测定司帕沙星间接竞争酶联免疫检测方法建立及应用

目的 建立快速、灵敏的司帕沙星残留间接竞争酶联免疫检测方法。方法 采用混合酸酐法,将司帕沙星与牛血清白蛋白和卵清蛋白分别合成免疫抗原(sparfloxacin-BSA)和包被抗原(sparfloxacin-OVA)。通过背部多点免疫法免疫大白耳兔,制备了抗司帕沙星的特异性抗血清。结果 利用所获得的特异性抗血清,建立了测定司帕沙星的间接竞争酶联免疫检测方法(ciELISA),其线性范围为5ng/mL～2μg/mL(R2=0.9942),且与HPLC方法具有良好的相关性(R2=0.9918)。样品牛奶、大鼠血浆和尿液中的加样回收率分别为93.7～110.3％、105.6～113.3％和90.2～98.1％％。应用所建立的方法,对司帕沙星大鼠体内药物分析及药品中的含量进行了测定。结论 本研究所建立的检测司帕沙星残留的酶联免疫检测方法具有样品处理简单,灵敏度高及分析速度快等优点,非常适合于生物样品分析及药品残留的筛选工作。     

大鼠血浆中芦荟大黄素浓度的固相萃取-高效液相色谱法测定及其药代动力学研究

目的:建立芦荟大黄素在大鼠血浆中的固相萃取-高效液相色谱(SPE-HPLC)分析方法,研究大鼠体内的药代动力学过程。方法:SD大鼠,按50和20 mg.kg-1剂量灌胃给药,不同时间点尾静脉取血,以SPE处理血浆样品,用HPLC内标法测定血药浓度,甲醇-0.1%磷酸水(70∶30)为流动相,柱温为30℃,检测波长254 nm,以DAS2.0软件计算药代动力学参数。结果:血浆中芦荟大黄素在0.016～19.53μg.mL-1(r=0.998 1)范围内线性关系良好,提取回收率为88.7%～94.6%,最低检测限为0.008μg.mL-1,定量限为0.016μg.mL-1,日内和日间精密度RSD均<6%。结论:芦荟大黄素在大鼠体内呈二室模型,分布广泛。建立的测定大鼠体内芦荟大黄素含量的方法具有良好的准确度、精密度以及专属性,适用于芦荟大黄素在大鼠体内的药代动力学研究。     

多抗夹心ELISA测定人血浆普莱单抗浓度

建立多抗夹心ELISA测定人血浆普莱单抗(anti-GPIIb/IIaF(ab)2)浓度的方法并进行方法学验证.采用复合快速免疫法免疫家兔获得抗血清,经常规及普莱单抗特异性亲和层析纯化,并以人AB型血浆偶联的Sephorose 4B凝胶去除与人血浆的交叉反应.以获得的特异性多抗包板,生物素标记的该多抗为检测抗体,建立测定人血浆普莱单抗浓度的多抗夹心ELISA法,并进行了方法学验证.复合快速免疫法可在较短的时间内获得了高滴度的抗普莱单抗的多抗;利用所获得的多抗构建的ELISA试剂盒测定普莱单抗的浓度范围为1.56～50ng·mL-1,方法学认证的各项指标符合药代动力学研究的要求,为进行临窗前及临床普莱单抗药物代谢动力学研究奠定了坚实的基础,为其它单抗及高分子生物技术药物的药代动力学研究提供了借鉴思路.     

HPLC法测定蝙蝠葛碱与大鼠和人血浆蛋白的结合率

目的:建立测定蝙蝠葛碱的高效液相色谱(HPLC)法,并研究蝙蝠葛碱与大鼠和人血浆蛋白的结合率。方法:采用平衡透析法,HPLC法测定蝙蝠葛碱的浓度,计算蝙蝠葛碱大鼠及人血浆蛋白结合率。结果:透析外液中的蝙蝠葛碱检测浓度在0.24～15.10μg.mL-1范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系;大鼠血浆中的蝙蝠葛碱检测浓度在0.24～15.10μg.mL-1范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系;人血浆中的蝙蝠葛碱检测浓度在0.24～15.10μg.mL-1范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系。蝙蝠葛碱在高、中、低浓度下,其大鼠血浆蛋白结合率分别为(69.63±1.30)%、(68.64±1.10)%、(72.54±0.50)%,人血浆蛋白结合率分别为(82.1±1.00)%、(84.96±0.70)%、(78.79±0.60)%。结论:HPLC法用于蝙蝠葛碱生物样品测定具有简便、灵敏与选择性高的特点;蝙蝠葛碱具有较强的血浆蛋白结合率,且大鼠和人血浆蛋白结合率具有种属差异性,人血浆蛋白结合率高于大鼠血浆蛋白结合率(P<0.05)。     

