左卡尼汀对肾脏缺血再灌注损伤中Nrf2和γ-GCS表达影响

目的研究左卡尼汀对大鼠肾脏缺血再灌注损伤中核因子相关因子2(Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组及治疗组。缺血再灌注组及治疗组建立肾脏缺血再灌注损伤模型,治疗组在缺血再灌注损伤模型建立前后尾静脉注射左卡尼汀2mL。假手术组不行缺血再灌注处理。再灌注6h后处死大鼠,取血检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及胱抑素C(Cys C)的水平,并测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。应用RT-PCR及Western-blot方法检测肾组织中Nrf2和γ-GCS的表达水平。结果治疗组Cr、BUN、Cys C及MDA水平显著低于缺血再灌注组,SOD活性显著高于缺血再灌注组(F=8.58～57.42,q=4.06～11.26,P<0.05);与假手术组相比,缺血再灌注组肾组织中Nrf2、γ-GCSmRNA及蛋白表达水平显著升高,而治疗组肾组织中上述指标较缺血再灌注组显著增高(F=143.53～241.64,q=3.76～13.51,P<0.05)。结论左卡尼汀可减轻肾脏缺血再灌注损伤,其机制可能为通过激活Nrf2-ARE通路进而诱导γ-GCS的表达而实现的。     

敲除核因子E2相关因子对肾肌成纤维细胞活化与纤维化的影响

目的：研究敲除核因子E2相关因子（Nrf2）对肾组织中肌成纤维细胞的活化及间质纤维化的影响。方法：将实验小鼠分成Nrf2野生型假手术组、Nrf2野生型单侧输尿管梗阻（UUO）组、Nrf2敲除型假手术组、Nrf2敲除型UUO组4个小组,每组6只。生化分析仪检测血肌酐和尿素氮水平;糖原染色（PAS）观察肾组织损伤程度;Masson染色评价肾间质总胶原累积情况;免疫组织化学染色分析肌成纤维细胞标志物α-SMA、基质成分III型胶原及TGF-β1的表达;RT-qPCR检测TGF-β1 mRNA的表达。结果：与Nrf2野生型假手术组比,Nrf2野生型UUO组血肌酐和尿素氮水平明显升高（P＜0.05）。Nrf2敲除型UUO组血肌酐和尿素氮水平与Nrf2野生型UUO组相比,差异无统计学意义（P＞0.05）。PAS染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾组织损伤明显加剧（P＜0.01）。Masson染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾间质总胶原累积明显增加（P＜0.01）。免疫组织化学染色显示,与Nrf2野生型UUO组相比,Nrf2敲除型UUO组肾组织α-SMA和III型胶原的表达明显增加（P＜0.05）,而这可能与Nrf2敲除所致的TGF-β1 mRNA和蛋白表达提高有关（P＜0.05）。结论：Nrf2敲除可加剧输尿管梗阻引起的肾损伤及纤维化程度,其机制可能为Nrf2敲除通过提高TGF-β1水平,进而促进肌成纤维细胞过度活化和胶原在肾间质的过度累积。     

缺血后处理对缺血-再灌注大鼠肾脏转录因子Nrf2表达的影响

目的:研究缺血后处理对缺血-再灌注大鼠肾脏转录因子红细胞系-2相关因子2(Nrf2)表达的影响,探讨Nrf2在缺血-再灌注中的作用及其意义。方法:SD大鼠30只分三组:假手术C组、缺血-再灌注(I-R)组、缺血后处理(IPO)组。于再灌注2h处死大鼠,取血检测血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)及胱抑素C(Cys C)的水平,并测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。应用RT-PCR及Western-blot方法定量分析Nrf2,血红素氧合酶1(H0-1),y-谷氨酞半肤氨酸合成酶(-GCS)蛋白在肾组织中的表达。结果:IPO组肾组织Cr,BUN,Cys C及MDA水平显著低于缺血再灌注组,SOD活性显著高于缺血再灌注组,Nrf2,H0-1,γ-GCS蛋白在肾组织中的表达明显增多。结论:缺血后处理可能通过提高Nrf2在肾组织中的表达增多避免加重肾缺血再灌注损伤。     

