内源性硫化氢对硫酸铍诱导人支气管上皮细胞自噬的影响

目的探讨内源性硫化氢(H_2S)对硫酸铍(BeSO_4)诱导人支气管上皮细胞(16HBE)自噬的影响。方法用0、100、150、200、250和300μmol/L BeSO_4处理16HBE细胞48 h,MTT法测定细胞活力,亚甲基蓝分光光度法测定细胞内H_2S含量,Western blot测定自噬标志蛋白LC3-B、Beclin-1及P62表达;用300μmol/L硫氢化钠(NaHS)或10 mmol/L DL-炔丙基甘氨酸(PPG)预处理16HBE细胞6 h后,用BeSO_4处理细胞,研究H_2S含量对上述指标的影响。结果 (1)BeSO_4作用16HBE细胞48 h的半数致死浓度为249μmol/L;与对照组相比,BeSO_4组自噬蛋白LC3-II/LC3-I和Beclin-1表达升高,细胞活力、H_2S含量和P62蛋白表达降低,当BeSO_4浓度100μmol/L时,差异均有统计学意义(P0.05);(2)与BeSO_4组比较,NaHS+BeSO_4组细胞活力、H_2S水平和P62蛋白表达均升高(P0.05),LC3-II/LC3-I和Beclin-1蛋白表达有降低趋势,但差异无统计学意义;(3)与BeSO_4组比较,PPG+BeSO_4组细胞活力、H_2S水平及P62蛋白表达降低,LC3-II/LC3-I和Beclin-1蛋白表达升高(P0.05)。结论在本试验条件下,BeSO_4染毒能致16HBE细胞活力和内源性H_2S含量下降,并引起细胞自噬;内源性H_2S能抑制BeSO_4诱导的16HBE细胞自噬、减轻细胞毒性,发挥保护功能。     

α1抗胰蛋白酶突变体ATZ过表达增强细胞自噬水平

目的观察α1抗胰蛋白酶(α1-antitrypsin,AAT)Z型突变体(α1-antitrypsin Z variant,ATZ)表达对细胞自噬水平的影响,探讨ATZ细胞毒作用的可能机制。方法体外培养人胚肾细胞株HEK 293T并转染ATZ真核表达质粒,利用Western blot法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,免疫荧光染色观察LC3的细胞定位,real-time PCR法检测自噬相关基因Atg5、Atg12和Beclin1的变化,DAB染色观察ATZ过表达对细胞形态的影响。结果与转染空质粒对照组相比,ATZ过表达促进细胞自噬的标志分子LC3由LC3-Ⅰ转变为LC3-Ⅱ,p62水平降低;而经自噬抑制剂氯化铵处理后,ATZ过表达细胞中出现LC3点状聚集,p62水平增加;同时,ATZ过表达明显增加自噬相关基因Atg5、Atg12的mRNA水平,而对Beclin1无明显影响;少量表达ATZ的细胞形态基本正常,细胞中LC3形成点状聚集;反之,过度表达ATZ的细胞核变小、固缩甚至消失,无LC3-Ⅱ表达。结论过表达ATZ通过增加Atg5和Atg12表达激活自噬,这可能与其细胞毒性有一定相关性。     

雷帕霉素通过调控NLRP3炎症小体抑制成纤维样滑膜细胞增殖

目的 探讨自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)通过调控含核苷酸寡聚化结构域样受体(NLR)家族PYRIN域蛋白3(NLRP3)炎症小体对肿瘤坏死因子ɑ(TNF-α)诱导成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖的影响。方法 培养FLS并分为3组：对照组、TNF-α组、RAPA组。采用CCK-8法检测细胞活力。采用免疫荧光法和透射电镜(TEM)检测FLS细胞自噬情况。采用Western blotting法检测NLRP3炎症小体关键蛋白NLRP3、caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II/LC3-I、Beclin-1、P62的表达。结果 与对照组比较,TNF-α组FLS细胞明显增殖(P<0.05),并激活NLRP3炎症小体(P<0.01)。与TNF-α组比较,RAPA组FLS增殖明显抑制(P<0.05),LC3-II和Beclin1表达水平明显上调(P<0.01),P62、NLRP3和caspase-1的表达水平均降低(P<0.05)。结论 RAPA可以抑制TNF-α诱导的FLS增殖,其机制可能与提高自噬、抑制NLRP3炎症小体的激活有关。     

