薯蓣皂苷对胶原性关节炎模型大鼠环氧合酶2及NF-κB的抑制作用

目的研究薯蓣皂苷对大鼠胶原性关节炎(CIA)的治疗作用并探讨其可能的作用机制。方法第1天大鼠左后足底皮内注射胶原乳剂制备CIA模型,第7天加强注射。第12天ig给予薯蓣皂苷30,60和120mg·kg-1,吲哚美辛8mg·kg-1,连续14d。给药前和给药开始,每4d测量1次右后足跖肿胀程度;处死后光镜观察右后足组织形态变化;检测CIA大鼠脏器指数;Western印迹法检测踝关节滑膜组织中NF-κB p65亚基和环氧合酶2蛋白(COX-2)表达;放射免疫法检测足爪肿瘤坏死因子α(TNF-α)及前列腺素E2(PGE2)含量。结果与正常对照组相比,CIA模型大鼠右后足跖明显肿胀(P<0.01);病理切片发现明显增生和大量炎症细胞浸润;胸腺指数和脾指数明显增高(P<0.01);踝关节滑膜组织中NF-κB p65亚基和COX-2的水平显著升高(P<0.01);足爪TNF-α及PGE2含量亦显著增高(P<0.01)。与模型组相比,薯蓣皂苷60和120mg·kg-1治疗可抑制CIA大鼠的足趾肿胀,明显改善大鼠病变关节的病理组织结构,降低大鼠胸腺指数,显著降低NF-κB p65亚基和COX-2的水平(P<0.01),降低足爪TNF-α及PGE2含量(P<0.01),对关节炎大鼠有明显的治疗作用。结论薯蓣皂苷对CIA大鼠具有较强的抗炎作用,机制可能与抑制NF-κB p65亚基和COX-2的表达有关。     

异绿原酸A抑制NLRP3炎性复合体/NF-κB活化减轻胶原诱导型关节炎大鼠炎症反应

目的分析异绿原酸A对胶原诱导型关节炎大鼠抗炎效应与潜在作用机制。方法 SD♂大鼠分为正常组、模型组、异绿原酸A高、低剂量组。高、低剂量异绿原酸A连续给药6周,测量大鼠足跖肿胀度,脾脏脏器系数;HE染色观察骨关节病理改变;Western blot检测关节滑膜NLRP3、caspase-1、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκB-ɑ、RANKL蛋白表达;ELISA检测血浆IL-1β、IL-6、TNF-ɑ、CRP、IFN-γ、IL-18表达。结果与正常组比较,模型组大鼠足跖明显肿胀,脾脏系数变大;关节滑膜内NLRP3、caspase-1、NF-κB p65、p-NF-κB p65、p-IκB、RANKL蛋白表达明显升高;血浆IL-1β、IL-6、TNF-ɑ、CRP、IFN-γ、IL-18明显上升。不同剂量异绿原酸A能明显降低模型组上述各项指标。结论异绿原酸A对胶原诱导型关节炎有较好的抗炎作用,其抗炎活性可能与降低NLRP3炎性复合体激活和NF-κB磷酸化表达有关。     