转录因子Klf2和Nrf2/Bach1调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶在气道上皮细胞中的作用

目的通过研究锌指Krüppel样转录因子2（Klf2）及红系衍生核因子相关因子2（Nrf2）/BTB-CNC异体同源体1（Bach1）在经香烟烟雾提取物（CSE）刺激的大鼠气道上皮细胞中的表达,了解其感受氧化应激对靶基因γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）的调控作用。方法采用酶消化法提取大鼠原代气管-支气管上皮细胞,并用10%CSE干预细胞6 h,收集细胞,双酶法检测γ-GCS活性;通过免疫细胞化学法观察Nrf2/Bach1的核转位;采用Western blot和RT-PCR技术研究细胞中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS的蛋白及mRNA表达。结果大鼠气管-支气管上皮细胞经CSE诱导后其γ-GCS活性明显增高。免疫细胞化学结果显示Nrf2经CSE刺激后出现由核外向核内的转位,Bach1经CSE刺激后出现由核内向核外的转位。Western blot结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS蛋白水平较对照组显著升高（P〈0.05）;RT-PCR结果显示CSE处理组中Klf2、Nrf2、Bach1、γ-GCS mRNA水平较对照组显著升高（P〈0.05）。直线相关分析表明γ-GCS蛋白表达与Klf2、Nrf2、Bach1呈正相关（P〈0.05）。结论 CSE可能通过转录因子Klf2、Nrf2、Bach1调节γ-GCS的表达。     

Nrf2基因敲除加剧单侧输尿管梗阻肾纤维化模型中巨噬细胞介导的炎症损伤作用

目的：研究Nrf2基因敲除对小鼠单侧输尿管梗阻（UUO）肾纤维化模型中炎症损伤的作用及其机制。方法：将实验小鼠分为4组：Nrf2野生型UUO组（Nrf2Wild-type UUO）、Nrf2野生型假手术组（Nrf2Wild-type Sham）、Nrf2敲除型UUO组（Nrf2KO UUO）和Nrf2敲除型假手术组（Nrf2KO Sham）,每组6只。PAS与Masson染色分别用于检测肾组织损伤和总胶原累积程度;免疫组织化学染色检测巨噬细胞标志物CD68、IRF5表达;ELISA检测iNOS水平;qRT-PCR检测促炎症基因IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达;Western blot检测IRF5蛋白的表达。结果：PAS染色显示,Nrf2基因敲除没有明显引起肾组织损伤,但构建UUO模型后,其肾组织损伤明显加剧。Masson和免疫组织化学染色结果显示,Nrf2基因敲除可加重UUO模型中肾间质纤维化程度,并促进CD68阳性的巨噬细胞大量浸润,且ELISA结果显示iNOS表达水平也明显升高（P＜0.05）。深入研究发现,Nrf2KO UUO组与Nrf2Wild-type UUO组相比,肾组织中促炎基因IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达水平明显升高（P＜0.05）。同时,Western blot和免疫组织化学染色结果显示,Nrf2基因敲除可增加IRF5蛋白的表达（P＜0.05）。结论：Nrf2基因敲除加剧了UUO肾纤维化模型中的炎症损伤作用,其机制可能是通过促进IRF5介导的炎症型巨噬细胞浸润,进而增加炎症因子的合成与释放。     

