飞燕草素对HER-2阳性乳腺癌的抑制效应及分子机制研究

目的 探讨飞燕草素（Dp）对HER-2阳性乳腺癌的抑制效应及分子机制。方法 以HER-2阳性乳腺癌细胞（MDA-MB-453和BT-474）为研究对象，经不同浓度Dp（10、20、40、80及160 μmol/L）处理48 h，同等浓度的DMSO为溶剂对照（Control），采用CCK-8法检测Dp对细胞活性的影响，计算半数抑制浓度（IC50），以确定后续实验浓度；以不同浓度Dp（20、40及80 μmol/L）处理细胞48 h，运用HE染色观察细胞形态学变化，流式细胞术检测细胞周期分布，原位细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL）检测细胞凋亡率，采用Western blot检测NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化水平。结果 在 10、20、40、80 及 160 μmol/L 浓度范围内，Dp 能抑制 MDA-MB-453 和 BT-474 的增殖，IC50分别为 41.02 和 60.97 μmol/L；20、40及80 μmol/L浓度范围内，与Control组相比，Dp处理组部分细胞脱落漂浮，裂解，细胞体积减小，G2/M期细胞比例增加，细胞凋亡率增加；与Control组相比，40及80 μmol/L Dp处理组胞内p-NF-κB/p65、p-IκBα、pIKKα/β、p-PKCα表达水平显著降低，IκBα、IKKα、IKKβ、PKCα表达水平增加（P＜0.05）。结论 Dp通过阻断NF-κB信号通路，诱导MDA-MB-453、BT-474细胞G2/M期周期阻滞和凋亡，从而抑制乳腺癌增殖。     

人参皂苷Rbl对阿霉素心力衰竭大鼠心肌细胞核因子-κB的影响

目的探讨人参皂苷Rbl(Gs-Rb1)改善阿霉素(Adr)慢性心力衰竭(CHF)效应是否与抑制核因子-κB(NF-κB)有关。方法 Adr诱导CHF大鼠模型被随机分为Adr组(n=15)和Gs-Rbl组(70 mg.kg-1.d-1,n=17),另随机选取同龄健康大鼠作为对照(n=10);同时培养乳鼠心肌细胞并随机分为对照组、Adr组(1μmol.L-1)和Gs-Rbl组(1μmol.L-1Adr+200μmol.L-1 Gs-Rbl)。干预完毕后,检测心脏超声、NF-κB、IκBα、p-IκBα和NF-κB DNA结合活性。结果 (1)Gs-Rb1组LVEF明显改善(P=0.003);(2)在NF-κB p50和NF-κB p65方面,体内或体外的Gs-Rbl组均明显低于Adr组(P<0.001);(3)体内、体外的Gs-Rbl组NF-κBDNA结合活性明显低于Adr组(P<0.01);(4)体内、体外的Adr组IκBα蛋白明显高于对照组,而Gs-Rbl组IκBα最高(P<0.01);Gs-Rbl组p-IκBα和p-IκBα/IκBα比值明显低于Adr组(P<0.01)。结论 Gs-Rb1改善CHF效应与其抑制NF-κB活性有关。     

IKBα、IKKα、IKKβ与Tim-3在肿瘤患者中表达及相关性研究

核因子(NF)-κB是重要的转录调控因子,其广泛存在于各种细胞中,参与免疫应激、细胞增殖、生长分化及细胞凋亡.NF-κB通常与其抑制蛋白IκB相结合,以非活性状态储存于细胞质中,只有当激活IκB激酶(IKK),水解IκB,解除了IκB的抑制作用,NF-κB才能进入细胞核中并与相应靶基因上的DNA序列(κB位点)结合,发挥基因转录功能.T细胞免疫球蛋白黏蛋白结构域相关分子-3(Tim-3)蛋白特异性表达于Th1细胞表面并参与自身免疫疾病的发病,也参与肿瘤免疫[1].为进一步探讨IκBα、IKKα、IKKβ及Tim-3在肿瘤患者体内之间的关系,本研究检测了IκBα、IKKα、IKKβ及Tim-3mRNA水平,并分析这些指标之间的相关性,报告如下.     

