RAPD标记在药用菊花种质鉴定中的应用

目的：探讨药用菊花类型间的遗传关系,为药用菊花资源合理保护利用和新品种选育提供理论依据,也为药用菊花DNA指纹图谱的构建奠定基础。方法：利用改良SDS方法提取药用菊花的基因组DNA,以RAPD分子标记技术,对6种药用菊花进行了遗传多样性和亲缘关系分析。结果：从8个随机引物中筛选出多态性频率高的2个引物。2个引物共扩增出17个DNA条带,其中多态性条带16个,多态性达94%,显示菊花品种内丰富的遗传多样性。扩增的多态性片段在300~1300bp之间。结论：聚类分析结果表明,利用RAPD标记可将全部供试材料区分开,得出了药用菊花种质资源在分子水平上确实存在较大差异。     

中国红花遗传多样性的AFLP分子标记

目的考察红花的种内变异，为进一步进行红花种质资源选育和筛选品质相关基因奠定基础。方法采用扩增片段长度多态性(AFLP)技术，研究中国红花28个不同栽培居群在DNA水平的多态性。采用UPGMA构建系统树图进行聚类分析和计算遗传距离。结果筛选得到的12对引物的扩增片段具有丰富的多态性。各居群间的遗传相似系数在0.48～0.96。聚类分析显示它们分为3大主要类群和一个中间类群。结论红花种内存在一定的遗传多样性。基于AFLP条带统计的聚类结果和表型特征并不完全一致,可能是基因型和环境共同作用于表型的结果。     

广西产鸡血藤遗传多样性的RAPD与ISSR标记方法的比较研究

目的:比较随机扩增多态性DNA分子标记技术(RAPD)和简单重复序列间区扩增技术(ISSR)两种标记方法,研究广西不同居群鸡血藤遗传多样性的优劣。方法:分别采用RAPD和ISSR标记方法,利用POPGENE 32软件、Ntsys软件、SPSS 17.0软件,对广西不同采集地的9份鸡血藤的遗传多样性进行研究。结果:筛选出的3条RAPD引物及4条ISSR引物扩增后,共得到198和315个位点,多态性位点37和80个,多态性位点比率为18.7%和25.4%,有效等位基因数为1.416 8、1.584 0,基因多样性指数为0.269 4、0.351 3,Shannon多样性指数为0.431 6、0.529 9。ISSR标记均高于RAPD标记,RAPD和ISSR的平均遗传相似系数为0.757 64、0.683 80,表明ISSR检测遗传多样性更灵敏。二者的聚类结果相近,相关系数r为0.847,说明其在0.001水平呈极显著正相关。结论:ISSR标记方法比RAPD标记反映出更多的遗传多样性信息,更适合于广西产不同居群鸡血藤的遗传多样性研究。     

不同居群白芍的DNA随机扩增多态性研究

目的分析6个不同居群白芍的遗传多样性,为白芍的种质鉴定及遗传多样性分析提供依据。方法运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术,对浙江磐安、四川中江、安徽亳州、上海崇明、江苏宿迁和山东荷泽居群白芍的基因组DNA进行随机扩增,利用NTsys2.10e软件计算遗传相似性,运用UPGMA法进行聚类分析并构建树状图。结果共筛选了70个随机引物,从中挑选出8条多态性强、重复性好的引物,共检测出215个位点,多态性位点137个,多态位点比率为63.7%,UPGMA聚类可以将不同来源的白芍很好地区分开。结论不同产地间的白芍存在丰富的遗传多样性,RAPD分子标记方法可以用来鉴定不同产地的白芍。     

不同产地白及遗传多态性的RAPD分析

目的 研究国内不同产地白及的遗传多样性和亲缘关系。方法 利用随机扩增多态DNA （random amplified polymorphic DNA,RAPD）引物,RAPD分子标记技术分析国内50个不同产地的白及。结果 RAPD技术扩增产物经琼脂凝胶电泳检测,从50条引物中筛选出10条（S8,S9,S14,S19,S23,S25,S28,S29,S30,S31）条带清晰的引物,10条引物共扩增出88条DNA条带,其中多态性的DNA条带数目为81条,占总数的92.05%。每个引物能扩增出5~11条DNA条带,平均可扩增出8.8条;扩增最少的引物为S19,扩增出5条DNA条带;扩增最多的引物为S29,扩增出11条DNA条带。而每个引物能扩增的多态性DNA条带数为3~11条,平均可扩增出8.6条。结论 不同产地的白及具有较丰富的遗传多样性,RAPD可有效应用于白及的遗传多样性研究。     

