长链基因间非编码 RNA 00963通过靶向微小 RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制.方法 本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系.将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭.结果 与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05).LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达.干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05).过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05).抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用.结论 干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭.     

幽门螺杆菌感染病儿胃黏膜组织微小 RNA-497-3p表达及与 Toll样受体 8/Toll样受体 10/核因子 κB信号通路的相关性

目的 观察微小RNA(miR)-497-3p在幽门螺杆菌(Hp)感染病儿胃黏膜组织中表达水平,并探讨其与核因子(NF)-κB信号通路的相关性.方法 选取2014年1月至2018年11月黄冈市中心医院就诊的病儿210例为研究对象,分为Hp感染组(n=100)和Hp非感染组(n=110).实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-497-3p、Toll样受体8(TLR8)、Toll样受体10(TLR10)和NF-κB mRNA的表达情况,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测病儿胃黏膜组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-10(IL-10)水平.结果 Hp感染组的胃黏膜组织中miR-497-3p mRNA相对表达量显著低于Hp非感染组[(1.53±0.16)比(2.46±0.14)],TLR8[(1.84±0.15)比(1.05±0.23)]、TLR10[(1.92±0.06)比(1.38±0.09)]和NF-κB[(2.56±0.03)比(1.40±0.02)]相对表达量均高于Hp非感染组,差异有统计学意义(均P<0.05);Hp感染组的胃黏膜组织中TNF-α[(21.18±1.35)比(11.50±2.37)]、IL-6[(1.74±0.15)比(1.05±0.23)]、IL-8[(1.92±0.06)比(1.38±0.09)]和IL-10[(2.56±0.03)比(1.40±0.02)]的表达水平均高于Hp非感染组,均差异有统计学意义;Pearson相关分析显示,Hp感染组病儿胃黏膜组织中miR-497-3p与TLR8、TLR10和NF-κB mRNA相对表达量、TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10水平均呈负相关(均P<0.05).miRNA-497-3p诊断Hp感染的ROC曲线下面积(AUC)为0.926,根据SPSS统计结果计算miR-497-3p在最佳临界值处诊断Hp敏感度和特异度分别为91.8％和93.7％.结论 miR-497-3p在Hp感染组的胃黏膜组织中异常低表达,其可能通过影响TLR8/TLR10/NF-κB信号通路介导的炎性反应,从而在Hp感染的致病过程中发挥作用,为临床下一步的治疗提供思路.     

微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

长链非编码前列腺癌相关转录因子 6靶向微小 RNA-139-3p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)前列腺癌相关转录因子6(PCAT6)对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响和分子机制.方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测20例骨肉瘤组织和与其对应的癌旁组织中PCAT6和微小RNA-139-3p(miR-139-3p)的表达水平.双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR验证PCAT6对miR-139-3p的靶向调控关系.将PCAT6小干扰RNA(si-PCAT6)、miR-139-3p模拟物(miR-139-3p mimics)分别转染骨肉瘤细胞SAOS2,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测SAOS2细胞增殖活力,流式细胞术检测SAOS2细胞凋亡,蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和P21、的表达水平.将si-PCAT6和miR-139-3p抑制物(anti-miR-139-3p)共转染至SAOS2细胞,采用上述方法检测细胞增殖、迁移侵袭能力以及凋亡变化.结果 与瘤旁组织相比,骨肉瘤组织中PCAT6的表达水平[(2.76±0.27)比(1.01±0.09)]显著升高,miR-139-3p的表达水平[(0.51±0.05)比(1.00±0.08)]显著降低(P<0.05).miR-139-3p是PCAT6的靶基因,PCAT6靶向负性调控miR-139-3p表达.抑制PCAT6表达或过表达miR-139-3p均可下调SAOS2细胞CyclinD1和Bcl-2蛋白表达,上调p21和Bax蛋白表达,降低细胞活力,促进细胞凋亡(P<0.05).抑制miR-139-3p表达可逆转si-PCAT6对骨肉瘤SAOS2细胞增殖抑制和凋亡的影响(P<0.05).结论 lncRNA PCAT6在骨肉瘤组织中表达上调,抑制miR-139-3p通过靶向miR-139-3p抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导骨肉瘤细胞凋亡.     

