鱼源胶原蛋白海绵材料的构建及其生物学性能

目的 构建鱼源胶原海绵材料,评价其生物学性能并与哺乳动物来源的胶原海绵材料相比较.方法 分别从草鱼鱼皮和猪皮中提取鱼皮酸溶性胶原蛋白(SKA)、鱼皮酶溶性胶原蛋白(SKP)和猪皮酶溶性胶原蛋白(PSP),采用氨基酸组成分析和SDS-PAGE凝胶电泳对胶原蛋白进行结构鉴定;以制备所得的3种胶原蛋白构建柱状胶原海绵材料,采用差式扫描量热仪(DSC)、体外模拟胶原蛋白酶降解、材料拉伸性能分析以及NIH/3T3细胞培养实验评价胶原海绵材料的热稳定性、降解性、生物相容性和材料机械力学性能.结果 从鱼皮和猪皮中分离、纯化得到的SKA、SKP和PSP均为典型的Ⅰ型胶原,SKA和SKP的氨基酸组成基本一致,但它们与PSP在氨基酸组成上存在部分差异.SKA和SKP的热变性温度分别为(35.6±0.2)℃和(35.8±0.3)℃,明显低于PSP的热变性温度(41.6±0.3)℃(P<0.05).与PSP海绵相比,SKA和SKP海绵材料具有更好的耐胶原酶降解能力和材料拉伸强度,但其材料的延展性能低于PSP海绵(P<0.05).在NIH/3T3培养实验中,3种胶原海绵材料均没有出现抑制细胞生长现象(P＞0.05),SKP和PSP在培养48 h和96 h时展现出促进细胞增殖的能力(P<0.05).结论 鱼源胶原海绵材料在生物学性能上与哺乳动物来源的胶原海绵材料各有优劣,具备应用于生物医学材料领域中的潜在价值.     

猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定

目的：从猪关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白，并对其进行鉴定。方法：选择猪关节软骨为提取原料，用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶消化、氯化钠盐析、DE22纤维树脂处理等步骤，提取纯化Ⅱ型胶原蛋白。采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析等方法对Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定。结果：4mol／L盐酸胍能有效去除蛋白多糖；分步加入胃蛋白酶的限制性酶解结果满意；氯化钠盐析浓度为2．4mol／L时最佳。SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的Ⅱ型胶原蛋白与Sigma公司的产品一致。Ⅱ型胶原最大吸收峰为230nm，氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高。结论：实验结果提示从猪关节软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高，符合Ⅱ型胶原的特征。提取材料广泛、实验条件简便。结果可靠。     

不同基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响

目的比较几种不同培养基质对兔气管纤毛上皮细胞贴壁生长的影响,探讨兔气管纤毛上皮细胞体外培养最佳生长基质。方法用组织块法比较兔气管纤毛上皮细胞分别在新鲜配制鼠尾胶原、市售鼠尾胶原、多聚赖氨酸和明胶4种基质上的贴壁和生长状况。结果兔气管黏膜上皮组织在4种基质上的贴壁率分别为:新鲜配制胶原89.1%,市售胶原43.5%,多聚赖氨酸36.9%,明胶21.7%;贴壁组织的单细胞层最大生长半径分别为:新鲜配制胶原(1 432.2±383.2)μm,市售胶原(928.9±390.3)μm,多聚赖氨酸(889±229.2)μm,明胶(651±221.2)μm;纤毛摆动最大频率及持续时间分别为:新鲜配制胶原(10.0±1.5)Hz 11 d,市售胶原(8.5±0.6)Hz 5 d,多聚赖氨酸(8.9±0.5)Hz 3 d,明胶(5.9±0.3)Hz 2 d。扫描电镜下新鲜配制鼠尾胶原纤维成条索状,相互交织成网,利于组织贴壁和细胞生长。结论在常用的4种培养基质中,新鲜配制的鼠尾胶原是兔气管纤毛上皮细胞体外培养的最佳生长基质,是纤毛功能研究的可靠保证。     

