丹酚酸B与三七总皂苷配伍对缺氧复氧内皮细胞粘附分子-1表达及对中性粒细胞与内皮细胞粘附率的影响研究

目的研究丹酚酸B与三七总皂苷配伍对缺氧复氧内皮细胞粘附分子-1(ICAM-1)表达及对中性粒细胞与内皮细胞粘附率的影响。方法体外建立大鼠心脏微血管内皮细胞缺氧再给氧模型,采用流式细胞仪(FCM)检测内皮细胞ICAM-1阳性细胞百分比及平均荧光强度;龙胆紫染色法检测中性粒细胞与血管内皮细胞粘附率。结果内皮细胞缺氧复氧后ICAM-1阳性细胞比例显著增加,ICAM-1平均荧光强度显著升高;150、450μg/L剂量组显著抑制ICAM-1表达和中性粒细胞与内皮细胞粘附率。结论丹酚酸B与三七总皂苷配伍对缺氧复氧内皮细胞ICAM-1表达具有抑制作用,可降低中性粒细胞与内皮细胞粘附率,对内皮细胞损伤具有一定的保护作用。     

PGA1对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的　研究前列腺素A1(PGA1)对缺氧再给氧大鼠心脏微血管内皮细胞ICAM 1表达的影响。方法　培养大鼠心脏微血管内皮细胞,建立细胞缺氧再给氧模型,通过凝胶电泳迁移率(EMSA)测定内皮细胞NF κB的活性,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定内皮细胞粘附分子ICAM 1的蛋白表达,Northernblot分析测定ICAM 1mRNA的表达。结果　大鼠心脏微血管内皮细胞在缺氧刺激后NF κB活性显著增加,ICAM 1的蛋白和ICAM 1mRNA的表达明显增加,再给氧后升高更明显;PGA1处理组NF κB活性较缺氧再给氧组明显下降(P<0 01),ICAM 1的蛋白和ICAM 1mRNA表达明显下降(P<0 01),呈剂量依赖效应。结论　前列腺素A1通过NF κB介导,下调内皮细胞ICAM 1的蛋白和mRNA表达。     

葛根素对缺氧复氧心脏微血管内皮细胞的保护作用

目的:探讨葛根素在心脏微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cell,CMEC)缺氧复氧损伤中的作用。方法:将CMEC随机分为空白组、模型组、葛根素低、中、高剂量(25,50,100 mg·L^-1)共3组。四甲基偶氮唑(methylthiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,Western blot法检测Caspase-3和Bcl-2蛋白表达。结果:葛根素预处理后,缺氧复氧CMEC细胞活力增强,细胞凋亡率、LDH活性及MDA含量降低,SOD活性增强,Caspase-3蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加。结论:葛根素可拮抗缺氧复氧所致的CMEC损伤,可能与其抗氧化及抗凋亡活性相关。     

丹酚酸B对兔离体心脏缺氧再复氧损伤的保护作用

目的观察丹酚酸B对兔离体心脏缺氧-复氧损伤的保护作用。方法离体兔心脏Langendorff灌流,通氮气饱和的灌流液60min后再恢复含氧灌流液灌流60min,造成缺氧-复氧损伤;自动生化分析仪测定冠脉流出液中肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;光学显微镜观察心肌组织结构改变。结果在缺氧的同时给予丹酚酸B0.3,1和3mg.L-l灌流60min,可降低心率,增加冠脉流量,降低冠脉流出液中CK和LDH的水平,心肌组织形态学损伤明显减轻。结论丹酚酸B对兔离体心脏缺氧-复氧损伤有明显的保护作用。     