微小 RNA-595在人晶状体上皮细胞凋亡中的调控作用

目的 探讨微小RNA-595(miR-595)在年龄相关性白内障晶状体组织中的表达情况及其对人晶状体上皮细胞凋亡的影响与机制.方法 收集年龄相关性白内障病人晶状体前囊膜组织(白内障组)及正常供体眼球晶状体前囊膜组织(健康组)标本,以H2O2诱导构建人晶状体上皮细胞SRA01/04凋亡模型(H2O2组),并以正常培养的SRA01/04细胞作为对照(对照组),采用实时荧光定量PCR检测miR-595的表达改变.将体外培养的SRA01/04细胞分为mimics-NC组、miR-595 mimics组、inhibitor-NC组和miR-595 inhibitor组,将miR-595 mimics/inhibitor及其阴性对照mimics/inhibitor-NC转染至SRA01/04细胞后,采用实时荧光定量PCR检测检测各组细胞中miR-595的表达情况;转染48 h后暴露于200μmol/L H2O21 h,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞中B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-595和Bcl-2的靶向关系.结果 与健康组相比,白内障组中miR-595表达水平明显升高[(5.52±1.64)比(1.00±0.00),P<0.05];同时,H2O2组细胞中miR-595表达水平明显高于对照组[(3.86±1.12)比(1.00±0.00),P<0.05].与mimics-NC组比较,miR-595 mimics组细胞中miR-595表达水平[(4.16±0.78)比(1.00±0.00)]、细胞凋亡率[(17.52±3.05)％比(8.86±1.21)％]明显升高,而Bcl-2蛋白的表达水平明显降低(P<0.05);但miR-595 inhibitor组细胞中miR-595表达水平、细胞凋亡率明显低于inhibitor-NC组,而Bcl-2蛋白的表达水平明显高于inhibitor-NC组(P<0.05).Bcl-2是miR-595的靶基因.结论 miR-595在年龄相关性白内障晶状体组织中高表达,并靶向调控Bcl-2表达促进人晶状体上皮细胞凋亡.     

微小 RNA-218-5p靶向 Jagged 1调控人牙周膜干细胞的活性和骨向分化

目的 研究微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)活性和骨向分化的影响并探讨其机制,为牙周炎的治疗提供研究基础.方法 将anti-miR-218-5p组(转染anti-miR-218-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-JAG1组(转染pcDNA-JAG1)、anti-miR-218-5p+si-NC组(共转染anti-miR-218-5p和si-NC)、anti-miR-218-5p+si-JAG1组(共转染anti-miR-218-5p和si-JAG1),用脂质体法转染至hPDLSCs细胞;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-218-5p、Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)、骨钙素、Runt相关转录因子2(Runx2)的表达;蛋白质印迹法(Westrn blotting)检测细胞中Jagged 1(JAG1)的蛋白表达;MTT法检测细胞活性;茜素红染色实验检测细胞的矿化结节;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果 与anti-miR-NC组相比,anti-miR-218-5p组hPDLSCs细胞培养48、72 h时,细胞活性升高[48 h:(0.44±0.04)比(0.62±0.06);72 h:(0.53±0.05)比(0.83±0.08);P<0.001],细胞的矿化结节明显升高,Col-1[(0.26±0.03)比(0.74±0.07)]、骨钙素[(0.21±0.02)比(0.54±0.05)]、Runx-2[(0.29±0.03)比(0.61±0.06)]蛋白相对表达量均显著升高(均P<0.001).与pcDNA组相比,pcDNA-JAG1组hPDLSCs细胞培养48、72 h时,细胞活性显著升高[48 h:(0.42±0.04)比(0.59±0.05);72 h:(0.55±0.05)比(0.81±0.08);P<0.001],Col-1[(0.34±0.03)比(0.71±0.07)]、骨钙素[(0.23±0.02)比(0.48±0.04)]、Runx-2[(0.25±0.03)比(0.56±0.05)]蛋白表达量均显著升高(均P<0.001).miR-218-5p可靶向调控JAG1的表达.抑制JAG1可逆转抑制miR-218-5p对hPDLSCs的活性和骨向分化作用.结论 抑制miR-218-5p可促进人牙周膜干细胞活性和骨向分化,其机制与靶向JAG1有关.     