新型钙离子拮抗剂DY-9836在大鼠体内的药动学

目的建立测定大鼠血浆中新型钙离子拮抗剂DY-9836浓度的高效液相色谱-荧光检测(HPLCFl)法,研究DY-9836在大鼠体内的药动学。方法以维拉帕米为内标,色谱柱:Extend C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相:乙酸钠(pH=6.5)-乙腈(50∶50,V/V);流速:1 mL·min-1;柱温:35℃;λex=304 nm,λem=335 nm。大鼠灌胃后,测定血浆中DY-9836的浓度,采用WinNonLin 5.2软件计算药动学参数。结果 DY-9836的血药浓度线性范围为0.327～4.083μg·mL-1;方法回收率分别为93.35%～98.08%;DY-9836在大鼠体内的主要药动学参数:Ke为(0.05±0.01)h-1、t1/2为(14.20±0.92)h、tmax为(1.25±0.42)h、ρmax为(2.98±0.56)μg·mL-1、AUC0-t为(37.74±2.00)μg·h·mL-1、AUC0-∞为(41.71±1.90)μg·h·mL-1、CL为(480.3±22.0)mL·h-1·kg-1、MRT0-t为(19.30±0.60)h。结论本实验所建立的测定血浆中DY-9836的HPLC-Fl方法简便、快速、灵敏、准确、可靠。     

大鼠血浆中木兰花碱的HPLC法测定及药动学研究

目的:建立大鼠血浆中木兰花碱的高效液相色谱分析方法,研究其在大鼠体内药动学过程。方法:以塔斯品碱为内标,采用甲基叔丁基醚沉淀蛋白。色谱柱为Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.05mol·L-1 KH2PO4-三乙胺(42:58:0.5,V:V:V),流速为1.0mL·min-1,紫外检测波长为260nm。结果:大鼠血浆内源性物质对木兰花碱测定无干扰,木兰花碱检测浓度在0.50～30.00μg·mL-1范围内与木兰花碱对内标塔斯品碱的峰面积之比线性关系良好(r=0.9994);提取回收率≥91.05%,方法回收率在90.57%～95.38%之间,日内、日间精密度RSD均≤8.42%(n=6)。木兰花碱在大鼠体内的血药浓度-时间曲线符合二室模型。结论:该方法准确、简便、灵敏,适用于木兰花碱在大鼠体内的药动学研究。     

黄连解毒胶囊中栀子苷在大鼠体内药代动力学研究

目的建立测定大鼠血浆中栀子苷含量的高效液相色谱法,并比较了灌胃栀子苷和黄连解毒胶囊后栀子苷在大鼠体内的药代动力学特点。方法(Gardenoside)采用HypersilC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水(30∶70),流速1.0mL·min-1,检测波长为238nm。结果大鼠血浆中栀子苷在0.05～5.00mg·mL-1范围内线性良好,回收率大于95%(n=5),日内和日间RSD均小于5%(n=5)。结论栀子苷在大鼠体内的药时曲线符合二室模型特征。所建立的方法准确,灵敏度高,专属性好,可用于栀子苷的体内血浆药物浓度分析。     

LC-MS/MS法测定舒肝平胃丸中厚朴酚在大鼠体内的血药浓度及其药动学研究

目的:建立舒肝平胃丸中厚朴酚在大鼠体内血药浓度的LC-MS/MS测定方法,并研究其在大鼠体内的药动学。方法:以1,8-二羟基蒽醌为内标,血浆样品经甲醇沉淀蛋白。以Agilent ZOBAX SB-C18柱(2.1 mm×50 mm,3.5μm)进行分离;采用电喷雾离子源(ESI源)以正离子方式检测;扫描方式:多反应离子监测(MRM)方式。结果:厚朴酚血药浓度在0.0166～1.66μg.mL-1范围内线性关系良好(r=0.9996);平均提取回收率在83.3%～86.1%之间,日内、日间RSD均≤7.2%。结论:本方法快速、简便、准确、灵敏,适用于舒肝平胃丸中厚朴酚的药动学研究。     

牛乳中抗幽门螺杆菌特异性抗体的间接ELISA法的建立

目的 建立抗幽门螺杆菌(Hp)特异性抗体的ELISA检测方法,用于牛乳中抗Hp特异性抗体的检测.方法 超声Hp全菌抗原接种奶牛,按多克隆抗体制备技术制备牛抗Hp抗血清.用纯化牛IgG免疫家兔.制备兔抗牛IgG多克隆抗体.硫酸铵盐析,DEAE-32柱层析分别纯化牛与兔IgG.兔抗牛IgG以辣根过氧化物酶标记.用Hp全菌抗原包被反应板,建立间接ELISA法用于牛乳抗Hp抗体的检测.结果 建立的抗Hp间接ELISA法的最佳包被抗原量为1.47μg/孔,HRP-兔抗牛IgG 1∶600稀释,标准曲线方程为A=0.0124 0.3988 lnC,相关系数r=0.999 8,线性范围为1.8～145μg/ml,回收宰在86.4%～92.8%,变异系数为9.4%～12.3%.结论 初步建立牛乳中抗Hp抗体的间接ELISA测定法,可用于Hp免疫牛乳中抗Hp特异性IgG的检测.     

