重组人源化兔抗VEGF单克隆抗体质控方法与质量标准研究

目的:建立重组人源化兔抗VEGF单抗的质控方法和质量标准。方法:利用HUVEC细胞增殖抑制试验测定重组人源化兔抗VEGF单抗的生物学活性;SDS-PAGE和SEC-HPLC测定纯度;胰酶酶切,HPLC测定其肽图;实时定量PCR检测CHO宿主DNA残留量;采用ELISA法分别测定VEGF结合力、残留ProA含量和残留菌体蛋白含量;水平等电聚焦电泳法测定等电点;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人源化兔抗VEGF单抗的原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》、《人用单克隆抗体质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。     

重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白(rhG-CSF-Fc)的质量研究

目的:建立重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白的质控方法和质量标准。方法:采用NSF-60细胞增殖法测定生物学活性;非还原SDS-PAGE电泳和RP-HPLC测定纯度;以ELISA法分别测定残留CHO细胞蛋白和蛋白A;其余检测项目按中国药典2010年版三部规定进行。结果:用建立的方法对重组人粒细胞集落刺激因子-Fc融合蛋白原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组DNA制品质量控制技术指导原则》和中国药典2010年版三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全有效、质量可控的特点,可用于该类产品的常规检定。     

重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白质控方法与质量标准的建立

目的:建立重组人血清白蛋白-干扰素α2a融合蛋白(rHSA-IFNα2a)的质控方法和质量标准。方法:分别使用抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体、采用免疫印迹法对成品进行鉴别试验,采用WISH细胞病变抑制法测定成品和原液的生物学活性,原液以胰蛋白酶酶切后,用HPLC分析肽图,其余项目按2010年版中国药典(三部)的规定进行检测。结果:样品与抗HSA抗体和抗IFNα2a抗体均呈阳性反应,比活性>1.5×105 IU.mg-1,其肽图与参考品的一致,其余项目均符合2010年版中国药典(三部)的规定,根据检测结果建立了rHSA-IFNα2a的质量标准。结论:建立的质控方法和质量标准可以保证rHSA-IFNα2a的安全、有效和质量可控,可以用于rHSA-IFNα2a的常规检定。     

注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂质量标准研究

目的:建立注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂(HTUPA)的质控方法和质量标准。方法:以纤维蛋白平板法测定HTUPA 的生物学活性,还原型 SDS-PAGE 确定相对分子质量,SDS-PAGE 和反相高效液相色谱测定纯度,毛细管电泳法测定等电点,用胰蛋白酶酶切后分析肽图,其余检测项目按2005年版中国药典三部规定进行。结果:用建立的方法对原液和成品进行了检定,各项指标均符合《人用重组 DNA 制品质量控制技术指导原则》和2005年版中国药典三部的要求。结论:建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于注射用人组织尿激酶型纤溶酶原激活剂产品的常规检定。     

GM—CSF／IL-3融合蛋白质量标准的研究和建立

目的：建立重组GM—CSF／IL-3融合蛋白的质控标准和检测方法，以用于该产品的常规质量控制。方法：用TF-1／MTT细胞增殖试验定量测定GM—CSF／IL-3融合蛋白体外生物学活性；用抗GM—CSF和IL-3的抗体分别进行WesternBlot进行鉴别试验；用C8-HPLC和SDS—PAGE测定蛋白纯度；用胰蛋白酶消化/C18-HPLC进行肽图分析；用顶空进样气相色谱法检测甲醇残留量；还原型SDS—PAGE测定融合蛋白相对分子质量；其他原液和成品检测项目参照2005年版中国药典三部的方法进行。结果：GM～CSF／IL-3融合蛋白的原液及成品与TF-1细胞的反应呈典型的S型曲线，符合四参数方程y=（A—D）／[1＋（x／C）^B）]＋JD，相关系数大于0．99，成品和原液的回收率均大于94％，RSD均小于20％；与GM—CSF和IL-3抗体进行的Western Blot均为阳性；原液纯度大于95．0％；甲醇残留量小于0．005％，其他项目均符合2005年版中国药典三部要求。结论：建立的重组GM—CSF／IL-3融合蛋白质控标准和检测方法可以有效控制该制品的质量，并确保制品的安全与有效，已用于该制品的常规检定。     

