早期百草枯中毒大鼠肺和肝组织NF—κBp65、MCP-1mRNA表达的变化

目的探讨百草枯（PQ）中毒的分子机制。方法应用半定量RT-PCR法检测PQ中毒大鼠染毒4h后肺、肝组织核因子-κBp65（NF-κBp65）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）mRNA的表达,并与正常对照组比较。结果大鼠PQ染毒4h后,肺、肝组织NF-κBp65、MCP-1mRNA的表达明显上调,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论PQ中毒大鼠4h内肺、肝组织NF—κBp65、MCP-1mRNA表达就已明显上调,提示在PQ致机体中毒的毒性过程中,早期就有细胞因子的参与。     

姜黄素对溶血磷脂酰胆碱诱导内皮细胞炎症因子产生的影响

目的：观察姜黄素对溶血磷脂酰胆碱（LPC）诱导内皮细胞炎症因子产生的影响,探讨姜黄素抗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法：体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,待细胞生长到融合状态时加入不同浓度（25、50、100mg／L）的姜黄素预处理30min,然后加入LPC（5mg／L）作用24h,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、IL-6和TNF-α的含量;实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测ICAM—1、MCP-1、IL-6和TNF-α mRNA的表达;蛋白印迹法（Wesiem blot）和免疫细胞化学染色法检测核因子-κBp65（NF-κBp65）蛋白的表达。结果：LPC能明显增加HUVECs ICAM-1、MCP-1、IL-6、TNF-α mRNA和NF-κB p65蛋白的表达以及上清液中ICAM-1、MCP-1、IL-6、TNF-α的含量,而预先应用不同浓度的姜黄素干预后,上述效应明显减弱,并且具有剂量依赖性。结论：姜黄素抑制炎症因子的产生可能与其抑制NF—κB的活性有关。     

晚期糖基化终产物对肾小球系膜细胞表达Fractalkine的诱导作用

目的 探讨晚期糖基化终产物（AGE）对肾小球系膜细胞表达Fractalkine（Fkn）的影响. 方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,实验设AGE组:加入AGE BSA ( 100 mg/L);对照组:加入牛血清清蛋白（BSA）（100 mg/L）;PDTC组:先加入PDTC100 μmol/L 孵育1 h,再加入AGE BSA ( 100 mg/L) ;AGE抗体组:先加入抗AGE 抗体(100 mg/L IgG) 孵育2 h后,再加入AGE BSA ( 100 mg/L).培养所需时间收集细胞,检测Fkn mRNA及蛋白表达,激光共聚焦显微镜检测NFκB活化. 结果 AGE诱导体外培养的大鼠系膜细胞大量表达Fkn mRNA及蛋白,PDTC和AGE抗体显著抑制AGE诱导系膜细胞表达Fkn mRNA及蛋白.经AGE刺激后NF κB/P65迅速核转位,30 min达高峰。 结论 AGE通过活化NF κB诱导肾小球系膜细胞表达Fkn.     

核因子-κB、增殖性细胞核抗原在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨核因子-κB（NF-κB）、增殖性细胞核抗原（PCNA）在宫颈癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学方法,检测45例宫颈癌组织及30例正常宫颈组织中NF—κBp65、PCNA的表达。结果宫颈癌组织中NF-κBp65、PCNA表达率均明显高于正常组织（P〈0．05）。Ⅰb、Ⅱa期宫颈癌组织NF—κBp65、PCNA表达明显高于Ⅰa期宫颈癌组织（P〈0．05）,低分化者表达明显高于中、高分化者（P〈0．05）,有淋巴结转移者明显高于无淋巴结转移者（P〈0．05）;且NF-κBp65与PCNA的表达呈正相关（r=0．705,P〈0．05）。结论NF-κB、PCNA与宫颈癌的发病、侵袭和转移密切相关。     

