茅莓总皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠兴奋性氨基酸含量的影响

目的:研究茅莓总皂苷对局灶性脑缺血再灌注大鼠兴奋性氨基酸(EAA)含量的影响。方法:将大鼠随机分为茅莓总皂苷5,10,20mg.kg-1组及尼莫地平10mg.kg-1组、模型组和假手术组。灌胃给药3d,采用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,相应时间断头取脑。采用高效液相法测定大鼠脑组织中天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)的含量。结果:缺血对照组天冬氨酸、谷氨酸含量明显高于治疗组。结论:茅莓总皂苷对脑缺血再灌注损伤有保护作用。其可能的机制为:干扰脑缺血再灌注损伤中EAA代谢而发挥脑保护作用。     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后凋亡相关基因Bcl-2mRNA,BaxmRNA表达的影响

目的:探讨茅莓总皂苷对缺血性再灌注后凋亡相关基因Bcl-2mRNA,BaxmRNA表达的影响。方法:采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血再灌注模型,以原位杂交技术观察脑缺血再灌注不同时间点茅莓总皂苷5,10,20 mg.kg-1对凋亡相关基因Bcl-2 mRNA,Bax mRNA的表达。结果:3个剂量的茅莓总皂苷治疗组增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低Bax mRNA阳性细胞的表达。结论:茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用可能与增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低BaxmRNA阳性细胞的表达有关。     

大鼠局灶性脑缺血脑组织的比较蛋白质组学研究

目的建立局灶性脑缺血模型,从蛋白质整体水平探讨脑缺血/再灌注的损伤机制。方法建立大鼠脑缺血2 h再灌注24 h的模型;提取脑组织总蛋白质,以双向电泳技术进行蛋白质分离,考马斯亮蓝染色,获得双向电泳图谱,利用专门的软件筛选出差异蛋白质,用MALDI-TOF-MS获得肽指纹图谱,MS-Fit数据库进行搜索,获得有关的蛋白质信息。结果局灶性脑缺血模型组与正常组脑组织的比较蛋白质组学研究。与模型组比较筛选出23个差异表达蛋白斑点,其中13个低表达,10个高表达,鉴定其中6个蛋白质,发现白细胞三烯A-4水解酶、促甲状腺激素释放激素降解胞外酶等与脑缺血相关的蛋白质。结论从蛋白质组学角度发现了一些与脑缺血相关的蛋白,有助于今后进一步研究脑缺血性损伤的保护机制。     

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨茅莓总皂苷对缺血性脑损伤的神经保护机制。方法采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血2h,再灌注24 h模型,以HE染色,TUNEL标记和免疫组化的方法观察茅莓总皂苷5、10、20 mg.kg-1对凋亡细胞数目及相关蛋白Bc l-2,Bax表达的变化。结果3个剂量的茅莓总皂苷治疗组显示神经元形态病理改变明显减轻,降低残存细胞中TUNEL阳性细胞的百分率。增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,Bc l-2/Bax的表达比例增加。结论茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用,其机制可能与增加Bc l-2阳性细胞的表达,降低Bax阳性细胞的表达,提高Bc l-2/Bax有关。     

三七总皂苷对大鼠局灶燃血再灌注损伤TGF－β1表达的影响

目的：观察三七总皂苷（PNs）对局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑组织TGF－β1表达的影响,探讨PNS的脑保护机制。方法：采用线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞缺血再灌注损伤模型,将30只成年雄性Sprague－Darley大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组和PNS治疗组,每组10只,各组分别于再灌注24h后做神经功能缺陷评估,并断头取脑,用免疫组织化学法和半定量RT－PCR法检测各组缺血区脑组织TGF－β1表达的变化。结果：与缺血再灌注组相比,PNS治疗组术后大鼠神经功能缺陷评分显著降低,脑组织中TGF－β1的表达水平明显增高。结论：三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠有保护作用,其作用机制可能与促进TGF－β1的表达有关。     

枸杞多糖对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用

目的:研究枸杞多糖对脑缺血再灌注损伤模型大鼠的保护作用。方法:采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型。84只SD大鼠随机均分为正常对照(等容生理盐水)组、假手术(等容生理盐水)组、模型(等容生理盐水)组、尼莫地平(0.5 mg/kg)组与枸杞多糖高、中、低剂量(60.0、30.0、15.0 mg/kg)组。于复制模型前2 d开始灌胃给药,每天2次,连续3 d。对大鼠进行神经症状评分,测定大鼠脑含水量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-12 mRNA的表达,Western blot法测定Caspase-12蛋白的表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠神经症状评分、脑含水量增加,Caspase-12 mRNA和蛋白表达增强,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,枸杞多糖高、中剂量组大鼠神经症状评分、脑含水量减少,Caspase-12 mRNA和蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:枸杞多糖对脑缺血再灌注损伤模型大鼠有一定保护作用,其机制与减少神经症状评分、脑含水量及调节Caspase-12 mRNA与蛋白的表达有关。     