参芪补肺方对慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠Nrf2和γ-GCS表达的影响

目的探讨参芪补肺方对大鼠肺组织红系衍生核因子相关因子-2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2, Nrf2)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(gamma-glutamylcysteines-ynthetase,γ-GCS)的mRNA及蛋白表达水平的影响。方法将40只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、富露施组,每组各10只。除空白组外,其余3组均采用香烟烟雾熏制和经鼻给予脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)制作慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型,且给予相应干预,连续灌胃30 d。于第38天对大鼠进行麻醉并提取肺组织,通过RT-PCR法检测Nrf2和γ-GCS的mRNA表达水平,通过免疫组化法、Western blot法检测Nrf2和γ-GCS蛋白表达水平。结果中药组、富露施组大鼠Nrf2、γ-GCS的mRNA和蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);中药组大鼠Nrf2、γ-GCS的mRNA和蛋白表达与富露施组组间比较差异无统计学意义(P0.05),疗效相当。结论参芪补肺方能够通过降低Nrf2、γ-GCS的mRNA及蛋白的表达,减轻COPD大鼠的氧化应激反应。     

PGC-1α与Nrf2协同调控γ-谷氨酰半胱氨酸合酶对大鼠COPD的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α（PGC-1α）和红系衍生的核因子相关因子2（Nrf2）对γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）表达的调控及其在COPD中的作用和意义。方法24只大鼠随机分为COPD组和对照组。COPD组用每日熏香烟和两次气管内滴入脂多糖（LPS）的方法制作COPD模型。观察大鼠的肺组织病理学改变,检测肺功能指标;应用免疫组化、Westernblot、原位杂交和逆转录-聚合酶链反应检测肺组织中PGC-1α、Nrf2和γ-GCS的蛋白及mRNA表达情况。结果COPD组的肺功能指标（FEV0.3、FEV0.3／FVC、PEF）和光镜下COPD组肺组织病理变化符合COPD的特征性改变。PGC-1α、Nrf2mRNA在两组大鼠肺组织中均有表达,且与γ-GCSmRNA的表达部位基本一致;PGC-1α、γ-GCS蛋白及mRNA表达在COPD组均显著高于对照组（P均〈0．05）;Nrf2蛋白表达在COPD组较对照组显著增高（P〈0．01）,而Nrf2mRNA在两组表达无明显差异（P〈0．05）。相关性分析显示PGC-1α蛋白与Nrf2蛋白及mRNA表达均呈正相关（r值分别为0．775和0．515,P均〈0．01）,PGC-1α、Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白（r值分别为0．531和0．575,P均〈0．01）及mRNA表达（r值分别为0．616和0．634,P〈均0．01）均呈正相关。结论PGC-1α可能作为Nrf2的辅激活因子,通过辅助激活Nrf2,上调γ-GCS的基因表达;PGC-1α和Nrf2可能通过一个共同通路协同上调γ-GCS的基因表达,从而改善COPD的氧化／抗氧化失衡。     

人参皂苷通过Nrf2/ARE信号通路干预波动性高糖致内皮细胞损伤的作用机制研究

目的 观察人参皂苷通过调控Nrf2/ARE信号通路,对波动性高糖所致内皮细胞损伤的影响,探讨人参皂苷起保护作用的部分机制。 方法 体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为对照组、波动性高糖模型组及人参皂苷低中高剂量治疗组。Western blot检测NF-E2相关因子2(Nrf2)的核转位及下游抗氧化蛋白血红素加氧酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)和醌氧化还原酶(NQO1)的表达;RT-PCR检测下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的mRNA表达。瞬时转染Nrf2siRNA质粒, Western blot检测Nrf2总蛋白和核蛋白表达,及下游HO-1、γ-GCS和NQO1蛋白的表达。 结果 人参皂苷治疗后,HUVECs中的Nrf2核蛋白及下游抗氧化蛋白HO-1、γ-GCS和NQO1的表达均明显增强。瞬时转染Nrf2siRNA质粒后,人参皂苷的治疗作用消失。 结论 人参皂苷通过促进Nrf2核转位,调控Nrf2/ARE信号通路发挥其抗波动性高糖所致内皮细胞损伤的氧化应激损伤作用。     

水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠转化生长因子-β_1 mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1 mRNA表达的影响