基于PPAR-γ/NF-κB信号通路探究芍甘附子汤对胶原诱导性关节炎大鼠的干预作用及作用机制

目的观察芍甘附子汤对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的干预作用并探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠随机选取12只为正常组,其余大鼠制备CIA大鼠模型。于首次免疫后第14日,依据分层分配原则将造模成功的大鼠分为模型组,芍甘附子汤低(1.05 g·kg-~1)、中(2.1 g·kg-~1)、高(4.2 g·kg-~1)剂量组,雷公藤多苷片组(9 mg·kg-~1),每组15只。于首次免疫后第15日各组按相应剂量进行药物干预,正常组及模型组灌胃同等量生理盐水,连续4周。分别于首次免疫后第14、21、28、35、42日进行关节炎指数(AI)评分。于末次给药24 h后麻醉大鼠,收集血清,并取踝关节,采用HE染色和Micro-CT扫描观察其病理及影像学改变。检测血清PGE_2、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO含量,免疫组织化学法检测踝关节组织PPAR-γ、NF-κB p65、p-NF-κB p65、COX-2、iNOS蛋白表达。结果同正常组相比,模型组大鼠足跖出现明显肿胀,血清PGE_2、TNF-α、IL-1β、IL-6、NO水平升高(P<0.01),踝关节滑膜增生,炎细胞浸润,骨质破坏,踝关节NF-κB p65、p-NF-κB p65、COX-2、iNOS蛋白表达上调,PPAR-γ蛋白表达显著降低。同模型组相比,芍甘附子汤可不同程度降低AI,降低血清PGE_2、NO、TNF-α、IL-1β、IL-6水平,改善踝关节病理损害,降低病理评分,下调踝关节NF-κB p65、p-NF-κB p65、COX-2、iNOS蛋白表达,上调PPAR-γ蛋白表达。结论芍甘附子汤对CIA大鼠关节肿胀及病理损害具有改善作用,作用机制可能与其调节PPAR-γ/NF-κB信号通路有关。     

黄芩苷对胶原诱导性关节炎大鼠抗炎作用研究

目的研究黄芩苷对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的抗炎作用并探讨其对白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和核因子(NF)-κB信号通路的影响,为其应用于类风湿关节炎临床治疗提供实验依据。方法 Wistar雌性大鼠制备CIA模型,将关节炎评分>2的CIA大鼠采用随机数字表法随机分为模型对照组(0.9%氯化钠注射液)、甲氨蝶呤组(1 mg/kg)、黄芩苷低、中、高剂量组(50、100、200 mg/kg),每组6只持续处理30 d。另外选取6只正常大鼠作为正常对照(0.9%氯化钠注射液)。检测大鼠关节炎症状,关节组织进行放射评估和组织病理检测。定量检测血清中TNF-α和IL-1β水平,蛋白质印迹法检测关节滑膜组织中NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(Ser536)和乙酰化-NF-κB p65(Lys310)蛋白表达。结果黄芩苷能减轻CIA大鼠的关节肿胀,明显抑制关节滑膜炎症和关节软骨及骨破坏,明显降低血清中TNF-α、IL-1β含量,抑制关节滑膜组织中NF-κB p65、磷酸化-NF-κB p65(Ser536)和乙酰化-NF-κB p65(Lys310)蛋白水平表达。结论黄芩苷抑制CIA大鼠炎症可能是通过抑制炎性细胞因子的产生和NF-κB信号转导途径而发挥治疗作用的。     

实验性关节炎大鼠滑膜组织核因子-κB基质金属蛋白酶-9表达相关性分析

目的观察核因子κB(NF-κB)、基质金属蛋白酶(MMP)-9在实验性关节炎(CIA)和对照组大鼠滑膜组织中不同时间点的表达差异及其血浆中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β的含量变化,探讨这些细胞因子在CIA发病中的作用机制,为类风湿关节炎(RA)今后的治疗提供理论依椐。方法将42只雄性Wistar大鼠随机分为模型组和对照组,通过免疫组织化学的方法检测各组大鼠不同时期滑膜组织NF-κB、MMP-9的表达水平,用放射免疫法(RIA)测定TNF-α、IL-1β的血浆含量,同时观察其发病时间与关节炎指数(AI)积分、病理评分及上述细胞因子之间的关系。结果随着CIA大鼠发病时间延长,AI和病理评分逐渐增加,NF-κB、MMP-9表达水平和TNF-α、IL-1β血浆含量也随之增加。CIA大鼠这些细胞因子的测定值都显著高于对照组(P<0.01),AI、病理评分与NF-κB、MMP-9呈正相关关系(P<0.05);CIA大鼠滑膜组织NF-κB、MMP-9表达水平之间呈正相关(P<0.05),而且它们的表达水平与IL-1β、TNF-α血浆含量之间亦呈正相关(P<0.05)。结论通过与TNF-α和IL-1β相互作用,滑膜组织中NF-κB、MMP-9的表达之间可能互相影响、互相促进,形成正反馈式的损坏机制,在CIA大鼠病情进展中起着重要作用,可能是RA发生发展以及骨质侵蚀的关键因子。     

