单纯照射组明显下降(P<0.05)。EGFR抗体浓度2、5、10 nmol/L时增敏比分别为1.34、1.59、2.08。持续低剂量率照射4 Gy后,抗体联合照射组凋亡率(39.86%±4.38%)高于单纯抗体组(12.49%±1.59%)和单纯照射凋亡率之和(21.57%±2.97%),差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期检测显示表皮生长因子抗体联合照射主要引起细胞的G₁期阻滞(84.51%±3.42%),持续低剂量率照射主要引起G₂/M期阻滞(46.41%±4.48%),两者联合作用时,G₁期(59.31%±5.34%)和G₂/M期(38.10%±2.57%)细胞比率增加,S期(2.59%±1.19%)细胞比率明显减少(P<0.05)。结论 表皮生长因子抗体对持续低剂量率照射具有明显的放射增敏作用,其增敏机制主要来自细胞周期的重分布和细胞凋亡的增加。     

穿心莲内酯对小鼠放射性肺损伤的防护作用

目的 观察穿心莲内酯对C57BL/6小鼠放射性肺损伤的保护效应。方法 将80只C57BL小鼠完全随机分为0.9% 氯化钠溶液组（空白对照组）、穿心莲内酯组（单纯给药组）、放射+0.9%氯化钠溶液组（单纯照射组）和放射+穿心莲内酯组（联合组）,每组20只。照射前单纯给药组和联合组用穿心莲内酯 20 mg·kg^-1·d^-1灌胃,空白对照组和单纯照射组用等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,连续灌胃30 d。采用6 MV高能X射线直线加速器单次15 Gy照射,建立小鼠全肺放射性肺损伤模型。取小鼠肺组织HE染色、Masson染色进行组织病理学观察;采用 ELISA 法检测小鼠血清转化生长因子β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）;紫外分光光度计检测肺组织丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活力和羟脯氨酸（Hyp）含量。结果 联合组小鼠肺组织损伤程度较单纯照射组小鼠明显减轻,其肺系数、肺组织MDA含量、羟脯氨酸含量以及血清 TGF-β1、TNF-α表达水平虽然略高于空白对照组,但低于单纯照射组差异有统计学意义（t_肺系数=1,60, t_MDA=7.06, t_羟脯氨酸=17.44, t_TGF-β1=16.67, t _TNF-α=14.03,P <0.05）;联合组小鼠血清SOD活力明显高于单纯照射组（t=60.81,P<0.05）,但低于空白对照组和单纯给药组;单纯给药组小鼠各项检测指标与空白对照组相比,差异均无统计学意义。结论 穿心莲内酯可有效减轻小鼠的放射性肺损伤,且对小鼠肺组织无明显毒性。     

尼妥珠单抗及西妥昔单抗增强照射对人食管癌细胞系的作用

目的 观察尼妥珠单抗（h-R3）、西妥昔单抗（C225）联合照射对人食管鳞癌细胞系TE-13的作用。方法 分为无药对照组、h-R3组、C225组、单纯照射组、h-R3联合照射组、C225联合照射组,采用MTS法观察处理组对食管癌细胞增殖的影响,并计算细胞增殖率;采用克隆形成实验检测h-R3、C225对食管癌细胞系放射敏感性的影响,多靶单击模型拟合细胞存活曲线;通过流式细胞仪分析细胞周期分布及细胞凋亡变化。结果 与单纯照射组相比,单抗联合照射组的细胞增殖率明显降低（F=325.59,P<0.05）,细胞凋亡率明显升高（F=120.59,P<0.05）, SF₂、D₀、D_q及N值均显著降低,G₀/G₁、G₂/M期细胞比例均增加,S期细胞比例减少。C225联合照射组的细胞凋亡率高于h-R3联合照射组（F=120.59,P<0.05）,C225联合照射组SER（1.83）高于h-R3联合照射组SER（1.46）。结论 h-R3与C225均能提高照射对食管鳞癌细胞系TE-13的抗肿瘤作用,C225的杀伤作用略优于h-R3。     

骨髓移植前输血对不同剂量全身照射大鼠的影响

本文以8～12Gy γ线孵射大鼠,观察了照射前输血对BMT的影响。输血+BMT组于照后7～10天WBC数上升者占97%,而FMT组占85%。两组于BMT后10、30和100天分批活杀取BMC染色体分析均见供体型细胞。9～11Gy照射时,见输血+BMT组90天活存率(72%)显著高于BMT组(41%)。8Gy照射前输血时,BMT和IBMT+植皮的两组30天活存率均为1 00%,90天活存率分别为93%和5%。移植的皮肤20天开始长毛,30天全部长毛,180天仍然蹙康。这些结果表明:BMT前输血有提高BMC植入和移植面耐受性的作用;BMT和BMT+植皮前输血效果一致;辐射量8～11Gy TBI移植显效,11Gy组差。并讨论了照前输血BMT的显效特点。     

