青蒿琥酯及二氢青蒿素逆转耐药结核分枝杆菌的初步研究

[目的]了解青蒿素类中药单体(二氢青蒿素、青蒿琥酯)单独或联合利福平(RVP)及异烟肼(INH)对耐药结核分枝杆菌的作用,初步研究此类单体是否具有逆转细菌耐药性的作用.[方法]刃天青显色法判断各中药单体是否有抑菌或杀菌作用;MB/BACT系统(生物梅里埃)检测RFP或INH联合中药单体是否有逆转细菌耐药的作用.[结果]单独使用时各单体均不能杀灭结核分枝杆菌;RFP联合青蒿琥酯(200μg/mL)或二氢青蒿素(200μg/mL)可使11株耐RFP菌株中的9或6株变为敏感,敏感率分别为82%或55%;INH联合上述中药单体则亦可使11株耐INH菌株中的10或7株变为敏感,敏感率分别为90%或64%.[结论]青蒿琥酯及二氢青蒿素有较强的协同相应抗结核药或逆转结核菌的耐药性的作用,但青蒿琥酯敏感率较二氢青蒿素更高.     

对耐药结核分支杆菌的药敏实验及临床分析

目的:本文对162例结核杆菌痰培养阳性株进行10种抗结核药物的耐药性检测。并对耐异烟肼(INH)、利福平(RFP)及HR者等进行了敏感药物的选择。方法:采用BACTEC960-TB法及普通改良罗氏培养,对结核菌株鉴定及药物敏感实验。结果:162株分支杆菌耐药顺位次序为,SM54.9%、REP52.5%、INH36.4%、多耐药率为30.2%;耐REP菌株85例中,利福喷丁(RFT)、力排肺疾(DIP)和左氧氟沙星(L-OFLX)的耐药率分别为96.7%、4.44%、3.33%。结论:吉林省结核病医院属于高耐药区域,RFP与RFT有明显交叉耐药性。DIP、OFLX对耐RFP者敏感。     

耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的建立快速检测耐多药结核分枝杆菌的分子药敏方法,掌握盐城、南通地区结核分枝杆菌KatG及rpoB基因的突变特点,了解耐药分子机制及探索痰标本结核分枝杆菌耐INH、RFP直接检测的可行性。方法对收集的47例耐INH、RFP的结核分枝杆菌临床痰分离株行PCR-自动测序法检测KatG及rpoB基因突变,以结核分枝杆菌标准株H37Rv为参比菌株,应用BACTEC460TB快速培养系统进行自动培养、药敏。结果47例耐INH、RFP分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29/47、39/47,两者同时突变率为47%。结论PCR-直接测序法敏感、特异,是可靠快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变,适合于临床肺结核患者MDR-TB痰标本耐药性的快速检测。     

初治菌阳肺结核患者的初始耐药情况分析

目的:对初治菌阳肺结核患者进行初始耐药情况分析以便及时调整治疗方案规范抗结核治疗。方法:应用BACTEC MGIT960进行痰的快速结核菌培养并对培养阳性菌株进行5种抗结核药物SM(链霉素)、INH(异烟肼)、RFP(利福平)、EMB(乙胺丁醇)及PZA(吡嗪酰胺)的耐药性测定。结果:385株培养阳性的分枝杆菌的初始耐药率为41.8%,初始耐多药(MDR-TB)率为9.1%,初始耐药率按顺序依次为INH 28.6%、SM 26.8%、RFP 10.6%、EMB 7.8%、PZA 2.3%,初始耐1、2、3、4和5种药分别为22.9%、11.2%、4.7%、2.3%、0.8%。结论:通过对初始耐药情况分析提醒临床医生关注初始耐药问题,及时调整治疗方案规范抗结核治疗。初始耐多药(MDR-TB)率高应引起注意。     