随机扩增多态性DNA技术对湘产蛇莓种质资源的遗传多样性分析

目的:研究湘产蛇莓种质资源的遗传多样性。方法:建立不同地理分布的蛇莓种质资源随机扩增多态性DNA(RAPD)反应体系,RAPD-聚合酶链反应(PCR)法检测湘产24组蛇莓样本(21个野生品,3个栽培品),琼脂糖凝胶电泳分析结果,计算等位基因数(Na)、有效等位基因数(Ne)、多态性位点百分比(PPB)、Nei’s基因多样性指数(H)、Shannon’s信息指数(I)。结果:筛选出多态性引物14条,共扩增出90条电泳谱带,其中多态带为81条,Na为1.900 0,Ne为1.540 1,PPB为90.0%,H为0.312 8,I为0.467 5。结论:湘产蛇莓各区域样本间遗传多样性丰富,人工栽培品与野生品之间存在遗传背景上的差异,聚类结果与地理分布表现出明显相关性。     

铁皮石斛野生居群基于RAMP标记的遗传多样性评价

本文运用RAMP标记16对引物组合,对铁皮石斛9个野生居群的112个样本进行了检测,共得到123条扩增带,其中86条(占69.92%)具有多态性,每对引物组合可扩增出3～8条多态性带,平均5条,表明铁皮石斛不同居群间存在较丰富的遗传多样性;铁皮石斛居群间遗传相似系数的变化范围为0.250～0.813,平均值为0.550。利用RAMP扩增条带数据进行聚类分析,可将9个铁皮石斛野生居群划分为3个类群,聚类结果表现出较好的地域相关性,显示RAMP标记可以有效地评价铁皮石斛野生居群的遗传多样性及遗传结构。     

三角帆蚌及其相似种的分子标记技术(RAPD)鉴别

目的以30个随机引物对三角帆蚌及其相似种进行鉴别分析。方法随机扩增多态DNA(RAPD)分析。结果最终筛选出2个引物,分别能扩增出1～5条大小不等的片段,片段长度在250～1000bp之间。结论RAPD的技术方法能鉴别三角帆蚌软体组织与相似种软体组织。     

RAPD分子标记对药用植物大花红景天濒危原因分析

目的:利用RAPD分子标记技术研究大花红景天的遗传多样性,分析其濒危的可能原因.方法:利用改良的CTAB法提取各产地大花红景天的总DNA,以40条随机引物随机扩增,利用RAPDdistance1.04软件计算多态位点百分率以及遗传距离,并进行聚类分析.结果:大花红景天表现出较为丰富的遗传多样性,加条随机引物筛选出能扩增出清晰稳定条带的12条随机引物.12条随机引物共扩增出99条DNA条带,其中79条表现出多态性,占总带数的79.8%.各产地大花红景天的遗传距离在0.4784-0.7774之间.通过聚类分析可将5个产地的大花红景天分为2个类群.结论:多态位点百分率表明大花红景天具有丰富的遗传多样性,其濒危的可能原因是由于人类无规则且盲目的采挖造成的.     

内蒙古产丹参的随机扩增多态性DNA研究

目的 用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA,RAPD)技术对内蒙古产丹参进行多态性分析. 方法 通过CTAB 法提取内蒙古产丹参干品DNA,用10个条随机引物进行RAPD分析. 结果 有2个随机引物扩增出了清晰的多态性图谱. 结论 该RAPD体系可用于评价内蒙古产丹参的质量.     