苗药良姜胃疡胶囊对胃溃疡模型大鼠的预防作用及机制研究

目的:研究苗药良姜胃疡胶囊对胃溃疡大鼠模型的预防作用及机制。方法:将大鼠随机分为正常组(生理盐水)、模型组(生理盐水)、阳性对照组(奥美拉唑,0.02 g/kg)和良姜胃疡胶囊低、中、高剂量组(0.3、0.6、1.2 g/kg),每组12只。每天灌胃给药1次,连续给药1周。末次给药1 h后,除正常组外,其余各组大鼠均灌胃无水乙醇复制胃溃疡模型。造模1 h后,测定各组大鼠胃液量、胃液pH、胃蛋白酶活力、胃溃疡面积及胃溃疡抑制率;苏木精-伊红(HE)染色后显微镜下观察各组大鼠胃黏膜组织病理学变化,酶联免疫吸附试验法检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平;Western blot法检测各组大鼠胃组织中核转录因子κB(NF-κB)通路相关蛋白[磷酸化核因子κB亚基65(p-NF-κB p65)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)]的水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠胃液量、胃蛋白酶活力、胃溃疡面积和血清中TNF-α、IL-6水平及胃组织中p-NF-κB p65、pIκBα水平均显著增加/升高(P<0.05),胃液p H显著降低(P<0.01);胃组织黏膜充血红肿、黏膜上皮细胞缺损明显、腺体结构破坏、细胞结构不完整。与模型组比较,阳性对照组和良姜胃疡胶囊中、高剂量组大鼠胃液量、胃蛋白酶活力、胃溃疡面积和TNF-α、IL-6水平均显著减少/降低(P<0.05或P<0.01),胃液p H显著升高(P<0.05);胃组织黏膜正常、腺体破坏减轻、细胞结构基本完整;良姜胃疡胶囊高剂量组大鼠胃组织中p-NF-κB p65、p-IκBα水平显著降低(P<0.05)。结论:良姜胃疡胶囊可通过升高胃液pH,抑制胃蛋白活力,减少炎症因子TNF-α、IL-6的释放,抑制NF-κB通路相关蛋白表达,从而发挥其对胃溃疡的预防作用。     

藏药臭蚤草不同提取部位对CIA大鼠的影响北大核心CSCD

目的明确藏药臭蚤草抗类风湿性关节炎的作用,筛选其抗类风湿性关节炎的活性部位,初步探讨其抗类风湿性关节炎作用机制。方法以牛Ⅱ型胶原与弗氏不完全佐剂建立大鼠类风湿性关节炎(CIA)模型。观察臭蚤草总提物、大孔树脂不同浓度乙醇洗脱部位及雷公藤多苷(GTW)对类风湿性关节炎模型大鼠的足肿胀度的影响,检测大鼠血清中的肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和类风湿性因子(RF)的含量,借助滑膜组织病理学验证臭蚤草对类风湿性关节炎的治疗作用,利用Western blot法探究臭蚤草对类风湿性关节炎大鼠滑膜组织中MAPK/p38/NF-κB、TLR4/NF-κB炎症通路蛋白表达的影响,探讨臭蚤草抗类风湿性关节炎的作用机制。结果与模型组相比,臭蚤草总提取物和大孔树脂60%乙醇洗脱部位能够明显降低CIA大鼠关节肿胀度;有效改善大鼠滑膜的病理变化,并明显降低血清中炎症因子中大鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和类风湿性因子(RF)水平;明显降低滑膜组织中(TLR4、NF-κB、Myd88、p-p38、p-IκBα、iNOS等)相关炎症蛋白的表达。结论(1)臭蚤草可以缓解类风湿性关节炎大鼠的关节炎症症状,且臭蚤草60%乙醇洗脱部位为臭蚤草抗类风湿性关节炎的有效活性部位;(2)臭蚤草总提物及不同极性提取物能抑制MAPK/p38/NF-κB、TLR4/NF-κB信号通路缓解CIA大鼠的关节炎症状。     

通痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠p38MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的观察通痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠血清和滑膜组织中炎性因子表达及p38MAPK/NF-κB信号通路的影响。方法 48只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、通痹胶囊不同剂量(375、750、1500mg·kg-1)组及雷公藤多苷片(10 mg·kg-1)组,除正常组外,其余各组均于右后足跖部注射弗氏完全佐剂造模。造模第8日,各组给予相应药物灌胃治疗,每日1次,连续4周。对大鼠关节炎指数进行监测,足容积法测量致炎侧足肿胀度;灌胃结束后,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清及滑膜中白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测大鼠滑膜组织中p38MAPK、NF-κB/P65、IκBα蛋白表达的。结果与正常组相比,造模后大鼠血清及滑膜组织中IL-1、TNF-α含量明显升高,p38MAPK、NF-κB/P65、IκBα表达显著增多(P <0.01);与模型组相比,通痹胶囊能够有效降低大鼠血清及滑膜组织中IL-1、TNF-α的含量,并抑制滑膜组织中p38MAPK、NF-κB及IκBα的蛋白表达(P <0.05,P <0.01)。结论通痹胶囊具有明显的抗炎作用,其治疗类风湿关节炎的作用机制之一可能为抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的激活。     

连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探究连翘醇提物对肺癌NCI-H226细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法 以肺癌NCI-H226细胞为研究对象,将细胞分为对照组,连翘醇提物低、中、高浓度组（5、10、20 mg/mL）,激活剂组[10 mg/mL连翘醇提物+0.5μmol/L核因子κB(NF-κB)信号通路激活剂PMA],抑制剂组（10 mg/mL连翘醇提物+10μmol/L NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082）,阳性对照组（20μg/mL顺铂）,除对照组细胞不作干预外,其余各组细胞加入相应药物培养24 h。检测细胞增殖、迁移、侵袭情况,并计算增殖率、迁移率、侵袭细胞数;检测细胞中NF-κB p65、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、磷酸化IκBα(p-IκBα)蛋白表达水平。结果 与对照组比较,连翘醇提物各浓度组和阳性对照组细胞的增殖率、迁移率、侵袭细胞数以及细胞中p-IκBα、p-NF-κB p65蛋白表达水平均显著降低（P<0.05）;与连翘醇提物中浓度组比较,抑制剂组细胞增殖率、迁移率、侵袭细胞数及细胞中上述蛋白表达水平均显著降低（P&l...     

龙胆苦苷对类风湿性关节炎的保护作用及其机制

目的通过体内外实验研究龙胆苦苷(Gent)对类风湿性关节炎(RA)的保护作用及机制。方法 SD大鼠右后足足趾皮下注射弗氏完全佐剂0.1 m L造模。14 d后,将大鼠分为正常组、佐剂性关节炎(AIA)组、地塞米松(Dex)0.1 mg·kg~(-1)组、Gent 100和200 mg·kg~(-1)组并按上述剂量灌胃给药14 d。记录大鼠原发与继发侧足趾容积,Wood法评估关节炎指数,计算胸腺和脾脏指数,HE染色观察大鼠踝关节组织病理学,Western印迹法检测滑膜组织中NF-κB信号通路相关蛋白表达。滑膜切除术取得RA患者滑膜组织,胶原酶消化法提取原代成纤维样滑膜细胞(FLS),MTT法检测药物细胞毒性,EDU及划痕法分别检测Gent及Dex对TNF-α(10μg·L~(-1))诱导的细胞异常增殖及迁移的调控作用,免疫荧光法检测NF-κB P65的核转位。结果Gent 200 mg·kg~(-1)及Dex能显著降低AIA大鼠原发与继发侧足趾肿胀(P<0.05,P<0.01)和大鼠关节炎指数评分(P<0.05)。HE染色显示,Gent及Dex能显著减轻AIA大鼠踝关节滑膜增生,炎细胞浸润,血管翳生成,以及软骨和骨的侵蚀破坏。与AIA组比较,Dex组大鼠胸腺、脾脏严重萎缩(P<0.05,P<0.01),Gent 200 mg·kg~(-1)对胸腺指数有抑制作用(P<0.05)。Western印迹法结果显示,Gent能抑制AIA大鼠滑膜组织IκB的降解及p-IκB,p-P65的表达(P<0.01)。RA-FLS经TNF-α刺激后,细胞异常增殖及迁移,加入Gent(25,50和100μmol·L~(-1))和Dex(100 nmol·L~(-1))预保护后,Gent 50和100μmol·L~(-1)及Dex组细胞增殖及迁移显著降低(P<0.01)。免疫荧光结果显示,Gent 50和100μmol·L~(-1)及Dex组能显著抑制NF-κB P65的核转位(P<0.05,P<0.01)。结论 Gent对RA具有保护作用,其保护作用可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积大鼠肠内菌群变化的影响及其机制研究

