透明颤菌血红蛋白基因的克隆及其在林可链霉菌中的表达

目的通过将透明颤菌血红蛋白基因vgb克隆到林可链霉菌染色体黑色素生物合成基因m elC位点,使m elC基因被破坏失活,vgb基因实现表达同时提高林可霉素产量。方法构建大肠杆菌-链霉菌重组质粒pYHT04,通过接合转移实验将重叠延伸PCR得到的具有红霉素抗性基因启动子的透明颤菌血红蛋白基因,以双交换的方式整合进林可链霉菌黑色素生物合成基因m elC中。采用不同装瓶量摇瓶发酵,HPLC检测发酵液中林可霉素含量。结果重组菌株颜色变浅,CO结合差光谱显示在420 nm处有明显吸收峰,随着装瓶量的增加重组菌株发酵液中林可霉素效价与对照菌株相比降低幅度较小。结论重组菌株m elC基因失活不能继续合成黑色素,vgb基因得到表达并表现出生物学功能,限氧条件下重组菌株发酵液中林可霉素效价高于对照菌株,有希望应用于工业发酵生产。     

棒状乳杆菌SZD菌株发酵液抑菌活性的初步研究

目的 观察棒状乳杆菌SZD菌株发酵液对常见致病菌的抑菌活性.方法 用牛津杯法对棒状乳杆菌SZD菌株发酵液的抑菌活性进行观察.结果 所有SZD菌株的发酵液在pH值为3.0时对4种指示菌(金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌及腐生葡萄球菌)均有抑菌活性,但其抑菌活性随着pH值的增高而逐渐减弱,当pH值增至5.0时抑菌活性完全消失.SZD菌株发酵液对4种指示菌的抑菌圈较相同pH值的MRS液体培养基上清液的抑菌圈稍大.结论 SZD菌株发酵液在pH值为3.0～4.5时对4种指示菌均有抑菌活性,其抑菌活性主要依赖于发酵产生的乳酸.     

金钗石斛内生菌CPU0029的诱变及其次级代谢产物的纯化

以实验室筛选得到的产生物碱的金钗石斛内生菌CPU0029为出发菌株,为了提高生物碱产量对其进行紫外及亚硝酸钠复合诱变,筛选出1株正突变菌株;运用正交实验的方法对发酵液中生物碱成分进行提取优化,最后采用薄层、气相方法进行检测。结果:通过复合诱变筛选出的正突变株,生物碱产量达到6.9mg/L,比出发菌株高出63%,且其遗传性状较稳定;通过提取纯化,该生物碱纯度提高了70.6倍。     

β-内酰胺酶抑制剂的初步筛选

由于广泛使用青霉素和头孢菌素,许多细菌已耐受这两类抗生素,从临床已分离得到的耐青霉素的细菌的耐药原因,主要是由于它们产生钝化青霉素的一种β-内酰胺酶,即青霉素酶。因此一些实验室开始从链霉菌的发酵液中筛选β-内酰胺酶抑制剂。 我们利用平板法筛选β-内酰胺酶抑制剂。方法为制备二种琼脂平板,试验平板为肉汤琼脂平板,200ml中含有10μg/ml苄青霉素钾,接种1.2mlβ-内酰胺酶产生菌金黄色葡萄球菌A肉汤,对照平板除不加苄青霉素钾外,其余与试验平板完全一样。放线菌发酵液加入琼脂孔中,两种平板在37℃培养18小时,测定抑菌圈的大小。如试验平板上抑菌圈大于对照平板上的抑菌圈,表示此样品中有β-内酰胺酶抑制剂。     

水仙内生真菌乙酰胆碱酯酶抑制活性菌株的筛选及鉴定

目的 从药用植物水仙中分离、筛选对乙酰胆碱酯酶(AChE)具较高抑制活性的菌株并确定其分类归属.方法 采用组织切块法对水仙内生真菌进行分离纯化,纯化后的菌株发酵培养,用乙酸乙酯萃取发酵液,以改良的Ellman方法进行AChE抑制活性的筛选,对获得的阳性菌株SX-S101进行形态学观察,用分子生物学方法鉴定其分类地位.结果 从水仙的根、鳞茎中共分离到18株内生真菌,活性检测筛选出3株对AChE具较强抑制作用的菌株,其IC50分别为0.4562、0.3897、0.4122 g·L-1;对SX-S101进行分类鉴定,确定其为子囊菌纲(Ascomycetes) 喙枝孢属(Rhinocladiella)菌株Rhinocladiella sp.LA60.结论 首次从水仙内生真菌中筛选出了1株AChE抑制活性较高的菌株Rhinocladiella sp.LA60,为后续开发阿尔采末症治疗药物提供依据.     