PCR-SSCP检测耐多药结核菌基因与细菌培养结果对比分析

目的应用PCR-SSCP检测常规及BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌临床分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,分析其敏感性和特异性,评价其在检测结核分枝杆菌耐药性方面的价值和临床实用性。方法22株常规培养和8株BACTEC培养检出的高浓度及低浓度耐INH、RFP、SM耐多药结核分枝杆菌分离株,分别用PCR-SSCP检测KatG、rpoB、rpsL基因,观察其电泳条带,并与结核菌标准株H37RV对比。结果22株常规培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中,KatG、rpoB、rpsLPCR扩增产物,用SSCP分别检出KatG基因16株(72.7%)、rpoB基因19株(86.4%)和rpsL基因14株(63.6%)。8株BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中分别检出KatG基因5株(62.5%),rpoB基因6株(75%)、rpsL基因5株(62.5%)。综合两者KatG、rpoB和rpsL基因检出率分别为70.0%(21/30)、83.3%(25/30)和63.3%(19/30)。高浓度耐药与低浓度耐药分离株中的检出率有显著差异(P<0.05),常规培养与BACTEC培养分离株中的检出率无显著差异(P>0.05),与结核菌标准株H37RV电泳条带对比,特异性为100%,敏感性97%。结论PCR-SSCP敏感、特异,可快速检测结核分枝杆菌的KatG、rpoB和rpsL基因,可用于耐多药结核分枝杆菌的临床检测。     

耐多药结核分枝杆菌KatG及rpoB基因变异的研究

目的建立快速检测耐多药结核分枝杆菌的分子药敏方法，掌握盐城、南通地区结核分枝杆菌KatG及rpoB基因的突变特点，了解耐药分子机制及探索痰标本结核分枝杆菌耐INH、RFP直接检测的可行性。方法对收集的47例耐INH、RFP的结核分枝杆菌临床痰分离株行PCR-自动测序法检测KatG及rpoB基因突变，以结核分枝杆菌标准株H37Rv为参比菌株，应用BACTEC460TB快速培养系统进行自动培养、药敏。结果47例耐INH、RFP分离株结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变阳性分别为29／47、39／47，两者同时突变率为47％。结论PCR-直接测序法敏感、特异，是可快速检测结核分枝杆菌KatG及rpoB基因突变，适合于临床肺结核患者MDR—TB痰标本耐药性的快速检测。     

结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性检测方法比较

目的  探讨基因芯片法和改良罗氏培养及比例法药敏试验在结核分枝杆菌（MTB）利福平（RFP）和异烟肼（INH）耐药性测定中的应用价值。方法  应用基因芯片法检测200株MTB临床分离株RFP耐药基因rpoB的6个位点、13种突变型,INH耐药基因katG的1个位点、2个突变型和INH inhA基因启动子-15位、1个C→T突变型。同时对MTB菌株进行罗氏培养及比例法药敏试验,并比较测定结果的敏感性、特异性和符合率。结果  基因芯片法检测敏感株152株、耐药株48株,罗氏比例法检测敏感株161株、耐药株39株。若以罗氏比例法测定结果为判断标准,基因芯片法检测RFP耐药性的敏感性、特异性和符合率分别为85.0%、98.8%和97.5%;检测INH耐药性的敏感性、特异性、符合率分别为82.8%、92.4%和91.0%。结论  基因芯片法对结核菌耐药菌株可做出初筛,与结核菌药敏试验联合检测可提高诊断率。

     

