侧脑室注射链脲霉素引起大鼠脑Aβ1-40、Aβ1-42和tau202、tau396、tau404表达增加

目的 探讨用链脲霉素(Streptozotocin,STZ)阻断脑内胰岛素信号传导,引起脑能量代谢障碍与Aβ表达及tau蛋白过度磷酸化的关系。方法 24只SD大鼠随机分为实验组和生理盐水组,实验组双侧侧脑室注入STZ3mg/kg,第3天重复此剂量;生理盐水组手术操作相同,但注入等量的生理盐水代替STZ。21d后,采用免疫组化方法观测各组大鼠大脑皮层和海马区的Aβ_1-40、Aβ_1-42、tau³⁹⁶、tau⁴⁰⁴阳性细胞表达。结果 与生理盐水组相比,实验组皮层和海马Aβ_1-40、Aβ_1-42、tau²⁰²、tau³⁹⁶、tau⁴⁰⁴阳性细胞明显增多。结论 侧脑室注射STZ可以引起脑内Aβ表达增多和tau蛋白过度磷酸化。     

人参糖肽的结构及其对Aβ25-35处理PC12细胞的抗凋亡作用

目的：研究人参糖肽的结构,探讨其对β淀粉样蛋白_25-35（Aβ_25-35）处理PC12细胞凋亡的保护作用,为开发人参抗阿尔茨海默病（AD）药物奠定理论基础。方法：采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）与Q ExactiveOrbitrap质谱联用分析人参糖肽结构。将鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞分为6组,加入含不同浓度（0、6.25、12.50、25.00、50.00和100.00 μmol·L^-1） Aβ_25-35的培养基,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法测定PC12细胞的存活率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.03、0.10、0.30和1.00 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基。采用CCK-8法测定PC12细胞的存活率,采用Annexin Ⅴ-FITC/PI法测定人参糖肽和Aβ_25-35处理后PC12细胞的凋亡率。将PC12细胞分为空白对照组、模型组和人参糖肽给药组,模型组加入含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,给药组加入不同浓度（0.10和0.30 g·L^-1）人参糖肽和含有50.00 μmol·L^-1Aβ_25-35的培养基,采用流式细胞术测定不同细胞周期PC12细胞的百分比。结果：人参糖肽结构分析得到肽链为NLSHYHSGSS、糖基为N1-HexNAc,肽链为SGSSSSSSSEDDGMGR、糖基为S6-HexNAc等20多个人参糖肽结构。当Aβ_25-35浓度为50 μmol·L^-1时,PC12细胞存活率为（55.45±2.34）%;与空白对照组比较,不同浓度Aβ_25-35处理组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞存活率明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率升高（P<0.01）;与模型组比较,给药组细胞凋亡率降低（P<0.05）。与空白对照组比较,模型组S期PC12细胞百分比升高（P<0.05）;与模型组比较,给药组S期PC12细胞百分比降低（P<0.05）。结论：利用质谱法分析得到人参糖肽结构。人参糖肽可有效抑制Aβ_25-35处理PC12细胞的凋亡,具有神经细胞保护作用,其抗凋亡活性作用可能与抑制细胞S期阻滞有关。     

人Aβ42重组抗原的融合表达及Aβ抗体的检测

目的 原核表达β-淀粉样蛋白(Aβ₄₂)抗原,建立检测Aβ抗体的间接ELISA技术。方法 化学合成Aβ₄₂基因两个互补片段,通过PCR构建人Aβ₄₂基因,克隆至pGEX-2T表达载体中,原核表达并亲和纯化GST-Aβ₄₂融合蛋白。Westernblotting检测其抗原特异性。以GST-Aβ₄₂和Aβ₄₂肽分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂免疫的大鼠血清中Aβ抗体。结果 原核表达的可溶性GST-Aβ₄₂融合蛋白相对分子质量为31000,经亲和纯化后,融合蛋白产量为800mg/L菌液,纯度大于95%;Westernblotting证实纯化的融合抗原与Aβ单抗特异反应;以GST-Aβ₄₂为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ抗体灵敏度为2ng/ml;以GST-Aβ₄₂和化学合成的Aβ₄₂分别为包被抗原,间接ELISA法检测Aβ₄₂肽免疫大鼠血清中Aβ抗体滴度,两者比较差异无显著性(P>0.05)。结论 原核表达的GST-Aβ₄₂融合蛋白可替代昂贵的化学合成的Aβ₄₂肽抗原,用于检测Aβ抗体。     

瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)在SGC-7901细胞增殖中的作用

目的 探讨瞬时受体电位通道蛋白6(TRPC6)与SGC-7901细胞增殖的关系。方法 体外培养SGC-7901细胞,以是否加入TGF-β₁分为对照组和实验组。根据实验组是否加入SKF96365抑制剂分为TGF-β₁和TGF-β₁+SKF96365组。免疫荧光染色观察TRPC6在对照和TGF-β₁组的表达。Western blot方法检测TRPC6和增殖指标在对照组、TGF-β₁组和TGF-β₁+SKF96365组中的变化。结果 与对照组相比,TRPC6蛋白在TGF-β₁组中表达升高(P＜0.05)。抑制TRPC6蛋白表达,增殖指标在TGF-β₁+SKF96365组表达明显降低(P＜0.01)。结论 抑制TRPC6蛋白表达可降低SGC-7901细胞增殖能力。     

迷迭香酸通过激活Nrf2/HO-1通路对Aβ1-42所致星形胶质细胞损伤的保护作用

目的 探讨迷迭香酸（RA）对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及炎症因子释放的抑制作用,并阐明其相关机制。 方法 原代培养星形胶质细胞,将细胞分为对照组,Aβ_1-42组（5 μmol?L^－1）,不同浓度（20,50和100 μmol?L^－1）RA+Aβ_1-42组,核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）组,ML385+RA+Aβ_1-42组。星形胶质细胞以不同浓度（20、50和100 μmol?L^－1）RA预处理24 h,再给予终浓度5 μmol?L^－1Aβ_1-42处理24 h,ML385组在加入RA前先加入终浓度10 μmol?L^－1 ML385预处理6 h。MTT法检测各组细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH释放率,酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Griess法检测各组细胞培养液中一氧化氮（NO）水平,免疫荧光法检测各组细胞中胶质原纤维酸蛋白（GFAP）和Nrf2表达情况,Western blotting法检测各组细胞中GFAP、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与Aβ_1-42组比较,不同浓度RA+Aβ_1-42组细胞活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显降低（P<0.01）,GFAP荧光强度明显减弱, Nrf2荧光强度明显增强,细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与RA（50 μmol?L^－1）+Aβ_1-42组比较,ML385+RA+Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 RA对Aβ_1-42诱导的星形胶质细胞炎症因子和NO释放有抑制作用,使星形胶质细胞免受损伤,该保护作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

利用SPR检测26肽与β1-肾上腺素受体自身抗体的相互作用

目的 探讨根据β₁肾上腺素受体细胞外第二环（β₁-adrenergic receptor,β₁-AR-EC_Ⅱ）的氨基酸序列合成的26肽与β₁-肾上腺素受体β₁-AR-EC_Ⅱ的单克隆抗体（β₁-adrenergic receptor autoantibodies,β₁-AA）的相互作用。方法 根据人β₁-肾上腺素受体细胞外第二环（β₁-AR-EC_Ⅱ）的氨基酸序列合成26肽;采用杂交瘤细胞融合的方法获得针对β₁-AR-EC_Ⅱ的单克隆抗体（β₁-AA）;利用表面等离子共振（surface plasmon resonance,SPR）检测该合成的26肽与β₁-AA的亲和力;利用乳鼠心肌细胞跳动频率实验验证该合成26肽对β₁-AA的中和作用。结果 提取的β₁-AA可以使乳鼠心肌细胞跳动频率增加（P<0.05）,提示该β₁-AA具有生物学活性;合成26肽与β₁-AA结合的亲和力（K_D）为4.44 μmol/L,属于中等强度结合;较β₁-AA组相比,26肽处理后可明显降低心肌细胞跳动频率（P<0.05）。结论 该合成26肽与β₁-肾上腺素受体自身抗体之间存在相互作用,并且可以拮抗β₁-AA引起的乳鼠心肌细胞跳动频率的增加。     