微小 RNA-203a-3p下调 Mink相关肽 1基因表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的 探讨微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)对非小细胞肺癌恶性生物学行为的影响及机制.方法 本研究于2018年7月至2019年6月进行,正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446购自中国科学院上海细胞库;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-203a-3p和Mink相关肽1(KCNE2)mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测KCNE2蛋白表达;将SPC-A-1细胞分为miR-203a-3p(转染miR-203a-3p模拟物)组、miR-con组(转染miR-203a-3p模拟物阴性对照)、si-KCNE2组(转染KCNE2干扰表达载体)、si-con组(转染KCNE2干扰表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA-KCNE2组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体);四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-203a-3p和KCNE2的靶向关系.结果 与BEAS-2B细胞相比,肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446中miR-203a-3p表达水平显著降低[(0.27±0.05)、(0.18±0.07)、(0.25±0.04)比(1.00±0.24)],KCNE2 mRNA表达水平显著升高[(4.37±0.43)、(5.24±0.34)、(6.39±0.35)比(1.00±0.08)],KCNE2蛋白表达水平显著升高[(0.73±0.07)、(0.75±0.06)、(0.59±0.05)比(0.38±0.04)](P<0.05).与miR-NC组相比,miR-203a-3p组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.42±0.05)比(0.55±0.05),72 h为(0.63±0.07)比(0.84±0.09)],迁移细胞数减少[(79.90±5.21)个比(172.13±8.57)个],侵袭细胞数减少[(45.89±3.50)个比(101.83±9.55)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).与si-NC组相比,si-KCNE2组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.44±0.05)比(0.58±0.05),72 h为(0.63±0.08)比(0.94±0.09)],迁移细胞数减少[(71.71±4.52)个比(174.56±13.67)个],侵袭细胞数减少[(35.68±3.27)个比(81.37±5.46)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).miR-203a-3p靶向调控KCNE2的表达;KCNE2过表达部分逆转miR-203a-3p对肺癌细胞SPC-A-1的作用.结论 miR-203a-3p可通过下调KCNE2抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

微小 RNA-216b-5p对骨肉瘤 MG63细胞功能的影响及其与高迁移率族蛋白 B1的靶向关系

目的 探讨微小RNA-216b-5p(miR-216b-5p)对骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其与高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的靶向关系.方法 将体外培养的MG63细胞分为mimics-NC组、miR-216b-5p mimics组、inhibitor-NC组和miR-216b-5p inhibitor组,采用实时荧光定量PCR检测miR-216b-5p的表达,MTT法、Transwell小室和流式细胞仪分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡能力.采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-216b-5p和HMGB1的靶向关系,蛋白质印迹法(Western blot-ting)检测HMGB1蛋白的表达.结果 与mimics-NC组相比,miR-216b-5p mimics组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(5.36±0.54)比(1.00±0.11)]和细胞凋亡率[(20.36±3.15)％比(8.58±1.22)％]明显升高,而细胞增殖活力、侵袭能力和细胞中HMGB1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);miR-216b-5p inhibitor组细胞中miR-216b-5p的表达水平[(0.24±0.03)比(0.96±0.08)]和细胞凋亡率[(2.05±0.38)比(9.27±1.16)]较inhibitor-NC组明显降低,而细胞增殖活力、侵袭能力和HMGB1蛋白的表达水平较inhibitor-NC组均明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验证实HMGB1是miR-216b-5p的靶基因.结论 miR-216b-5p可能通过靶向调控HMGB1表达,抑制骨肉瘤MG63细胞增殖、侵袭并诱导细胞凋亡.     

血清微小 RNA-181c、微小 RNA-146a对急性脑梗死病人神经功能缺损及预后的影响

目的 探究血清微小RNA(miR)-181c、miR-146a对急性脑梗死(ACI)病人神经功能缺损及预后的影响.方法 选取南阳市中医院2018年1月至2019年7月ACI病人135例作为研究对象,比较不同美国国立卫生院神经功能缺损评分(NIHSS)、不同预后病人血清miR-181c、miR-146a水平,采用Pearson相关性分析血清miR-181c、miR-146a与NIHSS评分相关性,logistic回归分析血清miR-181c、miR-146a与预后的关系,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-181c、miR-146a对预后的预测价值,并采用Kaplan-Meier曲线进行生存分析.结果 NIHSS评分≥16分病人血清miR-181c水平(1.63±0.14)高于5～15分(1.52±0.12)、<5分(1.38±0.09)病人,NIHSS评分≥16分病人miR-146a水平(0.54±0.08)低于5～15分(0.67±0.10)、<5分(0.86±0.13)病人(P<0.05);血清miR-181c与NIHSS评分呈正相关,miR-146a与NIHSS评分呈负相关(P<0.05);生存者入院时、入院第3天血清miR-181c水平[(1.45±0.20)、(1.20±0.19)]低于死亡者[(1.68±0.25)、(1.53±0.35)],miR-146a水平[(0.74±0.16)、(0.97±0.23)]高于死亡者[(0.60±0.13)、(0.76±0.15)](P<0.05);血清miR-181c、miR-146a与预后显著相关(P<0.05);预测预后的AUC:入院时第3天miR-146a>入院时第3天miR-181c>入院时miR-146a>入院时miR-181c(P<0.05);miR-181c高危与低危、miR-146a高危与低危者生存曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 ACI病人神经功能缺损与血清miR-181c呈正相关,与血清miR-146a呈负相关,并是预后相关影响因素,均具有较高的预后预测价值.     

