抗SARS病毒融合蛋白单克隆抗体的制备与初步鉴定

用基因工程技术表达的SARS-CoV S蛋白片段和N蛋白片段的融合蛋白作抗原免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定。最终获得2株(1F11和3D2)能稳定分泌抗SARS-CoV融合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。其培养上清的ELISA效价分别为1∶1024和1∶512;腹水效价分别为:1×10-6,2×10-5。1F11株识别融合蛋白上的N抗原表位,3D2识别其上的S抗原表位。该单抗可望成为快速诊断SARS-CoV感染的特异性抗体。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体的制备与鉴定

为了建立抗人心肌肌钙蛋白Ⅰ(CTnI)单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。以重组表达并纯化后的CTnI免疫BalB/C小鼠,采用传统单克隆抗体技术筛选能稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株。结果:建立了3株稳定分泌抗CTnI McAb的杂交瘤细胞株2E3,3D4和3E6,腹水效价分别为4×10-5,1×10-6,1×10-5,亲和常数分别为4.8×108,5.2×109,3.6×108,最低检测浓度分别为20,40,20μg/L,其中2E3和3D4可以识别CTnI的不同表位。     

抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的研制重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以纯化的rhBSP免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗rhBSP mAb;用亚型鉴定试剂条鉴定IgG亚类;ELISA鉴定mAb的特异性和效价。结果获得2株能稳定分泌特异性mAb的抗rhBSP的杂交瘤细胞系AHB1和AHB5,Ig亚类分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型,其效价分别为1×10-3和1×10-7。腹水mAb经Protein A亲和色谱柱纯化后,纯度达92%以上。结论获得抗rhBSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和用于临床诊断实验研究创造了条件。     

抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备抗前列腺干细胞抗原 (PSCA)单克隆抗体 (McAb) ,并对其特性进行鉴定。方法　应用PC 3细胞免疫BALB/c小鼠 ,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选 ,制备稳定的抗PSCAMcAb ,并对McAb的亚型、组织特异性进行鉴定。结果　制备出抗PSCA单克隆抗体 ,免疫扩散鉴定为IgG1亚类 ,ELISA法测定其腹水效价为 5× 1 0 -5。组织学检查与前列腺癌组织呈阳性反应 ,与其他肿瘤组织均呈阴性反应 ,和人体正常组织细胞无一出现阳性反应。结论　初步制备出一株抗PSCA的单克隆抗体细胞株 ,能特异性识别前列腺癌组织 ,对前列腺癌的诊断和治疗提供有用的工具。     

人巨细胞病毒重组抗原及单克隆抗体在ELISA中的应用

用重组人巨细胞病毒（rhCMV)gp52蛋白作抗原及相应的单克隆抗体酶标记物建立捕获ELISA，检测人血清中的HCMV特异性IgM抗体。其工作浓度均由方阵滴定法确定。并进行精密度、特异性和干扰实验。用该法检测体检献血员病毒性肝炎患者及疑似CMV感染的肝炎综合症患者血清共计939份。结果gp52蛋白抗原最佳浓度为1μg/ml,酶标单抗的工作浓度为1：1600，批内平均变异系数CV3．7％，批间CV7．9％。634例献血员IgM抗体阳性17例（2．7％）；288例病毒性肝炎患者，阳性10例（3．5％）；17例肝炎综合症患者，阳性11例（64．7％）。均经免疫印迹法证实。该组合特异性强，灵敏度高，不受类风湿因子的影响，结果可靠，优于全病毒抗原构成的检测试剂。适用于临床诊断和流行病学调查。     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及鉴定

目的制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体,鉴定其特性,为进一步研制HIV治疗性抗体提供贮备。方法将HIV-1 gp120基因片段连接到经酶切的原核表达载体PEGX-4T-2中,利用大肠杆菌XL1-blue表达GST-HIV蛋白。表达的蛋白纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA筛选阳性克隆。重组免疫印迹分析(RIBA)和Western blot检测抗体特异性。结果构建的重组质粒的外源基因片段经测序与预期HIV-1 gp120抗原基因片段大小一致。纯化蛋白SDS-PAGE可见1条相对分子质量(Mr)32 000的表达蛋白条带。获得6株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其细胞培养上清效价为10-3,小鼠腹水效价为10-5,抗体亚型均为IgG1。RIBA结果显示6株单抗皆只与HIV-1 gp120抗原反应。Western blot结果显示在Mr32 000处可见1条单一目的条带。结论获得6株稳定分泌抗HIV-1 gp120单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为进一步研制抗HIV治疗性抗体奠定了基础。     