不同干燥工艺对鱼腥草挥发油的影响研究

目的研究不同干燥工艺对大别山鱼腥草挥发油的影响。方法分别用低温烘干(50℃)、晒干、阴干的干燥方式处理新鲜的鱼腥草,挥发油提取器提取挥发油,采用GC-MS检测分析。结果阴干、晒干、烘干鱼腥草中的挥发油分别鉴定出43、37和14种。结论晒干和低温烘干方式均会影响鱼腥草挥发油的组成,但对总体积影响不显著。     

湖北麦冬及其近缘药用植物的随机扩增引物DNA分析

目的 探讨湖北麦冬及其近缘药用植物的亲缘关系和遗传多样性。方法 对不同栽培措施处理的湖北麦冬、湖北麦冬组培苗、山麦冬、恩施麦冬、杭麦冬和川麦冬的22种材料进行随机扩增引物DNA（RAPD）法分析,用SPSS软件中的Jaccd和Dice两种方法对扩增片断的相关性进行聚类分析。结果 从S系列100个随机引物中筛选出10个扩增条带清晰、稳定、重现性好和多态性明显的引物,10个引物共扩增出75个条带,其中多态性条带58个,占总扩增条带的77.3%。湖北麦冬不同栽培条件和组织培养植株的相关系数均接近1。湖北麦冬与山麦冬的相关系数在0.74～0.88之间。麦冬（杭麦冬和川麦冬）与湖北麦冬和与山麦冬之间的相关系数分别为0.41～0.66和0.48～0.69。杭麦冬与川麦冬的相关系数为0.74,介于湖北麦冬与山麦冬之间。不同的山麦冬样品相关系数均>0.8。结论 22种麦冬类药用植物之间的亲缘关系与形态分类结果基本一致,组织培养和栽培措施对遗传关系影响不大。但产于不同地区的川、杭、恩施麦冬具有一定的遗传差异.     

马齿苋及鱼腥草水提取液体外抑菌实验

目的:观察马齿苋与鱼腥草水提取液对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌的体外抑菌作用。方法:采用试管内连续稀释法(几何级稀释法)测定鱼腥草与马齿苋提取液体外最低抑菌浓度(MIC)。结果:马齿苋与鱼腥草水提取液(按生药质量浓度)对肺炎双球菌、痢疾杆菌、大肠杆菌抑菌作用分别为500.00mg/mL,62.50mg/mL;15.625mg/mL,250.00mg/mL;31.25mg/mL,125.00mg/mL。结论:马齿苋水提取液对痢疾杆菌、大肠杆菌的抗抑作用最佳;鱼腥草水提取液对肺炎双球菌较好。     

铁皮石斛野生居群遗传多样性的RAPD分析与鉴别

目的采用RAPD分子标记技术，对铁皮石斛8个野生居群的遗传多样性、亲缘关系以及分子鉴别等进行研究。方法筛选随机引物进行RAPD分析，通过UPGMA聚类，研究铁皮石斛各居群间的遗传关系，构建居群亲缘关系的分子系统树；利用特异性条带对铁皮石斛野生居群进行指纹分析鉴别。结果共筛选出10个有效引物，在8个野生居群材料的RAPD扩增中共得到439个位点，平均每个引物扩增出43.9个位点，每个居群扩增出54.9个位点；在所获得的104条可重现谱带中，9条是单态的，95条是多态的，多态性程度达91.35%，遗传距离在0.590～0.727之间，平均为0.686。结论铁皮石斛居群间遗传差异明显，具有较丰富的遗传多样性；RAPD可以作为铁皮石斛野生居群遗传多态性、居群亲缘关系和分子鉴别研究的有效手段；引物S412可以有效鉴别铁皮石斛的8个野生居群。     

HPLC法测定鱼腥草中的黄酮类化合物

目的建立RP—HPLC测定鱼腥草中芦丁和槲皮素含量的方法。方法采用色谱柱：ODS—C18柱（150x4．6ram,5μm）,流动相：甲醇-1％乙酸水（55：45,v／v）梯度洗脱．流速：1．0mL·min-1,检测波长：260nm,枉温：30~C。结果芦丁进样浓度在6．0—144．Oμg·mL-1。范围内线性关系良好,r=0．9984,平均回收率为97．4％（RSD=1．38％）;槲皮苷进样浓度在8．0～128．0μg·mL-1。范国内有良好的线性关系,r=O．9995,平均回收率为93．3％（RSD=1．82％）;槲皮素进样浓度在4．0~96．0μ·mL-1范围内有良好的线性关系,r=0．9995．平均回收率为87．3％（RSD=1．58％）。结论谊方法简便、准确度较高、重现性好,为鱼腥草中药材的质量控制提供了实验依据。     