乙酰葛根素对Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞Caspase-3表达的影响

目的 探究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白(Aβ_25-35)诱导BV-2小胶质细胞形态及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达的影响。方法 用凝聚态Aβ_25-35诱导体外培养的BV-2小胶质细胞作为阿尔茨海默病炎症细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、Caspase-3抑制剂(Z-DEVD-fmk)组以及乙酰葛根素低(0.1 μmol/L)、中(0.4 μmol/L)、高(1.6 μmol/L)剂量共6组,采用倒置相差显微镜观察小胶质细胞形态变化,应用Western blotting检测Caspase-3蛋白表达水平。结果 形态学结果显示,Aβ_25-35可激活小胶质细胞使其由静息态变为阿米巴样,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素可改善Aβ_25-35诱导的小胶质细胞形态改变。Western blotting结果显示,与对照组相比,模型组Caspase-3表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,Caspase-3抑制剂、乙酰葛根素各剂量组Caspase-3表达均显著降低(P<0.01);与Caspase-3抑制剂组相比,乙酰葛根素低、中剂量组Caspase-3表达均显著升高(P<0.01),高剂量组则无统计学意义。结论 乙酰葛根素可抑制Aβ诱导BV-2小胶质细胞激活,其机制可能与降低Caspase-3表达有关,且以高剂量组效果较好。     

TGF-β1和Ⅳ型胶原在慢性移植肾病患者肾组织中的表达及意义

目的 研究转化生长因子β₁(TGF-β₁)和Ⅳ型胶原在慢性移植肾病(CAN)患者肾组织中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学技术及计算机图像分析系统,观测19例CAN患者移植肾组织中TGF-β₁和Ⅳ型胶原的表达情况,分析两者间及与CAN病理分级之间的关系.结果 CAN移植肾组织中TGF-β₁和Ⅳ型胶原的表达比正常肾组织明显增加(P<0.001),并随CAN病理分级呈逐渐递增的趋势;与正常肾组织相比TGF-β₁和Ⅳ型胶原在CAN患者肾小球和肾小管间质中的表达呈正相关(r=0.94,P<0.001及r=0.910,P<0.001).结论 Ⅳ型胶原的异常沉积是CAN患者移植肾纤维化的重要表现,TGF-β₁可能通过调控Ⅳ型胶原等成分的变化在CAN移植肾的纤维化进程中起重要作用.     

北五味子酸性多糖对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力的改善作用

目的：观察北五味子酸性多糖（SCP-A）对Aβ_25-35致阿尔茨海默病（AD）模型小鼠学习记忆能力的改善作用,并阐明其相关机制。方法：75只雄性C57BL小鼠随机分为空白组（侧脑室注射生理盐水,灌胃蒸馏水）,模型组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃蒸馏水）,5、10和20 mg·kg^-1 SCP-A组（侧脑室注射Aβ_25-35,灌胃SCP-A）,每组15只。灌胃药物每日1次,连续14 d,于第8天给予Aβ_25-35进行侧脑室注射。给药完毕后,第15天依次进行避暗实验及Morris水迷宫实验观察小鼠的潜伏期、错误次数、找到平台时间、穿越平台次数和目标象限停留时间,Western blotting法检测小鼠海马组织中Tau蛋白、糖原合成酶激酶3（GSK-3β）及其磷酸化蛋白的表达水平。结果：避暗实验,与空白组比较,模型组小鼠潜伏期明显缩短,错误次数明显升高（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠潜伏期明显延长（P<0.01）,错误次数明显减少（P<0.05或P<0.01）。Morris水迷宫,与空白组比较,模型组小鼠找到平台时间明显延长（P<0.01）,穿越平台次数及目标象限停留时间明显缩短（P<0.01）;与模型组比较,10和20 mg·kg^-1 SCP-A组小鼠找到平台时间明显缩短（P<0.01）,穿过平台次数及平台区域停留时间明显增加（P<0.01）。Western blotting法检测,与模型组比较,20 mg·kg^-1SCP-A组小鼠海马组织中磷酸化蛋白Tau Ser199、Tau Ser396及Tau Ser404表达水平明显降低（P<0.05）,GSK-3β表达水平明显降低（P<0.01）,磷酸化蛋白GSK-3β Tyr216相对表达水平明显降低（P<0.05）,磷酸化蛋白GSK-3β Ser9相对表达水平明显升高（P<0.05）。结论：SCP-A具有抗AD作用,该作用与其调节GSK-3β活性进而降低海马组织中Tau蛋白磷酸化水平有关。     

PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素在Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应

目的 探讨程序性死亡受体-1(PD-1)单克隆抗体联合血管内皮抑素对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应。 方法 构建Lewis肺癌C57BL/6小鼠移植瘤模型,随机分为4个组:PBS对照组(A组)、PD-1单克隆抗体组(B组)、血管内皮抑素组(C组)、PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素组(D组)。测量小鼠肺内肿瘤体积,ELISA检测小鼠血浆中INFγ的含量,免疫组织化学染色检测肿瘤组织的CD31和VEGF。 结果 与A组相比,B组、D组肿瘤生长受到明显抑制(P均<0.001),C组肿瘤虽有缩小但差异无统计学意义(P=0.084);与A组相比,B、C、D组血浆中INFγ的浓度明显升高(P均<0.001),D组升高最为明显;与A组相比,D组小鼠肿瘤组织中VEGF的阳性表达最低(P<0.001);MVD计数D组降低,与A组相比(P<0.001),D组与B组相比(P=0.019),D组与C组相比(P<0.001)。 结论 PD-1单克隆抗体联合血管内皮抑素治疗明显减缓肿瘤生长速度,有效改善肿瘤微环境,有明显协同抗肿瘤作用。     

依达拉奉对急性脑梗死患者血清Aβ1—40、Aβ1—42水平的影响

目的探讨依达拉奉治疗对脑梗死患者血清Aβ（1-40）、Aβ（1-42）的影响。方法选择脑梗死患者64例,将其分为依达拉奉组及对照组,每组32例,依达拉奉组给予静脉滴注依达拉奉30mg／日,每日2次,共治疗14天;对照组不使用依达拉奉,其他治疗相同。两组患者分别于治疗前、治疗后3周、治疗后6周抽取静脉血进行Aβ（1-40）、Aβ（1-42）水平检测,将检测结果进行统计学分析。结果治疗前依达拉奉组血清Aβ（1-40）为1．87±0．39．对照组血清Aβ（1—40）为1．83±0．41,两组间无显著差异（P=0．691）。治疗前依达拉奉组血清Aβ（1-42）为1．43±0．26,对照组血清Aβ（1—42）为1．45±0．29（P=0．675）,治疗后3、6W,依达拉奉组Aβ（1-40）水平逐步降低（1．79±0．35VS1．34±0．21,P〈0．05）。依达拉奉组Aβ（1—42）于治疗后3W升高（1．61±0．32,P〈0．05）。对照组Aβ（1-40）和Aβ（1—42）水平无显著改变（P〉0．05）。治疗前两组Aβ（1-40）／Aβ（1-42）比率无差异（依达拉奉组1．365,对照组1．314,P=0．582）,治疗后3、6W依达拉奉组Aβ（1-40）／Aβ（1-42）比率逐步降低（1．17,0．89）,对照组Aβ（1-40）／Aβ（1-42）比率于治疗后3W明显增高（1．58,P=0．048）,其后下降,但仍大于治疗前水平。结论依达拉奉可以降低急性脑梗死后血清Aβ（1-40）水平,降低血清Aβ（1—40）／Aβ（1-42）比率。     