小檗碱抑制缺氧诱导的人乳腺癌HCC1937细胞自噬

目的 研究小檗碱(berberine,BBR)对缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞自噬的影响。方法 培养人乳腺癌HCC1937细胞,以CCK-8法分别测定常氧及缺氧条件下不同浓度BBR(0,5,10,20,40,80,160 μmol·L^-1)对细胞活力的影响,选择用于进一步实验的药物浓度;将培养的HCC1937细胞随机分为4组：对照组,20 μmol·L^-1 BBR组,缺氧组,缺氧+20 μmol·L^-1 BBR组。LIVE/DEAD细胞活力/细胞毒性试剂盒测定细胞死亡率。Western blotting测定自噬相关蛋白Beclin1、LC3及P62的表达。以mCherry-GFP-LC3腺病毒感染细胞,激光共聚焦显微镜成像并计数各组单个细胞内自噬体及自噬溶酶体的数目,判定BBR对HCC1937细胞自噬流的影响。结果 BBR呈浓度依赖性地降低人乳腺癌HCC1937细胞的细胞活力;缺氧处理后HCC1937细胞的死亡率无显著改变,细胞内Beclin1、LC3-II及LC3-II/LC3-I的比值显著增加,P62无显著改变,自噬流增强;常氧及缺氧条件下BBR都能显著增加细胞的死亡率,降低Beclin1及LC3II/LC3-I的比值,增加细胞内P62,显著减少自噬体及自噬溶酶体的数量,抑制自噬体的形成及清除。结论 BBR增加缺氧条件下人乳腺癌HCC1937细胞的死亡率,其作用与BBR抑制缺氧条件下细胞自噬的作用相关。     

稳定表达GFP-LC3蛋白的THP-1细胞系的构建

摘要：目的 构建稳定表达GFP-LC3的人急性单核细胞白血病细胞（THP-1）。方法 采用pCDH-CMV-GFP LC3-EF1α-puro转染293T细胞构建慢病毒质粒系统,获取的慢病毒感染THP-1细胞,用嘌呤霉素（Puromycin）筛选 稳定表达GFP-LC3蛋白的细胞系。通过Western blot和流式细胞术检测THP-1细胞中GFP-LC3蛋白的表达,并利用 该稳定表达细胞系观察饥饿和雷帕霉素诱导时细胞发生的自噬变化。结果 筛选得到稳定表达GFP-LC3蛋白的 THP-1细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光。Western blot和流式细胞术检测证实了GFP-LC3融合蛋白 的表达。激光共聚焦法和Western blot均证实饥饿和雷帕霉素可以诱导自噬的发生,且GFP-LC3融合蛋白可以反映 内源LC3蛋白的变化,包括蛋白聚集和发生剪切修饰。结论 应用慢病毒质粒系统成功构建了高效稳定表达GFP LC3蛋白的THP-1细胞系,从而为后续利用GFP-LC3融合蛋白研究自噬变化提供了细胞模型。     

铁皮石斛多糖对缺氧/复氧诱导星形胶质细胞AMPK/ULK1通路相关自噬的影响

目的 探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation，H/R）诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶（adenosine monophosphate-activated protein kinase，AMPK）/UNC-51类似自噬激活激酶1（UNC-51 like autophagy activating kinase 1，ULK1）通路相关自噬的影响。方法 体外培养人星形胶质细胞，分为对照组、H/R组（H/R建模）、低浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+100 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）、中浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+200 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）和高浓度铁皮石斛多糖组（H/R建模+400 μg·mL^-1铁皮石斛多糖）。MTT法检测细胞增殖情况；流式细胞仪检测细胞凋亡情况；试剂盒测定细胞中丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）水平；Western blotting检测细胞中p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（light chain 3，LC3） I、LC3 Ⅱ蛋白表达情况。结果 与对照组相比，H/R组星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著降低（P<0.05），细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）；随着铁皮石斛多糖的处理及处理浓度的升高，星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3 I/LC3 Ⅱ蛋白表达水平显著升高（P<0.05），细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 铁皮石斛多糖对H/R诱导的星形胶质细胞AMPK/ULK1通路激活及自噬具有抑制作用，可促进细胞存活并减少细胞凋亡。     