白细胞介素-1预适应对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 :观察低剂量白细胞介素 1β(IL 1β)预适应能否诱导心肌延迟保护作用的产生 ,并探讨其发生机制。方法 :在大鼠心肌缺血预适应和培养心肌细胞缺氧预适应模型上 ,分别设缺血或缺氧预适应组、IL 1β 预适应 (ILPC)组和缺血再灌注 (I/R )组或缺氧复氧 (A/R)组 ,检测预适应后即刻 ,12h ,2 4h细胞间粘附分子 (ICAM 1)和热休克蛋白72(HSP72 )表达 ,以及中性粒细胞 (PMN )浸润数和超氧化物歧化酶 (SOD)含量 ,并观察预适应 12h和 2 4h后心肌梗死范围和心肌细胞存活率的变化规律。结果 :ILPC组与I/R组比较 ,预适应后 2 4h大鼠心肌ICAM 1的表达、PMN浸润数明显减少 ,心肌梗死范围缩小 (P <0 .0 5或P <0 .0 1) ;与A/R组比较 ,预适应后 2 4h培养心肌细胞存活率、SOD含量、HSP72 表达均显著增加 (P <0 .0 5 ) ,而预适应后即刻无显著差异 (P >0 .0 5 )。结论 :低剂量ILPC和缺血或缺氧预适应能够诱导心肌延迟保护的发生 ;其发生机制除了与HSP72 表达和SOD含量增加有关外 ,且与ICAM 1表达下降 ,减少PMN浸润也有密切关系     

内源性一氧化氮介导脂质胞壁酸预适应对人冠脉内皮细胞再复氧损伤的作用

目的　探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对内皮细胞再复氧(H/R)损伤的作用,以及内源性一氧化氮(NO)参与保护机制的作用。方法　采用培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)在缺氧条件下培养 2h,然后在常氧条件下复氧培养 4h,模拟缺血 /再灌注损伤的模型。HCAECs在缺氧前 24h预先在含LTA(30或 300μg·L-1 )的培养基中培养 4h。用台盼蓝排斥法和培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量来评价内皮细胞损伤程度,比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量。并用RT PCR检测LTA预适应后(2-24)hHCAECseNOSmRNA的表达。结果　LTA预适应能显著减少台盼蓝排斥实验中的细胞死亡百分比,降低复氧末细胞培养液中LDH的含量。LTA预适应亦能显著增加HCAECs复氧末培养液中NO含量。LTA预适应的效应可被非选择性NOS抑制剂L 单甲基精氨酸(L NMMA, 100μmol·L-1 )所取消。在LTA预适应后 2和 4h,HCAECs的eNOSmRNA表达明显增加。结论LTA诱导的延迟预适应能显著减少HCAECs再复氧所致的细胞损伤和功能紊乱,eNOS产生的NO启动并介导了LTA保护内皮细胞的作用。     

内源性一氧化氮介导脂质胞壁酸预适应对人冠脉内皮细胞再复氧损伤的作用

目的探讨脂质胞壁酸(LTA)诱导的延迟预适应对内皮细胞再复氧(H/R)损伤的作用，以及内源性一氧化氮(NO)参与保护机制的作用。方法采用培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAECs)在缺氧条件下培养2 h，然后在常氧条件下复氧培养4 h，模拟缺血/再灌注损伤的模型。HCAECs在缺氧前24 h预先在含LTA(30或300 μg·L^-1)的培养基中培养4 h。用台盼蓝排斥法和培养基中乳酸脱氢酶(LDH)含量来评价内皮细胞损伤程度，比色法检测培养基中一氧化氮(NO)含量。并用RT-PCR检测LTA预适应后(2-24) h HCAECs eNOS mRNA的表达。结果LTA预适应能显著减少台盼蓝排斥实验中的细胞死亡百分比，降低复氧末细胞培养液中LDH的含量。LTA预适应亦能显著增加HCAECs复氧末培养液中NO含量。LTA预适应的效应可被非选择性NOS抑制剂L-单甲基精氨酸(L-NMMA,100 μmol·L^-1)所取消。在LTA预适应后2和4 h，HCAECs的eNOS mRNA表达明显增加。结论 LTA诱导的延迟预适应能显著减少HCAECs 再复氧所致的细胞损伤和功能紊乱，eNOS产生的NO启动并介导了LTA保护内皮细胞的作用。     