分子线性探针杂交法在结核分枝杆菌耐药性快速检测中的应用价值

目的探讨分子线性探针杂交法在快速检测结核分枝杆菌耐药性中的效果。方法选择新乡医学院第一附属医院住院治疗的结核患者的临床标本750例,其中结核分枝杆菌临床分离株190例,痰涂片阳性标本560例。所有临床标本分别采用传统方法及分子线性探针杂交法进行检测,对2种方法检测的异烟肼(INH)和利福平(RFP)的耐药结果进行比较,采用分子线性探针杂交法对耐药菌株进行基因分型,分析INH及RFP耐药相关突变位点情况。结果传统方法检测中,560例痰涂片阳性标本中共检测出结核分枝杆菌454例,其对INH、RFP耐药率分别为15.0%(68/454)、17.8%(81/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为26.8%(51/190)、18.4%(35/190);传统方法检测的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为18.5%(119/644)、18.0%(116/644)。分子线性探针杂交法检测454例结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率分别为14.1%(64/454)、17.6%(80/454),190例结核分枝杆菌临床分离株对INH、RFP的耐药率分别为23.2%(44/190)、16.3%(31/190);分子线性探针杂交法检测的对INH、RFP的总耐药率分别为16.8%(108/644)、17.2%(111/644)。2种方法检出的结核分枝杆菌对INH、RFP的耐药率比较差异无统计学意义(INH:χ~2=0.140、0.691、0.650;RFP:χ~2=0.011、0.293、0.131;P>0.05)。分子线性探针杂交法检测中,对INH和RFP的灵敏度、特异度分别为85.7%、98.9%和90.5%、98.9%,其中kat G-S315T1为INH耐药主要突变位点,约占88.9%,rpo B-S531L为RFP耐药主要突变位点,约占81.1%。结论分子线性探针杂交法能够快速检测出结核菌株和痰标本中结核分枝杆菌的耐药性,并能对耐药基因进行分型,减少药物敏感性试验的时间,并能根据药物敏感性结果尽快采取有效的治疗方案。     

81株耐多药结核分枝杆菌药敏监测分析

目的探讨耐多药结核分枝杆菌的耐药性,为结核病防治提供依据。方法用绝对浓度法进行药敏试验,筛选出81株耐多药性结核分枝杆菌,并回顾性地分析其耐药性。结果临床分离的结核分枝杆菌对SM、RFP、INH、EMB的耐药率分别为20.46%、21.29%、23.79%、8.20%,耐多药性菌株达8.41%。结论结核的耐药性和耐多性现象十分严重,要采取必要的措施,进行有效的控制和监管。     

巴豆油抗多重耐药结核分枝杆菌作用实验研究

目的：观察巴豆油体外对耐药结核杆菌的生长抑制作用。方法：在用分离培养的耐利福平(RFP)、雷米封(INH)二重耐药菌株,分别接种于含有不同浓度巴豆油以及含INH、RFP的豆漫液结核分枝杆菌对照培养基,观察各组结核分枝杆菌的生长情况。结果：在含INH、RFP的对照组培养基上,菌落生长正常,高浓度巴豆油组(1：10～1：160)对结核菌生长有抑制作用,到培养终止期(第40d)仍无细菌生长。将低浓度巴豆油组(1：1280)缓慢生长的菌落反复接种到1：80～1：1280的巴豆油培养基,接种5代后未发现耐巴豆油菌株。结论：1：160以上浓度的巴豆油培养基有体外抗耐药结核菌的作用,并且没有诱导耐药菌株的产生。     

深圳地区结核临床分离菌基因突变与耐药的关系

目的研究深圳地区结核分枝杆菌临床分离株的基因突变与利福平（RFP）、异烟肼（INH）、链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药之间的关系。方法采用反向斑点杂交技术（RDBHA）对182株结核分枝杆菌临床分离株的rpoB、katG、inhA、rpsL和embB基因突变位点进行检测,并采用L-J比例法检测这些分离株对RFP、INH、SM、EMB的耐药性。结果 182株临床分离株中,总的基因突变率为34.62%（63/182）,其中rpoB基因突变率最高,达24.17%（44/182）。多重耐药结核菌（MDR-TB）占17.03%（31/182）。以L-J比例法作为金标准,采用RDBHA技术检测分别与RFP、INH、SM、EMB耐药相关的rpoB、katG/inhA、rpsL、embB基因突变,其灵敏度分别为88.89%、67.50%、81.82%和64.29%,特异度分别为97.08%、94.37%、97.99%和92.86%。结论深圳地区结核分离株ropB基因突变最普遍,S531L位点是其突变率最高的位点。深圳地区结核分枝杆菌对4个一线抗痨药物耐药现象均较严重,反向斑点杂交技术（RDBHA）可快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变,能给临床提供快速用药指导。     