七十味珍珠丸对大鼠脑缺血再灌注损伤的抗凋亡作用

目的观察七十味珍珠丸(RNSP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法采用大脑中动脉阻塞模型,实验分组:假手术组、模型组、溶媒对照组和RNSP组。神经功能缺失评分观察大鼠神经缺失体征,红四氮唑染色测量脑组织梗死面积,及Western blot检测海马组织Bcl-2/Bax比值和caspase-3的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经缺失体征明显,脑梗死面积明显增加,Bcl-2/Bax比值减小,caspase-3蛋白表达明显升高。而与模型组比较,RNSP组大鼠神经缺失体征明显改善,脑梗死面积减少,Bcl-2/Bax比值增大,caspase-3蛋白表达明显降低。结论 RNSP对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,与其上调Bcl-2/Bax比值,减少caspase-3蛋白表达的抗凋亡作用有关。     

人参皂甙Rb1对大鼠脑缺血再灌注后巢蛋白表达的影响

目的:观察大鼠脑缺血再灌注后脑组织内巢蛋白的表达以及人参皂甙Rb1(Ginsenoside Rb1,GRb1)对神经的保护机制.方法:阻塞大鼠大脑中动脉2h制备脑缺血再灌注模型,大鼠随机分为缺血再灌注组(I/R组)和GRb1给药组(GRb1组).两组按不同的再灌注时间(3h、12h、1d、2d、3d、5d、10d)分为7个亚组,应用免疫组织化学技术检测脑内巢蛋白的表达.结果:与I/R组相比,GRb1能减轻脑组织的病理改变,上调各时间点巢蛋白阳性细胞数.结论:GRb1对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制与上调缺血再灌注大鼠脑内巢蛋白表达水平有关.     

依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制.方法 将120只♂ SD大鼠随机均分为假手术组、模型组和依托咪酯高、低剂量组,ip给予各组大鼠相应药物后,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞再灌注模型,评价依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注的保护作用.参照Bederson评分标准评价大鼠的神经功能损伤,采用TTC染色法观察大鼠的脑梗死体积,采用免疫组化法分析大鼠海马CA1区NAIP、caspase-3及caspase-7蛋白的表达,采用HE染色法观察大鼠脑组织的病理变化.结果 与模型组比较,依托咪酯组大鼠的神经功能损伤和脑梗死容积明显减轻,大鼠海马CA1区NAIP蛋白的表达明显增强,caspase-3蛋白的表达明显减少;依托咪酯高、低剂量组间比较无明显差异;各组大鼠海马CA1区caspase-7蛋白的表达无显著差异.结论 依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注造成的脑损伤具神经细胞保护作用,其机制可能与上调NAIP蛋白的表达、抑制caspase-3蛋白的活化有关.     

三七总皂苷对大鼠脑缺血再灌注后Caspase表达的影响

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1、Caspase-3、Caspase-8)蛋白表达的变化,以及三七总皂苷(PNS)对其表达的影响。方法采用线栓法建立大鼠大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型。实验动物随机分为假手术组、模型组、三七总皂苷组和尼莫地平对照组,于缺血前5 m in、缺血后12、24、36 h给药,共给药4次。缺血2 h再灌注46 h后,采用免疫组织化学方法检测脑组织中Caspase-1、Caspase-3、Caspase-8蛋白表达的变化。结果缺血2 h再灌注46 h后,可诱导脑组织Caspase-1、Caspase-3表达增强,PNS能下调Caspase-1、Caspase-3蛋白的表达;但对Caspase-8的表达无影响。结论PNS能抑制脑缺血再灌注后Caspase-1、Caspase-3蛋白的表达,这可能是其促进脑缺血后神经元存活及损伤后修复的机制之一。     

丹皮酚抑制大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤脑组织细胞间黏附分子-1和血管细胞黏附分子-1的表达

目的观察丹皮酚对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,以探讨其脑保护的作用机制。方法线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,大鼠脑缺血2 h再灌注24 h,采用Western blot及RT-PCR法观察大鼠脑组织ICAM-1、VCAM-1的蛋白及mRNA表达。结果丹皮酚明显降低缺血区脑组织ICAM-1、VCAM-1的蛋白及mRNA的表达。结论丹皮酚可能通过降低缺血区脑组织黏附分子表达发挥脑保护作用。     