淫羊藿次苷Ⅱ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的研究ICSⅡ对脂多糖(LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的作用。方法体外分离新生SD大鼠脑皮质组织提取原代星形胶质细胞并进行培养。将星形胶质细胞分为空白组、空白+ICSⅡ高浓度组、模型组、模型+ICSⅡ低浓度组、模型+ICSⅡ中浓度组、模型+ICSⅡ高浓度组、模型+地塞米松组。ICSⅡ(5,10,20μmol·L-1)或DSMX(1μmol·L-1)预处理星形胶质细胞1 h后,继续与LPS共同作用24 h。采用MTT法检测ICSⅡ作用于星形胶质细胞的安全浓度范围,确定安全浓度后再观察ICSⅡ对LPS诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响;采用ELISA法检测星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β,NO,Aβ1-40和Aβ1-42的水平;采用Western蛋白免疫印迹技术检测COX-2,i NOS,IκB-α,NF-κB(p65)(胞核),NF-κB(p65)(胞质)和BACE1的蛋白表达,以及NF-κB(p65)、IKK-α和IKK-β磷酸化水平;采用分子对接技术模拟ICSⅡ与BACE1蛋白的结合。结果 ICSⅡ(0～50μmol·L-1)对星形胶质细胞无毒性作用。模型组较空白组星形胶质细胞中TNF-α,IL-1β和NO水平均显著上升(P<0.05);细胞炎症通路蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(p65)(胞核)及BACE1表达升高(P<0.05);IκB-α和NF-κB(p65)(胞质)表达显著降低(P<0.05);NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平明显上升(P<0.05)。给予ICSⅡ能够明显降低TNF-α,IL-1β和NO水平(P<0.05)。此外,ICSⅡ显著下调炎症相关蛋白COX-2,i NOS,NF-κB(胞核)及BACE1的表达(P<0.05),明显上调NF-κB(胞质)和IκB-α蛋白表达(P<0.05)。同时,明显降低NF-κB(p65),IKK-α和IKK-β的磷酸化水平(P<0.05),对LPS诱导的IκB-α降解、NF-κB活化及细胞核易位均具有显著的抑制作用。结论本研究条件下,ICSⅡ通过调节IKK/IκB/NF-κB信号通路发挥其对LPS诱导的星形胶质细胞炎症损伤的保护作用。     

己酮可可碱联合骨髓间充质干细胞对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症因子及NF-κB信号通路的影响

目的 探讨己酮可可碱（Pentoxifylline,PTX）是否促进骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells,MSCs）对高糖作用下肾小球系膜细胞炎症因子及NF-κB信号通路的影响。方法 体外高糖培养小鼠肾小球系膜细胞,分为6组：对照组;模型组组;MSCs组;MSCs+ PTX 0.1 mM组;MSCs+ PTX 0.3 mM组和MSCs+ PTX 1 mM组。采用ELISA检测各组系膜细胞IL-6和TNF-α含量,采用Western blot检测各组系膜细胞中NF-?B p65,IKKα及IKKβ蛋白的表达。结果 与对照组相比,模型组系膜细胞的IL-6和TNF-α含量显著增高（P<0.01）,NF-?B p65、IKKα及IKKβ蛋白相对表达量显著升高（P<0.05或P<0.01）。与模型组相比,MSCs组及不同浓度PTX干预的系膜细胞分泌的IL-6及TNF-α含量出现明显降低（P<0.01）,NF-?B p65、IKKα及IKKβ蛋白表达量显著降低（P<0.05或P<0.01）。与MSCs组比较,MSCs+PTX 0.1 mM组、MSCs+ PTX 0.3 mM组及MSCs+PTX 1 mM组的IL-6和TNF-α含量显著下降（P<0.05或P<0.01）,NF-?B p65、IKKα和IKKβ的蛋白相对表达量明显降低（P<0.05或P<0.01）,且呈现PTX浓度依赖性。结论 不同浓度的PTX可通过抑制NF-?B信号通路的激活以及介导炎症反应促进MSCs对DN的治疗作用,且呈浓度依赖性。     

