表达人Fas配体的质粒治疗Graves病模型小鼠

目的:观察表达人Fas配体的质粒治疗Graves病模型小鼠的效果.方法:小鼠分为3组.对照组(10只)用空质粒pcDNA3.1(+)活化的脾细胞免疫后,以空质粒治疗;模型组和治疗组(各19只)均以人TSH受体(Human thyrotmpin receptor,hTSHR)活化的脾细胞进行免疫,前者不予治疗,后者甲状腺注射表达hFasL的质粒pcDNA3.1(+)/hFasL.结果:模型组47.4%的甲状腺细胞出现增生、肥大,以及甲状腺滤泡腔胶质减少,与对照组相比,TT4、TRAb升高、TSH降低(P<0.05).治疗组仅15.8%有类似甲状腺功能亢进改变,电镜下见细胞核异染色质边集,TT4、TSH、TRAb回复至对照组水平.结论:表达人Fas配体的质粒治疗Graves病模型小鼠取得一定效果.     

促甲状腺素受体在亚临床甲状腺功能减退小鼠心室肌的表达及意义

【摘要】 目的 探讨促甲状腺素受体（TSHR）在亚临床甲状腺功能减退（SCH）小鼠心室肌的表达及意义。方法 30只BALB/c小鼠随机分为对照组及实验组,每组15只。实验组小鼠构造亚临床甲状腺功能减退动物模型,对照组小鼠饮用正常水,腹腔注射等量生理盐水。比较两组小鼠超声心动图检测结果,血清TT3、TT4、TSH水平。免疫组织化学染色法检测各组小鼠心室肌组织中TSHR的表达情况。结果 两组超声心动图检测结果显示,实验组E/E’值高于对照组（P＜001）。两组TT3水平比较差异无统计学意义(P＞005);实验组血清TT4水平明显低于对照组,血清TSH水平明显高于对照组（P＜001）。免疫组织化学染色结果显示,实验组心室肌组织中TSHR表达明显高于对照组。结论〓当发生亚临床甲状腺功能减退时,心室肌组织TSHR表达上调,与高浓度的TSH结合后可能通过某种机制影响心脏舒缩功能。     

TSHR及活性多肽对BALB/c小鼠甲状腺的影响

目的:探讨促甲状腺激素受体(TSHR)及活性多肽对BALB/c小鼠甲状腺的影响。方法:对BALB/c小鼠腹腔注射血蓝蛋白耦联的人TSHR(hTSHRaa352～366)和从豚鼠脂肪细胞提取的TSHR(gTSHR)进行免疫,每2周免疫1次共6次,每次免疫前2d取血,检测血清T4、促甲状腺激素受体抗体(TRAb)水平。12周后处死小鼠,取甲状腺做病理组织学检查。结果:血清T4水平hTSHRaa352～366组从第6周开始下降(P<0.01),而且一直维持到12周,血清TRAb水平明显升高(P<0.01),甲状腺组织显示滤泡上皮细胞扁平、核缺失、皱缩、胶质浓缩等甲状腺功能减退病理改变;gTSHR组血清T4水平在第6周已下降,而12周时有的下降、有的则升高,无统计学意义,血清TRAb水平升高(P<0.01),甲状腺组织出现不均一的病理表现。结论:hTSHRaa352～366刺激BALB/c小鼠产生TRAb和促甲状腺激素受体抑制抗体(TBAb),抑制促甲状腺激素(TSH)与TSHR结合,降低了甲状腺激素T4水平;而gTSHR刺激BALB/c小鼠同时产生TRAb、促甲状腺激素受体刺激抗体(TSAb)和TBAb,引起甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退。     

H2S对Graves甲亢小鼠甲状腺功能与甲状腺滤泡上皮细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨气体信号分子硫化氢（H2S）对 Graves甲亢（GD）小鼠甲状腺功能的改善情况,及其对甲状腺滤泡上皮细胞损伤的保护作用。方法 45只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、空载体病毒组和重组腺病毒组,每组15只。通过注射Ad-TSHR289重组腺病毒建立GD小鼠模型,GD造模成功的15只小鼠随机分为模型组、H2S组及甲疏咪唑组,每组5只。H2S组小鼠予以硫氢化钠（NaHS）溶液（56μmol/kg/d）腹腔注射,甲疏咪唑组小鼠予以甲疏咪唑溶液（3.9 mg/kg/d）腹腔注射,正常对照组和空载体病毒组小鼠予以等体积 0.9%Nacl 溶液腹腔注射,共干预 4 周。4周后,测定小鼠血清中促甲状腺激素受体抗体（TRAb）、甲状腺素（T4）和促甲状腺激素（TSH）水平,HE染色观察各组小鼠甲状腺组织的病理变化,免疫组织化学染色检测甲状腺组织增殖细胞核抗原（PCNA）与细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达,Western blot检测钠/碘转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、甲状腺球蛋白（Tg）表达水平。分离培养小鼠甲状腺滤泡上皮细胞,将细胞随机分为正常对照组、H2O 组、NaHS+H2O 组,正常对照组细胞不进行任何处理,H2O 组使用H2O 溶液处理甲状腺滤泡上皮细胞24 h,NaHS+H2O 组先用 NaHS 预处理甲状腺滤泡上皮细胞 30 min再用H2O 2溶液处理细胞。通过CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 与正常对照组比较,重组腺病毒组小鼠血清中TRAb和T4水平显著上升,TSH水平显著下降（均P＜0.05）。NaHS 溶液干预后,GD小鼠血清中TRAb和T4的水平显著下降,TSH水平显著升高（均P＜0.05）;甲状腺组织病变得到明显的改善,PCNA与CyclinD1阳性表达显著降低,NIS、TPO与Tg蛋白表达量显著下降（均P＜0.05）。与正常对照组比较,H2O 2组甲状腺滤泡上皮细胞活性在培养24、48、72 h显著下降,细胞凋亡率显著升高（均P＜0.05）;与H2O 2组比较,NaHS+H2O 细胞在培养48 h和72 h时,甲状腺滤泡上皮细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低（均P＜0.05）。结论 气体信号分子 H2S 对GD小鼠的甲状腺功能减退具有一定的改善作用,机制可能与其抑制PCNA、CyclinD1及NIS、TPO、Tg蛋白表达有关,并对H2O 诱导的甲状腺滤泡上皮细胞损伤具有保护作用。     

