CK19、CK20 mRNA在上皮性恶性肿瘤患者外周血中的表达及其意义

目的：分析上皮性恶性肿瘤患者外周血中CK19、CK20mRNA的表达水平，探讨其临床病理意义。方法：随机选择和收集53例上皮性恶性肿瘤患者的外周血，应用巢式RT－PCR法联合检测其CK19、CK20mRNA表达情况，另取15例上皮性肿瘤组织的为阳性对照，15例非肿瘤患者外周血为阴性对照。结果：53例肿瘤患者外周血中CK19阳性率为35．8％（19／53，CK20阳性率41．5％（22／53），两者至少1项阳性者69．8％（31／53）。15例肿瘤组织中CK20阳性率为100％（15／15），CK19阳性率86％（13／15）；15例阴性对照CK19阳性2例，CK20阳性1例，结合肿瘤的临床病理资料分析，肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA阳性表达与肿瘤浸润深度，临床分期及淋巴结转移存在明显的相关性，而与肿瘤患者的年龄，性别，肿瘤分化程度无明显相关。结论：CK19、CK20mRNA可作为检测上皮性肿瘤外周血微转移的靶基因。联合检测肿瘤患者外周血CK19、CK20mRNA可增加外周血循环癌细胞的检测率。     

喉癌患者外周血CK19mRNA及CK20mRNA的表达

目的研究喉癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA的表达,探讨其I临床意义。方法采用巢式RT-PCR技术检测喉癌患者术前外周血中CK19mRNA、CK20mRNA的表达。结果48例喉癌患者外周血中CK19mRNA阳性率为37．5％（18／48）,CK20mRNA阳性率45．8％（22／48）。10例肿瘤组织中CK19mRNA阳性率为100％（10／10）。CK20mRNA阳性率80％（8／10）;10例声带息肉患者外周血为阴性对照,CK19mRNA阳性率为10％（1／10）,CK20mRNA阳性率为0。结合临床病理资料,喉癌患者外周血CK19mRNA、CK20mRNA表达与喉癌T分期、临床分期及淋巴结转移存在相关性,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论采用巢式RT—PCR技术,对喉癌患者外周血单个核细胞CK19mRNA和,或CK20mRNA的检测,在分子生物学水平对喉癌细胞对周围组织的浸润及局部扩散提供了参考,有助于指导临床治疗。     

膀胱移行细胞癌患者外周血CK20表达的研究

目的：探讨CK20在膀胱移行细胞癌(TCCB)患者外周血的表达及其意义。方法：采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测63例TCCB患者和19例健康志愿者以及19例非肿瘤患者外周血CK20表达。以CAPDH作为内参照。结果：19例健康志愿者和19例非肿瘤患者外周血CK20的表达均为阴性；63例TCCB患者外周血CK20阳性表达率为25．4％(16／63)，其中T1期为0(0／31)，T2期为12．5％(2／16)，T3期为77．8％(7／9)，T4期为100％(7／7)，CK20阳性表达率随分期增加而增加，T3～4期明显高于T1期和T2期。对T1～3期33例患者随访6个月，其中外周血CK20阴性表达26例未发现远处转移；外周血CK20阳性表达7例中2例发生远处转移。结论：检测外周血CK20表达，可以提示癌细胞的血行播散，对判断预后以及指导治疗具有一定临床价值。     

实时荧光定量RT—PCR检测乳腺癌患者外周血CK19及hMAMmRNA表达的临床意义

目的动态监测乳腺癌患者外周血液中CK19及hMAMmRNA的表达,探讨其临床意义。方法应用实时荧光定量PCR技术,动态检测40例经病理证实的乳腺癌及10例健康对照组外周血液中CK19及hMAM的表达。结果40例乳腺癌循环血液中CK19及hMAM的表达显著高于正常人群。在治疗过程中,乳腺癌患者循环血液中上述指标表达的阳性率呈下降趋势。不同分期乳腺癌在治疗前、中期的表达无显著性差异,但在治疗后期不同分期乳腺癌表达的阳性率差异有统计学意义（CK19：P=0．044;hMAM：P=0．005）,对持续阳性的乳腺癌患者,其复发转移率较高,差异有显著性统计学意义（P〈0．001）。结论实时荧光定量PCR技术可检测出各期乳腺癌患者外周血中CK19及hMAM的表达,有较高的敏感性和特异性,在判断乳腺癌预后、监控复发中的应用具有一定的可行性。     