鱼腥草及其制剂的药理与免疫毒理作用研究进展

鱼腥草是三白草科植物蕺菜的干燥地上部分,主要活性成分为挥发油和黄酮类化合物。近年来,鱼腥草注射液出现了严重的免疫毒性反应,被停止生产使用,对制药行业造成了巨大的损失。本文对鱼腥草的用药沿革、产地、栽培、有效成分和制剂方法对成分的影响、药理作用、不良反应、临床应用及免疫毒性研究进展等进行分析总结,旨在探讨鱼腥草及其制剂的药理与毒理作用,为正确认识其免疫毒性机制、研究致敏成分和改进制剂工艺及鱼腥草注射剂的临床应用提供理论和实验依据。     

鱼腥草的化学成分及其药理作用

目的了解鱼腥草的化学成分与药理作用研究现状，以合理利用鱼腥草。方法查阅相关文献，对鱼腥草的化学成分及其药理作用进行了较全面的综述。结果鱼腥草化学成分复杂，含有多种对人体有效的物质，药理作用广，并且毒副作用低。结论鱼腥草是一种既具有广泛的药理活性，又具有食用价值的植物资源，极具开发潜力。     

Genetic and metabolic diversity in Stevia rebaudiana using RAPD and HPTLC analysis

Abstract

Context: Stevia rebaudiana Bertoni (Asteraceae) is an important medicinal plant and is much used due to its zero calories sweetening property. Stevia leaves as well as its extracts and pure compounds are currently used in the preparation of several medicines, food products and neutraceuticals.

Objective: To study the genetic and metabolic variability in S. rebaudiana among accessions of different geographical regions of India using random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers and high-performance thin layer chromatography (HPTLC) analysis.

Materials and methods: The RAPD analysis of Stevia rebaudiana (11 accessions) was carried out using 20 random operon primers. Dendrogram was constructed for cluster analysis based on the unweighted pair group method with arithmetic means (UPGMA) using Winboot. The HPTLC analysis of all samples was carried out on silica using acetone:ethyl acetate:water (5:4:1, v/v/v) for fingerprinting and quantification of stevioside and rebaudioside A at 360?nm after spraying with anisaldehyde sulphuric acid.

Results: Ten out of 20 primers screened were found most informative; amplification products of the genotypes yielded a total of 87 scorable bands (67 polymorphic), whereas genetic similarity (GS) coefficient (0.01–0.08) and polymorphism (67.24–92.40%) showed huge variability. Similarly, HPTLC analysis showed large variation among different samples with respect to their presence or absence of metabolite and their concentration.

Conclusion: Out of the 11 Stevia accessions, Delhi and Mohali varieties showed much relatedness with each other and were concluded to be the superior genotype in context to RAPD and HPTLC analysis. The information obtained here could be valuable for devising strategies for cultivating this medicinal plant.     

鱼腥草注射液质量控制中的谱效学初步探讨

鱼腥草用于治疗呼吸系统疾病,在临床上有一定疗效.然而,由于国内中药质量缺乏有效稳定的控制手段及标准,一直很难被国际医药市场所接受.近年来,指纹图谱技术用于中药的质量控制取得了较好的成绩,但是目前用于中药质量控制的指纹图谱技术多是在承认其传统药效的基础上,开展其化学物质组成及量化研究,尚没有以这些成分的药效作为指纹性依据.也就是说,这种指纹图谱的研究与建立只是对中药产品成分的稳定性和可控性实现改进,而没有与中药的药效建立直接的内在联系.本实验在鱼腥草注射液指纹图谱研究的基础上,     

用合成的癸酰乙酸检测鱼腥草注射液中的杂质

目的探讨鱼腥草注射液中癸酰乙酸。方法采用HPLC进行定性分析。结果建立了癸酰乙酸的合成方法和HPLC定性分析方法。结论鱼腥草注射液中不含癸酰乙酸,排除了癸酰乙酸为鱼腥草注射液中引起不良反应的成分。