微小 RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶 A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用.     

老年重症肺炎病人血清微小 RNA-146a、微小 RNA-223、微小 RNA-21、微小 RNA-124水平及其与预后的关系

目的探究老年重症肺炎病人血清微小 RNA(miR)-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及其与预后的关系。方法选取 2018年 2月至 2020年 3月郑州大学第二附属医院诊治的 128例老年重症肺炎病人、 130例普通肺炎病人分别为重症肺炎组、普通肺炎组,并纳入同期 128例体检健康者为健康组。比较三组血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;分析老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平与 TNF-α的相关性;比较不同预后老年重症肺炎病人临床资料和血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124水平;分析老年重症肺炎病人死亡的影响因素;分析血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α对老年重症肺炎病人预后的预测价值。结果普通肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 1.67±0.56、1.64±0.55、1.71±0.57、(12.78±4.30)ng/L,重症肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 2.32±0.78、2.27±0.76、2.39±0.80、(23.64±7.92)ng/L,高于健康组的 1.03±0.35、1.01±0.34、0.99±0.33、(5.43±1.84)ng/L、(P<0.05)普通肺炎组、重症肺炎组血清 miR-124表达水平分别为 0.71±0.24、0.37±0.13,低于健康组的 1.07±0.37(P<0.05);重症肺炎人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水组病,平高于普通肺炎组( P<0.05)血清 miR-124表达水平低于普通肺炎组( P<0.05);老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、 miR-21表达水平与 TNF-α呈正,相关( P<0.05)血清 miR-124表达水平与 TNF-α呈负相关( P<0.05);死亡组老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α水平及有,呼吸系统疾病史、吸烟史、机械通气占比高于生存组( P<0.05),血清 miR-124表达水平、氧分压水平低于生存组( P<0.05); miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α、机械通气是老年重症肺炎病人死亡的危险因素( P<0.05);血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α预测老年重症肺炎病人预后的曲线下面积( AUC)分别为 0.84、0.88、0.82、0.66、0.68,其灵敏度分别为 72.5%、80.4%、82.4%、60.8%、60.8%,特异度分别为 85.7%、81.8%、79.2%、67.5%、72.4%。结论老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平较高,与 TNF-α水平呈正相关; miR-124表达水平较低,与 TNF-α水平呈负相关。且测定血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平有助于临床预测老年重症肺炎病人的预后情况。     

microRNA-155在类风湿关节炎外周血中的表达及临床意义

目的：通过研究microRNA-155（miR-155）在类风湿关节炎（RA）患者外周血的表达水平,分析miR-155与疾病临床特征的相关性,探讨其在RA发病及疾病进展中的意义。方法抽取50例初发RA患者及36例健康对照组外周血分离PBMC（外周血单个核细胞）,提取和纯化miRNA,实时定量PCR检测miR-155的表达,以小分子RNA U6作为内对照,对miR-155的表达量进行相对定量分析。同时收集RA患者有关的临床参数,统计分析miR-155的表达水平与RA合并临床参数的相关性。对RA活动组中,随机分为甲氨蝶呤（MTX）单药治疗组,肿瘤坏死因子（TNF）-α抑制剂单药治疗组,两组随访观察12周,收集患者治疗前后外周血。实时荧光定量PCR法检测RA患者治疗前后外周血miR-155的表达水平变化。结果 RA患者中PBMC中miR-155的表达水平较健康对照组明显升高,(P<0.01);同时RA患者miR-155的表达与患者活动度有关,与肺间质病变等无明显相关,RA患者TNF-α抑制剂单药治疗组中,miR-155的表达较治疗前下降,而在甲氨蝶呤治疗组中无明显下降。结论 miR-155在RA的PBMC中异常高表达,且与RA的活动度相关,提示miR-155可能可作为RA诊断及RA活动的一个预测指标。 miR-155在RA的发病机制中可能参与了TNF-α的致炎过程。     