SBEM、hMAM及CK19预测乳腺癌外周血微转移的临床价值

目的：探讨生物学标志物乳腺上皮小黏蛋白（ SBEM ）、乳腺珠蛋白（ hMAM ）和细胞角蛋白19（ CK19）在乳腺癌患者外周血循环中的表达及其作为乳腺癌外周血微转移预测指标的价值。方法采用巢式PCR技术,检测47例乳腺癌患者和45例乳腺良性瘤患者外周血有核细胞中SBEM、hMAM和CK19的表达;采用半定量PCR技术10例乳腺癌及对应的癌旁组织以及10例乳腺良性肿瘤组织中SBEM、hMAM和CK19的表达。结果 SBEM和hMAM在乳腺癌组患者外周血中表达率高于乳腺良性肿瘤组患者（ P＜0．05）,而两组外周血CK19表达率差异无统计学意义（P＞0．05）。 SBEM、hMAM和CK19在乳腺癌组织、癌旁组织及乳腺良性肿瘤组组织中均呈高表达,3组患者hMAM和CK19表达量没有差异（ P＞0．05）, SBEM在癌组组织中表达量低于癌旁组织及乳腺良性肿瘤组织组（ P＜0．05）。结论 SBEM、hMAM、CK19在乳腺组织中呈稳定高表达,作为乳腺癌外周血微转移生物学标志物灵敏性高,但缺乏特异性,联合检测可提高特异性。     

大肠癌患者外周血中癌细胞角蛋白20的检测

目的：以逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）检测外周血大肠癌细胞,探讨大肠癌患者外周血中癌细胞存在的临床意义。方法：应用RT－PCR方法检测47例没Dukes分期结肠癌患者及其肝转移患者外周血中大肠癌细胞角蛋白20（CK20）,并以大肠癌组织（20例）和正常健康人外周血（20例）为对照。结果：正常健康人外周血中未见CK20mRNA表达,大肠癌患者外周血中CK20 mRNA检出率达40.4％（19／47）,Dukes B,C,D期患者外周血CK20 mRNA检出率分别为20.5％（5／20）,41.2％（7／17）和87.5％（7／8）,（P＜0.05）。肝转移患者CK20 mRNA检出率为87.5％（7／8）,无肝转移患者检出率为30.8％（12／39）（P＜0.01）。结论：CK20可作为肿瘤标志物,用于检测外周血中的大肠癌细胞,预测肿瘤复发及转移,识别高危患者。     

实时定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA水平及其临床价值

目的：以细胞角蛋白19（CK19）mRNA作为基因标志，建立实时定量RT—PCR方法（QRT—PCR）检测乳腺癌患者外周血中播散的肿瘤细胞，并探讨其在乳腺癌微转移监测及预后预测中的临床应用价值。方法：采用QRT—PCR方法．检测102名正常献血员、177例乳腺原发癌患者及12例有远处转移的乳腺癌患者外周血有核细胞的CK19 mRNA水平。结果：正常对照组、原发乳腺癌组及远处转移组CK19 mRNA的中位数分别为67、542和1082。原发乳腺癌组与另外两组比较，CK19 mRNA平均水平差异具有显著性（P〈0．05）；以正常对照组CK19 mRNA的最大值497拷贝／ml血作为阳性阈值。原发乳腺癌患者外周血肿瘤细胞阳性检出率为52．0％，与正常对照组（0）比较差异具有显著性（P〈0．05），远处转移组肿瘤细胞阳性检出率（83．3％）显著高于r原发乳腺癌组（P〈0．05）；原发性乳腺癌患者外周血CK19 mRNA水平及肿瘤细胞阳性率在临床病理因素各组间差异无显著性，但随着临床分期的增加，患者外周血CK19 mRNA水平呈递增趋势。结论：QRT—PCR方法定量检测乳腺癌患者外周血CK19 mRNA水平可早期发现血行播散的肿瘤细胞，应用于临床可指导个体化治疗方案的选择和疗效的动态监测，同时有望成为有价值的预后预测指标。     