重组人白介素12质量标准与检测方法研究

目的：建立白介素12的质量标准与检测方法，用于该产品的质量控制。方法：采用诱导PBMC生成IFN-γ的方法测定生物学活性；用胰酶酶解分析肽图；用分子排阻HPLC、离子交换HPLC和SDS-PAGE法分析蛋白纯度；免疫印迹及N端氨基酸序列测定分析、鉴定产品特性。按照《中国药典》三部2005年版的有关规定进行了其他项目检查。结果：用建立的方法对重组人白介素12成品及原液进行检定，结果各项指标均符合《中国药典》的要求。结论：建立了重组人白介素12的质量标准，并可有效地控制制品的质量。     

重组人脑利钠肽质量标准与检定方法研究

目的：建立重组人脑利钠肽（rhBNP)质量标准与检定方法，用于该产品的质量控制。方法：用离体动脉条测定法测定rhBNP的生物活性；用反相HPLC和SDS-PAGE分析蛋白纯度；用肽图，免疫印迹及N-端氨基酸序列测定分析。鉴定产品特性；用固相斑点杂交法测定残余外源DNA含量；用ELISA测定残余工程菌蛋白含量；用《中国生物制品规程》的方法对rhBNP成品进行无菌，热原，细菌内毒素和异常毒性等常规试验等。结果：用建立的方法对连续3批rhBNP原液和成品进行检定，结果各项指标均符合《重组DNA制品质量控制要点》和《中国生物制品规程》的要求。结论：建立的rhBNP质量标准与检定方法，具有保证产品安全，有效，质量可控等特点，可用于该产品的常规检定。     

重组人血小板衍生生长因子（rhPDGF—BB）质控方法和质量标准的研究

目的：建立重组人血小板衍生生长因子(rhPDGF—BB)的质控方法和质量标准。方法：以BALB／C 3T3细胞增殖实验及MTT染色法测定rhPDGF—BB的生物学活性，还原型SDS—PAGE确定B链分子量，SDS—PAGE和反相高效液相色谱测定纯度，毛细管电泳法测定等电点，用胰蛋白酶酶切后分析肽图，其余检测项目按《中国生物制品规程》2000版规定进行。结果：用建立的方法对连续3批rhPDGF—BB原液和成品进行了检定，各项指标均符合《重组DNA制品质量控制要点》和《中国生物制品规程》的要求。结论：建立的质控方法和质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点，可用于重组人血小板衍生生长因子产品的常规检定。     

聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法研究

目的:建立聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质量标准和质控方法.方法:采用荧光分光光度法测定PEG-rhG-CSF的PEG化率,RP-HPLC方法蒸发光检测器检测游离PEG残留量,胰蛋白酶裂解进行肽图分析,其它指标按照<中国生物制品规程>进行.结果:建立了聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的质控方法和质量标准.结论:建立的方法和质量标准已用于聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子产品的检定.     

凝胶法和动态浊度法在b型流感嗜血杆菌结合疫苗细菌内毒素控制中的应用比较

目的在b型流感嗜血杆菌结合疫苗生产过程中采用凝胶法和动态浊度法检测中间品、原液和成品中细菌内毒素含量,以此控制热原,提高制品质量,并对两种方法进行比较。方法采用《中华人民共和国药典》（2010年版）三部附录刈E细菌内毒素检查法中的凝胶法和动态浊度法。结果Hib中间品、原液及成品经凝胶法和动态浊度法测定,内毒素含量均〈25EU／μg、5EU／μg、25EU／剂,符合规定。结论各项检定结果表明：应用动态浊度法和凝胶法检测b型流感嗜血杆菌结合疫苗中间品、原液和成品细菌内毒素含量结果相符,动态浊度法定量检测对于内毒素含量内控指标有很好的指导意义。     