抗氧化剂2-吲哚啉酮衍生物对NF-κB信号通路的抑制作用

目的探讨2-吲哚啉酮衍生物(PMID)对NF-κB信号通路的调控作用。方法用PMID 2,5和10μmol·L-1预处理HEK293T细胞2 h,加入肿瘤坏死因子α(TNF-α)10μg·L-1刺激8 h。用双荧光素酶报告基因系统检测PMID对TNF-α诱导的NF-κB报告基因和ICAM启动子报告基因的影响;对照组HEK293T细胞单用TNF-α10μg·L-1处理,实验组用PMID 10μmol·L-1预处理细胞2 h,加入TNF-α10μg·L-1,分别在0,10,30,60 min后收取细胞,Western蛋白印迹法检测PMID对TNF-α诱导的IκBα降解和P65入核的影响;对照组用PMID 10μmol·L-1处理HEK293T细胞12 h,实验组用10μmol·L-1PMID处理4 h,后用TNF-α10μg·L-1刺激8 h。采用实时荧光定量PCR检测PMID对NF-κB信号通路下游靶基因白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化因子(MCP)和干扰素γ(IFN-γ)表达的影响。结果 TNF-α单用组与正常对照组比较,NF-κB和IFN-β报告基因活性明显增加(P<0.01),ICAM报告基因活性增加(P<0.05)。PMID预处理细胞后再采用TNF-α刺激,与TNF-α单用组比较,PMID 2μmol·L-1时,NF-κB和IFN-β报告基因活性降低(P<0.05),ICAM报告基因活性无明显变化;PMID 5μmol·L-1时,NF-κB和IFN-β报告基因活性明显降低(P<0.01),ICAM报告基因活性降低(P<0.05);PMID 10μmol·L-1时,NF-κB,ICAM和IFN-β报告基因活性明显降低(P<0.01)。与TNF-α单用组比较,PMID预处理后再用TNF-α处理,在10,30和60 min 3个时间点,IκBα表达增高(P<0.05),细胞核中P65表达减弱(P<0.05),胞浆中的P65表达增加(P<0.05)。加入PMID后,与正常对照组相比,对NF-κB下游靶基因IL-6和MCP的表达明显抑制(P<0.01),对IFN-γ有一定的抑制作用(P<0.05);加入TNF-α刺激后,与正常对照组相比,IL-6,MCP和IFN-γ表达均显著增高(P<0.01);加入PMID处理后,与TNF-α单用组比较,IL-6,MCP和IFN-γ表达均明显下降(P<0.05)。结论 PMID作为抗氧化剂,可负调控NF-κB信号通路。     

丹皮酚对脂多糖诱导的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的观察丹皮酚对体外培养的星形胶质细胞炎性因子分泌的影响,并探讨其作用机制。方法采用神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色法鉴定星形胶质细胞;实验分为对照组,模型组和2.5、5、10μmol·L-1丹皮酚组,0.5 mg·L-1脂多糖(LPS)诱导炎症反应。采用ELISA法测定培养液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用Western blot检测细胞IκBα蛋白表达和磷酸化水平及胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平显著增加(P<0.01),胞浆IκBα蛋白表达受抑(P<0.01),IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平上调(P<0.01);5、10μmol·L-1丹皮酚能减少LPS活化的星形胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平(P<0.05或P<0.01),增加胞浆IκBα蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制LPS上调的IκBα蛋白磷酸化和胞核NF-κB(p65)蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论丹皮酚能抑制LPS诱导的星形胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,IκBα/NF-κB信号通路可能参与了丹皮酚对星形胶质细胞炎症反应的抑制作用。     