半红树植物海芒果内生与根际细菌多样性及抗农用真菌活性研究

摘要：勘探半红树植物海芒果内生和根际细菌多样性,挖掘具有高效广谱抗农用真菌活性菌株。以7种植物病原真菌为指示菌,采用平板对峙法对海芒果组织和根际中分离到的细菌进行抑菌活性筛选,并对活性菌株的基因组DNA进行聚酮合酶(PKS)基因与非核糖体肽合成酶(NRPSs)基因的扩增及检测。从海芒果组织和根际中共分离到454株细菌,隶属于35属71种,从中筛选出15株细菌在至少1个抗菌活性检测中显示阳性,总阳性率为21.13%,其中6株细菌对多种指示菌均有抑制活性;且15株活性菌株的基因组DNA均扩增出至少1种次级代谢产物合成基因。综上所述,广西山口红树林自然保护区内半红树植物海芒果内生和根际细菌具有丰富物种多样性、抗农用真菌活性及合成聚酮类和非核糖体肽类化合物的潜能。     

鱼腥草对泌尿系感染常见致病菌体外抗菌作用的研究

目的：探讨鱼腥草对泌尿系感染常见致病菌体外抗菌作用。方法：鱼腥草水煎液采用水煮蒸馏方法制备;试验菌株由全自动细菌分析仪VITEK2-compact鉴定;药物抑菌试验采用活菌计数法,观察不同药液浓度和不同作用时间鱼腥草对试验菌株的抗菌作用。结果：鱼腥草药液作用16 h结果表明,鱼腥草药液对试验菌株均有抑制作用;延长作用时间至36 h结果表明,鱼腥草对细菌的抑制作用受时间的影响,随着时间的延长抑菌作用会降低。结论：鱼腥草药液对临床泌尿系感染菌具有一定的抗菌活性,且与细菌的耐药性无关;鱼腥草对临床多重耐药菌感染的治疗具有重要的意义。     

药用植物雷公藤内生真菌分离及其抑菌活性筛选研究

目的 研究药用植物雷公藤内生真菌的分离及其抑菌活性,并预测次级代谢化合物种类,为进一步筛选雷公藤内生真菌产天然抑菌物质提供依据。方法 采用组织块法和反复划线法对雷公藤原植物进行微生物的分离纯化;采用滤纸片法检测雷公藤内生真菌液体发酵液对金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌的抑菌活性,并测定其最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);采用UPLC/Q-TOF-MS法对具有抑菌功能的菌株发酵液进行分析,得到各样品总离子流图,结合相关数据库及软件对其成分进行质谱网络化分析,预测微生物次级代谢化合物种类。结果 共获得20株内生真菌;5株内生真菌发酵液对金黄色葡萄球菌具有显著抑菌活性,其中LGT-15对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌均有高度抑菌活性,抑菌圈直径分别为38.0,34.0,13.1 mm,MIC分别为0.49,0.61,1.46μg·mL^–1。根据质谱数据分析结果,LGT-3和LGT-15代谢产物数量和类型较多,均含有氮杂螺环酮类化合物,而LGT-15另含有结构新颖的喹唑啉类生物碱。结论 采用菌落形态...     

定向筛选细菌产生的抗绿脓杆菌抗生素的方法

本文报道从四川灌县青城山土壤中定向分离由细菌产生的抗绿脓杆菌的抗生素的方法及早期鉴别研究结果。 一、多粘菌素产生菌的分离及其产生的多粘菌素的早期鉴别 在加有5μg/ml核糖霉素的分离培养基上,筛选青城山的土样,分离到3000个细菌菌落,用琼脂挖块法移至含绿脓杆菌1.50的双碟上,挑取所有具抑菌圈的菌落移至斜面培养基上,生长三天后接入多粘菌素发酵培养基中,30℃发酵40小时,用纸片法测定发酵液抑制绿脓杆菌的能力,根据发酵液的特殊酒香味,发酵结束时pH下降及显微镜形态观察,共获得7株菌株能产生多粘菌素。     