内皮-单核细胞激活多肽对人U118胶质瘤细胞自噬的影响及机制

目的研究内皮-单核细胞激活多肽(EMAP-Ⅱ)对人U118脑胶质瘤细胞自噬的影响及可能机制。方法 EMAP-Ⅱ处理人U118胶质瘤细胞后,采用MTT检测细胞活力;用免疫荧光法检测自噬标记物微管相关蛋白轻链-3(LC3)在U118细胞的分布;Western blot方法检测LC3-Ⅱ、自噬降解底物p62/SQSTM1和自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平。结果与EMAP-Ⅱ0 h组相比,0.05 nmol.L-1剂量以上的EMAP-Ⅱ可明显抑制人U118胶质瘤细胞的活力,降低线粒体膜电位(MMP),在EMAP-Ⅱ作用0.5 h时效果最明显;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)能够阻断EMAP-Ⅱ的作用,使细胞活力和线粒体膜电位基本恢复;EMAP-Ⅱ作用0.5 h后自噬标记物LC3在胞质内呈点状分布,荧光表达明显增强,并且LC3-Ⅱ的蛋白表达水平明显上调;同时伴有自噬降解底物p62/SQSTM1的表达下降;此外,自噬相关蛋白Beclin1的蛋白表达水平明显上调。结论 EMAP-Ⅱ能明显抑制人U118胶质瘤细胞活力,诱导U118细胞发生自噬,其机制可能与自噬相关蛋白Beclin1上调有关。     

硝苯地平促进肝癌细胞Huh-7自噬小体形成并上调Beclin1的表达

目的探讨硝苯地平对肝癌细胞Huh-7自噬小体形成及其可能机制。方法以不同浓度的硝苯地平体外干预Huh-7细胞,通过细胞增殖实验和克隆形成实验,检测硝苯地平对Huh-7细胞增殖的影响;Western blot实验检测Huh-7细胞自噬相关蛋白Beclin1、LC3B-Ⅱ的表达变化。运用激光共聚焦显微成像技术,观测硝苯地平对Huh-7细胞自噬小体形成的作用。结果硝苯地平可明显抑制Huh-7细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖关系,2 d时硝苯地平的IC₅₀为22.7 mg·L^-1;浓度为25 mg·L^-1的硝苯地平作用使Huh-7细胞的克隆形成率较对照组明显降低,克隆形成的抑制率结果为(95.46±0.45)%;Western blot结果提示,硝苯地平明显上调Beclin1、LC3B-Ⅱ蛋白表达水平;激光共聚焦显微镜影像结果显示,硝苯地平可以促进GFP-LC3B的聚集,提示硝苯地平明显诱导Huh-7细胞自噬小体形成。结论硝苯地平明显抑制肝癌细胞Huh-7增殖,并促进Huh-7细胞自噬小体形成,其机制可能与上调Beclin1蛋白的表达有关。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的:探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法:构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果:氧糖剥夺处理后,1μmol/L和10μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而100μmol/L则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论:低剂量(1、10μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

有氧运动对小鼠主动脉自噬相关因子表达的影响

目的 研究有氧运动对小鼠主动脉自噬相关因子表达及自噬活化的影响。方法 将8周龄C57BL/6雄性小鼠40只随机分为安静对照组（n=20）与有氧运动组（n=20）,其中10只用于Real-Time PCR实验,10只用于Western-blot实验,有氧运动组小鼠进行6周的游泳运动（60 min/d,5 d/周）,对照组小鼠自由活动。6周后取小鼠胸腹主动脉,采用Real-Time PCR方法检测自噬相关因子ULK1、Beclin1、LC3B mRNA水平;Western-blot方法检测主动脉LC3B蛋白中LC3B-II/LC3B-Ⅰ比值及p62蛋白水平。结果 与对照组相比,有氧运动组小鼠主动脉ULK1、Beclin1、LC3B mRNA水平明显升高（P<0.05）;有氧运动组小鼠主动脉LC3B-II/LC3B-Ⅰ比值增大（P<0.05）,p62蛋白降解增加（P<0.05）。结论 有氧运动能够使主动脉ULK1、Beclin1、LC3B自噬相关因子表达增强,进而增强主动脉自噬活性。     