嗜肺军团菌主要外膜蛋白DNA疫苗的免疫保护性研究

目的观察m ompS基因DNA疫苗对嗜肺军团菌感染的免疫保护作用。方法将18只BALB/c雌性小鼠随机分为3组,pcDNA 3.1-m ompS实验组股四头肌肌肉接种pcDNA 3.1-m om opS质粒100μg,两周后加强免疫1次,2个对照组分别肌肉注射等体积的生理盐水和空质粒,加强免疫后3周小鼠鼻腔滴注嗜肺军团菌L 1型菌液进行攻击感染,感染4周后,检查小鼠肺组织带菌量,观察肺组织病理形态学改变。结果pcDNA 3.1-m ompS免疫组肺组织带菌量少于生理盐水对照组和空质粒对照组(P<0.01);与生理盐水对照组和空质粒对照组比较,pcDNA 3.1-m ompS免疫组肺组织病理改变轻微。结论由m ompS基因构建的嗜肺军团菌DNA疫苗能诱导小鼠产生保护性免疫。     

基因枪介导人精子顶体膜相关蛋白32基因疫苗在小鼠骨骼肌中的表达

目的:观察pcDNA3.1( )-人精子顶体膜相关蛋白32(hSAMP32)基因疫苗经基因枪介导肌肉接种后在小鼠体内的表达.方法:BALB/c雌性小鼠6只,实验组鼠(4只)经后腿股内侧肌以基因枪多点注射重组质粒pcDNA3.1( )-hSAMP32 5μg,空载体对照组(1只)注射pcDNA3.1( )载体5 μg,空白对照组(1只)注射无菌生理盐水200μl.接种后第7 d取小鼠股内侧肌注射部位肌肉,RT-PCR和原位杂交法检测目的基因mRNA的表达,以自制抗血清进行免疫组织化学染色检测目的基因蛋白的表达.取小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎组织,PCR扩增,行基因疫苗的安全性检测.结果:RT-PCR和原位杂交检测结果显示实验组小鼠注射部位肌肉组织有目的基因及其蛋白的表达,对照组未见表达.实验组小鼠心、肝、脾、脑、肾、胚胎的基因组DNA均未扩增出目的基因条带,说明外源性基因没有整合到宿主染色体.结论:该基因疫苗可在小鼠骨骼肌内有效、安全地表达.     

人β防御素-2联合HPV16E7c免疫小鼠的免疫学效应实验研究

目的 探讨以人β防御素-2为佐剂的HPV16 E7c免疫功能及细胞免疫应答.方法 将30只小鼠按随机数字表法分为3组:PBS组、pcDNA3.1(+)/E7c组、pEGFP-C1/HBD2-E7c组,每组10只.PBS组采用PBS 100 μg·只-1 行股四头肌肌内注射,进行初次免疫;pcDNA3.1(+)/E7c组采用pcDNA3.1(+)/E7c质粒100 μg·只-1 行股四头肌肌内注射,进行初次免疫;pEGFP-C1/HBD2-E7c组采用pEGFP-C1/HBD2-E7c联合质粒100 μg·只-1行股四头肌肌内注射,进行初次免疫.3组初次免疫后,再间隔2周,以上述方法和剂量加强免疫2次.共免疫3次.3组小鼠免疫1周后,断颈处死小鼠,取小鼠脾脏称重,计算脾脏脏器指数及计数脾淋巴细胞数量,流式细胞仪检测淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞数量及比值;采用摘眼球采血法收集小鼠血清,采用ELISA法检测小鼠血清E7抗体水平.结果 pcDNA3.1(+)/E7c组、pEGFP-C1/HBD2-E7c组小鼠脾脏脏器指数均明显低于PBS组(均P＜0.01).pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠CD4+、CD8+阳性细胞比例、绝对数均明显高于PBS组(均P＜0.05),pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠CD4+/CD8+比值均明显低于PBS组(均P＜0.05),pEGFP-C1/HBD2-E7c组、pcDNA3.1(+)/E7c组小鼠血清E7抗体水平均明显高于PBS组(均P＜0.01),pEGFP-C1/HBD2-E7c组小鼠血清E7抗体水平明显高于pcDNA3.1(+)/E7c组(P＜0.05).结论 人β防御素-2可明显改善HPV16 E7c基因的免疫原性,提高HPV16E7特异性抗体水平,升高免疫小鼠脾CD4+和CD8+T淋巴细胞数量.     