正交试验法提取鼠尾腱胶原工艺的优化

目的: 探讨浸提时间、乙酸浓度及料液比对鼠尾腱胶原提取的影响,建立并优化鼠尾腱胶原的提取工艺,提高胶原提取效率。方法: 选取健康SD大鼠鼠尾,采取酸溶法提取鼠尾腱胶原,观察不同浸提时间(12、24、48、72和96 h)、乙酸浓度(0.10、0.25、0.50、0.75和1.00 mol·L^-1)及料液比(g:mL)(1:5、1:10、1:20、1:40和1:80)对胶原提取率的影响,利用正交试验判断浸提时间、乙酸浓度及料液比等影响因素的最佳工艺参数。通过SDS-PAGE电泳实验、单宁酸沉淀实验和傅里叶红外光谱实验等对提取的胶原进行鉴定。结果: 单因素分析,胶原提取率在一定参数范围内随浸提时间、乙酸浓度及料液比的增加而增加。正交试验,鼠尾腱胶原提取的最佳工艺参数为浸提时间72 h、乙酸浓度0.5 mol·L^-1、料液比为1:40。SDS-PAGE电泳显示,样品为Ⅰ型胶原,单宁酸沉淀实验显示胶原降解程度低,傅里叶红外光谱显示胶原结构完整。样品氨基酸含量测定符合胶原蛋白的成分特征。中性胶原溶液在37℃时能够形成固态胶原凝胶,胶原凝胶经过碳化二亚胺(EDC)交联后,扫描电镜下显示内部相互连接,构成孔径适中的蜂窝状多孔结构。结论: 成功建立并优化鼠尾腱胶原蛋白的提取工艺,得出浸提时间、乙酸浓度及料液比等因素的最佳工艺参数,有效提高了鼠尾腱胶原的提取效率。     

羊软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定

目的 从羊肋软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定.方法 选择羊肋软骨为原料经脱脂、脱钙后,用盐酸胍去除蛋白多糖,经胃蛋白酶消化、氯化钠盐析等步骤,提取纯化蛋白,然后进行鉴定.结果 4mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖,用胃蛋白酶的限制性酶解结果满意;氯化钠盐析浓度为3mol/L时最佳.SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的蛋白与sigma公司的Ⅱ型胶原蛋白一致.Ⅱ型胶原蛋白最大吸收峰为212 nm.结论 从羊肋软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高,且符合Ⅱ型胶原蛋白的特征.     

半仿生酶法提取三七皂苷工艺研究

目的 研究酶法及半仿生法从三七中提取皂苷的最佳工艺。方法 以提取液中总皂苷得率和干膏收率为指标,对乙醇回流法、纤维素酶酶解、果胶酶酶解、α-淀粉酶酶解、复合酶酶解和半仿生-α-淀粉酶酶解提取法进行比较,并对半仿生酶法进行了正交试验优化。结果 该法的最佳提取条件为温度70 ℃,时间2.5 h,料液比为1∶10。结论 半仿生-α-淀粉酶酶解提取三七皂苷的方法最经济有效。     

全蝎的酶解工艺研究

目的以全蝎为研究对象,优选胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解全蝎的工艺条件,用抗肿瘤药效验证提取工艺的可行性.方法以丙氨酸含量为指标,以酶解温度、时间和酶底比为考察因素,用正交试验设计法筛选酶解的最佳工艺条件,并用凯氏定氮法测定此条件下的蛋白质的水解率.结果确定酶解工艺为:全蝎先用40℃人工胃液加入2.5%(酶底比)胃蛋白酶酶解4 h,残渣转入53℃人工肠液加入5.0%胰蛋白酶酶解4 h.用凯氏定氮法测得此条件下的蛋白质的水解率可达80.7%.结论经抗肿瘤药效验证,全蝎酶解提取物对肝癌H22有明显的抑癌活性,酶提物的抑瘤作用强于全蝎原粉.     

阶梯生物催化协同提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的研究

目的利用阶梯生物催化协同提高提取盾叶薯蓣中薯蓣皂苷元的收率和质量。方法通过正交试验对阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元工艺进行研究,确定该工艺最佳条件;用红外光谱和HPLC谱对皂苷元产品进行定性和定量测定;以产品的收率和熔点为考察标准,比较阶梯生物催化法与直接酸水解法、自然发酵法以及酶解法的优劣。结果利用阶梯生物催化法,当纤维素酶和果胶酶复合酶制剂、淀粉酶以及糖化酶按顺序依次加入时,能够将植物中98%的薯蓣皂苷元提取出来,其产品的红外谱图与对照品谱图相吻合,经HPLC谱测定薯蓣皂苷元质量分数95%以上。结论利用阶梯生物催化协同提取薯蓣皂苷元与其他3种工艺相比,能耗降低,皂苷元收率和质量均提高。     

仿生酶解法提取蜈蚣的工艺研究

目的 研究仿生酶解法提取蜈蚣的工艺条件.方法 以水解度为指标,单因素考察了仿生酶解法提取蜈蚣的工艺条件;以APTT法、纤维蛋白原平板法为考察指标,对仿生酶解法提取蜈蚣的工艺进行验证.结果 仿生酶解法凝血时间长,抗血栓效果明显.酶解的条件为:蜈蚣先用37℃人工胃液加入4.0%(酶底比)胃蛋白酶酶解4 h,残渣转入37 ℃人工肠液加入5%(酶底比)胰蛋白酶酶解4h.结论 仿生酶解法适于提取蜈蚣抗凝血和溶栓的有效部分.     