微小RNA-375调控自噬抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖和转移

目的 探讨微小 RNA-375（miR-375）通过调控自噬相关蛋白（Atg）14 介导的自噬对肝癌细胞（SMMC-7721）增殖和转移能力的影响。方法 将SMMC-7721细胞分别用miR-375模拟物、抑制物以及Atg14的干扰RNA处理,并建立缺氧1 h复氧6 h的模型,分为miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组以及siRNA NC组、Atg14 siRNA 组、miR-375+Atg14 siRNA 组。TargetScan 预测 miR-375 与 Atg14 基因相关性。荧光实时定量 PCR（qRT-PCR）检测miR-375 NC组、miR-375 mimics组、miR-375 inhibitor组miR-375、Atg14 mRNA相对表达量。免疫细胞化学染色检测3组细胞内N-钙黏素（N-Cadherin）和β-连环蛋白（β-catenin）表达分布情况。绿色荧光蛋白-红 色荧光蛋白-轻链（mGFP-RFP-LC3）自噬双标腺病毒转染3组细胞,荧光显微镜下观察自噬体形成情况。平板克隆检测肝癌细胞增殖情况。Western blot 检测Atg14、泛素结合蛋白（P62）、轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、酵母Atg6同源物（Beclin1）、N-Cadherin、β-catenin和波形蛋白（Vimentin）表达情况。结果 miR-375与Atg14基因相关性较高,qRT-PCR显示过表达miR-375能抑制Atg14 mRNA表达;反之能促进Atg14 mRNA表达。过表达miR-375能抑制肝癌细胞内N-Cadherin表达、提高β-catenin表达水平,抑制肝癌细胞增殖能力（P＜0.01）;而抑制miR-375表达能促进N-Cadherin表达、降低β-catenin表达水平,提高肝癌细胞增殖能力（P＜0.01）。过表达miR-375能抑制Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,促进P62表达（P＜0.01）;反之能促进Atg14、LC3Ⅱ、Beclin1表达,抑制P62表达（P＜0.01）。荧 光显微镜下观察到过表达 miR-375 可抑制自噬体形成,而抑制 miR-375 表达能促进自噬体形成（P＜0.01）。干扰Atg14表达后可增强miR-375对肝癌细胞增殖、转移能力的抑制作用（P＜0.01）。结论 激活miR-375能抑制肝癌细胞增殖和转移,而抑制miR-375能促进肝癌细胞增殖和转移,其机制可能与miR-375通过靶向调控Atg14抑制自噬,从而抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖和转移有关。     

芪血通络片联合依达拉奉治疗急性脑梗死的临床研究

目的 研究山楂酸对鼻咽癌CNE2细胞增殖和自噬的影响,探讨PI3K/Akt/mTOR通路在该过程中的调控作用。方法 采用CCK-8法检测不同浓度的山楂酸作用不同时间对CNE2细胞增殖的影响;MDC染色法检测不同浓度山楂酸处理CNE2细胞24 h后自噬小体的形成情况;Western blotting法检测山楂酸对CNE2细胞自噬相关蛋白及PI3K/AKT/mTOR通路关键蛋白表达的影响。结果 与溶剂对照组相比,山楂酸可以抑制CNE2细胞的增殖,而且随药物处理时间和浓度的增加,抑制效果增强（P<0.05）;山楂酸能够诱导细胞自噬小体的形成,且可显著提高Atg5和LC3-II/LC3-I的表达,降低p62的表达;此外,山楂酸可抑制PI3K-p110α、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达。结论 山楂酸可抑制鼻咽癌细胞增殖,诱导鼻咽癌细胞发生自噬,其机制与PI3K/Akt/mTOR信号通路有关,可作为治疗鼻咽癌的潜在药物研究。     