动态检测乳腺癌患者外周血中CK19表达的临床研究

目的动态检测乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19（cytokeratin 19,CK19）的表达并探讨其临床意义。方法应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）动态检测32例乳腺癌、10例乳腺良性疾病及10例健康人外周血CK19的表达。结果32例乳腺癌患者外周血CK19阳性的总表达率为29.73%;外周血CK19的表达与TNM分期呈显著相关（P〈0.05）;与肿瘤大小、淋巴结有无转移、HER-2、ER、PR的表达均无相关性（P〉0.05）;IV期与I、II、III期之间有统计学意义。CK19表达预测远处转移敏感性高达100%,特异性为96.3%;10例良性患者及10例健康人外周血均无CK19表达。结论乳腺癌患者外周血CK19可以作为检测乳腺癌远处转移的敏感特异性指标。     

实时荧光定量PCR法检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的临床价值

目的:比较运用实时荧光定量PCR法联合不同生物标志物细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK19)?乳珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)?小黏蛋白(small breast epithelial mucin,SBEM)检测乳腺癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)的临床价值?方法:运用实时荧光定量PCR法检测人乳腺癌细胞株MCF-7中的生物标志物CK19?hMAM?SBEM的表达情况,对20例健康志愿者和20例乳腺良性疾病患者(对照组人群)进行检测以确定CK19?hMAM?SBEM在外周血中的基础表达水平,检测94例可手术乳腺癌患者外周血中CK19?hMAM?SBEM表达情况?结果:人乳腺癌细胞株MCF-7中CK19?hMAM?SBEM均有表达,Ct值分别为13.87?34.47?20.14;40例对照组人群中有1例表达CK19,另有1例表达hMAM,未检测到SBEM表达;94例可手术乳腺癌患者中CK19表达率49%?hMAM表达率34%?SBEM表达率13%,联合CK19?hMAM?SBEM阳性率为56%?结论:运用多标志物(CK19?hMAM?SBEM)联合的实时荧光定量PCR法检测乳腺癌外周血CTCs具有较高的敏感性,同时特异性并不降低?     

改良IME-FICC方法对乳腺癌外周血微转移的检测

【目的】探讨一种改良IME-FICC（免疫磁珠富集-免疫荧光细胞化学）法检测乳腺癌外周血微转移癌细胞及其意义。【方法】通过与磁珠共价结合的表皮细胞黏附分子（EpCAM）抗体富集外周血中表达EpCAM的癌细胞，结合免疫荧光化学法检测细胞角蛋白（CK）8／18阳性的癌细胞（呈绿荧光）。放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本方法癌细胞回收率及敏感度，检测20例正常女性志愿者及12例Ⅳ期乳腺癌患者治疗前的外周血标本，探索其特异性及临床应用可行性。【结果】免疫磁珠富集后癌细胞回收率达86％～93％．可在10^7外周血单个核细胞中检测到1个癌细胞，特异性为100％。Ⅳ期乳腺癌患者外周血中CK8／18阳性细胞检出率75％。【结论】改良IME-FICC法是一种简便、省时、敏感性及特异性高的检测方法，有较大的临床应用前景。     

CK20 mRNA在大肠癌患者外周血中阳性表达的临床意义

目的：研究大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，探讨CK20 mRNA阳性表达与肿瘤病理指标的关系，观察大肠癌患者手术前、后外周血中CK20 mRNA表达的变化情况。方法：采用巢式逆转录多聚酶链反应（RT－PCR）的方法，对大肠癌42例、原发性肝细胞肝癌5例、对照组（非癌肿）10例患者手术前、后不同时间外周血中肿瘤细胞的靶基因CK20 mRNA表达进行检测。结果：对照组（非癌肿）10例及原发性肝细胞肝癌5例手术前、后外周血中CK20 mRNA均为阴性表达。大肠癌组42例，手术前外周血中CK20 mRNA阳性表达率为50．0％（21／42），手术后48h外周血中CK20 mRNA阳性表达率为59．5％（25／42）。大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达率与肿瘤细胞病理分化程度无关，与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移有关。结论：大肠癌患者外周血中CK20 mRNA的阳性表达可作为肿瘤细胞血行播散的标志，有助于判断大肠癌的预后及鉴别原发性肝细胞肝癌和大肠癌肝转移。手术操作会促使肿瘤细胞向血液中播散，手术过程中应加强预防措施以减少癌细胞的播散。     