鹅去氧胆酸抗脂多糖诱导的BV2小胶质细胞炎症反应作用及机制

目的研究鹅去氧胆酸(CDCA)抗脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞炎症反应的作用及其机制。方法 BV2细胞与CDCA 25～100μmol·L~(-1)预孵育2 h,加LPS 200 mg·L~(-1)继续培养22 h,采用Griess试剂法检测一氧化氮(NO)含量;Western印迹法检测细胞内环氧合酶2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平;RT-PCR法检测细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL~(-1)β和G蛋白偶联受体5(TGR5)mRNA表达水平。BV2细胞与CDCA 25～100μmol·L~(-1)预孵育2 h,加入LPS 200 mg·L~(-1)继续培养1 h,Western印迹法检测NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)和丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)磷酸化水平;细胞免疫荧光法观察NF-κB入核情况。结果与正常对照组相比,模型组培养基中NO含量显著增加(P<0.01);COX-2和iNOS蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01);TNF-α,IL-6和IL~(-1)βmRNA表达显著上调(P<0.01);TGR5 mRNA表达显著下调(P<0.01);并且NF-κB,IκBα和AKT磷酸化水平显著增加(P<0.05,P<0.01),NF-κB入核增多。与模型组相比,CDCA显著减少培养基中NO含量(P<0.01),降低COX-2和iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01);显著下调TNF-α,IL-6和IL~(-1)βmRNA表达(P<0.01);显著上调TGR5 mRNA表达(P<0.01)。与模型组相比,CDCA显著降低NF-κB,IκBα和AKT磷酸化水平(P<0.05,P<0.01),并观察到NF-κB核转位减少现象。结论 CDCA可显著抑制LPS诱导BV2细胞炎症反应,其作用机制可能与激活TGR5、抑制Akt/NF-κB信号通路相关。     

柚皮素对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响

本研究探究柚皮素对肺炎链球菌(SP)诱导的肺泡上皮细胞凋亡及MAPK/NF-κB信号通路的影响。培养肺泡上皮细胞HPAEpiC,使用CCK-8检测柚皮素对HPAEpiC细胞的毒性。再次培养HPAEpiC细胞,分为对照组、模型组、阳性对照组、柚皮素组和抑制剂组,ELISA法检测炎症因子的表达水平;TUNEL检测细胞凋亡水平;Western blot检测凋亡及MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果显示,柚皮素浓度≤60μmol/L时,对HPAEpiC细胞无毒性(P>0.05)。SP诱导可上调细胞上清液中炎症因子(TNF-α和IL-1β)的释放量、细胞凋亡率和细胞中凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-8、Cleaved caspase-9和Cleaved caspase-3)与MAPK/NF-κB信号通路相关蛋白(p-JNK、p-p38、p-ERK、p-p65和p-IκBα)的表达水平。柚皮素干预后可改善SP对肺泡上皮细胞的影响,且添加MAPK/NF-κB信号通路抑制剂干预与柚皮素干预对SP诱导的肺泡上皮细胞的作用效果具有相似性。以上结果提示柚皮素可能通过抑制MA...     

人参皂苷Rg1对Aβ_(25-35)诱导的神经细胞核因子-κB活化的影响

目的探讨人参皂苷Rg1拮抗β淀粉样蛋白(Aβ)、保护神经细胞的作用是否与核因子κB(NF-κB)活化机制变化有关。方法分别以原代培养的大鼠海马神经元和星形胶质细胞为靶标建立Alzheimer病(AD)细胞模型。采用四唑盐显色(MTT)法检测细胞活力,进行Aβ25-35造模浓度、时间以及人参皂苷Rg1预处理最适宜浓度的选择。经Aβ25-35和Rg1干预后,用激光共聚焦显微镜检测分析FITC/PI双重标记的NF-κB在细胞内的激活程度,结合形态学观察分析人参皂苷Rg1对以上两种细胞的保护作用。结果40μmol.L-1的Aβ25-35作用24h后可激活原代培养星形胶质细胞的NF-κB(P<0.01),下调原代培养神经元的NF-κB活性(P<0.01)。2μmol.L-1的人参皂苷Rg1能明显提高神经元的NF-κB活性(P<0.01),减弱星形胶质细胞的NF-κB活性(P<0.01)。同时结合形态学观察和细胞活力检测发现,人参皂苷Rg1对两种细胞都有保护作用。结论人参皂苷Rg1通过启动神经元中NF-κB活化、下调星形胶质细胞的NF-κB活性,从两方面发挥其保护神经细胞的作用,从而有可能达到减缓AD发病进程的效果。     