前列腺素A1通过NF—κB介导抑制大鼠心脏微血管内皮细胞凋亡

目的:研究前列腺素Al(PGAl)对心脏微血管内皮细胞凋亡的影响.方法:培养分离大鼠心脏微血管内皮细胞,建立缺氧再给氧模型,通过原位缺口末端标记观察PGAl对内皮细胞凋亡的作用;通过凝胶电泳迁移率测定NF-κB的活性;用Western blot法测定Bcl-2和Bax蛋白表达;用Northern blot法测定bcl-2 mRNA的表达.结果:PGAl能明显减少缺氧再给氧内皮细胞的凋亡,抑制NF-κB的活性,升高Bcl-2蛋白及bcl-2 mRNA的表达,不改变Bax蛋白的表达,导致Bcl-2/Bax增加.结论:PGAl通过NF-κB介导抑制大鼠心脏微血管内皮细胞的凋亡.     

丹酚酸B镁盐对缺氧复氧内皮细胞内钙和一氧化氮的影响

目的:研究丹酚酸B镁盐对缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和一氧化氮释放增加的影响.方法:培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)暴露在95％ N_2 5％CO_2条件下缺氧30分钟,后在含5％CO_2的空气中复氧30分钟.内皮细胞的损伤用染料排除实验、SOD的活性和MDA的生成来评价.胞内游离钙浓度用钙荧光探针Fura 2-AM测定.一氧化氮含量用一氧化氮试剂盒测定.内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.结果:缺氧复氧引起内皮细胞的活力由正常条件下(93.1±1.2)％降至(88±3)％(P<0.01),SOD的活性也由(0.24±0.07)kNU/L下降到(0.18±0.03)kNU/L(P>0.05),但其使内皮细胞MDA的生成由(1.12±0.06)mmol/L增至(3.78±0.03)mmol/L(P<0.01).丹酚酸B镁盐2.5,5,10 mg/L能明显降低缺氧复氧引起的内皮细胞MDA生成量的增加,并且显著提高细胞活力和SOD的活性.同时,缺氧复氧还增加内皮细胞的胞内游离钙浓度(F_(340)/F_(380)由 1.65±0.16增至 1.89±0.28)和一氧化氮释放[由(7.5±1.3)μmol/L增至(16±5)μmol/L],并上调其eNOS mRNA的表达,但降低iNOS mRNA的表达(P<0.05).但在无钙的条件下,缺氧复氧对内皮细胞的胞内游离钙浓度、一氧化氮含量、eNOSnRNA和iNOS mRNA表达     

丹酚酸A对缺血/再灌注心肌的保护作用研究

目的研究丹酚酸A对缺血/再灌注性心肌的保护作用及机制探讨。方法采用Sprague Dawley大鼠冠状动脉左前降支结扎10 min,再灌注2 h,评价丹酚酸A(1.5、0.5mg.kg-1)静脉给药对在体状态下大鼠心律失常的影响。以利多卡因(5 mg.kg-1)为阳性对照,各给药组均为结扎前10 min给药。同时评价丹酚酸A对培养的心肌细胞缺氧-复氧损伤的影响。结果丹酚酸A 1.5 mg.kg-1剂量组静脉给药可降低由于心肌缺血/再灌注引起的心律失常发生率,减少肌酸激酶和肌酸激酶同工酶MB从胞体中的漏出。另外,丹酚酸A可防止心肌细胞缺氧-复氧损伤,提高细胞内ATP水平,降低细胞线粒体的膜电位和细胞内钙水平。结论丹酚酸A对缺血/再灌注性心肌具有保护作用,可能是通过抗氧化、抑制钙离子内流、保护线粒体功能、增加心肌细胞中ATP的含量实现的。     