1.5Gy X射线全身照射对小鼠胸腺细胞CD、CD4、CD8分子表达及

采用单克隆抗体免疫荧光技术,流式细胞术检测,观察了1.5GyX射线单次全身照射(剂量率0.286Gy/min)对小鼠胸腺细胞CD₃分子表达的影响,及胸腺细胞亚群和细胞周期的变化。结果表明,中等剂量照射后,胸腺细胞CD₃分子的百分率明显增高,胸腺细胞CD₃阳性细胞比例为对照组的177.61%.同时,胸腺中CD₄⁺及CD₈⁺细胞比例亦显着增加,分别为对照的202.5%及165.87%.然而,胸腺中CD₄⁺、CD₈⁺细胞的比例显着降低,为对照组的68.28%,与此同时,胸腺细胞周期中S期细胞比例明显降低,为对照组的55.14%.     

肝肠联合移植的实验研究

目的：建立一种新肝肠联合移植手术模型,探讨移植肝脏对移植小肠的保护作用。方法：Ｗｉｓｔａｒ 大鼠同种异体肝肠联合移植,先进行肝脏移植,再进行小肠移植,门静脉、肝下下腔静脉袖套式吻合,肠系膜上动脉与左肾动脉吻合,供体肠系膜上静脉袖套式与受体左肾静脉吻合,回肠下端在左下腹部造瘘,完成肝肠联合移植。　结果：手术成功率为６２－５ ％ （１５／２４） 。手术平均存活为１１－２ ｄ 。手术后组织学发现：移植肝脏和小肠发生排斥反应。结论：（１） 袖套式血管吻合技术在大鼠身上建立的肝肠联合移植模型是可行的。（２） 肝肠联合移植后移植的肝脏不能起到保护移植小肠的作用。     

肝肾联合移植围术期电风暴的识别与救治

目的 分析肝肾联合移植术后患者并发电风暴的临床特征,揭示此类急症在器官移植围术期的危险性及诊疗措施.方法 解放军309医院器官移植中心2009年3月收治1例肝肾联合移植患者,对其围术期并发电风暴的诊治体会进行分析并查阅文献.患者术前诊断为“肝功能衰竭、尿毒症”,心脏超声提示“左房、右心轻度增大,二尖瓣、三尖瓣轻度反流”,左室射血分数62％,既往无心律失常病史.患者术中及术后24h内室性心动过速(室速)或室性纤维性颤动(室颤),利多卡因效果不佳,需较大剂量升压药维持血压.换用盐酸艾司洛尔联合胺碘酮静脉持续泵入,并根据血压和心律调节用量.结果 患者术后第2天发生3次室扑,每次立即给予盐酸艾司洛尔100mg弹丸式静脉推注后恢复窦性心律,术后第3天起未再出现心律失常.患者术后4d停用盐酸艾司洛尔,术后2周停用胺碘酮,术后42d出院,生命体征稳定,移植物功能正常.结论 肝肾联合移植围术期交感神经系统过度兴奋是引起心室电风暴的重要因索.重视β-受体阻断剂在治疗中的积极作用,维持机体内环境稳定,改善脏器功能,是器官移植围术期电风暴的重要治疗措施.     

HLA-G5在健康人和肝肾移植受者体内的表达分析

目的了解国内健康人和器官移植受者体内人类白细胞抗原-G5(HLA-G5)的表达情况,并探索其表达的时间规律。方法分别采集30例健康人(健康查体正常)、50例肝移植受者(肝移植术后3个月且肝功能稳定)、50例肾移植受者(肾移植术后3个月且肾功能稳定)的外周血各3ml,并采集33例肝肾移植受者术前及术后1周、4周、12周、1年的外周血各3ml。提取血清,采用酶联免疫法(ELISA)检测HLA-G5水平。结果30例健康人中,28例HLA-G5的A值低于0.5,根据标准曲线含量为0.0ng/ml,2例分别为8、9ng/ml。50例肝移植受者HLA-G5表达阳性者16例,阳性率为32%,其中4例含量高于30ng/ml。50例肾移植受者HLA-G5表达阳性者10例,阳性率为20%,有1例含量为25ng/ml。健康人、肝移植、肾移植3组血清中HLA-G5平均含量分别为0.56±0.20、8.34±1.50和3.26±0.25ng/ml。对33例肝肾移植受者进行动态检测显示,有1例患者术前和术后1周HLA-G5呈阳性,4例术后4周阳性,12例术后12周阳性,追踪至术后1年有11例阳性。结论HLA-G5在健康人体内低表达,与器官移植免疫耐受有一定相关性。在移植后移植物接受良好的情况下,HLA-G5有不同水平的表达,肝移植受者的HLA-G5表达量高于肾移植受者。33例肝肾移植受者的动态结果证实了HLA-G5的表达从mRNA转录到蛋白表达的时间为15~60d的观点,HLA-G5的表达在第60天到达高峰,并具有稳定性。     