279株结核分枝杆菌耐药情况分析

目的：了解目前云南省结核病耐药情况,为临床治疗及制定策略提供依据．方法采用世界卫生组织推荐的比例法对临床分离的结核分枝杆菌菌株进行INH、RFP、EMB、SM 4种一线抗结核药物的药敏试验．结果301株分枝杆菌分离株中279株（92.7%）为结核杆菌复合群,结核分枝杆菌的总体耐药率为31.5%（88/279）,其中初始耐药率为27.3%,获得性耐药率为44.3%;结核杆菌对INH、RFP、EMB和SM的耐药率分别为19.7%、10.8%、12.9%和19.0%,耐多药率为9.3%．总体耐药情况与云南省既往数据以及全国水平基本持平．结论结核病控制工作任重道远．应及早发现耐药结核病患者并给予规律治疗,同时应把耐药趋势的追踪和耐药监测作为结核病防治规划的重要组成部分并定期观察．     

淮南地区结核分支杆菌耐药性分析及5年耐药率变迁

目的:分析淮南地区结核分枝杆菌耐药性特点,为临床用药提供参考?方法:收集2009年1月~2011年9月本院培养分离的166株结核分支杆菌的药敏结果和患者信息,采用绝对浓度法对培养阳性的结核分枝杆菌进行5种抗结核药物利福平(RFP,50?250 mg/L)?异烟肼(INH,1?10 mg/L)?链霉素(SM,10?100 mg/L)?乙胺丁醇(EMB,5?50 mg/L)和吡嗪酰胺(PZA,25?100 mg/L)的耐药性测定?并与2005年6月~2008年5月本院细菌室分离出的273株结核分枝杆菌的药敏结果比较?结果:2009年1月~2011年9月分离的166株结核分支杆菌总耐药率50.6%(84株),耐多药率18.1%(30株),5种药物耐药情况为PZA﹥RFP﹥SM﹥INH﹥EMB,耐药率分别是40.9%?22.9%?20.5%?15.7%?9.6%;初始耐药率45.5%,耐多药率9.1%;获得性耐药率54.0%,耐多药率24.0%?与本地2005年6月~2008年5月比较,INH?EMB?SM的耐药率明显降低(P﹤0.05)?结论:本地结核菌单药耐药率逐渐降低,总耐药率和耐多药率高于全国平均水平,应加强抗结核药物的耐药性监测,根据药敏结果选择有效化疗方案,防止耐药菌的传播?     

1800株结核分枝杆菌对10种抗结核药物耐药分析

目的:了解住院结核患者常用10种抗结核药物的耐药趋势。方法:以南京市胸科医院2001年至2006年的培养阳性结核分枝杆菌为本次研究对象,用绝对浓度法做RFP、INH、SM、EMB、DP、OFLX、PAS、KM、TH1321和CPM10种药物的药敏试验。结果:共有耐药菌株1800例,总耐药率70%,耐多药率为54.9%。结论:结核分枝杆菌对多种药物的耐药性有差异。该院结核分枝杆菌对部分药物的耐药性流行水平有上升趋势,获得了该院耐药性水平资料,对临床用药具有重要的必要性和指导性。     

172株结核分枝杆菌耐药性分析

目的 了解本地区肺结核病人对常用抗结核药物的敏感情况.方法 利用高低俩个药物浓度分别检测172株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)的耐药性.结果 172株结核分枝杆菌全敏感81株占47.1%,耐药91株占52.9%.结论 单一耐药高于同时耐两种药,同时耐两种药高于耐三种药,低浓度耐药高于高浓度耐药.     

重庆市结核病患者利福平耐药与耐多药的相关性分析

目的 了解重庆市结核病患者利福平（rifampicin, RFP）耐药与耐多药的相关程度,为重庆市RFP耐药及耐多药结核病患者的准确诊断和及时治疗提供科学依据。方法 收集重庆市公共卫生医疗救治中心2017—2019年收治的培养阳性且鉴定为结核分枝杆菌的患者菌株,进行以下十种抗结核药物的药敏试验：RFP、异烟肼（isoniazid, INH）、链霉素、乙胺丁醇、氧氟沙星、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、对氨基水杨酸和丙硫异烟胺。共收集菌株937例,分析其RFP和INH耐药情况。结果 937例菌株中,RFP耐药菌株288例,RFP耐药INH敏感菌株比例为20.14%（58/288）;RFP敏感菌株为649例,其中INH耐药菌株占比7.09%（46/649）。重庆市耐多药患者比例为24.55%,广泛耐药肺结核患者占比2.99%。无论RFP耐药还是RFP敏感菌株中,INH耐药或敏感的患者在年龄、性别和治疗史方面差异均无统计学意义。结论 重庆市RFP耐药结核病患者中有较高比例为异烟肼敏感患者,RFP耐药不适合作为重庆地区耐多药患者确诊的指标,应采取有效手段同时检测RFP和INH耐药情况,以指导临床医生为结核病患者制定合理的化疗方案,推动重庆市结核病防治工作的进展。     