乳腺癌患者外周血中角蛋白19 mRNA,乳腺小粘蛋白mRNA和泌乳素诱导蛋白mRNA的检测及其临床意义

目的:研究乳腺癌患者外周血中角蛋白(CK)19mRNA,乳腺小粘蛋白(SBEM)mRNA和泌乳素诱导蛋白(PIP)mRNA的表达,并探讨三者在微转移检测中的意义。方法:用RT-PCR检测乳腺癌患者50例、结直肠癌20例、乳腺良性肿瘤21例、健康者20例外周血中的CK19mRNA、SBEM mRNA、PIP mRNA。结果:CK19mRNA在乳腺癌组的阳性率(36.0%)明显高于乳腺良性肿瘤组(0.0%,P<0.05)与健康者(0.0%,P<0.05)。SBEM mRNA、PIP mRNA在乳腺癌组的阳性率(28.0%、18.0%)明显高于其它3组(0.0%,P<0.05)。联合检测3个基因,可将阳性率提高到62.0%。结论:乳腺癌患者外周血中的SBEM mRNA、PIP mRNA均可能作为微转移标志物;而CK19mRNA作为乳腺癌微转移标志物的特异性尚待探讨;联合检测三者可提高乳腺癌外周血微转移的检出率。     

乳腺癌患者外周血CK19基因表达的检测及临床价值分析

目的探索外周血CK19基因表达的检测及在乳腺癌诊断中的应用价值。方法应用逆转录结合荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测乳腺癌MDA-MB453细胞株血液标本模型和280例临床标本的CK19表达,同时检测三磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)表达作为PCR方法的监控指标。结果逆转录结合FQ-PCR检测MDA-MB453细胞株血液标本模型的灵敏度为107个血细胞中含1个乳腺癌细胞的水平。280例外周血临床标本的CK19表达,乳腺癌组(38/120)与非乳腺癌组(20/80)比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌组(38/120)与正常对照组(2/80)比较,差异有统计学意义(P<0.01);乳腺癌淋巴结转移组(21/53)与未见淋巴结转移组(17/67)比较,差异无统计学意义(P>0.05);乳腺癌术后2年以上者,复发组(3/9)与未复发组(6/31)比较,差异也无统计学意义(P>0.05)。GAPDH表达均阳性。结论CK19是上皮细胞性癌细胞的较特异指标,诊断乳腺癌的特异性不强,但可用作病理学检查的补充,或结合其他特异性指标共同诊断乳腺癌微转移和复发,具有一定的价值。     

CK19和CEA mRNA表达与乳腺癌外周血微转移的相关性研究

目的 检测乳腺癌患者外周血中细胞角蛋白19(CK19)和癌胚抗原(CEA)mRNA的表达,探讨其表达是否可作为判断外周血微转移及预后的分子生物学指标.方法 采用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测45例术前乳腺癌患者及30例乳腺良性病变患者外周血中CK19和CEA mRNA的表达情况.结果 CK19和CEA mRNA在乳腺癌患者血清中阳性率分别为62.2%和53.3%,在30例乳腺良性患者血清中CK19 mRNA阳性率为3.3%,无CEA mRNA表达.乳腺癌患者和良性肿瘤患者血清中CK19、CEA mRNA表达阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.01).CK19和CEA mRNA阳性率与临床分期、淋巴结转移均有关,二者表达呈正相关(P＜0.01).结论 乳腺癌患者外周血中CK19和CEA mRNA表达与临床分期密切相关,提示两项指标有望预测乳腺癌外周血微转移和判断预后.     