目的探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠肾脏病理、肾组织Ⅲ型胶原蛋白及转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA和金属蛋白酶组织抑制物-1(TIMP-1)mRNA表达的影响。方法 SD大鼠72只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组24只。行单侧输尿管梗阻(UUO)术诱导肾小管间质纤维化模型。治疗组大鼠给予30 mg.kg-1水飞蓟素,模型组及假手术组给予生理盐水灌胃。分别于UUO术后第7、14、21天各组随机处死8只大鼠,光镜下观察肾组织的病理改变,免疫组织化学法评价肾组织Ⅲ型胶原蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肾组织TGF-β1mRNA及TIMP-1 mRNA的表达水平。结果各时间点肾小管间质损伤和肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量在治疗组和模型组均较假手术组明显增多(P均<0.01),治疗组较模型组则明显减轻(P均<0.05)。各时间点治疗组和模型组肾脏TGF-β1mRNA和TIMP-1 mRNA表达量明显高于假手术组(P均<0.01),治疗组则明显低于模型组(P均<0.05)。UUO大鼠肾间质中TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾小管间质损伤评分均呈正相关(r=0.915、0.838、P均<0.01)。TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA表达量与肾组织Ⅲ型胶原蛋白表达量均呈正相关(r=0.833、0.786、P均<0.01)。结论在UUO大鼠模型中,水飞蓟素通过下调TGF-β1mRNA、TIMP-1 mRNA的表达,减少Ⅲ型胶原的产生,从而发挥延缓肾间质纤维化的作用。     

蒿鳖养阴软坚方通过Nrf2/γ-GCS信号转导通路抑制酒精性肝纤维化作用及其机制

目的:研究不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对肝纤维化大鼠肝组织中Nrf2/γ-GCS信号转导通路的影响,探讨不同提取方案的蒿鳖养阴软坚方对大鼠肝纤维化的治疗作用。方法:健康Wistar 大鼠随机分为8组:正常组、模型对照组、先水后醇60%提取方案组(0.09 mg.kg^-1.d^-1)、先水后醇95%提取方案中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)、水提醇沉中、高剂量组(2.59 g.kg^-1.d^-1、8.2 g.kg^-1.d^-1)及复方鳖甲软肝片组(0.09 mg.kg^-1.d^-1),每组10只大鼠。酒精性肝纤维化大鼠模型制备成功后,各组按相应药物剂量分别开始治疗,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每日1 次,造模10周后处死大鼠,留取标本。酸水解法测定肝组织中胶原蛋白含量; Western blotting 检测肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达;光镜观察肝组织免疫组化染色结果。结果:(1) 肝组织中羟脯氨酸含量:与正常组比较,模型组大鼠肝组织胶原蛋白含量增高 (P<0.01);与模型组比较,先水后醇60%提取方案组、先水后醇中、高剂量组以及复方鳖甲软肝片组大鼠肝组织胶原含量均降低 (P<0.05)。(2) 肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白的表达:与正常组比较,模型组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠肝组织Nrf2蛋白与γ-GCS蛋白表达增高 (P<0.01)。(3) 肝组织免疫组化染色结果: 模型组的Nrf2和γ-GCS蛋白主要在细胞浆中表达,各用药组Nrf2和γ-GCS蛋白均多数在细胞浆和细胞核中表达,汇管区附近也有所表达,但表达量不及胞浆和胞核。结论:提取工艺优化后的蒿鳖养阴软坚方可能通过上调肝组织Nrf2/γ-GCS信号转导通路,增加Nrf2蛋白和γ-GCS蛋白的表达,降低大鼠肝组织肝纤维化程度从而发挥抗肝纤维化的作用。     