格列齐特对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的: 以大脑中动脉栓塞(MCAO)/再灌注模型为研究对象,探讨格列齐特对缺血性脑卒中的保护作用及机制。方法: 雄性Wistar大鼠采用线栓法进行2h左侧MCAO/再灌注,对不同再灌注时间点的梗死核心区样本检测mRNA水平及SUR1蛋白表达水平;不同剂量格列齐特静脉注射到右颈内静脉后灌注12h,采用TUNEL法检测凋亡细胞数量、采用Bederson试验评价神经功能缺损、采用TTC染色法观察脑梗死体积。结果: SUR1mRNA和蛋白水平在MCAO/再灌注组织中显著上调,在缺血后8~12h达到最大水平。格列齐特可减少TUNEL阳性细胞数量,减轻神经功能损伤和脑梗死体积。结论: 研究表明SUR1信号通路可能与MACO/再灌注损伤及梗死相关,静脉注射格列齐特可通过抑制SUR1的表达减轻梗死程度,减少MACO/再灌注造成的梗死面积及脑细胞凋亡程度。     

复方白花前胡液对大脑中动脉缺血再灌注大鼠 Caspase-3蛋白表达的影响

目的 :探索复方白花前胡液对大脑中动脉缺血再灌注大鼠Caspase 3蛋白表达的影响。方法 :线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型 ,术后2 4、4 8、72h分别检测大鼠的神经功能缺损 ;并采用免疫组织化学法检测凋亡相关基因Caspase 3蛋白表达。结果 :MCAO R 2 4、4 8、72h后 ,所有动物都出现程度不同的运动障碍 ,且大鼠脑组织中Caspase 3蛋白表达显著升高 ,复方白花前胡液可明显改善大脑中动脉缺血再灌注大鼠的神经功能缺损症状 ,抑制大鼠Caspase 3蛋白表达水平。结论 :复方白花前胡液能有效抑制凋亡相关基因Caspase 3蛋白的表达 ,减轻或消除缺血级联反应中迟发性神经元死亡 ,复方白花前胡液是其治疗缺血性中风病的机理之一。     

后适应对大鼠脑缺血神经细胞凋亡和内皮型一氧化氮合酶与诱导型一氧化氮合酶的影响

目的：研究缺血耐受（后适应和预适应）对脑缺血再灌注神经细胞凋亡及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白表达的影响。方法：50只雄性SD大鼠随机分为假手术组（sham）、脑缺血再灌注模型组（MCAO）、预适应组（MCAO＋preconditioning）、后适应组（MCAO＋postconditioning）和尼莫地平组（MCAO＋nimodipine），每组10只大鼠。预适应组大鼠在MCAO前24h，双侧颈总动脉夹闭2min，再灌注20min，循环两次。后适应组大鼠在脑缺血再灌注开始时，再灌注20s，栓塞20s，循环3次。大鼠大脑中动脉阻断1．5h，再灌注24h。用TUNEL法和免疫组化染色法分别检测缺血半暗带凋亡细胞和iNOS、eNOS蛋白表达。结果：与MCAO组比较，后适应组大鼠脑缺血半暗带的凋亡细胞显著减少，eNOS蛋白表达显著增加，iNOS蛋白表达显著减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：缺血后适应能诱导脑缺血耐受，对脑缺血／再灌注损伤产生保护作用，其保护作用与促进eNOS蛋白的表达，抑制iNOS蛋白的表达有关。     

大鼠脑缺血/再灌注后神经元凋亡及caspase-12 mRNA和蛋白表达的改变

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后caspase-12 mRNA及蛋白的表达,明确内质网信号通路在脑缺血后神经元凋亡调控中的作用。方法60只Wistar♂大鼠随机分为假手术组和缺血组。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、RT-PCR技术检测脑缺血/再灌注后各组凋亡细胞数和caspase-12 mRNA及蛋白的表达。结果脑缺血/再灌注后,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞数和caspase-12mRNA及蛋白的表达逐渐增高。在脑缺血/再灌注后24h达高峰。与假手术组相比,缺血组在各时间点凋亡细胞数、caspase-12 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论脑缺血/再灌注后神经元凋亡数明显增高,caspase-12 mRNA及蛋白的表达明显升高,提示内质网通路参与了脑缺血/再灌注后神经元凋亡的调控。     

细粒棘球蚴囊液蛋白质组学的分析研究

目的分析细粒棘球绦虫幼虫生长环境即囊液的蛋白质构成情况,为深入了解棘球蚴的发育、代谢奠定基础。方法采用双向凝胶电泳分离蛋白质,经过图像分析标记,通过自动切胶仪切胶、回收,胶内酶解、纯化以及质谱分析技术分析蛋白样点的数据,最后结合生物信息学方法进行注解。结果在囊液二维电泳图谱上提取约30个蛋白斑点,成功获取21种蛋白的肽指纹图谱,利用生物信息学检索工具MASCOT进行了蛋白鉴定。结论通过建立细粒棘球蚴囊液的二维电泳图谱,初步鉴定出囊液中含人血清铁传递蛋白、人白蛋白、人β-血红蛋白3种蛋白,为从外界干扰囊液中蛋白质构成比方面寻找包虫病治疗的新方法提供了参考依据。