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1.
目的:将外源基因通过重组然后在宿主细胞中表达,以研究其功能.资料来源:应用计算机检索Medlinel997-01/2004-12与外源基因重组表达产物亚细胞定位的相关文献,检索词“foreign recombined gene,subcellure location”等分别进行检索提炼,限定文献语种为English.资料选择:就检索到的500余篇资料进行初审,纳入标准:①有关外源基因重组策略.②与表达产物定位检测方法相关.排除标准:文献中重复研究、综述、Meta分析类文章.未排除文章中资料是否应用了随机、对照和盲法.资料提炼:共收集到80余篇关于外源基因重组表达后定位相关的文章.其中研究内容相似的,以近5年内发表在较权威杂志者优先.对符合标准的38篇文献进行分析.资料综合:外源重组基因在宿主细胞中表达后,可以通过多种方法进行亚细胞定位,如报告基因,免疫电镜,免疫荧光技术等,且大规模的外源重组基因亚细胞定位具有重要的意义.结论:因为外源重组基因表达产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关系,所以研究其在宿主细胞中的亚细胞定位,对研究外源重组基因表达产物的功能或未知新基因的功能来说有很重要的意义.  相似文献   
2.
含人自噬基因hAPG12穿梭载体构建及其在酵母自噬中的作用   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的该研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母穿梭栽体pESC—URA—EGFP—hAPG12,将构建好的栽体转化到酵母菌内.以此研究hAPG12在酵母自噬过程中的作用。方法从pEGFP-C2-hAPG12中扩增出EGFP—hAPG12融合基因,鉴定正确后定向亚克隆到大肠杆菌一酿酒酵母穿梭载体pESC—URA中,构建载体pESC—URA—EGFP—hAPG12并将其转化到酵母,荧光显微镜下观察,用自噬诱导剂诱导酵母自噬以观察hAPG12在酵母内的表达定位。结果证实EGFP-hAPG12基因已完全正确亚克隆到pESC—URA中,荧光显微镜观察结果证明EGFP—hAPG12融合蛋白在酵母中成功表达,以诱导培养24h的荧光最强。EGFP—hAPG12定位于酵母的自噬体中。结论成功构建了具有报告基因的重组真核表达栽体pESC—LIRA—EGFP—hAPG12;EGFP—hAPG12融合蛋白在酵母中得到表达,hAPG12在酵母自噬体形成过程中起作用。  相似文献   
3.
目的 观察刀豆素A(ConA)与小鼠腹腔巨噬细胞表面ConA受体结合、内吞、转运及巨噬细胞自噬、凋亡的形态学变化,以探讨受体介导内吞与自噬体形成和细胞凋亡之间的关系。方法 用辣根过氧化物酶(HRP)标记ConA(ConA-HRP)与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,不同时间取出部分巨噬细胞,制备电镜标本,观察。结果透射电镜观察表明:ConA的内吞属于受体介导内吞;形成的内吞体有泡状、管状及双层膜的线状等形式;双层膜的线状结构包裹部分胞质和细胞器,形成自噬体;自噬体与溶酶体融合,而后巨噬细胞凋亡。结论受体介导内吞和自噬同凋亡之间存在一定的关系。  相似文献   
4.
目的建立快速简便筛选酵母突变株的方法。方法利用同源重组技术,通过转座子上的GFP基因,从酵母基因组文库中,检测发生突变的菌株,从而筛选出酵母突变株。结果应用荧光显微镜观察SC-ura 选择平板筛选出的酵母,有绿色荧光发出的即为阳性菌落。结论利用同源重组技术,初步筛选出了所需的酵母突变株。  相似文献   
5.
人发角蛋白丝束修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究   总被引:1,自引:1,他引:0  
目的:观察人发角蛋白(HHK)丝束桥接体诱导坐骨神经再生过程中形态字变化:方法:制备坐骨神经损伤SD大鼠动物模型,分别植入HHK或HHK 胶原屏障膜,术后2d、2、3、6、9、12周行组织学观察。结果:术后2d到2周,断端的施万细胞去分化,沿着HHK束表面纵向分裂增殖。术后3周HHK开始降解,施万细胞大量增生:HHK周围有很多巨噬细胞和多核巨细胞,并出现轴突和大量微血管:术后6周,HHK丝周围可见大量新生的神经纤维。术后9周,HHK降解显著,有明显的神经外膜和束膜。术后12周,HHK完全降解,其部位被新的神经纤维取代。HHK丝束 胶原膜屏障膜组与HHK丝束组没有明显区别。结论:HHK具有良好的桥接作用,坐骨神经沿着HHK再生时在其外周就能由微血管和结缔组织形成一屏障膜,无需外加屏障膜。  相似文献   
6.