目的： 研究姜黄素对亚急性肝内胆汁淤积（intrahepatic cholestasis,IHC）大鼠肠内菌群变化的影响,并分析相关机制。方法： 38只IHC大鼠随机分为模型组（9只）、姜黄素低剂量组（9只）、姜黄素高剂量组（10只）、阳性药物组（10只）,9只健康大鼠设置为对照组。姜黄素低、高剂量组姜黄素200、400 mg·kg^-1灌胃;阳性药物组熊去氧胆酸60 mg·kg^-1灌胃;对照组与疾病组等量生理盐水灌胃。均为每天一次;干预14 d。检测肝功能指标、胆红素代谢指标、炎症指标;qRT-PCR反应定量检测肠内菌群;Western blot检测肝组织核转录因子-κB（NF-κB）p65、p-NF-κB p65、核因子抑制蛋白（IκBα）、p-IκBα蛋白相对表达量。结果： 与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组碱性磷酸酶（ALP）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、γ-谷氨酰转肽酶（GGT）、总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）、总胆汁酸（TBA）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）均降低,白介素-10（IL-10）均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组ALP、ALT、AST、GGT、TBIL、DBIL、TBA、IL-1β、IL-6、TGF-β₁均降低,IL-10均升高,乳酸杆菌、双歧杆菌均增加,大肠杆菌均减少（P<0.05）。与疾病组比较,姜黄素低、高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）;与姜黄素低剂量组比较,姜黄素高剂量组、阳性药物组p-NF-κB p65/NF-κB p65,p-IκBα/IκBα均降低（P<0.05）。结论： 姜黄素可改善亚急性IHC模型大鼠肝功能、胆红素代谢、肠道菌群,减轻炎症反应及肝脏组织病理变化,且具有剂量依赖性,推测其作用机制与抑制NF-κB信号通路有关。     

Chebulanin exerts its anti-inflammatory and anti-arthritic effects via inhibiting NF-κB and MAPK activation in collagen-induced arthritis mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a chronic systemic autoimmune disease characterized by synovial inflammation and progressive joint destruction. Chebulanin is a natural polyphenol acid isolated from the traditional Tibetan medicine Terminalia chebula Retz that has previously been reported to possess anti-inflammatory properties. The present study aimed to investigate the anti-inflammatory and anti-arthritic effects of chebulanin and explore its underlying mechanisms in vivo and in vitro using a collagen-induced arthritis (CIA) mouse model and lipopolysaccharide (LPS) stimulated RAW264.7 cell inflammation model. Arthritis severity scores were assessed twice weekly; the levels of cytokines interleukin-6 (IL-6) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) in serum were detected using enzyme-linked immunosorbent assay kits; histopathological assessment was performed using micro computed tomography and hematoxylin and eosin staining. Activation of nuclear factor kappa B (NF-κB) and mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways were assessed using western blotting. The inhibition of translocation of cytosolic p38 and p65 into the nucleus was observed using immunofluorescence staining and western blotting in vitro. Chebulanin significantly suppressed the progression and development of RA in CIA mice by decreasing the arthritis severity scores, attenuating paw swelling and joint destruction, and reducing the levels of IL-6 and TNF-α significantly (p < 0.05). Furthermore, chebulanin reduced the levels of excised phosphorylated (p)-p38, phosphorylated-c-JUN N-terminal kinase (p-JNK), p-p65 and phosphorylated NF-κB inhibitor alpha (p-IκBα) in CIA mice, but did not affect the level of phosphorylated extracellular-signal-regulated kinase (ERK). In addition, chebulanin could inhibit the nuclear translocation of p38 and p65 in LPS-stimulated macrophages in dose-dependent manner. In conclusion, this study demonstrated that chebulanin exerts anti-inflammatory and anti-arthritic effects by inhibiting the activation of NF-κB and MAPK signaling pathways.     