丁苯酞对血管性痴呆小鼠认知功能的影响及Nrf2/SIRT3信号通路的调节作用

目的探讨丁苯酞对血管性痴呆(vascular dementia,VD)小鼠认知功能及Nrf2/SIRT3信号通路中的调节作用。方法将36只野生型小鼠(Nrf2^+/+)按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、模型组(Nrf2^+/+VD组)、丁苯酞治疗组(Nrf2^+/+NBP组),每组12只。将24只Nrf2基因敲除小鼠(Nrf2^-/-)按照随机数字表法分为Nrf2^-/-模型组(Nrf2^-/-VD组)和Nrf2^-/-治疗组(Nrf2^-/-NBP组),每组12只。采用反复三次结扎小鼠双侧颈总动脉的方法建立脑缺血再灌注致认知功能障碍的小鼠模型;应用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能,HE染色观察海马CA1区神经元形态结构的变化,免疫组化分析小鼠海马CA1区caspase-3、caspase-9的阳性表达,Western blot检测小鼠海马Nrf2、p62、LC3、SIRT3的蛋白表达。结果(1)Morris水迷宫实验中:与VD组小鼠相比,Sham组与Nrf2^+/+NBP组小鼠第5天逃避潜伏期明显缩短[(20.69±8.91)s,(7.58±9.47)s,(8.41±12.20)s;q=3.58,5.07,均P<0.05],目标象限停留时间百分比明显增加[(16.80±3.27)%,(25.25±5.51)%,(24.18±6.46)%;q=3.36,4.43,均P<0.05];与VD组比较,Nrf2^-/-VD组小鼠第5天逃避潜伏期明显延长[(33.71±9.05)s],目标象限停留时间百分比明显降低[(10.84±3.26)%],均差异有统计学意义(q=3.56,3.58;均P<0.05)。与Nrf2^-/-VD组比较,Nrf2^-/-NBP组小鼠逃避潜伏期、目标象限停留时间百分比均差异无统计学意义(均P>0.05)。(2)病理学结果显示:与VD组小鼠比较,Sham组与Nrf2^+/+NBP组小鼠海马CA1区锥体神经元形态结构损伤更轻,Nrf2^-/-VD组的损伤更为严重,且经NBP治疗后神经元形态改善并不明显。(3)凋亡蛋白的表达:与VD组相比,Sham组与Nrf2^+/+NBP组小鼠海马CA1区caspase-3、caspase-9表达均降低(t=3.48,2.95,3.46,2.93,均P<0.01),而Nrf2^-/-VD组的表达均增加(t=-2.99,-3.77,均P<0.01);同Nrf2^-/-VD组小鼠比较,Nrf2^-/-NBP组小鼠海马CA1区caspase-3、caspase-9的表达差异无统计学意义(均P>0.05)。(4)Western blot结果显示:与VD组相比,Nrf2^+/+NBP组小鼠海马Nrf2、SIRT3、p62蛋白表达增加,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低(t=-3.24,-4.04,-4.03,3.62,均P<0.01);Sham组Nrf2表达、LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低,SIRT3、p62表达增加(t=3.44,4.72,-3.92,-4.19,均P<0.01);Nrf2^-/-VD组Nrf2、SIRT3、p62蛋白表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高(t=9.14,4.20,4.30,-3.78,均P<0.01);同Nrf2^-/-NBP比较,Nrf2^-/-VD组Nrf2、SIRT3、p62蛋白表达降低,LC3Ⅱ/Ⅰ比值升高(t=2.40,3.24,1.21,-1.16,均P<0.01);Nrf2^+/+NBP组Nrf2、SIRT3、p62蛋白表达升高,LC3Ⅱ/Ⅰ比值降低(t=-3.29,-5.00,-7.12,6.24,均P<0.01)。结论丁苯酞可以减轻VD小鼠海马区的凋亡损伤,改善反复缺血再灌注损伤所致的认知功能障碍,其机制可能与调控Nrf2/SIRT3通路、抑制海马区神经细胞凋亡、自噬有关。     