核因子-κB在凝血酶促自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：研究凝血酶诱导培养的自发性高血压大鼠（SHR）血管平滑肌细胞（VSMCs）的增殖作用，探讨其引起VSMCs增殖与NF—κB途径的关系及可能机制。方法：以0．01、0．1、0．2、0．5、1．0、2．0U／mL的凝血酶与培养的VSMCs共孵育24h和用0．5U／mL凝血酶与VSMCs分别孵育1、2、6、12、24、48h：采用WST-1代谢活性和^3H—TdR掺入率测定VSMCs细胞增殖率；免疫荧光法和蛋白质印迹技术检测基础状态下和0．5U／mL凝血酶干预的VSMCs中NF—κB的细胞内定位及其核中NF—κB的蛋白含量；以已知的AngⅡ和PDGF对VSMCs的增殖作用为阳性对照，研究NF-κB途径与凝血酶诱导的VSMCs增殖关系,100μmol／LPDTC（NF—κB特异性阻断剂）预处理后检测凝血酶引起VSMCs的增殖率。结果：浓度为0．2～2．0U／mL的凝血酶对VSMCs分别有明显的促增殖作用（P〈0．05和P〈0．01）；但浓度为0．5～2．0U／mL的凝血酶作用24h对VSMCs的促增殖作用差异无统计学意义（P〉0．05）。0．5U／mL凝血酶促VSMCs的增殖呈双峰样改变．1h和24h分别达峰值。基础状态下VSMCs的NF-κB主要分布于细胞浆，凝血酶干预后VSMCs的NF—κB主要分布于细胞核。PDTC预处理明显抑制凝血酶促VSMCs增殖的作用（P〈0．01）。结论：浓度0．2～0．5U／mL范围内的凝血酶呈浓度依赖性方式促进培养SHR的VSMCs增殖：而且在时间上呈双峰样改变，提示凝血酶的促增殖作用存在延迟现象。凝血酶能够激活VSMCs的NF—κB，使其从细胞浆转位至细胞核。凝血酶引起VSMCs增殖与NF-κB途径有关联，NF—κB可能是VSMC增殖的细胞内信号转导的共同通路。     

小白菊内脂通过wnt/β-catenin影响胃癌细胞侵袭、迁移、凋亡的机制研究

目的 研究小白菊内酯对胃癌细胞的侵袭、迁移和凋亡的影响.方法 采用终浓度为10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L的小白菊内酯处理胃癌细胞SGC-7901、SNU-1作为不同浓度小白菊内酯处理组,以0μmol/L小白菊内酯处理的SGC-7901、SNU-1细胞作对照(control)组;用...     

小白菊内酯抑制紫杉醇诱导的肿瘤细胞凋亡

目的　探讨NF κB在紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡中的作用及小白菊内酯对紫杉醇诱导凋亡的影响。方法　以人乳癌BCap37细胞和人表皮KB细胞为研究对象 ,用 5,1 0和 2 0 μmol·L-1 小白菊内酯预处理细胞 ,以DNA凋亡梯状条带、DNA含量、MTT、细胞甩片及电泳迁移率变动分析 (EMSA)法检测它对紫杉醇诱导细胞凋亡的影响并探索其作用靶点。结果　通过检测DNA凋亡梯状条带、DNA含量和细胞生存率 ,2 0μmol·L-1 小白菊内酯能显著抑制紫杉醇所诱导的BCap37和KB细胞凋亡 ,但不影响紫杉醇诱导肿瘤细胞G2 /M期阻滞。EMSA实验表明小白菊内酯能抑制紫杉醇诱导激活NF κB。结论　小白菊内酯通过抑制NF κB的激活来抑制紫杉醇所诱导的肿瘤细胞凋亡 ,而紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的过程可能与G2 /M期阻滞无关     

氯胺酮对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠NF-κB的影响

目的探讨氯胺酮对重症急性胰腺炎肺损伤大鼠NF-κB的影响。方法60只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组,SAP组和氟胺酮干预组（KTM组）,每组20只。应用逆行胰胆管泵注5％牛磺胆酸钠诱导大鼠重症急性胰腺炎。氯胺酮干预组术后腹腔给予4mg／kg氯胺酮。造模后12h检测肺湿重干重比,肺泡灌洗液中蛋白含量和中性粒细胞百分比,并应用原位杂交法检测造模后6h,12h肺组织NF-κBp65mRNA的表达。结果NF-KBp65mRNA在SAP时除肺泡的细胞质内有表达外,出现细胞核内表达,随时间的延长表达逐渐增加,KTM组NF—KBp65mRNA的表达明显下降。结论NF—κB活化与sAP的肺损伤密切相关,氯胺酮可以通过抑制NF-KBp65mRNA的表达起到肺保护作用。     