猪皮胶原的实验室制备和成膜技术

皮肤胶原作为一种细胞外间质,是真皮再造最基本的生物材料,胶原本身在临床也有直接应用价值。本文介绍用酶降解法在实验室条件下提取猪皮胶原的技术,同时介绍两种使胶原成膜的方法,即氨熏成膜法和盐析成膜法,供选择使用。作者认为在以提取皮肤胶原为目的时,酶降解法的效果优于酸溶解法。     

淫羊藿总黄酮的提取和分离纯化工艺研究

目的:优选淫羊藿总黄酮的提取纯化工艺。方法:采用L9(34)正交设计法,以浸膏得率和总黄酮含量为检测指标优选提取工艺;用AB-8型大孔吸附树脂柱进行分离,乙酸乙酯、正丁醇萃取纯化。结果:淫羊藿总黄酮的最佳提取工艺为淫羊藿叶的粗粉中加入27倍量水(V/W),浸泡2 h后,煎煮3次,每次1 h;淫羊藿提取液上AB-8型大孔吸附树脂柱分离,再用乙酸乙酯、正丁醇萃取,所得淫羊藿总黄酮的平均含量(以淫羊藿苷计)为60.91%。结论:该工艺稳定可行,提取淫羊藿总黄酮的含量较高,可为工业生产提供依据。     

鼠尾胶原蛋白提取、分离、纯化方法的建立及鉴定

目的建立一种高效提取、分离、纯化鼠尾胶原蛋白的方法。方法通过对鼠尾进行剥离获得鼠尾腱,用Tris-HCl缓冲液、胃蛋白酶处理获得鼠尾胶原蛋白原液、反复使用氯化钠溶液进行分级盐析、醋酸溶液复溶进行鼠尾胶原蛋白的纯化。超纯水透析除去无机盐类获得纯化的鼠尾胶原蛋白。通过SDS-PAGE蛋白质电泳、氨基酸含量分析等技术手段鉴定。结果本研究建立的方法可以获得高纯度的鼠尾胶原蛋白,纯度达到电泳纯。与国外进口的商业化鼠尾胶原蛋白产品相比无差异。研究了提取、分离、纯化参数对得率、纯度的影响,建立了最优的鼠尾胶原蛋白提取条件,胃蛋白酶用量:1∶500,酶解时间:72 h,盐析浓度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05mol/L醋酸溶液。结论为鼠尾胶原蛋白的扩大化生产提供了合适的工艺参数,为大量获得鼠尾胶原蛋白并进行更深层次的功效方面研究提供了理论支持和实践基础。     

不同几丁糖-胶原膜物理性能的比较研究

目的以几丁糖和胶原为主要材料制作可吸收膜并对膜的物理性能进行比较。方法从牛肌腱中提取胶原。将2％几丁糖乙酸溶液风干成膜,在其上流延0．1％胶原乙酸水溶液,风干后制成复合膜;不同量的胶原乙酸水溶液与2％几丁糖乙酸溶液混合,风干后为混合膜;将混合液冷冻干燥制成冻干膜。测定膜表面结构和成分、吸水性及抗张强度。结果复合膜质地不均而混合膜和冻干膜质地均匀。随着胶原量及膜厚度的增加,膜均匀性更加。复合膜表面不平整、无孔隙、有胶原聚集,而混合膜和冻干膜表面均匀呈多孔状。与几丁糖膜比较,复合膜的红外透射光谱与几丁糖膜基本一致,但混合膜差异较大。冻干膜的吸水性较其他两种膜高。同样比例的复合膜与混合膜抗张强度无明显差异,但均大于冻干膜;随着胶原量的增加膜的强度增加。结论几丁糖与胶原有良好的成膜性。混合膜和冻干膜适用于引导骨再生膜。     

独活中总香豆素的超临界CO2提取工艺研究

目的：优化独活中总香豆素的超临界CO2提取工艺并简单纯化提取液。方法：以提取率和浸膏中总香豆素的含量为指标,通过单因素和正交试验,考察超临界CO2萃取过程中,温度、压力、时间和夹带剂对提取率和含量的影响,确定最优提取工艺。采用干燥法和水萃取法对提取浸膏进行简单纯化处理。结果：综合比较,最优提取工艺为：萃取压力25 mPa,萃取温度50℃,萃取时间4 h。在此条件下,浸膏中总香豆素含量达42.43%,提取率达81.49%。浸膏经干燥处理,总香豆素含量提高到52.35%。用水萃取法,当水温为90℃时,含量可达到54.55%。结论：超临界CO2萃取技术是独活中总香豆素提取的一种高效方法。     