十堰市结核分枝杆菌临床分离株耐药性分析

目的：分析临床分离结核分枝杆菌的耐药性特点，了解十堰地区近年来耐药结核分枝杆菌的流行情况。方法：收集2003年9月～2006年5月十堰市疾病控制中心门诊痰菌阳性标本，获取培养阳性标本84份，采用绝对浓度间接法试验对全部培养阳性标本进行4种抗结核药物（RFP、INH、SM、EMB）的耐药性测定。结果：总耐药率60．7％（51株），耐多药率为40．5％（34株）。耐药顺序为RFP〉INH〉SM〉EMB。结论：本地结核菌耐药率远远高于全国平均耐药率（46％），因此应加强抗结核药物的耐药性监测，根据药敏结果选择有效化疗方案，彻底治疗结核病人。     

45例非结核分枝杆菌肺病临床特征及耐药特点分析

目的分析我院近5年来非结核分枝杆菌（NTM）肺病临床特征及耐药特点。方法对2006年1月至2011年12月我院检验科分枝杆菌实验室分离、培养的分枝杆菌培养物进行菌种鉴定、耐药性统计及其每份标本相对应的临床资料分析总结。结果我院2006年至2011年NTM的平均分离率0.91%,远低于全国水平。NTM对异烟肼（INH）、对氨基水杨酸（PAS）耐药率最高,对阿米卡星（AMK）耐药率最低,同时耐INH、利福平（RFP）和至少耐1种药分别为62.22%和91.11%。结论 NTM肺病病程长,临床症状无特异性,耐药率高,需要及早行细菌学培养、菌株鉴定和药敏试验。     

吉林省复治肺结核患者抗结核药物耐药情况调查

目的 了解吉林省复治肺结核患者对一线药物耐药情况,为吉林省结核病防控策略制定等提供科学依据。方法 收集来自吉林省复治肺结核患者痰培养分离的结核分枝杆菌,采用比例法进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、链霉素(SM)及乙胺丁醇(EMB)四种一线药物的耐药性检测。结果 154株结核分枝杆菌对四种一线药物总体耐药率为53.2%,对INH、EMB、RFP、SM的任何形式耐药率分别为30.5%、14.9%、32.5%、33.8%,耐多药率21.4%,多耐药率为9.1%。结论 吉林省复治肺结核病患者对一线药物耐药率较高,应加强结核的防控工作,动态监测耐药水平,为防控策略的调整提供依据。     

快速检测结核分枝杆菌γpoB基因突变的研究

目的 :应用PCR SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌γpoB基因突变 ,评价此方法用于结核分枝杆菌利福平 (RFP)耐药性的意义。方法 :以结核分枝杆菌H37Rv为对照、5 0例耐RFP(单耐和多耐 )结核分枝杆菌临床分离株、12例RFP敏感菌株、35例耐RFP肺结核患者痰标本 ,采用PCR SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌γpoB基因突变。结果 :5 0例耐RFP菌株中有 45例PCR SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别 ,与药敏试验结果做对比 ,PCR SSCP检测敏感性为 90 % ,特异性为 10 0 % ;12例敏感菌株与H37Rv条带一致 ,35份肺结核病人痰标本 ,2 1份痰PCR扩增阳性 ,15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别 ,而用PCR SSCP 2 8份图谱与H37Rv有差别 ,阳性率为 80 %。结论 :PCR SSCP检测结核分枝杆菌γpoB基因突变快速、简便、易行 ,有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定 ,并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法