LC-IT-MS/MS法测定大鼠体内商陆皂苷甲浓度及其药动学研究

目的:建立测定SD大鼠体内商陆皂苷甲(EsA)血药浓度的高效液相-离子阱串联质谱方法;研究EsA在SD大鼠体内的药动学特征。方法:采用Diamonsil C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,3μm),流动相为甲醇-水(含0.1%冰醋酸)(70∶30),流速为0.2 mL.min-1,采用ESI源,正离子检测模式,以人参皂苷Rg1为内标,血浆样品经正丁醇液液萃取后进样分析,测定大鼠血浆中EsA浓度,BAPP软件计算主要药动学参数。结果:在选定的色谱条件下,EsA和内标分离良好,没有内源性物质干扰。EsA在5～500 ng.mL-1范围内线性良好(r=0.998 3),最低定量限为5 ng.mL-1,提取回收率大于70%,日内和日间精密度小于10%。SD大鼠灌胃给予EsA 15 mg.kg-1后,其主要药动学参数AUC0～24 h为(1 013.85±82.73)ng.h.mL-1,AUC0-∞为(1 076.31±92.70)ng.h.mL-1,t1/2为(6.16±0.63)h,Cmax为(218.80±38.33)ng.mL-1,Tmax为(0.8±0.1)h。结论:本方法简便快捷、灵敏准确;本研究所获得的EsA在SD大鼠体内的药动学参数为EsA的临床应用提供了依据。     

血清Hcy、IL-6及hs-CRP水平在2型糖尿病肾病患者中的变化及临床意义

目的探讨2型糖尿病肾病患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、白介素-6(IL-6)和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平的变化及其临床意义。方法选择2型糖尿病患者100例,根据尿白蛋白排泄率(UAER)分组,其中无白蛋白尿组(DM组)28例,早期糖尿病肾病组(DN1组)34例,临床糖尿病肾病组(DN2组)38例,另选健康体检者30例作为对照组。采用ELISA法分别测定各组血清Hcy、IL-6水平,应用免疫比浊法测定血清hs-CRP水平。结果 2型糖尿病肾病患者组血清中Hcy IL-6及hs-CRP水平高于正常人组及DM组,且随糖尿病肾病的加重而增高,组间比较差异有显著性(P<0.05)。结论 Hcy IL-6及hs-CRP是2型糖尿病肾病的病理生理过程中重要的炎性介质,在2型糖尿病肾病的发生及发展过程中可能起重要作用。检测Hcy IL-6及hs-CRP有助于DN患者病情及预后的判断。     

A reverse-phase HPLC assay for the simultaneous determination of enrofloxacin and ciprofloxacin in pig faeces

A reverse-phase HPLC assay is described for the simultaneous assay of enrofloxacin (ENR) and ciprofloxacin (CPX) in pig faeces. Extraction used dichloromethane, 2-propanol and 0.3M ortho-phosphoric acid (1:5:4 v/v/v). Separation was achieved using a Spherisorb S5 C8 column, heated to 50 degrees C and a mobile phase of 0.16% ortho-phosphoric acid (adjusted to pH 3.0 with tetrabutylammonium hydroxide solution) with 20 ml acetonitrile per litre solution. The method used fluorescence detection (Ex 310 nm; Em 445 nm), a flow rate of 1 ml/min and a 20 microl injection volume. Retention times were approximately 6 min for ciprofloxacin and 10 min for enrofloxacin. The linearity range for both compounds was 0-20 mg/kg, lowest limit of quantification 0.3 mg/kg and recoveries were >92%.     

Evaluation of human albumin use in a university hospital in Belgium

In 1996 — 1997, a drug use evaluation )DUE) of human albumin was conducted in the Ghent University Hospital )Belgium) to determine the pattern and appropriateness of the albumin use. The DUE was followed by permanent review of the albumin consumption. This paper describes how the DUE was carried out and how the albumin use in our hospital changed over time.Method: The study was based on criteria for indications and end of treatment, accepted by consensus of the physicians prescribing albumin. Albumin treatment episodes were classified as appropriate or inappropriate according to these criteria.Results: For 115 treatment episodes in 90 patients, the researchers found 21 )18.3%) deviations from the developed criteria. After analysis, half out of them were considered as minor. Most deviations involved starting treatment too early )n = 17). Follow-up results indicated that the overall consumption of albumin dropped by 50.1% from 1994 to 1999, while the consumption of colloid solutions during the same period remained stable.Conclusion: A good compliance with internally developed criteria for indications and end of treatment with human albumin was observed. Discussion with the clinicians involved led to the development of stricter criteria and a continuous decrease in albumin consumption.     