乳腺癌组织miR-20a的表达及其对乳腺癌细胞自噬的影响

目的 探究乳腺癌患者肿瘤组织中miR-20a的表达情况及其对乳腺癌细胞自噬功能的作用。 方法 收集芜湖市第一人民医院2016年1月至2017年12月间收治的接受手术治疗的乳腺癌患者56例,逆转录实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肿瘤组织与癌旁组织miR-20a与自噬相关基因Beclin1、LC3、ATG5及ATG7 mRNA的表达水平。脂质体法转染pcDNA3/pri-miR-20a质粒至MCF7细胞,免疫蛋白印记实验检测Beclin 1与饥饿条件下LC3Ⅱ表达水平,免疫荧光实验检测自噬斑点。 结果 肿瘤组织miR-20a的平均表达水平为211.35±67.43,癌旁组织miR-20a的平均表达水平为126.72±24.37,差异有统计学意义(P<0.05)。此外,肿瘤组织较癌旁组织Beclin1 mRNA表达量降低(P<0.05),ATG5、ATG7与ATG12 mRNA的表达量差异无统计学意义 (P>0.05)。过表达miR-20a后MCF7细胞Beclin1蛋白表达量降低,饥饿刺激下LC3Ⅱ表达水平降低且自噬斑点减少。 结论 乳腺癌组织中miR-20a呈高表达,并且降低自噬调节蛋白Beclin1的表达以抑制自噬活化。     

维生素K_3通过下调mTOR信号途径而诱导HeLa细胞自噬

目的观察VitK3(维生素K3,vitaminK3)对HeLa细胞损伤过程中的自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的影响。方法以HeLa细胞为研究对象,采用MTT检测细胞存活率,用Western blot方法检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达的变化和蛋白激酶B(PKB,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化-Akt/mTOR表达的变化。结果30μmol·L-1剂量以上的VitK3可明显抑制HeLa细胞的增殖(P<0.05)。VitK3作用12h后增加Beclin1和LC3-Ⅱ的蛋白表达水平(P<0.05),降低磷酸化的Akt/mTOR的蛋白表达水平(P<0.05)。结论VitK3能明显抑制HeLa细胞增殖并具有诱导HeLa细胞发生自噬的作用,其机制可能与下调mTOR信号有关。     

雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡

目的 研究自噬在雷公藤甲素(triptolide, TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法 以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin, Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果 TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p...     

DAPT对慢性社会挫败应激诱导小鼠抑郁样行为的作用及机制北大核心CSCD

目的探究DAPT对慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为的作用及机制。方法C57BL/6J小鼠给予慢性社会挫败应激(chronic social defeat stress,CSDS)处理10 d以建立抑郁模型,药物处理组小鼠每天腹腔注射DAPT 5 mg·kg^(-1)。通过社会接触、糖水偏爱、旷场、强迫游泳和悬尾实验来评价小鼠的抑郁样行为;采用Western blot检测小鼠海马NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、p62、Atg7、Atg5和Beclin1蛋白的表达,运用ELISA检测小鼠海马IL-1β和IL-18的表达水平。结果CSDS诱导小鼠出现明显的抑郁样行为,同时增加了小鼠海马NLRP3、ASC、caspase-1的表达和炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-18的水平,另外,CSDS处理小鼠海马自噬相关蛋白Atg7、Atg5和Beclin1表达明显减少,而p62的表达则明显增加。DAPT处理能明显改善CSDS诱导的小鼠抑郁样行为,并能抑制NLRP3、ASC、caspase-1、TNF-α、IL-1β、IL-18以及p62蛋白表达的增加和Atg7、Atg5和Beclin1蛋白表达的减少。结论DAPT能够改善慢性应激诱导的小鼠抑郁样行为,其机制可能与其抑制NLRP3炎症小体激活和上调自噬功能有关。     