非诺贝特治疗单侧输尿管结扎小鼠肾纤维化的机制研究

  目的  探讨非诺贝特在单侧输尿管结扎诱导的小鼠肾纤维化中的作用机制,为肾纤维化提供潜在的治疗靶点。  方法  成年雄性C57BL/6J小鼠31只,随机分为假手术组（Sham组,n=9）、单侧输尿管结扎组（UUO组,n=10）和单侧输尿管结扎+非诺贝特治疗组（UUO+Feno组,n=12）。UUO组及UUO+Feno组小鼠均结扎左侧输尿管,Sham组小鼠仅游离左侧输尿管,不做结扎处理。术后第二日起,UUO+Feno组每日给予10 mg/kg （终浓度为0.08 mg/mL）的非诺贝特溶液灌胃,持续14 d;其余两组每日灌胃等量生理盐水。术后第15 天灌胃结束后处死小鼠取材,检测血清肌酐和尿素氮,肾组织行HE染色、Masson染色和Sirius Red染色,检测肾组织羟脯氨酸含量,免疫组化染色检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原（COLⅠ）蛋白表达,Western blot法检测肾组织α-SMA、COLⅠ蛋白表达变化,实时荧光定量（RT）- PCR法检测肾组织纤维化相关基因基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、COLⅠA1、COLⅠA2、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-SMA mRNA的表达变化。  结果  与Sham组相比,UUO组小鼠血清肌酐及尿素氮水平升高（P<0.05）;与UUO组相比,UUO+Feno组小鼠血清肌酐及尿素氮水平降低（P<0.05）。HE染色、Masson染色、Sirius Red染色以及肾羟脯氨酸含量的结果均表明UUO组较Sham组胶原沉积明显增多,炎性细胞浸润明显,UUO+Feno组较UUO组胶原沉积程度显著减轻,炎性细胞浸润程度显著改善,对肾纤维化的启动阶段有抑制作用。免疫组化结果显示:与Sham组相比,UUO组 α -SMA、COLⅠ在肾组织中的表达水平升高（P<0.05）;与UUO相比,UUO+Feno组α-SMA、COLⅠ在肾组织中的表达水平降低（P<0.05）;RT-PCR和Western blot结果显示:与Sham组相比,UUO组纤维化相关因子的mRNA及α-SMA、COLⅠ蛋白表达水平均升高（P<0.05）;与UUO组相比,UUO+Feno组纤维化相关因子的mRNA及蛋白表达水平均降低（P< 0.05）。  结论  非诺贝特通过调控与肾脏纤维化相关因子的表达水平改善肾脏纤维化。     

基于Nrf2信号通路研究丁苯酞对高危缺血性卒中的保护作用

目的:在急性脑梗死小鼠模型中,检测预使用丁苯酞(n-butylphthalide, NBP)是否可通过核因子红系2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)通路减轻缺血性脑损伤。方法:Nrf2^-/-纯合子和Nrf2^+/+野生型小鼠随机分为3组,分别为对照组(C)、低剂量给药组(20 mg/kg)和高剂量给药组(60 mg/kg),每组6只。将丁苯酞用植物油按30 mg/mL溶解,低剂量给药组以20 mg/kg每天一次灌胃,高剂量给药组以60 mg/kg每天一次灌胃,对照组小鼠给予同等剂量的植物油灌胃,1次/d,持续给药4周。4周末采用电凝法制备小鼠局灶性脑梗死模型(d MCAO)。在脑梗死模型3 d及10 d后,通过Longa评分评估小鼠的脑神经功能。通过氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色检测小鼠的脑梗死体积,并通过Western blot及免疫荧光技术检测小鼠脑组织中Nrf2及H奎尼酮氧化还原酶1(NADPH:qui...     

MicroRNA-21在单侧输尿管梗阻大鼠间质纤维化肾脏组织中的表达及意义?