miR-539对乳腺癌细胞增殖与凋亡的调控作用研究

目的：研究miR-539对乳腺癌细胞增殖和凋亡的调控作用。方法采用荧光定量PCR检测乳腺癌细胞(MCF-7、MDA-MB-453、ZR-75-30)和正常乳腺上皮细胞(MCF-10A)中miR-539表达的差异;通过转染miR-539-mim-ics在MCF-7细胞中上调miR-539的表达,并通过MTT和TUNEL实验检测miR-539对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。结果与正常乳腺上皮细胞相比,乳腺癌细胞中miR-539的表达显著降低( P<0．01)。与空白对照组和阴性对照组相比,过表达miR-539能显著降低过表达组乳腺癌MCF-7细胞的增殖能力并增加其对地塞米松诱导凋亡的敏感性(P<0．01)。结论 miR-539能够抑制乳腺癌细胞增殖并促进其凋亡,有望作为乳腺癌基因治疗的靶点。     

微RNA-802在肥胖人群脂肪组织中的表达及临床意义

目的 探讨微RNA-802(miR-802)在肥胖人群脂肪组织中的表达情况及临床意义。方法 选择2019年3月至2021年7月在枣庄市三家医院因慢性胆囊结石而需手术治疗的病人102例,其中体质量指数(BMI)≥28 kg/m²有59例作为肥胖组,BMI<24 kg/m²有43例作为非肥胖组。手术过程中取皮下脂肪组织,采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测脂肪组织miR-802相对表达量;比较两组人体学指标、血脂、血糖等临床资料;采用Pearson分析肥胖病人脂肪组织miR-802水平与各指标的相关性。结果 肥胖组、非肥胖组病人性别、年龄及血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平之间比较,差异无统计学意义(P>0.05),肥胖组病人BMI[(31.81±2.43)kg/m²]、腰臀比(WHR)(1.03±0.07)、空腹血糖(FBG)[(10.51±2.71)mmol/L]、空腹胰岛素(FINS)[(16.54±3.26)mU/L]、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)...     

miR-539对肺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 研究miR-539对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用.方法 通过荧光定量PCR检测非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H358、NCI-H1650、NCI-H1299、HCC827)和正常人支气管上皮细胞(16HBE)中miR-539表达的差异;通过转染miR-539-mimics在NCI-H358细胞中上调miR-539的表达,并通过MTT和TUNEL法检测miR-539对非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)增殖和凋亡的影响.结果 与正常人支气管上皮细胞相比,非小细胞肺癌细胞中miR-539的表达显著降低(P<0.01);与空白对照组和阴性对照组相比,过表达miR-539能显著降低非小细胞肺癌NCI-H358细胞的增殖能力并增加其对地塞米松诱导凋亡的敏感性(P<0.01,P<0.05).结论 miR-539能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖并促进其凋亡,可作为非小细胞肺癌基因治疗的靶点.     

血清微RNA-34a在多发性骨髓瘤中的表达及其临床意义

目的 检测初诊多发性骨髓瘤（MM）病人血清微RNA-34a(miR-34a)表达水平,并探讨其临床意义。方法 选取2017年3月至2021年5月石家庄市人民医院收治的102例初诊MM病人作为疾病组,并同期选取100例性别、年龄匹配的健康体检者作为对照组,采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应法（qRT-PCR）检测两组血清miR-34a表达水平,对比疾病组MM不同临床病理特征病人血清miR-34a表达水平。另疾病组均行以硼替佐米为基础的方案化疗,评估不同化疗方案的效果,并采用logistic回归分析法分析血清miR-34a表达水平对MM病人化疗效果的影响。结果 疾病组血清miR-34a表达水平低于对照组（0.63±0.10比1.45±0.23,P<0.05）;疾病组国际分期系统（ISS）分期Ⅲ期、修订版国际分期系统（R-ISS）分期Ⅲ期、免疫球蛋白G(IgG)型、FISH筛查高危病人血清miR-34a表达水平均低于ISS分期Ⅱ期、免疫球蛋白A(IgA)、轻链型和其他类型、荧光原位杂交（FISH）筛查非高危病人（P<0.05）;疾病组化疗4个周期后总有效率为75.49%,其中PT...     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的 探讨MicroRNA-129-2(miR-129-2)在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路.方法 将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染到食管癌NMC109细胞中,并设为miR-129-2 mimics高表达组和miR-129-2 mimics阴性对照组(miR-129-2 mimics NC组),将非转染的NMC109细胞设为空白对照组.体外实验:运用MTT法检测3组细胞的增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达.采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力.结果 miR-129-2 mimics组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较miR-129-2 mimics NC组及空白对照组明显减弱(P<0.001),而空白对照组与miR-129-2 mimics NC组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异(P>0.05);miR-129-2 mimics组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调(P<0.001);miR-129-2 mimics组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小(P<0.001),而miR-129-2mimics NC组及空白对照组无明显差异(P>0.05).结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调SOX4基因表达有关.     