3种基因工程药物对大鼠动脉阻塞性脑损伤治疗作用的比较研究

目的 :探讨基因工程药物NIF、NHH、TNHH对大鼠动脉阻塞性脑损伤的治疗作用。方法 :用线栓法将24只大鼠制成动脉阻塞性脑缺血损伤模型后分为治疗组 (3组 )和模型对照组 ,每组6只。治疗组静脉给予NIF、NHH、TNHH ,模型组给予生理盐水。分别于术后4、8、24、48、72h进行神经行为学评分 ;术后72h取血测定血清APTT ,判断凝血功能 ;取脑组织行TTC染色 ,计算梗塞灶体积 ;HE染色观察脑组织病理变化。结果 :治疗组各时间点行为学评分均优于模型组 (P<0 05) ,血清APTT比模型组均有明显延长 (P<0 05) ,脑组织梗塞灶体积比模型组小 (P<0 05) ,HE染色脑组织病理变化均较模型组轻。结论 :NIF、NHH、TNHH对大鼠动脉阻塞性脑缺血损伤有明显的保护作用 ,其中以TNHH最优。     

新型水蛭肽嵌合蛋白治疗脑出血后脑水肿的实验研究

目的探讨新型基因工程药物水蛭肽嵌合蛋白（TNHH）对大鼠脑出血后脑水肿的治疗作用及其机制。方法将96只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血模型组、TNHH组,以自体血注入大鼠尾状核方法建立脑出血模型,假手术组只进针不注血。TNHH组静脉注射TNHH（2mg／kg）,分别于造模前30min及造模后每12h给药1次。于6,24,72,168h时分别用Longa标准测定神经功能缺损,干、湿重法检测脑含水量,分光光度法测定脑血肿周围脑组织髓过氧化物酶（MPO）活性。结果与假手术组相比,脑出血模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、MPO活性均显著增高（P〈0．05或P〈0．01）;与脑出血模型组相比,TNHH组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、MPO活性显著下降（P〈0．05或P〈0．01）。结论TNHH对大鼠脑出血后脑水肿有治疗作用,其机制可能与抑制凝血酶活性、降低中性粒细胞浸润有关。     

TNHH对大鼠全脑缺血再灌注损伤的抗氧化性保护作用

目的观察TNHH对大鼠全脑缺血再灌注损伤的抗氧化性保护作用。方法以改良的四血管阻塞法(Pulsinelli four-vessel occlusion model)建立大鼠全脑缺血模型,于缺血30 min,再灌注48 h后进行脑组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)测定。结果TNHH能显著降低大鼠缺血损伤脑组织中MDA含量,降低MPO活性,提高SOD活性。结论TNHH对大鼠全脑缺血再灌注损伤的具有明显的抗氧化作用。     

反相高效液相色谱法测定甲磺酸酚妥拉明片的含量

目的：建立了反向高效液相色谱法测定甲磺酸酚妥拉明的含量的方法。方法：采用Symmetry C18硅烷键和硅胶柱,甲醇－水－冰醋酸－三乙胺（10：10：1：0．1）作为流动相,检测波长为278nm,峰面积外标法测定。结果：平均回收率为100．2％（n=11),日内、日间差分别为0．7％和0．8％,在10－250μg范围内线性关系良好（r=0.9999),结论：该法简便、准确、结果满意。     

柱前衍生化HPLC法测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体

目的:建立柱前衍生化HPLC法研究大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体体外代谢的立体选择性。方法:以二-O-乙酰基-L-酒石酸酐（DATAAN）为衍生化试剂,采用反相高效液相色谱法拆分川丁特罗对映体,测定大鼠肝S9组分中川丁特罗对映体的浓度。结果:川丁特罗对映体达到基线分离,分离度为2.24,线性范围2.50～200μmol·L^-1,平均回收率（S）-川丁特罗为89.3%,（R）-川丁特罗为91.3%。平均日内、日间RSD均小于15%。在大鼠肝S9组分中川丁特罗的代谢呈现立体选择性。结论:此法专属性强、准确可靠,可用于大鼠肝S9组分中川丁特罗代谢的立体选择性研究。     