SARS冠状病毒核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的:SARS 冠状病毒(SARS-CoV)核衣壳蛋白 N(nucleocapsid protein)单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)的制备及鉴定。方法:用基因重组的 SARS-CoV N 蛋白免疫 BALB/c 小鼠制备 McAb,并采用间接 ELISA、免疫印迹法进行筛选和鉴定。结果:筛选出2株抗 SARS-CoV N 蛋白 McAb 杂交瘤细胞株,间接 ELISA 证实这组单克隆抗体仅与 SARS-CoV 产生特异性反应,而与其他病原体无交叉反应,IgG 亚类鉴定1株为 IgG1,另1株为 IgG2b。2株抗体亲和常数分别为4.14×10~(-9)和3.19×10~(-9)。结论:获得特异性针对 SARS-CoV 的单克隆抗体,为 SARS-CoV 早期诊断试剂的研制奠定了基础。     

ApoAⅡ单克隆抗体对抗原决定簇的测定及应用研究

目的　研究载脂蛋白AⅡ (ApoAⅡ )单克隆抗体 (McAb)对其抗原的决定簇。方法　应用淋巴细胞杂交瘤技术 ,建立抗人ApoAⅡ杂交瘤细胞株 (BI1 ,BI2 ,BI3,BI4 ,BI5,BI6 ,BI7) ,以制备的McAb用双向免疫扩散法和ELISA对其免疫学特性进行了测定 ,用单抗相加试验和双抗体竞争试验对其抗原决定簇进行分析。结果　Ig亚类测定 :BI1 、BI2 、BI5和BI7为IgG1 ,而BI3、BI4 和BI6 均为IgG2b,腹水效价BI1与BI6 为 1× 10 - 6 ,BI2 、BI3、BI4 、BI5和BI7均达到 1× 10 - 5。特异性测定 :与载脂蛋白AⅠ、B、CⅠ、CⅡ、CⅢ、E、脂蛋白 (a)、人血清白蛋白及纤维蛋白溶酶原 (pg)没有交叉反应。单抗相加试验和双抗体竞争试验结果证实 ,BI1 、BI4 和BI5为识别apoAⅡ上同一抗原决定簇的McAb、BI2 、BI3、BI6 和BI7则为针对apoAⅡ上另一抗原决定簇的McAb。结论　ApoAⅡ的McAb对抗原决定簇的测定为预测动脉粥样硬化危险性提供了理论依据     

角质形成细胞模型中白介素8和单核趋化蛋白1的表达及西替利嗪对诱导的干预作用

目的　探讨人角质形成细胞株HaCaT细胞中组胺H1 受体(H1R)表达及西替利嗪(CET)对组胺诱导炎症因子的干预作用。方法　用RT-PCR和免疫组化技术检测HaCaT细胞H1RmRNA和蛋白表达,用组胺处理细胞为模型组,用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测组胺诱导白介素8 (IL-8)和单核趋化蛋白1(MCP-1)的蛋白分泌及CET对诱导的干预作用。结果　HaCaT细胞有H1RmRNA和蛋白表达;组胺(1×10-6 ~1×10-4 mol·L-1 )可显著诱导细胞IL-8蛋白分泌(P<0. 05, vs对照组), 组胺(1×10-5 mol·L-1 )可显著诱导MCP-1分泌(P<0. 05, vs对照组),加入(1×10-6, 1×10-5mol·L-1 )CET共同培养24h,可抑制诱导作用(P<0. 05, vs模型组)。结论　西替利嗪可能通过抑制角质形成细胞趋化因子的表达而发挥抗皮肤过敏炎症作用。     

丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：以基因工程表达的丙型肝炎病毒抗原蛋白（HCAg）为抗原，建立分泌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系．并对其分泌的McAh进行鉴定。方法：用纯化HCV基因工程表达抗原（HCAg）免疫Balb／c小鼠，取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备McAb。采用ELISA及分片断鉴定技术进行鉴定。结果：筛选出5株能稳定分泌特异性抗-HC的McAb杂交瘤细胞株，经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，特异性强，效价高。与不同抗原蛋白的ELISA反应呈特异性阳性反应。分片断鉴定结果显示，所获5株McAb主要为抗HCV核心蛋白和非结构蛋白NS3。结论：此5株丙肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丙肝抗原具有特异亲和性，为丙型肝炎病毒抗原诊断试剂的研制提供了关键技术基础。