IL-1β激活后的许旺细胞与人发角蛋白三维培养构建人工神经桥接体

目的 探索白细胞介素-1β（IL-1β）激活后的许旺细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体,修复神经缺损.方法 体外培养纯化的许旺细胞经IL-1β激活前、后与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处.S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白共培养情况,原位杂交法观察人发角蛋白降解及神经生长因子（NGF）在坐骨神经内的表达,移植术4周后检测坐骨神经功能指数.结果 经IL-1β激活后的许旺细胞能更好地黏附于人发角蛋白表面,进行分裂、增殖.3～4周,桥接体内的人发角蛋白开始降解,其周围可见IL-1β激活后的处于增殖分裂期的许旺细胞NGF表达强阳性,坐骨神经功能恢复时间提前.结论 经IL-1β激活后的许旺细胞与细胞外基质凝胶修饰的人发角蛋白复合培养构建成人工神经桥接体,具有修复神经缺损的同时还能够加速坐骨神经损伤后功能的恢复.     

神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究

目的探索神经膜（旧称许旺细胞）与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法用10μmol／ml BrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人T神经桥接体，移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋门免疫组化染色鉴定许旺细胞，倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养．石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长，移植入神经缺损处4周后，坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解．黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养．构建成人工神经桥接体．填补神经缺损。     

神经膜细胞与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体的实验研究

目的 探索神经膜(旧称许旺细胞)与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法 用10μmol/mlBrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养,石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果 体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长,移植入神经缺损处4周后,坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解,黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论 许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养,构建成人工神经桥接体,填补神经缺损。     

壳聚糖神经导管修复神经鞘瘤所致10mm周围神经缺损的实验研究

目的:观察壳聚糖神经导管修复神经鞘瘤所致10mm周围神经缺损的神经再生恢复情况。方法:制备神经鞘瘤模型→肿瘤切除、壳聚糖神经导管(A组)及硅胶管(B组)桥接→观察桥接材料周围的瘢痕形成及桥接材料吸收情况,12周时行大体标本观察、组织学观察、神经电生理检测与正常对照组(C组)比较。结果:A组术后6周时与周围组织粘连较重,8周时逐渐减轻,12周时无明显粘连,导管已基本降解吸收,神经连续性已建立;组织学及电生理检测证实缺损的神经已再生、功能恢复良好,A组综合效果明显优于B组,组间差异无统计学意义。结论:壳聚糖神经导管能明显促进神经鞘瘤所致10mm周围神经缺损后的神经再生与功能恢复。     

异体羊膜复合神经生长因子桥接周围神经缺损的实验研究

目的 :探讨同种异体羊膜材料复合应用神经生长因子替代神经材料桥接周围神经缺损的可行性。方法 :4 8只健康SD大鼠制备坐骨神经缺损模型 ,随机分为 4组 ,即自体神经原位移植组 (A组 )、异体神经移植应用环孢菌素A(CSA) 5mg/(kg·d) 5周组 (B组 )、异体羊膜材料桥接缺损复合应用神经生长因子组 (C组 )、单纯异体神经移植组 (D组 )。 6只Wistar大鼠取双侧坐骨神经作为供体。于术后 12周取移植段神经行光镜、电镜形态学观察 ,测定神经运动诱发电位潜伏期、神经运动诱发电位峰值、神经传导速度和振幅积分、腓肠肌最大收缩力 ,再生轴突计数及髓鞘厚度测定。结果 :12周时A、B、C组的各项检测指标明显优于D组 (P <0 0 5 ) ,A、B、C 3组间差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,再生神经形态与功能恢复良好。结论 :对于长段周围神经缺损 ,应用异体羊膜复合神经生长因子进行桥接可以有效促进神经再生及功能恢复     

人发角蛋白非神经移植材料的基础研究

①目的 研究人发角蛋白非神经移植材料的解剖学特点和组织相容性，及其对周围神经缺损的修复效果。②方法 Wistar大白鼠18只随机分成3组，将其坐骨神经切取10mm，分别用人发角蛋白非神经移植材料(实验组)、大白鼠自体骨骼肌(对照I组)和未经特殊处理的人发(对照Ⅱ组)连接神经两断端。术后不同时间进行组织形态及解剖学观察。③结果 术后第8周实验组坐骨神经两断端之间出现白色新生组织；第12周白色新生组织出现于移植材料腔隙；第24周移植材料腔隙被充满，人发被初步降解，光镜下可见人发周围有大量呈无序排列的再生神经纤维，透射电镜下可见人发周围雪旺细胞增殖并形成髓鞘。对照组未出现上述变化。④结论 人发角蛋白非神经移植材料的组织相容性好，并可诱导神经纤维再生，是用于修复神经缺损较为理想的材料。     