血管紧张素-（1-7）对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞表型转化的影响

目的观察血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化的影响。方法将35株体外培养的大鼠肾小球系膜细胞株EC（HB2Y-1）随机分为对照组9株,低糖组6株,高糖组7株,高糖＋Ang-（1-7）10-6mol/L组6株及高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组7株。采用免疫化学染色检测各组α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果高糖组细胞α-SMA表达明显高于对照组（P〈0.01）;与高糖组相比,高糖＋Ang-（1-7）10^-6mol/L组及高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组α-SMA阳性细胞率明显下降（P〈0.01）,但高糖＋Ang-（1-7）10^-7mol/L组下调幅度较低。结论Amg-（1-7）呈剂量依赖性抑制高糖诱导的体外培养大鼠肾系膜细胞表型转化。     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

氟伐他汀对溶血磷脂酰胆碱致内皮细胞粘附分子和基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的：观察氟伐他汀对内皮细胞粘附分子（intercellular adhesion molecule，ICMA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响，探讨氟伐他汀抗动脉粥样硬化（AS）的作用机制。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，待细胞生长到融合状态时加入溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholine，LPC）5mg／L作用0、12、24、48h，观察LPC对ICAM和MMP-9表达的影响。不同浓度（10^-7 -10^-5mol／L）的氟伐他汀预先孵育20min，然后加入LPC（5nvdL）作用24h，用免疫细胞染色法检测核因子-κBp65（NF-κBp65）、ICAM-1、血管细胞粘附分子-1（vasettlar cell adhesion molecule-1。VCAM-1）蛋白和用RT-PCR检测MMP-9mRNA的表达水平。结果：LPC能明显增加ICAM-1、VCAM-1和MMP-9的表达，相关分析表明，NF-κBp65与ICAM-1、VCAM-1和MMP-9的表达呈直线相关关系。而预先应用不同浓度的氟伐他汀干预后，上述效应明显减弱，并且具有剂量依赖性。结论：LPC通过激活NF-κBp65而导致内皮细胞ICAM-1、VCAM-1和MMP-9的表达增强，而氟伐他汀对上述效应有抑制作用。     

大鼠心肌缺血缺氧损伤核转录因子-κB与细胞间粘附分子-1的表达

目的　研究异丙肾上腺素致大鼠心肌损伤对心肌核转录因子 κB(NF κB)以及细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达的影响。方法　大鼠皮下注射异丙肾上腺素造成心肌坏死模型,测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸磷酸激酶(CK)活力和丙二醛(MDA)含量,观察心肌坏死程度,免疫组化检测心肌NF κBp65蛋白的表达,Western蛋白质印迹杂交检测IκBα的蛋白质表达,半定量RT PCR检测ICAM 1mRNA含量。观察腹腔注射地塞米松后上述指标的变化。结果　大鼠给予异丙肾上腺素后,血清LDH、CK和MDA含量升高,心肌坏死,NF κBp65蛋白大量表达,IκBα蛋白质表达减弱,ICAM 1mRNA表达上升。地塞米松使升高的LDH、CK和MDA明显下降,减轻心肌坏死程度,显著抑制NF κBp65蛋白和ICAM 1mRNA表达,IκBα蛋白质表达增强。结论　儿茶酚胺大量释放引起的心肌缺血缺氧损伤中,NF κB和ICAM 1mRNA表达增加,表明抑制NF κB激活,减少ICAM 1mRNA的表达及炎性细胞因子产生是减少心肌缺血缺氧损伤的关键点之一。     

硫辛酸通过抑制NF-κB-iNOS-NO信号保护氧化应激诱导的PC12细胞损伤

目的研究硫辛酸对氧化应激的PCI2细胞NF-κB—iNOS-NO信号通路的影响。方法用终浓度为0．4mmol·L^-1的H2O2损伤PC12细胞,用MTT法测定细胞存活率;用激光共聚焦法（LSCM）检测细胞内一氧化氮的动态变化;用RT-PCR法检测iNOS mRNA和NF-κBp65 mRNA表达量的变化。结果0．4mmol·L^-1的H2O2处理PC12细胞4h,细胞存活率为27．9％（P〈0．01）,硫辛酸10mg·L^-1可以提高H2O2损伤的PC12细胞存活率（65．4％,P〈0．01）;LSCM检测显示,DAF-2荧光强度的比值（F1/F0）的最大值由损伤模型组的5．34下降到1．80;和模型组比较,iNOS mRNA和NF柚p65mRNA的表达明显下调（P〈0．05或P〈0．01）。结论硫辛酸可能通过抑制NF-κB-iNOS—NO信号减轻氧化应激诱导的PC12细胞损伤。     