吴茱萸碱通过TRIB2/AKT信号通路诱导人白血病细胞K562凋亡

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对人白血病细胞K562增殖与凋亡的影响,并初步探究其潜在的分子机制。方法以CCK-8法测定不同浓度的EVO处理K652细胞不同时间后的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,qRT-PCR检测TRIB2 mRNA表达,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路;以EVO作用于AKT激活剂SC79预处理后的K562细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路。以EVO作用于Wnt激活剂SKL2001预处理后的K562细胞,Western blot检测TRIB2/AKT信号通路。结果EVO对K562细胞的增殖抑制作用呈时间及浓度依赖性;流式结果显示EVO体外可促细胞凋亡且呈浓度依赖性;EVO处理后,TRIB2mRNA的表达降低,TRIB2/AKT信号通路被抑制;SC79削弱了由EVO诱导的K562细胞凋亡,且SC79和SKL2001均能逆转EVO对AKT信号通路的抑制作用。结论EVO可诱导人白血病细胞K562凋亡,从而抑制其增殖,其机制可能是通过抑制TRIB2的表达,进而抑制AKT的磷酸化,最终抑制下游基因NF-κB p65的磷酸化,从而诱导细胞凋亡并抑制其生长。     

Tetrachlorobenzoquinone exhibits neurotoxicity by inducing inflammatory responses through ROS-mediated IKK/IκB/NF-κB signaling

Tetrachlorobenzoquinone (TCBQ) is a joint metabolite of persistent organic pollutants (POPs), hexachlorobenzene (HCB) and pentachlorophenol (PCP). Previous studies have been reported that TCBQ contributes to acute hepatic damage due to its pro-oxidative nature. In the current study, TCBQ showed the highest capacity on the cytotoxicity, ROS formation and inflammatory cytokines release among four compounds, i.e., HCB, PCP, tetrachlorohydroquinone (TCHQ, reduced form of TCBQ) and TCBQ, in PC 12 cells. Further mechanistic study illustrated TCBQ activates nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling. The activation of NF-κB was identified by measuring the protein expressions of inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase (IKK) α/β, p-IKKα/β, an inhibitor of NF-κB (IκB) α, p-IκBα, NF-κB (p65) and p-p65. The translocation of NF-κB was assessed by Western blotting of p65 in nuclear/cytosolic fractions, electrophoretic mobility shift assay (EMSA) and luciferase reporter gene assay. In addition, TCBQ significantly induced protein and mRNA expressions of inflammatory cytokines and mediators, such as interleukin-1 beta (IL-1β), IL-6, tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), inducible nitric oxide synthase (iNOS), cyclooxygenase-2 (COX-2) and the production of nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2). Pyrrolidine dithiocarbamate (PDTC), a specific NF-κB inhibitor inhibited these effects efficiently, further suggested TCBQ-induced inflammatory responses involve NF-κB signaling. Moreover, antioxidants, i.e., N-acetyl-l-cysteine (NAC), Vitamin E and curcumin, ameliorated TCBQ-induced ROS generation as well as the activation of NF-κB, which implied that ROS serve as the upstream molecule of NF-κB signaling. In summary, TCBQ exhibits a neurotoxic effect by inducing oxidative stress-mediated inflammatory responses via the activation of IKK/IκB/NF-κB pathway in PC12 cells.     

Proanthocyanidins from grape seeds modulates the nuclear factor-kappa B signal transduction pathways in rats with TNBS-induced recurrent ulcerative colitis