丹酚酸B在剪切应激存在下对血管内皮细胞ICAM-1的影响

目的：观察丹酚酸B（SalB）在不同强度血流剪切应激下对血管内皮细胞ICAM-1的影响。方法：首先建立层流剪切应激（LSS）模型,利用蛋白质化学印迹Westernblot检测不同剪切时间（1、4、24h）对血管内皮细胞表达的细胞内黏附因子ICAM-1的影响;其次利用Westernblot方法检测不同浓度（0、5、10、25、50μg·mL-1）SalB处理内皮细胞后ICAM-1的表达情况;最后血管内皮细胞先用10μg·mL-1SalB预处理24h后,加入LSS[12dynes·（cm2）-1]的剪切应激12h,观察丹酚酸B（SalB）在剪切应激存在下对内皮细胞所表达的ICAM-1的影响。结果：我们发现不同剪切时间（1、4、24h）的LSS[12dynes·（cm2）-1]可呈时间依赖性增加ICAM-1的表达,SalB可呈浓度依赖性降低剪切应激诱导的ICAM-1的表达,这一降低可能是通过NF-κB信号转导途径介导实施的。结论：SalB可通过NF-κB信号转导途径降低LSS诱导的ICAM-1的增高。     

一氧化氮参与预处理心肌细胞早期保护作用

目的　明确一氧化氮 (NO)是否诱导预处理心肌细胞早期保护作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞 ,分为如下各组 :①阴性对照组 (Normal组 ) ;②SNAP(5 0 0 μmol·L-1)预处理组 (NO组 ) ;③缺氧预处理组 (HP组 ) ;④NO合成抑制剂L NAME作用细胞后再行缺氧预处理组 (L NAME +HP组 ) ;⑤L 精氨酸 (L Arg)预处理心肌细胞组(L Arg组 ) ;⑥L NAME与L Arg共同作用于心肌细胞组(L NAME +L Arg组 ) ;⑦缺氧复氧损伤组 (H/R组 )。②～⑥组细胞在给予干预因素后使细胞经历 6h缺氧及 3h复氧 ,阳性对照组不予任何处理直接使其缺氧 6h复氧 3h。分别检测心肌细胞存活率及乳酸脱氢酶 (LDH)活性 ,以判定心肌细胞损伤程度。结果　NO预处理心肌细胞后使其缺氧复氧损伤减轻 ,表现为与单纯缺氧复氧组细胞比较其培养上清LDH活性降低 ,细胞存活率提高 (P <0 0 1) ;缺氧预处理和L Arg预处理细胞均可减轻心肌细胞缺氧复氧损伤 (P<0 0 1) ,但此作用可被NOS抑制剂L NAME所拮抗。结论　内源性及外源性NO均可诱导心肌细胞预处理早期保护作用     

钴原卟啉对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞上清液中LDH、CK的水平变化;用RT-PCR法分析HO-1mRNA表达水平;Westernblot分析HO-1、Nrf2的蛋白表达水平。结果与缺氧/复氧组比,COPP预处理组中LDH和CK水平均明显降低,而HO-1mRNA水平,蛋白水平及细胞核的Nrf2蛋白水平均明显增加;Znpp的加入阻断了COPP预处理对心肌细胞的保护作用;ATAR的加入抑制了Nrf2在细胞核的聚集,进而抑制了COPP对HO-1的诱导。结论COPP预处理诱导H9c2心肌细胞HO-1过表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用;其机制与Nrf2-ARE信号通路相关。     

丙泊酚预处理对大鼠离体心肌缺氧/再给氧损伤线粒体细胞色素C释放的影响

目的探讨丙泊酚预处理对大鼠离体心肌缺氧再给氧损伤时心肌细胞凋亡及线粒体细胞色素C释放的影响。方法50只SD大鼠随机分为5组:对照组(C组),DMSO预处理组(D组),25、50、100μmol.L-1丙泊酚预处理组(P1、P2、P3组)。应用Langendorff离体心脏灌注模型,经主动脉用K-H液逆行灌注。各组均缺氧30min,再给氧60min。DMSO组、P1、P2、P3组在缺氧前分别以含DMSO、相应浓度丙泊酚的K-H液灌注10min,再冲洗5min,重复2次。记录平衡灌注末、缺氧前即刻、再给氧30、60min时的心功能指标。再给氧60min时用DNA原位末端缺口标记技术(TUNEL法)测定凋亡细胞,提取心肌线粒体,免疫印迹法测定线粒体和胞质的细胞色素C水平。结果D组与C组相比差异无显著性;与D组相比,P1、P2、P3组再给氧30min、60min时LVEDP降低、LVDP升高(P<0.05),再给氧末心肌细胞凋亡率降低(P<0.05或0.01),心肌线粒体细胞色素C释放减少,胞质细胞色素C的量明显降低(P<0.05或0.01)。结论丙泊酚预处理能够通过抑制心肌线粒体细胞色素C释放到胞质降低心肌细胞凋亡率,减轻心肌缺氧再给氧损伤。     