组织工程真皮抗张强度的初步研究

目的 采用高敏度小张力膜状生物材料力学性能测定仪检测组织工程真皮的抗张强度。方法 分别培养含有不同数量成纤维细胞的胶原凝胶和复方壳多糖真皮替代物，15d后检测抗张强度。结果 组织工程真皮抗张强度随成纤维细胞数量增多而增强（P〈0．01），复方壳多糖人工真皮的抗张强度高于胶原凝胶真皮（P〈0.01）。结论 复方壳多糖真皮替代物具有良好的抗张强度，为临床应用提供稳定机械性能。     

正交设计优选陈皮超临界CO2萃取工艺

目的:优选陈皮超临界CO2萃取的工艺条件。方法:采用L(934)正交试验优选陈皮超临界萃取最佳工艺条件,以萃取时间、萃取温度、萃取压力和CO2流速为考察因素,以萃取率和萃取物中川陈皮素、橘皮素的含量为评价指标。结果:最佳萃取工艺条件为:萃取时间2 h,萃取温度35℃,萃取压力30 MPa,CO2流速每小时20 Kg,此时陈皮萃取率为1.96%,川陈皮素和橘皮素总含量为45.23 mg/g(n=3)。结论:优选出的工艺稳定、可行,可用于陈皮的超临界CO2萃取。     

菠菜叶绿素的提取及叶绿素铜钠盐的制备

目的 研究菠菜叶绿素的提取工艺并探讨其叶绿素铜钠盐的制备.方法 采用有机溶剂从菠菜中提取叶绿素,对不同温度、不同时间下的色素提取率进行测试,以确定最佳提取条件;同时在超声波作用下从菠菜中提取叶绿素,以叶绿素的收率为指标,运用正交法确定了乙醇超声提取菠菜叶绿素的最佳条件,同时考察了外在因素对叶绿素铜钠盐制备过程中的影响.结果 提取剂：乙醇;料液比：1：5;提取温度：50℃;提取时间：60min;超声波功率：200 W;全过程叶绿素铜钠盐的收率可达52.6%.结论 本方法 有助于菠菜叶绿素的提取及其叶绿素铜钠盐的制备.     

一种新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理性能研究*

目的：研究一种新型聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid), PLGA]/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理性能。方法：制备PLGA电纺膜(A组)、纯鱼皮胶原膜(B组)及新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜(C组)3种膜,分别检测接触角、失重率、拉伸强度、断裂伸长率等物理性能,初步评价新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理性能,为其应用于种植引导组织再生提供理论依据。结果：新型PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜(C组)具有良好的亲水性,接触角为68.52°;体外降解12周后失重率为(14.85±0.13)%,拉伸强度为(2.41±0.47) MPa,断裂伸长率为(77.98±25.72)%,失重率速率最小且仍保持一定的拉伸强度与断裂伸长率。结论：PLGA/鱼皮胶原共轭静电纺丝膜的物理机械性能能够达到临床要求,为进一步的细胞实验提供基础。     

制川乌白芍合煎微波提取工艺研究

目的 优选微波法提取制川乌配伍白芍中有效成分乌头总生物碱和芍药苷的工艺条件。方法 采用单因素结合正交设计法,优选出65%乙醇为提取溶媒,进一步考察了微波功率、微波辐射时间、乙醇体积分数及料液比4个因素,用紫外可见分光光度法测定乌头总生物碱,采用HPLC法测定芍药苷,并以其量及浸膏得率作为评价指标。结果 以65%乙醇为提取溶媒,在微波功率800 W,微波辐射时间为0.5 h,固液比为1∶10时乌头总生物碱和芍药苷的提取量最高且浸膏得率最低。结论 微波提取时间短,有效成分提取率高,此方法是一种有发展潜力的工艺。     

复方二仙汤有效成分提取工艺的研究

目的优化复方二仙汤的提取工艺。方法以总黄酮、总生物碱和总皂苷及干膏收率为考察指标,以不同浓度乙醇索氏提取,并用正交试验设计乙醇回流法提取二仙汤。结果正交试验优选的乙醇回流提取法优于索氏提取,最佳工艺为10倍量60%乙醇回流,提取3次,每次提取60分钟。结论最佳提取方法有效成分溶出率高,工艺稳定可行。