小白菊内酯对U-87 MG迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的研究小白菊内酯对恶性人脑胶质瘤细胞系U-87 MG细胞迁移、侵袭的抑制作用,并探讨其作用机制。方法采用CCK-8比色检测法筛选小白菊内酯处理细胞的IC50浓度;采用细胞划痕实验观察小白菊内酯处理0、12、48 h后U-87 MG细胞的迁移情况,并且测量48 h后迁移的距离;采用Transwell实验观察穿膜细胞数,判断细胞的侵袭能力;并采用q PCR以及Western blotting法研究了小白菊内酯处理后,U-87 MG细胞的SNAIL、E-Cadherin的表达变化,以及GSK3β-Ser9蛋白质磷酸化变化。结果 CCK-8比色检测法筛选的小白菊内酯IC50浓度为39μmol/L。与对照组比较,在小白菊内酯处理48 h后,U-87 MG细胞迁移的距离和穿膜细胞数都明显减少,且与浓度呈正相关(P0.01);与对照组比较,小白菊内酯处理的U-87 MG细胞内SNAIL基因表达下降,同时E-Cadherin表达上调,且表达差异明显(P0.05);GSK3β-Ser9残基磷酸化水平下降。结论小白菊内酯能够抑制U-87 MG细胞的迁移、侵袭,可能是通过下调GSK3β磷酸化从而抑制了SNAIL蛋白表达入核,从而促进了E-Cadherin蛋白的表达而引起的。     

Ski在全反式维甲酸抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖中的作用

【摘要】目的 探讨全反式维甲酸（ATRA）对转化生长因子(TGF)-β1诱导的大鼠系膜细胞增殖及Ski表达的影响。方法 不同浓度ATRA预处理大鼠HBZY-1系膜细胞（为各剂量ATRA组）24 h后再加TGF-β1 (10 μg/L)培养24 h。 CCK-8法检测细胞增殖情况;Real-time PCR法检测Ski mRNA的表达;Western blot检测Ski蛋白的表达;激光共聚焦荧光显微镜检测Ski蛋白的亚细胞定位。并与正常对照组及TGF-β1组比较。结果 与正常对照组相比,TGF-β1组系膜细胞增殖明显,且Ski mRNA及蛋白表达升高(P < 0.05);与TGF-β1 组相比,ATRA能够呈剂量依赖性地抑制 TGF-β1的促增殖作用,ATRA 10 μmol/L组Ski mRNA及蛋白表达量明显增高。ATRA组Ski蛋白主要定位于大鼠系膜细胞核,其细胞核荧光信号强度较TGF-β1组明显增强,细胞浆中荧光信号强度较TGF-β1组减弱。结论 ATRA可通过上调大鼠系膜细胞Ski表达,抑制其向核外转位,从而抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖。     

银杏黄酮磷脂复合物对动脉粥样硬化大鼠iNOS和NF-κB的影响

目的：探讨动脉粥样硬化时银杏黄酮及其磷脂复合物对大鼠主动脉iNOS及NF—κB表达的影响。方法：将40只健康Wistar雄性大鼠随机分为4组：正常对照组;模型组;银杏黄酮组90mg／（kg·d）;银杏黄酮磷脂复合物组90mg／（kg·d1。喂养70d后取胸主动脉HE染色,测定血TC、TG、HDL、LDL;RT-PCR测主动脉iNOS mRNA的表达,免疫组化测NF—κB的表达。结果：与模型组相比,使用银杏黄酮及其磷脂复合物可在一定程度上降低主动脉壁iNOS mRNA和NF—κB的表达（P〈0．01）,且银杏黄酮磷脂复合物的作用明显强于银杏黄酮（P〈0．05）。结论：银杏黄酮磷脂复合物可能通过抑制NF—κB的活化．进而抑制iNOS等相关因子的表达,从而延缓AS病变的发生发展。     