Ginsenoside Rb1 attenuates adjuvant-induced arthritis in rats through inactivation of NF-κB signaling pathway

OBJECTIVE To investigate the anti-arthritic effect and mechanism of action of ginsenoside Rb1 on adjuvant-induced arthritis(AIA) in rats. METHODS Male SD rats were received 0.1 m L injections of FCA(10 g·L~(-1)) emulsion into the right hind metatarsal foot pad for arthritis induction. After that, rats were randomly divided into six groups, namely control group, untreated group, dexamethasone(DEX, 2.5 mg·kg~(-1)) group, low(5 mg·kg~(-1)), medium(10 mg·kg~(-1)) and high(20 mg·kg~(-1))doses of ginsenoside Rb1 groups, and treated intraperitoneally at the above dosage once a day for2 weeks. After treatment, paw swelling and arthritis indexes were evaluated, the thymus and spleen index were calculated as well. HE staining were used to observe the joint histopathology in rats. Rat ELISA kits were used to determinate the TNF-α, IL~(-1)β and IL-6 levels. Western blotting were used to detect the related protein expression of NF-κB signaling pathway in the tissues of inflamed joints. RESULTS Rb1 significantly decreased the paw swelling and arthritis index,Compared with AIA group. HE staining results revealed that medium and high doses of Rb1 significantly reduced synovial inflammatory cell infiltration, synovial lining hyperplasia and bone destruction, compared with AIA group. Elisa results showed that Rb1 significantly decreased the TNF-α, IL~(-1)β and IL-6 levels(P<0.05, P<0.01). Western blotting results revealed that the expression of p-IκB and p-P65 were significantly reduced in 20 mg·kg~(-1) of Rb1 group, compared with AIA group(P<0.05, P<0.01). CONCIUSION Rb1 manifests therapeutic anti-inflammatory effects on rats with AIA, potential y through a mechanism of inhibiting activation of the NF-κB.     

来氟米特联合甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎大鼠骨破坏因子RANKL和IL-17的影响

目的探讨来氟米特(LEF)联合甲氨蝶呤(MTX)治疗大鼠胶原诱导的关节炎(CIA)的骨保护作用。方法建立CIA模型后,大鼠分为模型对照组、LEF组、MTX组、MTX+LEF(联合组);另设立空白对照组。用ELISA分析核因子κB受体活化因子的配体(RANKL)和白细胞介素17(IL-17)水平。结果与空白对照组比较,CIA大鼠模型外周血RANKL、IL-17水平明显升高(P<0.05)。与模型对照组比较,LEF组、MTX组、联合组大鼠模型外周血RANKL及联合组IL-17的水平均明显下降(P<0.05);与MTX组比较,联合组外周血RANKL、IL-17水平明显下降(P<0.05)。结论在成功建立的CIA大鼠模型中,LEF联合MTX对类风湿关节炎有协同骨保护作用,可能与下调外周血RANKL、IL-17水平有关。     

吴茱萸碱通过TRIB2/AKT信号通路诱导人白血病细胞K562凋亡

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对人白血病细胞K562增殖与凋亡的影响,并初步探究其潜在的分子机制。方法以CCK-8法测定不同浓度的EVO处理K652细胞不同时间后的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测TRIB2 mRNA表达,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路;以EVO作用于AKT激活剂SC79预处理后的K562细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路。以EVO作用于Wnt激活剂SKL2001预处理后的K562细胞,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路。结果EVO对K562细胞的增殖抑制作用呈时间及浓度依赖性;流式结果显示EVO体外可促细胞凋亡且呈浓度依赖性;EVO处理后,TRIB2mRNA的表达降低,TRIB2/AKT信号通路被抑制;SC79削弱了由EVO诱导的K562细胞凋亡,且SC79和SKL2001均能逆转EVO对AKT信号通路的抑制作用。结论EVO可诱导人白血病细胞K562凋亡,从而抑制其增殖,其机制可能是通过抑制TRIB2的表达,进而抑制AKT的磷酸化,最终抑制下游基因NF-κB p65的磷酸化,从而诱导细胞凋亡并抑制其生长。     