自噬促进IL-1β诱导的大鼠INS-1胰岛β细胞凋亡

目的观察自噬在IL-1β促进INS-1胰岛β细胞凋亡中的作用。方法体外培养大鼠INS-1胰岛β细胞株,给予不同浓度IL-1β干预,用CCK-8法检测在不同作用时间点INS-1细胞的存活率;用Western blot技术检测不同IL-1β浓度下自噬相关蛋白LC3、Beclin1、P62的表达水平;Western blot法和流式细胞术检测INS-1细胞的凋亡水平。结果 IL-1β可以降低INS-1细胞的存活率,且呈浓度及时间依赖性(P<0.05,P<0.01)。与对照组相比,随着IL-1β浓度的增高,INS-1细胞凋亡水平逐渐升高(P<0.05),且细胞自噬水平也随着IL-1β浓度的增高而逐渐增高(自噬相关蛋白LC3、Beclin1表达上升,P62降低,P<0.05)。采用自噬激动剂雷帕霉素预处理细胞上调自噬可进一步增加IL-1β诱导的细胞凋亡,而用自噬抑制剂3-MA预处理抑制细胞自噬后则可逆转IL-1β诱导的INS-1胰岛细胞凋亡。结论 IL-1β通过诱导自噬增加促进INS-1胰岛β细胞凋亡。     

康莱特注射液(薏苡仁)对人肝癌细胞株SMMC7721自噬和凋亡的影响

目的 探讨康莱特注射液对人肝癌细胞株SMMC7721自噬和凋亡的影响.方法 使用康莱特注射液处理人肝癌细胞株SMMC7721,用CCK-8法检测人肝癌细胞株SMMC7721的增殖,流式细胞仪检测凋亡率,通过Western blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-II等表达情况.结果 与对照组比较,随着药物作用时间的延长,康莱特注射液对细胞的抑制程度逐步增加,细胞株在加药后96h表现出较好的抑制率,实验组人肝癌细胞株SMMC7721凋亡显著增加,自噬相关基因Beclin-1、LC3的mRNA与蛋白表达上调.结论 康莱特注射液可能通过上调Beclin-1、LC3 mRNA水平以及蛋白表达水平,促进人肝癌细胞SMMC7721自噬,抑制其增殖,并诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长.     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3凋亡和自噬的影响

目的研究雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡和自噬的影响,并探讨可能的分子机制。方法雷帕霉素及顺铂分别单独或联合作用于卵巢癌细胞株SKOV3细胞后,流式细胞仪检测凋亡率,实时荧光定量PCR检测各处理组的mTOR mRNA表达,Western blot检测自噬蛋白Beclin1、LC3和抗凋亡蛋白bcl-2的表达。结果雷帕霉素联合顺铂组凋亡率为(12.520±1.499)%,较其他处理组凋亡率提高(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的mTORmRNA表达为0.339±0.015,较对照组明显降低(P<0.05);雷帕霉素联合顺铂组的自噬蛋白Beclin1、LC3-Ⅱ表达均增强(P<0.05),抗凋亡蛋白bcl-2明显降低(P<0.05)。结论雷帕霉素通过特异性阻滞mTOR的表达,可以促进顺铂诱导的卵巢癌SKOV3细胞凋亡,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬性死亡。     

钙络合剂BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响及其可能机制

目的观察BAPTA-AM对胞外酸化诱导大鼠关节软骨细胞自噬作用的影响,探讨其可能的作用机制。方法体外使用胰酶-Ⅱ型胶原酶消化法分离提取大鼠关节软骨细胞,分为正常组(p H 7.4)、酸化组(p H 6.0)、以及分别经BAPTA-AM处理的正常组和酸化组,激光共聚焦技术检测软骨细胞胞内钙离子变化,实时荧光定量PCR法检测细胞自噬基因Beclin-1、ULK1 mRNA的表达,Western blot法检测自噬蛋白LC3的表达,吖啶橙染色分析细胞自噬溶酶体形成情况。结果与p H 7.4正常组比较,p H 6.0酸化刺激明显增加大鼠关节软骨细胞内Ca2+的浓度,且自噬标志物Beclin-1、ULK1 mRNA及LC3Ⅱ蛋白表达均明显升高,酸性自噬溶酶体形成增多,同时酸化刺激能引起Ca MKKβ及pAMPK蛋白表达水平增高,磷酸化蛋白p-m TOR水平明显降低。BAPTA-AM酸化组自噬水平和Ca MKKβ及p-AMPK表达明显降低,p-m TOR表达明显升高。结论 BAPTA-AM能明显减弱胞外酸化诱导软骨细胞自噬作用,其机制可能与抑制胞内Ca2+有关。