芍药苷神经保护作用的实验研究

目的观察芍药苷（PF）的神经保护作用,为阿尔茨海默病（AD）的防治提供理论依据。方法体外培养PC12细胞,用Aβ1-40诱导α7nAChR缺失,建立AD早期细胞模型;用不同浓度（50、100和200μM）的芍药苷预处理,光镜观察细胞形态,MTT比色法测定细胞活性,MTB比色法测定细胞内Ca2＋含量,免疫细胞化学法观察α7nAChR的表达情况。结果芍药苷预处理组细胞活性、α7nAChR平均灰度值（AVG）均随芍药苷浓度的增加而增加,且Aβ1-40＋PF100μM组和Aβ1-40＋PF200μM组增加明显（P〈0.05）;芍药苷预处理组细胞内Ca2＋含量均降低（P〈0.05）。结论芍药苷抑制细胞内Ca2＋超载和Aβ1-4040的神经毒性作用,改善PC12细胞的活性,保护α7nAChR,是其防治AD的重要机制。     

Effect of insulin on the cognizing function and expression of hippocampal Aβ1-40 of rat with Alzheimer disease

Background A model of simulated Alzheimer＇s disease （AD） induced by aggregated amyloid protein （Aβ1-40） was built in Wister rats to observe the behavioral and pathological changes of Aβ1-40 and the effect of hypodermic insulin injected on the function of study and memory and the expression of Aβ1-40 from the CA1 area of the hippocampus. Methods Experimental groups were as follows： contrast, simulated AD model, contrast of Nacl, and insulin treated. The simulated AD model was built by microinjection of aggregated Aβ1-40 at the CA1 area of the hippocampus, and was hypodermically injected with 0.9% NaCI （1 ml/kg） and insulin （0.1 U/kg） separately the next day. Two weeks after the modeling, the four groups were tested with water maze about the study and memory function of rats. Three weeks after the injection, the expression of Aβ1-40 at the CA1 area of the hippocampus was examined by pathological tests （HE, Congo red） and immunohistochemical methods. Results The study and memory abilities of rats were ameliorated significantly by the place navigation test and the spatial probe test after the application of insulin. Insulin could decrease the expression of Aβ1-40 at the CA1 area of the hippocampus to reduce the pathological damage of Aβ1-40 to the hippocampal area of rats. Conclusions The injection of aggregated Aβ1-40 to the hippocampal area could simulate the behavioral and pathological features of AD such as the difficulty of study and memory and the damage to neurons. Insulin is effective to improve the function of study and memory and amend the pathological damage of simulated AD model rats. The results give a experimental proof of insulin in the clinical treatment of AD.     

可溶性Aβ1-42寡聚体双侧海马注射对大鼠认知功能的影响

目的:探讨可溶性Aβ1-42寡聚体双侧海马CA1区注射是否对Wistar大鼠认知功能具有损害作用。方法:雄性Wistar大鼠40只随机分为空白对照组(Intact group)、假手术组(Sham group)、溶剂对照组(Vehicle group)、Aβ组(Aβgroup)4组,空白对照组不做任何处理,假手术组仅行双侧海马CA1区插管,溶剂对照组对双侧海马CA1区注射与Aβ组等体积的灭菌双蒸水(dd H2O),Aβ组给双侧海马CA1区注射可溶性Aβ1-42寡聚体;注射后两周用Morris水迷宫检测各组行为学表现。结果:Aβ注射可以明显增加大鼠逃避潜伏期与上台前路程(P<0.01),对大鼠平均游泳速度无影响,而Intact、Sham、Vehicle组之间差异无统计学意义(P>0.05);空间探索实验结果显示,Aβ注射可明显减小大鼠目标象限时间百分比(P<0.01)与穿越平台次数(P<0.05)。结论:双侧海马CA1区注射可溶性Aβ1-42寡聚体对大鼠认知功能有明显损害作用。     

泰唑巴坦关键中间体的合成研究

目的　改进β-内酰胺酶抑制剂泰唑巴坦关键中间体2α-甲基-2β[(1,2,3-三唑-1-基)-甲基]青霉烷酸砜二苯甲酯(Ⅰ)的合成。方法　将2α-甲基-2β-氯甲基-青霉烷酸二苯甲酯(Ⅱ)与1,2,3-三唑直接反应,再经氧化,成功地合成了Ⅰ。结果　对本合成路线中关键步骤的反应条件进行了优化,提出了可能的反应机理。结论　该研究结果　为提高合成泰唑巴坦的收率奠定了基础。     