胶原关节炎大鼠滑膜组织核转录因子κB与白细胞介素1β和基质金属蛋白酶9相关性分析

目的 探讨白细胞介素1β(IL-1β)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、核因子κB(NF-κB)与类风湿关节炎发生发展的相关性.方法 构建Ⅱ型胶原诱导的胶原关节炎大鼠模型,分不同时点处死动物,检测滑膜细胞中IL-1β,NF-κB和MMP-9的表达,分析大鼠关节炎评分与滑膜细胞NF-κB、IL-1β、MMP-9的表达的相关性.结果 实验组造模前关节体积为(2.18±0.16)ml,造模后2、4、6周分别为(4.68±0.49)、(5.62±0.59)、(5.44±0.66)ml,与造模前比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);对照组造模前和造模后2、4、6周关节体积分别为(2.15±0.26)、(2.38±0.32)、(2.19±0.31)、(2.18±0.26)ml.造模后2、4、6周实验组大鼠关节体积与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).实验组大鼠造模后2、4、6周关节指数分别为(8.00±0.32)、(9.80±0.66)、(9.40±0.51),与对照组(均为0)比较,差异有统计学意义(P＜0.05).大鼠关节指数与NF-κBp65呈显著正相关(r=0.593,P＜0.05);MMP-9与NF-κBp65呈显著负相关(r=-0.506,P＜0.05).结论 实验组大鼠滑膜组织中NF-κB与IL-1β表达水平显著高于正常对照滑膜组织,且与关节炎的评分有一定相关性;提示NF-κB在类风湿关节炎发病机制中起关键的调控作用.

Abstract：

Objective To investigate the corelation among interleukins-1β (IL-1β), matrix metalloproteinase 9 ( MMP-9), nuclear factor kappa B (NF-κB) and arthritis index (AI) in the development of arthritis, and to understand the pathology of synoviocyte. Methods Thirty-six female Wistar rats were randomly divided into two groups,namely the model controlled group and the normal controlled group; three subgroups were randomly divided into model group and controlled group. The model group rats were immunized with emuusified bovine type Ⅱ collagen in complete Freund'adjuvant by introdemal injection to induce collagen induced arthritis (CIA) on day1, day14 and day 28, while the controlled group were injected with saline at the same time. The model and the controlrats were killed at different times. We detected the expression and activation levels of IL-1β, MMP-9 and NF-κB in synovial tissue by immunohistochemistry. Then we analyzed the corelation between AI and the expression of IL-1 β, MMP-9 and NF-κB in the synovium and IL-6 and TNF-α in the serum. Results The joint volume of model group was (2. 18 ± 0. 16), (4.68 ± 0.49 ), (5.62 ± 0. 59), (5.44 ± 0.66 ) respectively before, 2, 4 and 6 weeks after setting up models. There were statistically significant differences between before and after setting up models ( P ＜ 0. 01 ).The joint volume of control group was ( 2. 15 ± 0.26), (2.38 ± 0.32), (2. 19 ± 0. 31 ), ( 2.18 ± 0.26 ) respectively before, 2, 4 and 6 weeks after making model. Through measuring joints sizes after successfully modeling 2, 4 and 6 weeks, there were statistically significant differences between model and control group( P ＜0.01 ). MMP-9 showed significant negative correlation with NF-κB P 65 ( r = -0. 506, P ＜ 0.05 ). Conclusions The expression levels of IL-1 β and NF-κB are significantly higher in CIA synovial than those in control group and show a positive correlation with AI. NF-κB plays acritical role in the pathology of RA via regulating inflammation reaction, facililating the prolifteration of synoviocyte and participating the reestablishment of articulation.     