巴山榧树内生真菌产生的二萜类物质的鉴别及对Hela细胞的抑制作用

目的：研究巴山榧树组织分离产生二萜类物质紫杉醇的植物内生菌及其产生的紫杉醇类似物对肿瘤细胞的抑制作用。方法：分离纯化出植物内生菌,研究其对革兰阳性（G⁺）和革兰阴性（G^-）细菌的抗性,并对菌株BP6T3进行了分类鉴定,用高效液相色谱（HPLC）分析其代谢产物的保留时间、百分含量,液质联用仪（HPLC-MS）分析该物质形成离子片段的特征。初步探讨紫杉醇物质对Hela细胞的抑制作用,并采用添加前体物质等,以提高代谢产物产量。结果：分离得到的菌株BP6T3产生的次生代谢产物具有抗G⁺和G^-细菌的双抗活性,该菌株经初步分类鉴定为青霉sp（Penicillium sp）。其发酵液提取物保留时间为12.8 min,与紫杉醇对照品的保留时间基本一致。百分含量为15.8%,发酵液中紫杉醇类似物的含量达到16.59 mg·L^-1。HPLC-MS测定其代谢抽提物中该物质形成离子片段的特征,表明其离子片段信息与紫杉醇对照品完全一致,可初步判定青霉BP6T3可产生紫杉醇类化合物。该菌株产生的紫杉醇物质对Hela细胞有明显的抑制作用,并随着浓度的增加而增加。不同前体物质对该菌株产生紫杉醇代谢物有明显的影响,以L-苯丙氨酸为前体,产量增加最多,增长率为425.17%。结论：菌株BP6T3可被用于大规模生产抗癌药物紫杉醇。     

大狼毒内生真菌的分离、鉴定与抑菌活性研究

目的 分离和鉴定大狼毒根中的内生真菌,并检测其抑菌活性.方法 用组织块法分离,点植法对分离菌株进行分类鉴定;选择3种人类病原细菌作为指示菌进行体外抑菌试验.结果 分离获得内生真菌41株,鉴定为1纲、4目、6科、15属;其中9株有稳定的抑菌活性,尤其对大肠杆菌有显著抑制作用.结论 大狼毒根中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源.     

马齿苋及鱼腥草水提取液体外抑菌实验

目的:观察马齿苋与鱼腥草水提取液对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌的体外抑菌作用。方法:采用试管内连续稀释法(几何级稀释法)测定鱼腥草与马齿苋提取液体外最低抑菌浓度(MIC)。结果:马齿苋与鱼腥草水提取液(按生药质量浓度)对肺炎双球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌抑菌作用分别为500.00mg/mL,62.50mg/mL;15.625mg/mL,250.00mg/mL;31.25mg/mL,125.00mg/mL。结论:马齿苋水提取液对痢疾杆菌、大肠杆菌的抗抑作用最佳;鱼腥草水提取液对肺炎双球菌较好。     

三角叶黄连内生真菌的多样性及其抑菌活性的筛选

目的分离和鉴定三角叶黄连Coptis deltoidea根状茎、叶柄及叶中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用平板法分离菌株,对照真菌鉴定手册,根据菌株的菌落形态、大小、颜色、生长速率、质地、生长培养基的颜色变化以及菌丝体和孢子的形态特征进行分类鉴定;选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌作为指示菌,采用杯碟法对内生真菌的发酵上清液进行体外抑菌试验。结果从三角叶黄连中分离获得的297株内生真菌,分属2目、3科、32属;抑菌实验表明:22株内生真菌的发酵液对指示菌均有不同程度的抑制作用,其中6号内生真菌同时对两种致病菌的抑菌效果明显。结论三角叶黄连内生真菌在种类、不同部位呈多样性分布,且部分内生真菌的代谢产物具有较强的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。     

不同干燥工艺对鱼腥草挥发油的影响研究

目的研究不同干燥工艺对大别山鱼腥草挥发油的影响。方法分别用低温烘干(50℃)、晒干、阴干的干燥方式处理新鲜的鱼腥草,挥发油提取器提取挥发油,采用GC-MS检测分析。结果阴干、晒干、烘干鱼腥草中的挥发油分别鉴定出43、37和14种。结论晒干和低温烘干方式均会影响鱼腥草挥发油的组成,但对总体积影响不显著。     

鱼腥草注射剂治疗毛细支气管炎疗效

目的:探讨鱼腥草注射液在治疗毛细支气管炎中的疗效。方法:将鱼腥草治疗组52例与对照组46例临床指标对比观察。结果:治疗组在退热、咳喘及肺部罗音消失时间及住院时间等与对照组有显著差异,(t=3.7P<0.001),结论:鱼腥草注射液治疗毛细支气管炎效果较为满意。     