肾移植术后微嵌合状态的研究

目的探讨肾移植术后微嵌合体的状态及其与移植肾长期存活的的关系。方法采集以男性为供者的70例女性肾移植患者术后外周血白细胞，用套式PCR扩增单拷贝SRY基因来鉴定患者血中是否存在微嵌合体。结果70例肾移植术后0．5～10年的女性患者微嵌合体阳性率为58．6％（41／70），2年以内（68％）及5年以上（72％）与2～5年（44．4％）的阳性率比较有明显差异（P〈0．05）。结论肾移植术后不同时间段嵌合细胞的阳性率有明显差别；长期的微嵌合状态与移植肾长期存活有一定的关系。     

亲属活体供肾移植与尸体供肾移植的临床疗效比较

目的：比较亲属活体供肾移植与尸体供肾移植的临床效果。方法：对21例亲属活体供。肾移植者及22例尸体供肾移植者的资料进行分析，比较其临床疗效。结果：两组术后1年内的急性排斥反应发生率分别为14．3％和22．7％；人／肾1年、3年和5年存活率，前者分别为100％／100％、95．2％／100％和90．5％／95．2％，后者分别为100％／100％、90．9％／95．5％和81．8％／86．4％。结论：在HLA配型和免疫抑制方案相同的情况下，亲属活体供肾移植的临床效果优于尸体供肾移植。     

Role of MRCP in assessment of biliary variants in living donor liver transplantation

Introduction

Liver transplantation can be done by three different methods: Cadaveric, heterotopic and living donor liver transplantation (LDLT). In LDLT usually the right lobe of a donor liver is transplanted into the patient after proper volumetric studies. The native patient bile ducts are connected to the biliary tree of the transplanted liver segment.

Patients and methods

From January 2010 to August 2011, 50 potential LDLT donors were evaluated with preoperative MRCP.

Results

The radiologist evaluated the visualization of the common duct, right and left intra-hepatic ducts, and insertion of the right posterior lobe duct. The data were classified according to Huang and Hakki classifications. According to the more detailed classification of Hakki 13 patients (26%) were Type K1; 15 patients (30%) were Type K2a; three patients (6%) were Type K2b; 11 patients (22%) Type K3a; four patients (8%) were Type K3b; two patients (4%) were Type K4 and no patients were Type K5. Two patients with unclassified anatomical biliary pattern were encountered. In conclusion, this study has shown an extremely high accuracy of MRCP in preoperative assessment of live hepatic donors, which aided in the style and procedure of the operation and ultimately to a high success rate of the transplantation procedures.     

同种异体骨复合自体红骨髓移植研究进展

骨肿瘤、骨创伤等多种原因引起的骨缺损、骨不连的治疗一直是困扰骨科医生的难题之一，本文综述了应用同种异体骨复合自体红骨髓移植的发展概况、可能愈合机制、影响手术成功的诸多因素以及今后需进一步研究解决的一系列问题等，为该方法的深入研究提供一个较为系统的思路。     

异基因外周血造血干细胞移植治疗极重度骨髓型和肠型急性放射病的临床报告

目的 探讨异基因外周血造血干细胞移植在肠型和极重度骨髓型放射病救治中的作用和地位.方法 山东"10·21" 60Co 辐射事故中2例病人受到意外照射,病例A受照射剂量20～25Gy,诊断为"肠型放射病",病例B受照射剂量9～15Gy,诊断为"极重度骨髓型放射病".经联合环磷酰胺、抗淋巴细胞球蛋白和氟达拉滨预处理,2例分别行HLA半相合及全相合外周血造血干细胞移植.采用环孢霉素A和骁悉方案(病例A加用CD25单抗和供者间充质干细胞)预防移植物抗宿主病(GVHD).结果 2例均移植成功,供体完全存活,移植后9～11天白细胞开始恢复,2周后白细胞恢复正常、骨髓造血重建成功.2例均未发生移植排斥和GVHD.病例A照射后33天死于败血症和多器官功能衰竭.病例B照射后75天死于心衰为主的多器官功能衰竭.结论 HLA相合及半相合外周血造血干细胞移植救治极重度骨髓型和肠型急性放射病是完全可能和可行的,联合免疫抑制剂预处理对促进供体稳定植入是必要的,环孢霉素A、骁悉和CD25单抗及供者间充质干细胞对预防GVHD有重要作用.