Graves病母鼠分娩后甲状腺自身抗体水平的观察

目的:建立Graves病小鼠模型,研究Graves病母鼠分娩后甲状腺自身抗体水平变化?方法:应用表达促甲状腺激素刺激激素受体(thyrotropic-stimulating hormone receptor,TSHR) A亚单位的重组腺病毒Ad-TSHR-289免疫雌性Balb/c小鼠制备Graves病动物模型?将6周Balb/c雌性小鼠随机分为实验组?对照组,分别用重组Ad-TSHR-289?Ad-β-gal经小鼠腿部肌肉注射,免疫剂量均为3.3 × 108 pfu/50 μl PBS,每隔3周免疫1次,共3次?免疫结束后,内眦静脉取血,检测血清甲状腺素(T4)?促甲状腺素受体抗体(TRAb),然后分别与Balb/c雄性小鼠配对,确定妊娠后继续饲养至分娩?分娩后1 d,处死母鼠,检测母鼠血清T4?TRAb?抗甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)?甲状腺球蛋白抗体(TGAb),并分离母鼠甲状腺,行组织学检查?结果:实验组中96.7%的母鼠血清TRAb水平显著增高(P < 0.05);实验组第3次免疫后有56.7%(17只) 的小鼠达到甲亢标准,分娩后73.3%(22只)的母鼠达到甲亢标准;实验组中16.7%的母鼠血清TPOAb水平明显高于正常范围;母鼠血清TGAb较对照组显著增高,差异有统计学意义(P < 0.05)?结论:利用Ad-TSHR-289免疫Balb/c小鼠可以成功制备Graves病小鼠模型?分娩后Graves病母鼠血清TPOAb及TGAb水平升高可能与TRAb有关?     

micro-CT法观测雌性小鼠股骨骨参数的分析

目的 利用小动物CT（micro-CT）收集正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的影像学数据.方法 BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠各15只,雌性,10～12周龄,取股骨后用micro-CT进行扫描,将得到的数据进行系统分析.结果 成功收集了正常雌性BALB/c-nu/nu小鼠与BALB/c小鼠股骨的CT影像学数据.通过数据分析,发现两者在皮质骨相对骨体积上具有显著差异,在骨小梁相对骨体积、骨表面积与组织体积比值和骨密度也有显著差异.结论 micro-CT可以对雌性小鼠股骨的各项参数进行定量分析.     

高渗盐水点眼制作的小鼠干眼模型与评估

目的 通过高渗盐水点眼提高泪液渗透压制作小鼠干眼模型并对该模型进行评估.方法 60只雌性6～8周龄BALB/c小鼠,采用随机数字表法分为空白组、对照组和实验组,每组20只.对照组采用308 mOsmol/L氯化钠溶液点眼,每天5次,实验组采用500 mOsmol/L氯化钠溶液点眼,每天5次,空白组不点眼.分别在第0,7,14,28,42天行SchirmerⅠ实验、角膜荧光素钠染色和评分、眼表虎红染色观察、泪液蕨类实验、角膜上皮HE染色观察、角膜上皮厚度测量、结膜上皮PAS染色观察和杯状细胞计数.第42天行角膜上皮扫描电子显微镜观察.结果 第0天各组间比较差异无统计学意义(P>0.05).第7天起,与空白组[(3.0±0.5)mm]和对照组[(3.1±0.5)mm]相比,实验组[(2.3±0.4)mm]BALB/c小鼠出现泪液生成明显减少(P<0.05),角膜荧光素钠染色和虎红染色出现点、片状着色,角膜荧光素钠染色评分升高[3组分别为(0.9±1.2)、(0.5±0.7)、(1.4±1.6),P<0.01],泪液蕨类图形减少.第14天起,与空白组和对照组相比,实验组BALB/c小鼠结膜杯状细胞计数减少[3组分别为(10.6±2.0)、(11.8±1.3)、(5.4±1.8),P<0.01].角膜上皮基底部细胞排列紊乱缺失,角膜上皮分层减少,出现空泡,角膜上皮层厚度减少[3组分别为(21.69±3.41)、(21.23±2.64)、(15.82±1.38)μm,P<0.05],角膜上皮细胞微绒毛丢失.结论 高渗盐水可以在小鼠眼表引起类似干眼的病理损害,泪液高渗透压在干眼的发病中起重要作用.