羟丁酸钠对大鼠原代培养皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与GABAA受体的关系

目的 :探讨羟丁酸钠 (SO)对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与GABAA 受体的关系。方法 :采用原代培养大鼠皮层神经元建立缺氧复氧损伤模型 ,观察细胞的形态学 ,测定其LDH漏出率、MDA含量、SOD、GPx活力。结果 :缺氧复氧可引起神经元损伤 ,LDH漏出率增加 ,MDA含量升高 (P <0 .0 1) ,SOD、GPx活力降低 (P <0 .0 1)。SO能显著减少损伤神经元的LDH漏出率及MDA的生成 (P <0 .0 1) ,升高SOD、GPx(P <0 .0 1)的活力 ,这种作用可被GABAA 受体阻断剂seurinine减弱 (P <0 .0 1)。结论 :SO对缺氧复氧神经元损伤的保护作用可能与其激动GABAA 受体有关。     

缺氧／再给氧和细胞因子对白细胞与脑微血管内皮细胞粘附作用？…

目的：研究缺氧／再给氧（Ｈ／Ｒ）对中性粒细胞（Ｎｅｕ）和单核细胞（Ｍｏｎ）与诱导的培养牛脑微血管细胞粘附作用的影响。方法：牛脑微血管内皮细胞（ＣＭＦＣ）和平滑肌细胞（ＣＭＳＭＣ）经Ｈ／Ｒ处理或经ＴＮＦ－α和ＩＬ－１α刺激，Ｍｏｎ和Ｎｅｕ与ＣＭＥＣ和ＣＭＳＭＣ粘附的细胞数目用流式细胞仪测定，结果：ＣＭＥＣ先缺氧２ｈ再经复氧与ＴＮＦ－α（２μｇ．Ｌ＾－１）作用２ｈ，Ｍｏｎ和Ｎｅｕ与ＣＭＥＣ的粘附率分别     

PGE_1对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的　研究PGE1对纯化培养心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法　采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧 /复氧损伤模型 ,实验分 5组 :正常细胞培养组、缺氧 /复氧损伤模型组、缺氧 /复氧损伤 +PGE1(5、15、4 5 μg·L-1)组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量 ,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变并测定LDH含量变化。结果　PGE1可明显提高SOD、LDH活性 ,降低MDA含量并可提高线粒体脱氢酶活性。结论　PGE1具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌作用     

黄蜀葵花总黄酮预处理对家兔心肌缺血再灌注损伤的影响

目的研究黄蜀葵花总黄酮(Total F lavone of Abelmos-chusM an ihot(L)M ed ic,TFA)药理性预适应对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法采用持续静脉推注TFA模拟预适应的实验方法,观察家兔冠状动脉左旋支经结扎、再灌后,其心肌组织病理损伤情况、血浆中MDA含量和SOD、GSH-PX活力的变化以及心肌组织中细胞间粘附分子ICAM-1的表达情况。结果TFA不同程度减轻缺血再灌注损伤家兔心肌病理损伤的严重程度;明显降低血浆中MDA的含量,同时增强SOD及GSH-PX的活力;下调缺血心肌组织中ICAM-1 mRNA的表达。结论TFA药理性预适应可通过抑制心肌脂质过氧化、抑制心肌炎症反应,对缺血再灌注损伤的心肌具有保护作用。