小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2细胞Caspase-3和NF-κB蛋白表达的影响

目的:研究小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2增殖抑制和诱导凋亡作用的机制.为小白菊内酯在临床上早日应用于肝癌患者提供理论及实验依据.方法:用体外培养的方法培养人肝癌HepG-2细胞;用四唑盐(M TT)比色法检测小白菊内酯对人肝癌HepG-2细胞的抗增殖及细胞毒作用;用倒置显微镜、HE染色光学显微镜;用免疫组织化学染色法检测小白菊内酯作用人肝癌HepG-2前后Caspase-3、NF-κB蛋白阳性表达变化的情况.通过以上实验研究小白菊内酯在体外对人肝癌HepG-2在细胞增殖、细胞凋亡等方面的影响及其作用机制.结果:(1)MTT法结果显示:小白菊内酯对人肝癌HepG-2细胞的作用影响具有浓度和时间依赖性;(2)细胞形态学观察:倒置显微镜观察到对照组细胞贴壁生长,伸展性良好,细胞呈梭形和多角形,细胞之间连接紧密.小白菊内酯作用人肝癌HepG-2 24h以后,增殖速度减慢,细胞贴壁能力下降,细胞之间连接疏松.药物作用48h以后,增殖速度大大减慢,大部分细胞变圆漂浮在培养瓶中.药物作用72h以后,几乎无活细胞,并且可见死细胞碎片;HE染色光学显微镜下观察:对照组细胞呈梭形和多角形,细胞之间连接紧密,细胞胞浆丰富,细胞核完整;药物作用24h以后,细胞伸展减弱,有一部分细胞呈现圆形,细胞之间连接疏松,核浓缩,染色质出现边聚;药物作用48h后视野中可见凋亡细胞和死亡细胞,细胞浆浓缩、染色质浓缩成新月形和“出泡”现象的变化;(3)免疫组化结果显示:实验组Caspase-3表达增加,NF-κB表达降低,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05).结论:小白菊内酯对人肝癌HepG-2细胞有明显的抑制增殖作用,呈现出浓度和时间的依赖性;小白菊内酯对人肝癌HepG-2细胞株有诱导凋亡作用,其诱导人肝癌HepG-2细胞凋亡机制可能与NF-kB、Caspase-3等信号转导有关.     

小白菊内酯对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的观察小白菊内酯（PN）对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响并分析其可能机制。方法不同浓度PN作用于结肠癌HT-29细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Western Blot法检测核转录因子（NF）-B亚单位pso、环氧化酶（cox-2）蛋白表达的改变;ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）浓度。结果PN能诱导结肠癌细胞的凋亡,且随PN浓度的增加,结肠癌HT-29细胞的凋亡率增加;而NF-κB亚单位p50、COX-2蛋白表达减少,同时PGE2浓度降低。结论PN可诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,其机制可能与其能下调NF-κB、COX-2蛋白表达并减少PGE2生成有关。     

磷脂酰肌醇3—激酶调控白介素—18诱导核因子—κB活化

目的：研究磷脂酰肌醇（PI）3－激酶在白介素18（IL－18）诱导核因子－κB（NF－κB）活化中的作用。方法：Lipofectin介导反义PI 3－激酶寡核苷酸转染HepG2细胞。用逆转录PCR法检测PI 3－激酶mRNA表达水平,以Sandwich ELISA法检测NF－κB的活化。结果：1）反义PI 3－激酶寡核苷酸抑制PI 3－激酶mRNA表达。（2）IL－18诱导NF－κB活化。（3）反义PI 3－激酶寡核苷酸呈时间（5－24h)和浓度（1－8mg/L)依赖性地抑制IL－18诱导的NF－κB活化。结论：PI 3－激酶调控白介素－18诱导的NF－κB活化。     

大黄素对心肌梗死后小鼠心肌组织TNF-α、IL-10基因表达和NF—κB活性的影响

目的：研究大黄素对小鼠缺血后心肌局部细胞因子TNF—α和IL-10表达及NF—κB活性的影响。方法：持续性结扎小鼠冠状动脉左前降支造成心肌缺血损伤模型,用大黄素进行干预。实时定量PCR检测干预后心肌组织的TNF—α和IL-10的mRNA,ELISA法检测TNF—α和IL-10蛋白水平,EMSA测定NF—κB的活性。结果：经大黄素干预后,心肌组织TNF—α的表达明显减少（P〈O．01）,IL-10的表达增加（P〈0．01）,IL-10／TNF—α的比值显著性升高,NF—κB的活性明显减弱（P〈0．01）。结论：大黄素显著抑制干预后心肌组织促炎性细胞因子的表达,抑制NF—κB的活性。