miR-218在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中的生物学功能

目的 探讨微小RNA-218(miR-218)在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中发挥的生物学功能.方法 采用实时定量PCR方法检测上皮性卵巢癌细胞株中miR-218的表达.通过转染miR-218模拟体、miR-218抑制剂外源性地增高或者降低miR-218在SKOV3中的表达,利用MTT、流式细胞术、癌细胞侵袭迁移实验观察miR-218对SKOV3增殖、凋亡和侵袭转移的作用.结果 miR-218能增强SKOV3增殖能力(P＜0.05),而与细胞凋亡、侵袭转移无相关性(P＞0.05).结论 miR-218在上皮性卵巢癌细胞株SKOV3中发挥调节细胞增殖的作用.     

子痫前期孕妇血浆外泌体中LncRNA MALAT1和miR-206的表达水平及临床意义

目的 探究长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1（LncRNA MALAT1）、微小RNA-206（miR-206）在子痫前期（PE）孕妇血浆外泌体中的表达水平及临床意义。方法 选取2017年1月至2019年12月在郑州市妇幼保健院住院分娩的PE孕妇42例为PE组,另选取同期在本院分娩的健康孕妇42例为对照组。根据入组PE患者病情严重程度分为轻度组22例,重度组20例。检测所有研究对象血浆外泌体LncRNA MALAT1、miR-206、血管内皮生长因子（VEGF）表达水平并进行组间比较。采用Pearson法分析PE孕妇血浆外泌体中LncRNA MALAT1、miR-206和VEGF的相关性,logistic回归模型分析PE发生的影响因素,采用受试者工作特征曲线（ROC）分析血浆外泌体LncRNA MALAT1、miR-206表达水平对PE发生的预测价值。结果 与对照组比较,PE组患者血浆外泌体miR-206水平明显升高,LncRNA MALAT、VEGF水平明显降低（P<0.05）。LncRNA MALAT1、VEGF水平随PE患者病情加重有降低趋势,miR-206水平有升高趋势（P<0.05）。高miR-206水平、低LncRNA MALAT1水平是PE发生的独立危险因素（P<0.05）。LncRNA MALAT1、miR-206联合检测预测PE发生的曲线下面积为0.872,敏感度为92.86%。结论 PE患者血浆外泌体中LncRNA MALAT1呈低表达、miR-206呈高表达,两者均是PE发生的危险因素,二者联合检测对PE的诊断价值较高。     

miR-31调控PAX9对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究miR-31调控配对盒基因9(PAX9)对肺癌细胞侵袭和增殖能力的影响.方法 运用免疫组织化学检测肺癌组织和癌旁正常组织PAX9蛋白的表达;运用荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁正常组织和肺癌细胞株M14中miR-31的表达.通过转染miR-31-inhibitor下调M14细胞中miR-31的表达,双荧光素酶活性检测miR-31对PAX9转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-31对M14细胞的侵袭能力的影响;平板克隆实验检测miR-31对M14细胞的增殖能力的影响.结果 与癌旁正常组织比较,PAX9蛋白在肺癌组织中表达降低,miR-31在肺癌组织中表达明显升高(P<0.05);双荧光素酶活性检测结果显示,miR-31可以直接调控PAX9的转录活性;抑制miR-31的表达后,肺癌细胞株M14的PAX9蛋白表达水平上调,侵袭和转移能力明显降低(P<0.05).结论 miR-31靶向PAX9的表达,从而调控肺癌细胞的侵袭和增殖能力.