目的：观察 MicroRNA-21(miRNA-21)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏组织中的表达,初步探讨其在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3致大鼠肾间质纤维化(RIF)信号通路中的机制。方法选择20只 SD 雄性大鼠,分为 UUO 组和假手术组(Sham 组),分别于建模后第3天、第7天各采集每组5只大鼠肾脏组织,应用实时荧光定量 PCR(Real-time qPCR)方法检测肾脏组织中 miRNA-21的表达变化,采用 Masson 染色、苏木素-伊红(HE)染色和免疫组织化学技术评价肾组织纤维化,使用免疫组织化学检测肾脏组织中 TGF-β1、Smad3、Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况。结果建模后第3天和第7天 UUO 组肾脏组织中 miRNA-21与 Sham 组比较均升高(P <0.01),7 d UUO 组肾组织中 miRNA-21与3 d UUO 组相比升高(P <0.01)。建模后3、7 d UUO 组 Masson 染色纤维化评分、TGF-β1、Samd3、α-SMA 及 Col-Ⅰ蛋白阳性表达面积较 Sham 组升高(P <0.01),以上指标7 d UUO 组较3 d UUO 组比较表达增强(P <0.01)。UUO 组肾组织中 miRNA-21的表达与肾间质纤维化评分正相关(r=0.888,P <0.01);肾组织 miRNA-21与 TGF-β1、Smad3、Col-Ⅰ、α-SMA 蛋白表达呈正相关(r =0.799、0.849、0.882、0.896,P <0.01)。结论UUO 大鼠肾组织中 miRNA-21在建模后表达上调,且间质纤维化程度越重表达越高,TGF-β1/Smad3信号通路可能是通过上调 miRNA-21从而介导大鼠肾间质纤维化。     

依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的防治作用

目的:动态观察血管紧张素转换酶抑制剂依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响.方法:采用单侧输尿管梗阻模型,雄性SD大鼠64只随机分为假手术组(n=16)、模型组(n=24)和依那普利治疗组(n=24).治疗组从造模前24 h开始以依那普利10 nag/(kg·d)灌胃,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃.分别于造模后第3,7,14,21天处死大鼠,取梗阻侧肾组织,行HE染色和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,采用real-time PCR方法检测肾组织Ⅰ型胶原mRNA的表达,应用Westem免疫印迹检测结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果:随着梗阻时间的延长,模型组大鼠肾间质损伤指数评分逐渐增加,肾间质胶原相对面积逐渐增大,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达逐渐增加.依那普利治疗后,肾间质损伤指数和肾间质胶原相对面积下降,Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达均减少,与模型组比较,差异在第3,7,14天有统计学意义(P<0.05),而在第21天无统计学意义(P>0.05).结论:依那普利可减轻梗阻肾间质纤维化,这一作用可能与其能抑制肾组织Ⅰ型胶原mRNA和CTGF蛋白表达有关.     

幼鼠肾小管间质损伤早期AT_1R介导JAK_2/STAT_3蛋白表达及其相关性

目的 探讨幼年大鼠肾小管间质损伤早期肾组织AT1R介导跨膜信号传导通路中JAKM2/STAT3信号分子表达的趋势、相关性及给予苯那普利和氯沙坦干预治疗的影响. 方法 3周龄幼年Wistar雄性大鼠72只,随机分为对照组(n=24)、UUO未治疗组(n=24)和UUO治疗组(n=24).以单侧输尿管梗阻模型(UUO模型)作为实验模型,于治疗后第3,7,14,28天取病变肾脏石蜡包埋并切片.采用免疫组化方法检测大鼠肾组织AT1、JAK2、STAT3蛋白的表达,并从时相表达趋势上评价AT1R与JAK2/STAT3表达的相关性. 结果 UUO未治疗组3 d时三种蛋白表达的强度即增加,14 d时达高峰,28 d时稍有下降.UUO治疗组AT1、JAK2、STAT3蛋白表达的上调趋势明显受到抑制,与UUO未治疗组比较差异均有统计学意义(均P<0.01),但其表达仍强于对照组(均P<0.05).UUO未治疗组三种蛋白表达两两之间的相关系数γ值均大于0,且呈高度正相关关系(均P<0.01). 结论 UUO大鼠模型肾小管间质损伤早期,AngⅡ/IAT1R/JAK2/STAT3间可能存在一条促肾小管间质损伤的信号途径;给予苯那普利和氯沙坦治疗可明显抑制该信号途径的激活.