目的:将外源基因通过重组然后在宿主细胞中表达,以研究其功能。 资料来源:应用计算机检索Medline 1997-01/2004-12与外源基因重组表达产物亚细胞定位的相关文献,检索词“foreign recombined gene,subcellure location”等分别进行检索提炼,限定文献语种为English。 资料选择:就检索到的500余篇资料进行初审,纳入标准:①有关外源基因重组策略。②与表达产物定位检测方法相关。排除标准:文献中重复研究、综述、Meta分析类文章。未排除文章中资料是否应用了随机、对照和盲法。 资料提炼:共收集到80余篇关于外源基因重组表达后定位相关的文章。其中研究内容相似的,以近5年内发表在较权威杂志者优先。对符合标准的38篇文献进行分析。 资料综合:外源重组基因在宿主细胞中表达后,可以通过多种方法进行亚细胞定位,如报告基因,免疫电镜,免疫荧光技术等,且大规模的外源重组基因亚细胞定位具有重要的意义。 结论:因为外源重组基因表达产物的功能与其在宿主细胞中的定位有重要的关系,所以研究其在宿主细胞中的亚细胞定位,对研究外源重组基因表达产物的功能或未知新基因的功能来说有很重要的意义。  相似文献   
7.
 目的:研究高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙肝病毒药物的效应评价。 方法: 选用抗乙肝药物拉咪呋啶、大剂量重组乙肝蛋白疫苗、α-1b型干扰素和RNA干扰在转基因小鼠进行药效及作用机制评价。 结果:拉咪呋啶、重组乙肝疫苗、α-1b型干扰素均可使HBV转基因小鼠血清中HBV DNA滴度显著降低。其中后两者还可提高机体脾细胞IL-2和IFN-γ的水平及使分泌IFN-γ脾细胞Elispot斑点数明显增加。将RNA干扰表达载体pU6-siHBV质粒尾静脉注入小鼠体内。注射后5 d血清HBsAg下降56.7%,抑制作用持续14 d。肝脏免疫组化显示HBcAg阳性细胞明显减少,但血清HBV DNA定量无明显降低。 结论: 本近交系高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙肝药物药效学评估是可靠、可行的。  相似文献   
8.
目的探索神经膜(旧称许旺细胞)与人发角蛋白复合培养构建人工神经桥接体。方法用10μmol/mlBrdU标记体外培养纯化的许旺细胞与ECM凝胶修饰的人发角蛋白进行三维方向的共培养而构建成人工神经桥接体,移植入SD大鼠坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中。S-100蛋白免疫组化染色鉴定许旺细胞,倒置显微镜和扫描电镜下观察许旺细胞与人发角蛋白的共培养,石蜡切片抗BrdU免疫组化染色观察体外培养纯化的许旺细胞在体内的生长情况。结果体外培养的许旺细胞能黏附于人发角蛋白上进行良好的生长,移植入神经缺损处4周后,坐骨神经缺损处、皮下、骨骼肌中的桥接体内的人发角蛋白开始降解,黏附于该人发角蛋白上的许旺细胞均见成活并分裂增殖。结论许旺细胞可与人发角蛋白进行三维培养,构建成人工神经桥接体,填补神经缺损。  相似文献   
9.
目的检测复制型HBV(ayw)转基因小鼠血清中HBV病毒颗粒。方法应用密度梯度离心收集病毒颗粒并应用免疫电镜检测。结果发现了直径22nmHBsAg颗粒和45nm左右的Dane颗粒。结论本转基因小鼠模型能继续复制,组装并分泌HBV病毒颗粒。  相似文献   
10.
目的观察刀豆素A(ConA)与小鼠腹腔巨噬细胞表面ConA受体结合、内吞、转运及巨噬细胞自噬、凋亡的形态学变化,以探讨受体介导内吞与自噬体形成和细胞凋亡之间的关系。方法用辣根过氧化物酶(HRP)标记ConA(ConA-HRP)与小鼠腹腔巨噬细胞共孵育,不同时间取出部分巨噬细胞,制备电镜标本,观察。结果透射电镜观察表明:ConA的内吞属于受体介导内吞;形成的内吞体有泡状、管状及双层膜的线状等形式;双层膜的线状结构包裹部分胞质和细胞器,形成自噬体;自噬体与溶酶体融合,而后巨噬细胞凋亡。结论受体介导内吞和自噬同凋亡之间存在一定的关系。  相似文献   
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