The aim of this study was to elucidate the molecular mechanisms involved in the therapeutic effects of proanthocyanidins from grape seeds (GSPE) on recurrent ulcerative colitis (UC) in rats. GSPE in doses of 100, 200, and 400 mg/kg were intragastrically administered per day for 7 days after recurrent colitis was twice-induced by TNBS. The levels of GSH, as well as the activity of GSH-Px and SOD in colon tissues were measured by biochemical methods. The expression levels of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and the nuclear translocation levels of nuclear factor-kappa B (NF-κB) in the colon tissues were measured by enzyme-linked immunosorbent assay methods. Western blotting analysis was used to determine the protein expression levels of inhibitory kappa B-alpha (IκBα), inhibitor kappa B kinase (IKKα/β), phosphorylated IκBα and phosphorylated IKKα/β. GSPE treatment was associated with a remarkable increased the activity of GSH-Px and SOD with GSH levels in TNBS-induced recurrent colitis rats as compared to the model group. GSPE also significantly reduced the expression levels of TNF-α, p-IKKα/β, p-IκBα and the translocation of NF-κB in the colon mucosa. GSPE exerted a protective effect on recurrent colitis in rats by modifying the inflammatory response and promoting damaged tissue repair to improve colonic oxidative stress. Moreover, GSPE inhibited the TNBS-induced inflammatory of recurrent colitis though blocking NF-κB signaling pathways.     

丹酚酸B对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖及转分化的作用研究

目的基于Wnt/β-catenin信号途径探讨丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对高糖诱导心肌成纤维细胞(car-diac fibroblasts,CFs)增殖及转分化的影响。方法SD大鼠乳鼠CFs,高糖诱导,CCK-8检测不同浓度葡萄糖诱导CFs增殖的浓度及时间效应;加Sal B(12.5、25、50μmol·L^-1)预处理CFs,确定Sal B最佳给药浓度。天狼猩红染色观察胶原纤维沉积;免疫荧光及Western blot检测α-SMA表达,Western blot检测p-GSK 3β、β-catenin表达。结果与正常对照组相比,25 mmol·L^-1高糖刺激CFs24 h明显促进CFs增殖及转分化(P<0.01),增加胶原纤维沉积,α-SMA、β-catenin、p-GSK 3β表达增加;与高糖组比较,经Sal B(25μmol·L^-1)及XAV939(1μmol·L^-1)预处理后,CFs增殖明显抑制(P<0.01),胶原纤维沉积减少,α-SMA、β-catenin、p-GSK 3β表达降低(P<0.01)。结论Sal B可抑制高糖诱导CFs增殖及转分化,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

Cannabinoid receptor agonist WIN55,212-2 and fatty acid amide hydrolase inhibitor URB597 ameliorate neuroinflammatory responses in chronic cerebral hypoperfusion model by blocking NF-κB pathways

The present study explored the protective effects of cannabinoid receptor agonist WIN55,212-2 (WIN) and fatty acid amide hydrolase inhibitor URB597 (URB) against neuroinflammation in rats with chronic cerebral hypoperfusion (CCH). Activated microglia, astrocytes, and nuclear factor kappa B (NF-κB) p65-positive cells were measured by immunofluorescence. Reactive oxygen species (ROS) was assessed by dihydroethidium staining. The protein levels of cluster of differentiation molecule 11b (OX-42), glial fibrillary acidic protein (GFAP), NF-κB p65, inhibitor of kappa B alpha (IκB-a), IκB kinase a/β (IKK a/β), phosphorylated IKK a/β (p-IKK a/β), cyclooxygenase-2 (COX-2), inducible nitric oxide synthase (iNOS), tumor necrosis factor (TNF)-α, and interleukin-1β (IL-1β) were examined by western blotting or enzyme-linked immunosorbent assay. All the protein levels of OX-42, GFAP, TNF-a, IL-1β, COX-2, and iNOS are increased in CCH rats. WIN and URB downregulated the levels of OX-42, GFAP, TNF-α, IL-1β, COX-2 and iNOS and inhibited CCH-induced ROS accumulation in CCH rats, indicating that WIN and URB might exert their neuroprotective effects by inhibiting the neuroinflammatory response. In addition, the NF-κB signaling pathway was activated by CCH in frontal cortex and hippocampus, while the aforementioned changes were reversed by WIN and URB treatment. These findings suggest that WIN and URB treatment ameliorated CCH-induced neuroinflammation through inhibition of the classical pathway of NF-κB activation, resulting in mitigation of chronic ischemic injury.