巢式PCR检测胃癌患者外周血CK19 mRNA的临床意义

目的：对外周血CK19 mRNA基因表达的检测,探讨对胃癌患者微转移的诊断价值。方法：采用巢式RT-PCR方法检测63例胃癌患者,20例健康志愿者外周血CK19 mRNA的表达情况。结果：胃癌患者外周血中CK19 mRNA的阳性检出率为36.5%,并与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度有关（P〈0.05）,而与年龄、性别、肿瘤分化程度、肿瘤大小、有无淋巴结转移无关（P〉0.05）,而健康志愿者外周血中CK19 mR-NA无1例阳性表达。结论：CK19 mRNA可以作为判断胃癌患者外周血微转移的肿瘤标志物。     

大肠癌组织血管生成与患者外周血CK20mRNA表达的临床研究

目的观察大肠癌组织中微血管密度、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达与大肠癌患者外围血癌细胞微转移的关系.方法采用S-P免疫组织化学法检测了58例大肠癌组织中的微血管密度(MVD)和VEGF的表达,用巢式RT-PCR法检测了大肠癌患者外周血中癌细胞微转移情况并分析其与病理指标的关系.结果 58例大肠癌组织中35例高中分化MVD计数为30.2±12.7,低分化大肠癌23例MVD计数为86.6±19.1;26例大肠癌组织中VEGF呈阳性染色(44.8%).MVD计数及VEGF阳性表达与大肠癌分化程度、Dukes分期、有无区域淋巴结转移及远处转移密切相关(P<0.05或P<0.01).58例大肠癌患者外周血中32例CK20mRNA阳性表达(32/58),术后48 h有35例阳性表达(35/58),其中根治性切除组有21例阳性表达(21/44),非根治性手术组12例阳性表达(12/14),21例根治性切除患者术后7～14 d有11例转为阴性,12例非根治性切除患者术后7～14 d有11例阳性表达.CK20mRNA阳性表达与大肠癌病理分化程度无关,但与Dukes分期、区域淋巴结转移及远处转移情况相关(P<0.01).CK20mRNA阳性表达患者大肠癌组织中MVD计数(88.5±15.1)与VEGF阳性表达率(65.6%)明显高于CK20mRNA阴性表达患者的MVD计数(31.0±12.9)和VEGF阳性表达率(19.2%)(分别P<0.01,P<0.001).结论大肠癌组织中MVD和VEGF阳性表达与大肠癌的病理分化程度、Dukes分期、淋巴结及远处转移情况相关.大肠癌组织血管生成与周围静脉血中癌细胞微转移情况密切相关.CK20mRNA的检测对大肠癌预后判断、疗效评估及指导综合治疗有重要意义.     

乳腺癌患者外周血癌胚抗原及细胞角蛋白19 mRNA表达的临床意义

目的 探讨细胞角蛋白19(CK19)mRNA、癌胚抗原(CEA)mRNA的表达在诊断乳腺癌患者外周血微转移的临床意义及与临床病理指标的关系.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)法,测定28名健康女性志愿者、20例良性乳腺疾病患者、108例乳腺癌患者(88例行手术切除乳腺癌患者、20例复发转移乳腺癌患者)的外周血中CK19、CEA mRNA的表达.以上有一项为阳性即判定为转移.结果 28名健康对照者CK19 mRNA和CEA mRNA两个指标检测结果均为阴性.20例良性乳腺疾病患者中,CK19 mRNA阳性1例(5%),无CEA mRNA表达阳性者.108例乳腺癌患者中,26例(24.1%)CK19 mRNA阳性,23例(21.3%)CEA mRNA阳性,15例(13.9%)两者均阳性.在108例乳腺癌患者中,复发转移乳腺癌患者CK19 mRNA和(或)CEA mRNA的表达高于行手术切除乳腺癌患者.88例行手术切除乳腺癌患者外周血微转移阴性组、阳性组在肿瘤大小、病理分期、kI67,细胞黏附分子CD44变异型v6(CD44v6),血管内皮生长因子(VEGF)表达方面差异有统计学意义(P<0.05),但在年龄、肿瘤位置、病理组织学类型、淋巴结转移、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、CerbB2、基质金属蛋白酶9(MMP9)表达等方面差异无统计学意义(P>0.05).多因素分析表明肿瘤大小、病理分期、kI67、CD44v6、VEGF与患者外周血微转移有关.结论 联合检测CK19mRNA和CEA mRNA可提高乳腺癌患者外周血微转移的检出率.肿瘤大小、病理分期、kI67、CD44v6、VEGF可评估乳腺癌患者外周血微转移风险.