藏药独一味抗类风湿关节炎的作用及其药效物质基础研究

目的:研究藏药独一味抗类风湿关节炎(RA)的作用及其药效物质基础。方法:将56只SD大鼠随机分为正常对照组(0.5%羧甲基纤维素钠溶液),模型组(0.5%羧甲基纤维素钠溶液),甲氨蝶呤组(阳性对照组,3 mg/kg),独一味水提液低、中、高剂量组(0.5、1、2 g/kg,以生药量计)和独一味总黄酮组(200 mg/kg,以黄酮提取物计),每组8只。除正常对照组外,其余各组大鼠均于右后足垫注射弗氏完全佐剂(FCA)复制佐剂性关节炎模型。注射FCA次日,各组大鼠灌胃相应药物,每天给药1次(仅甲氨蝶呤组每3天给药1次),连续给药30天。给药第15、30天时,分别测定大鼠左后足的足肿胀度,计算其关节炎指数。第30天给药结束后,采用酶联免疫吸附法测定各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、IL-10水平,计算其胸腺指数、脾指数,并采用苏木精-伊红染色法观察各组大鼠踝关节的病理学变化。结果:与正常对照组比较,模型组大鼠给药第15、30天时的足肿胀度、关节炎指数以及给药第30天时的脾指数和血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著升高(P<0.01);给药第30天时的胸腺指数、IL-10水平均显著降低(P<0.01);踝关节可见明显的滑膜细胞增生、浸润关节腔等病理学改变。与模型组比较,各给药组大鼠给药第15、30天时的足肿胀度、关节炎指数以及给药第30天时的脾指数和血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著降低(P<0.01);给药第30天时的胸腺指数和血清中IL-10水平均显著升高(P<0.01);关节炎病理学变化明显改善。与独一味水提液高剂量组比较,独一味总黄酮组大鼠给药第15天时的足肿胀度以及给药第15、30天时的关节炎指数、胸腺指数、脾指数、炎症细胞因子水平、踝关节病理学变化等差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:藏药独一味具有良好的抗RA作用,总黄酮可能是其药效物质基础。     

丹皮酚对IL-1β诱导HFLS-RA的保护作用及相关机制研究

目的　探讨丹皮酚对白细胞介素（IL）-1β诱导人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（HFLS-RA）的保护作用及机制。方法　将HFLS-RA细胞分为空白对照组,10 μg/L IL-1β组及0.1、1、10、100 μmol/L丹皮酚组,采用MTT法检测细胞增殖情况;酶联免疫吸附测定试验（ELISA）法检测HFLS-RA中肿瘤坏死因子（TNF）-α、IL-6水平。采用免疫荧光法观察空白对照组、10 μg/L IL-1β组及10 μmol/L丹皮酚组HFLS-RA中核因子（NF）-κB p65细胞核移位情况;Western blot法检测空白对照组,10 μg/L IL-1β组,0.1、1、10 μmol/L丹皮酚组及阴性对照组（仅10 μmol/L丹皮酚处理）的基质金属蛋白酶（MMP）-1、MMP-3和Toll样受体-4（TLR4）蛋白表达。将24只雄性DBA/1小鼠随机均分为对照组、CIA组和治疗组,对小鼠进行四肢累计评分,HE染色观察关节组织病理学变化,ELISA法检测滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平。结果　丹皮酚对IL-1β诱导HFLS-RA细胞增殖无明显抑制作用。与空白对照组相比,10 μg/L IL-1β组TNF-α、IL-6、NF-κB p65核移位、MMP-1、MMP-3和TLR4蛋白表达水平均升高,而经丹皮酚干预后可逆转这些改变（P＜0.05）。与CIA组相比,治疗组小鼠四肢累计评分明显下降（P＜0.05）;HE染色结果示丹皮酚治疗48 d时踝关节病理变化有所改善,其中炎性细胞明显下降,软骨破坏减轻。治疗组小鼠滑膜组织中TNF-α、IL-1β水平低于CIA组。结论　丹皮酚具有减轻IL-1β诱导HFLS-RA炎性因子表达和缓解CIA小鼠关节炎症状的作用,其机制可能与抑制TLR-4-NF-κB p65通路,减轻炎症反应有关。