3-脱氧葡萄糖醛酮体外生成AGEs模型的建立

目的：建立可用于药物筛选的体外蛋白质非酶糖基化模型。方法：37℃孵育1周后用流动注射法于波长（λ：Ex／Em）：370／440nm处测定糖基化终产物（AGEs）。结果：反应1周后，反应体系内3-脱氧葡萄糖醛酮（3．DG）浓度与AGEs的吸收度值呈线性关系，y=22．946x＋22．846；r^2=0．9985。结论：随着各反应体系中底物3-DG浓度的增加及反应时间的延长，蛋白质非酶糖基化反应增强3-DG为底物与牛血清白蛋白组成反应系统，能较可靠地反映AGEs的生成变化，有望成为体外蛋白质非酶糖基化的1种新模型。     

异硫氰酸荧光素标记人血清白蛋白

目的：用异硫氰酸荧光素（FTTC）对人血清白（HSA）进行荧光标记。方法：采用直接标记法,并考查不同料比时的荧光素分子与蛋白分子的结合情况,荧光标记物（FTTC－HSA）的荧光光谱及荧光寿命情况,结果：FTTC－HSA的激发波长为500nm,荧光波长为530nm;其固态和液态低温保存时荧光寿命分别为一年和37天。     

黄芩苷完全抗原的合成鉴定及其多克隆抗体的制备

目的:研究黄芩苷作为一种半抗原分子,通过与载体蛋白偶联形成完全抗原后,使免疫动物血清中产生特异性抗体的可能性,为进一步建立黄芩苷的免疫分析测定方法提供实验依据。方法:采用活性酯法将黄芩苷(BAL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备黄芩苷完全抗原(BAL-BSA),并采用红外吸收光谱法、SDS-PAGE法、MALDI-TOF-MS法对其进行鉴定。用此完全抗原免疫动物制备抗血清,通过间接ELISA法检测其抗体效价。结果:完全抗原BAL-BSA中BAL与BSA的偶联比为3∶1;用此完全抗原免疫的家兔产生针对BAL的多克隆抗体,抗体效价最高可达1∶8000。结论:成功合成了BAL的完全抗原BAL-BSA,且该抗原具有良好的反应原性与免疫原性。     

抗氧化活性藻蓝色素与牛血清白蛋白的相互作用

目的:进一步验证藻蓝色素(phycocyanobilin,PCB)的抗氧化作用,并研究藻蓝色素与牛血清白蛋白(bovine serum albu-min,BSA)之间的相互结合反应。方法:通过1,1-二苯基-2-苦基肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)清除法验证PCB的抗氧化作用。用荧光光谱法、分光光度法研究了PCB与BSA的相互结合反应。结果:PCB对DPPH自由基的清除作用呈现一定的量效关系。随着PCB浓度的增加,BSA的荧光强度有规律地降低且呈良好的线性关系。结论:抗氧化活性PCB能够有效地淬灭BSA的内源荧光,该猝灭作用属于静态荧光猝灭作用,反应的结合常数K=1.22×106L.mol-1,结合位点数n=1.14,与PCB的结合基本不会引起BSA的构象变化。     

Enoyl acyl carrier protein reductase inhibitors: an updated patent review (2011 – 2015)

Introduction: Enoyl-(acyl-carrier-protein) reductase (ENR) is a limiting step enzyme in the Fatty Acid Synthase II system. In mammals, there is no homologue to ENR, which makes it an optimal candidate target for selective anti-infective drugs. Up-to-date, only two ENR inhibitors are used in clinical practice.

Area covered: This review is a survey on important patents on low molecular weight compounds with ENR inhibiting activity published in 2011–2015. Common patent databases (SciFinder, esp@cenet, WIPO) were used to locate patent applications on the proposed topic and in the timespan of 2011–2015.

Expert opinion: In 2011–2015, we have observed patents in previously known structural groups of diphenyl ethers and acrylamides as well as new structural classes, often identified by high-throughput screening campaigns. The spectrum of activity of applied derivatives covers significant bacteria, mycobacteria, and apicomplexan parasites (Plasmodia and Toxoplasma). Good news from research of ENR inhibitors: a) four selective anti-staphylococcal compounds applied in 2011–2015 or earlier were pushed to Phase I or Phase II clinical trials and some of them proved safety and tolerability after peroral and/or intravenous administration; b) big pharma companies have renewed their interest in the development of new anti-infective compounds against resistant strains of clinical relevance.