肺癌病人医院内获得性肺炎34例临床分析

目的 探讨肺癌病人医院内获得性肺炎（HAP）的病原菌及其药敏情况,正确选择抗生素。方法 对34例肺癌病人合并HAP进行回顾性分析。结果 38株病原菌中,革兰阴性杆菌32例（84．21％）,其中大肠埃顽希氏菌9株,铜绿假单胞菌8株,肺炎克雷伯氏杆菌8株。阿米卡星、头孢他啶和头孢哌酮＋舒巴坦对上述三种菌株敏感性较高。结论 明确肺癌病人AHP的病原菌及其药敏结果,可指导临床合理应用抗生素。     

鱼腥草种质资源的RAPD分析

目的分析鱼腥草种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用RAPD技术对92份鱼腥草种质资源进行检测。结果34个随机引物中有32个引物(94.1%)扩增产物具多态性。34个引物共得到200条扩增DNA片段,其中93.5%的片段具多态性。每个多态性引物平均可扩增出5.8个多态性片段。峨眉蕺菜和蕺菜种内平均遗传相似系数(genetic similarity,GS)分别为0.521和0.572,二者种间GS值为0.517。峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为36的细胞型间相似程度最高,其平均GS值达0.530。栽培蕺菜类群比其野生类群遗传多样性相对较高。聚类分析表明,利用RAPD技术可将全部供试材料区分开,所有材料共划分为14类。其中,绝大多数(62个)聚为一类,且根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论(1) 鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。(2) RAPD标记可作为构建鱼腥草DNA指纹图谱的有效工具。(3) 鱼腥草药材道地性与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素所决定。     

药用植物内生真菌抗菌活性的筛选

文章进行了353株药用植物内生真菌抗菌活性的研究。结果表明，内生真菌对植物病原真菌的抑菌现象较为普遍，且抑菌效果明显；对细菌的抑菌效果较差。其中对番茄早疫霉和番茄灰霉产生抑制作用的内生真菌比例分别达到15．9％和11．3％。     

铁皮石斛内生真菌的鉴定及菌株205509的次级代谢产物研究

摘要：目的 鉴定铁皮石斛内生真菌及从中发现活性菌株,探究菌株205509产生的次级代谢产物。 方法 利用分子生物学方法并结合形态特征,对9株铁皮石斛内生真菌进行鉴定;采用琼脂扩散法和MTT法,筛选出次级代谢产物丰富,且具有抑制病原指示菌和人乳腺癌MCF-7细胞系的活性菌株;利用大米固体培养基对活性菌株进行发酵,乙酸乙酯萃取;采用硅胶、反相硅胶、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20和HPLC色谱技术进行分离纯化,得到化合物;通过质谱(MS)和核磁共振(1H NMR和13C NMR)等波谱技术并结合文献比对,确定化合物结构。结果 9株铁皮石斛内生真菌分属3个科的3个属,初步判定其中1株为枝顶孢霉属(Acremonium)的一个新种,2株为树粉孢属(Oidiodendron)的一个新种,2株为Acremoniopsis属的未确定种;获得抗菌活性和细胞毒活性较好的菌株205509,并从中分离得到了4个化合物,其中化合物HXW-3浓度为3 μg/mL时对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)和蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)表现出抑制活性。结论 铁皮石斛内生真菌物种较新颖,其次级代谢产物具有较好的生理活性,值得进一步研究。     

灰毡毛忍冬与忍冬的药理作用比较研究

目的对《中国药典》新增药材忍冬科植物灰毡毛忍冬与传统忍冬的主要药理作用进行比较研究。方法观察两种受试药物体外对金葡菌等6种常见致病菌的抗菌作用;通过建立小鼠毛细血管通透性增加、大鼠足肿胀、大鼠棉球肉芽增生的模型等试验评价药物抗炎作用;评价药物对环磷酰胺致免疫低下小鼠免疫器官重量、巨噬细胞吞噬功能的影响。结果灰毡毛忍冬和忍冬对6种常见致病菌均有明显地抑菌和杀菌作用,MIC分别在7.8～62.8 g·L-1和15.7～125.5 g·L-1,MBC分别≥250 g·L-1和≥500 g·L-1;二者剂量各为1 g·kg-1时,均能明显降低小鼠毛细血管通透性、抑制大鼠足肿胀度和肉芽组织的增生;明显提高小鼠脏器指数、廓清指数K和吞噬指数α,且两种受试药物药效强度差异无显著性。结论灰毡毛忍冬和忍冬均具有抗菌、抗炎的作用,均能增强动物非特异性免疫,且二者的作用强度相当。