冻干去细胞异种神经和类许旺细胞共移植修复外周神经缺损的实验研究

目的 研究冻干化学去细胞异种神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果.方法 48只成年雌性DA大鼠分别用4种移植物桥接大鼠1.5cm坐骨神经缺损:冻干化学去细胞异种神经与类许旺细胞共移植组、冻干化学去细胞异种神经移植组、化学去细胞异种神经移植组、异种神经移植组.术后4周、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果.结果 术后24周A组运动神经传导速度和肌肉湿重恢复率优于B、C、D组(P＜0.05);组织学检测发现,术后24周A组移植段再生神经纤维较多,以有髓神经纤维为主.结论 种植类许旺细胞的冻干化学去细胞异种神经能有效的修复大鼠周围神经缺损.     

人发角蛋白桥接周围神经缺损后的相容性和降解性的实验研究

目的：探讨HHK（人发角蛋白）在桥接周围神经缺损后,诱导神经再生及与周围组织的相容和自身的降解情况。方法：用PLGA（聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物）套管装配HHK来桥接SD大鼠10mm长的坐骨神经缺损,术后3、6、9、12周取材,切片做组织学观察。结果：术后3周HHK毛小皮已经开始剥脱降解,并已有大量的雪旺细胞和神经纤维沿HHK长入,6周时HHK已均质化,9周、12周HHK继续降解,长入其间的雪旺细胞和神经纤维更多,排列更加规律。结论：HHK有很好的生物相容性,和可控的降解速率,能很好的诱导神经再生,可以作为支架材料应用于周围神经组织工程研究。     

组织工程化神经构建及其修复周围神经缺损的实验研究

目的探讨构建组织工程化神经及其修复周围神经缺损的作用.方法体外诱导人骨髓基质干细胞分化为雪旺细胞,与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经;建立坐骨神经缺损10mm的动物模型,A组:经诱导骨髓基质干细胞分化为雪旺细胞与天然细胞基质(ECM)凝胶及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经桥接神经缺损;B组:单纯将ECM凝胶注入可降解聚乳酸导管桥接神经缺损;C组:自体神经移植组.术后12周进行神经电生理检测、新生神经组织学观察和轴突计数等检测坐骨神经功能恢复情况.结果诱导后成人骨髓基质干细胞具有雪旺细胞形态及特性;动物模型各组经移植术后12周,再生神经已通过缺损区长至远端.A组、C组各项检测指标均优于B组(PAB=0.021,PBC=0.001),A组与C组无显著性差异(P=0.065);A、B组聚乳酸导管降解吸收明显.结论人骨髓基质干细胞在体外可诱导分化为雪旺细胞,利用其与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经可以修复周围神经缺损.     

胎兔雪旺细胞复合体桥接神经缺损的实验研究

目的 将胎兔雪旺细胞种植到脱细胞的同种异体神经段中制成神经桥接复合体,修复神经缺损.方法 实验包括胎兔雪旺细胞培养、去细胞神经桥接体的制备以及去细胞神经桥接体复合体的动物实验3个部分.使用双酶消化法培养雪旺细胞并将其种植于经3% TritonX-100作用96 h后的同种异体神经中.实验组,将胎兔雪旺细胞神经复合体桥接移植到兔缺损的坐骨神经上.对照组,移植未注入雪旺细胞的去细胞同种异体神经段.术后观察坐骨神经的再生及功能恢复情况,观察兔足部溃疡形成及愈合情况.于4、8、12周行肌电图检查,在光镜下观察神经轴突的再生情况,并进行统计学分析.结果 术后4、8、12周2组动物手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况、再生神经纤维数目优于对照组.神经传导速度于术后4周时,2组均未见明显的神经传导,术后8周实验组(24.88±1.19)m/s,对照组(18.64±0.75)m/s(t=-10.92,P<0.05);术后12周实验组(38.66±2.02)m/s,对照组(33.49±1.51)m/s(t=-5.03,P<0.05).2组差异有统计学意义.神经纤维数目,术后4周实验组(751.67±74.14)根,对照组(541.67±62.42)根(t=-5.31,P<0.05);术后8周实验组(2 067.83±233.65)根,对照组(1 805.50±155.65)根(t=-2.29,P<0.05);术后12周实验组(3 430.33±128.48)根,对照组(2 491.17±158.95)根(t=-11.26,P<0.05).2组差异有统计学意义.结论 胎兔雪旺细胞神经复合体不但能够为神经再生提供良好的支架作用,而且能够诱导和促进神经轴突的再生.