     

牛膝-杜仲药对对小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用

目的研究牛膝-杜仲药对的抗炎作用。方法将小鼠巨噬细胞RAW264.7分为空白组、模型组、牛膝组(800μg/mL)、杜仲组(800μg/mL)和牛膝-杜仲药对低、中、高浓度组(400、800、1 600μg/mL),除空白组和模型组外,其余各组加入相应药物培养6 h后,空白组继续加入培养基,模型组加入10μg/mL脂多糖(以复制炎症模型),其余各组加入相应药物和10μg/mL脂多糖。检测各组细胞中炎症因子[一氧化氮(NO)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]的水平,并采用金氏公式评价牛膝、杜仲的联合作用;检测细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、核因子κB(NF-κB)抑制蛋白α(IκBα)的表达水平和NF-κB p65、IκB激酶(IKK)、p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)、胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun N端激酶(JNK)的磷酸化水平。结果与空白组比较,模型组细胞中炎症因子水平以及i NOS、COX-2蛋白表达水平和NF-κB p65、IKK、p38 MAPK、ERK、JNK蛋白磷酸化水平均显著升高(P<0.01),IκBα蛋白的表达水平显著降低(P<0.01);经牛膝-杜仲药对干预后,细胞中炎症因子水平以及上述蛋白的表达水平或磷酸化水平大部分显著逆转(P<0.05或P<0.01),且牛膝-杜仲药对具有协同作用。结论牛膝-杜仲药对对RAW264.7细胞具有协同抗炎作用,其作用机制可能与抑制NF-κB/MAPK信号通路相关蛋白表达有关。     

EMT and CSC-like properties mediated by the IKKβ/IκBα/RelA signal pathway via the transcriptional regulator, Snail, are involved in the arsenite-induced neoplastic transformation of human keratinocytes

Exposure of humans to inorganic arsenic can cause skin cancer. The epithelial–mesenchymal transition (EMT) and acquisition of cancer stem cell (CSC)-like properties are essential steps in the initiation of human skin cancers; however, the mechanisms of action remain obscure. We have found that, during the neoplastic transformation induced by a low concentration (1.0 μM) of arsenite in human keratinocyte HaCaT cells, the cells undergo an EMT and then acquire a malignant CSC-like phenotype. With longer times for transformation of HaCaT cells, there were increased activations of IκB kinase β (IKKβ), inhibitor nuclear factor-kappa B alpha (IκBα), and nuclear factor κB (NF-κB) RelA and increases in the level of Snail. Further, during the transformation of HaCaT cells, the activation of NF-κB RelA up-regulated Snail levels. Inhibition of NF-κB RelA blocked the arsenite-induced EMT, acquisition of a CSC-like phenotype, and neoplastic transformation. These observations show that EMT, along with acquisition of a CSC-like phenotype mediated by IKKβ/IκBα/RelA signal pathway via Snail, contributes to a low concentration of arsenite-induced tumorigenesis.     

拮抗Toll样受体4对于溶血磷脂酸诱导的THP-1细胞Toll样受体4／核因子-κB信号通路的影响

目的：通过拮抗Toll样受体4（TLR4）观察其对于溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）诱导的人单核细胞株THP-1细胞的核因子-κB（nuclear factor-kappaB,NF-κB）p65表达的影响以及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平的变化。方法取THP-1细胞,LPA以不同浓度水平（0～10μmol·L－1）刺激4 h,或1μmol·L－1浓度刺激不同时间（0～8 h）,酶联免疫吸附法（ELISA）测定细胞因子TNF-α,随后在LPA （1μmol·L－1）条件下分别予不同浓度TLR4单克隆抗体（TLR4 mAb）（5,20,30 mg·L－1）干预THP-1细胞,观察其对LPA诱导的核蛋白NF-κB p65表达及TNF-α分泌水平的影响。结果 LPA以剂量依赖方式促进TNF-α分泌,并可诱导THP-1细胞NF-κB p65活化,予TLR4 mAb阻断TLR4后,可显著抑制NF-κB p65表达及TNF-α分泌。结论 LPA可经由Toll4／NF-κB信号途径激活单核细胞,最终引起TNF-α等炎性因子的分泌,参与动脉粥样硬化进程。