反相高效液相色谱法测定氢氯噻嗪片含量

目的 :建立以反相高效液相色谱法测定氢氯噻嗪片含量的方法。方法 :以ZORBAXC18 为色谱柱 ,0 02mol/L磷酸盐缓冲液 -甲醇 (80∶20)为流动相 ,紫外检测波长为226nm ,柱温为室温 ,进样量为20μl。结果 :氢氯噻嗪在0 006～0 303mg/ml浓度范围内线性关系良好 (r=1 0000 ,n=5) ,平均回收率为100 1 % ,RSD=0 43 % (n=9)。结论 :该法准确度高、精密度好、简便快速 ,可作为氢氯噻嗪片的含量测定方法。     

首批科博肽国家对照品的研制

目的:建立科博肽含量测定用首批国家对照品。方法:以眼镜蛇毒抗血清试验及紫外分光光度法进行鉴别,TOF-MS测定相对分子质量,反相高效液相 C_8柱、C_(18)柱及毛细管电泳分别测定纯度,凯氏定氮及 Lowry 法测定蛋白含量。结果:用建立的方法对科博肽的原料进行测定,符合国家药品标准的要求。结论:建立的质量标准具有保证产品安全、有效、质量可控的特点,可用于科博肽产品的常规检定。     

反相高效液相色谱法测定奥沙利铂的含量

目的:建立奥沙利铂反相高效液相色谱(RP-HPLC)含量测定方法。方法:采用RP-HPLC测定奥沙利铂的含量,色谱柱:kromasil C18柱(150mm×4.6mm),检测波长250nm。流动相:甲醇-水(5:95),流速:1.0ml/min。结果:本法线性范围为20μg/ml-100μg/ml,r=0.9999。日内和日间精密度RSD分别为0.71％和0.97％(n=5)。平均回收率为99.82％,RSD为0.89％。结论:该测定方法专属性强,操作简便,准确度高,精密度高,可作为奥沙利铂的含量测定方法,以控制其原料及制剂的质量。     

盐酸头孢甲肟原料及制剂的聚合物杂质分析

目的:建立盐酸头孢甲肟原料及制剂聚合物杂质的分析方法。方法:采用高浓度溶液降解法制备盐酸头孢甲肟降解溶液;采用高效凝胶色谱法(TSK G2000 SWxl)和柱切换-LC/MSn法对盐酸头孢甲肟降解溶液的聚合物杂质进行分离和结构鉴定,并评估高效凝胶色谱法分离聚合物杂质的专属性;采用Kromasil100-5 C₁₈型色谱柱,以水-乙腈-冰醋酸为流动相进行梯度洗脱,建立盐酸头孢甲肟聚合物的RP-HPLC分析方法,采用二维色谱法和柱切换-LC/MSn法对该方法的专属性进行分析,并对实际供试品进行分析。结果:在盐酸头孢甲肟降解物中鉴定出盐酸头孢甲肟脱3位侧链二聚体及二聚体开环水解物,未发现三聚体及四聚体杂质;高效凝胶色谱法分离盐酸头孢甲肟聚合物杂质时,易受到小分子杂质的干扰,方法专属性与定量准确性差;RP-HPLC法分析盐酸头孢甲肟聚合物杂质时,能够检出盐酸头孢甲肟二聚体及其异构体,专属性良好。结论:高效凝胶色谱法不能对盐酸头孢甲肟的聚合物杂质进行有效质控,建立的反相色谱法分析盐酸头孢甲肟聚合物杂质的专属性良好,可将盐酸头孢甲肟降解溶液可作为聚合物杂质系统适用性溶液。     

反相高效液相色谱法测定复方呋喃西林滴鼻剂的含量

目的 :建立测定复方呋喃西林滴鼻剂中呋喃西林和盐酸麻黄素含量的反相高效液相色谱法。方法 :色谱柱 :KromasilC18(4 6mm×250mm ,5μm) ;流动相 :甲醇 -水 -三乙胺 -冰醋酸 (12∶88∶0 2∶1) ;内标 :氯霉素 ;检测波长 :254nm。结果 :复方呋喃西林滴鼻剂各组分及内标在18min内获得满意的分离 ,呋喃西林和盐酸麻黄素在定量范围内具有良好的线性关系和回收率。结论 :反相高效液相色谱法应用于复方呋喃西林滴鼻剂的含量测定 ,操作简便易行 ,结果准确可靠