乙酰葛根素对 Aβ25-35诱导BV-2小胶质细胞活性的影响

目的：研究乙酰葛根素对β淀粉样蛋白（ Aβ25-35）诱导的BV-2小胶质细胞活性的影响。方法体外培养BV-2小胶质细胞,用Aβ25-35诱导小胶质细胞建立AD细胞模型,加入不同浓度的乙酰葛根素,显微镜下观察细胞的形态变化;MTT法检测细胞的存活率;ELISA法检测细胞中IL-1β,TNF-α的含量。结果 Aβ诱导后小胶质细胞由分枝状的静息状态转变为阿米巴样的激活状态,而乙酰葛根素可以减轻细胞发生的变化,细胞状态介于空白组与模型组之间;MTT显示乙酰葛根素不会对小胶质细胞的存活率产生影响;ELISA结果显示,与空白组相比,模型组的IL-1β,TNF-α表达水平明显升高,而乙酰葛根素能够降低Aβ诱导IL-1β,TNF-α的表达水平。结论乙酰葛根素能够抑制Aβ25-35诱导的小胶质细胞激活减轻炎性因子的分泌,对阿尔茨海默病具有保护作用。     

阿尔茨海默病大鼠模型复制的实验研究

目的:探讨阿尔茨海默病大鼠模型的复制方法.方法:大鼠腹腔注射D-半乳糖(D-Gal)造成急性衰老,同时大鼠双侧海马内缓慢一次性注射β淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)和Ibo的混合液来制作阿尔茨海默病大鼠的模型.结果:光镜观察可见模型组大鼠海马神经细胞之间有大量的老年斑(SP)沉积和神经纤维缠结(NFT)形成,大鼠行为学检测结果提示:模型组大鼠与正常组大鼠相比平均逃避潜伏期明显延长.结论:腹腔注射D-Gal,双侧海马内注射Aβ1-42和Ibo混合液,能引起大鼠学习记忆能力下降,并使神经组织中出现SP及NFT,是现在较为理想的阿尔茨海默病动物模型的复制方法.     

白藜芦醇对高脂饮食去卵巢肥胖大鼠脑组织炎症反应及海马Aβ1-42水平的影响

目的 探讨白藜芦醇对高脂饮食去卵巢肥胖大鼠海马组织炎症反应及β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)水平的影响.方法 健康3月龄Wistar雌性大鼠30只随机分为假手术普通饮食组(SHAM组)、去卵巢高脂饮食组(OH组)、白藜芦醇[40 mg/(kg·d)-1]干预组(OHR组).相应干预3个月后检测大鼠血清雌二醇(E2)、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,RT-PCR法检测海马组织中白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNF-α) mRNA的表达,ELISA法检测海马匀浆IL-6、TNF-α与3淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)表达.结果 OH组大鼠血清E2水平较SHAM组明显降低(P＜0.01),OHR组大鼠血清中E2水平较OH组显著升高(P＜0.05);OH组大鼠血清TC、LDL-C含量较SHAM组升高(P＜0.01),OHR组大鼠血清TC含量较OH组降低(P＜0.01);OH组大鼠海马组织IL-6、TNF-α mRNA及IL-6、TNF-o、Aβ1-42蛋白含量较SHAM组明显升高(P＜0.01),OHR组IL-6、TNF-α mRNA及Aβ1-42蛋白含量较OH组明显降低(P＜0.05).结论 白藜芦醇能减轻高脂饮食去卵巢肥胖大鼠海马组织中Aβ1-42的沉积,其机制可能与白藜芦醇升高大鼠血清E2水平、降低血清TC含量、改善肥胖相关大脑炎症反应有关.     

EPO对Aβ_（1-42）所致AD样大鼠空间记忆的影响及作用机制

目的探讨erythropoietin（EPO）对Aβ1-42所致AD样大鼠空间记忆的影响及作用机制。方法 48只雄性Wistar大鼠随机分成4组：生理盐水对照组、AD模型组、rHu-EPO治疗组与脑复康阳性对照组,每组12只。通过海马注射Aβ1-42的方法建立模型组,rHu-EPO治疗组与脑复康阳性对照组在建立模型的基础上,分别给予腹腔注射rhEPO（5000IU/kg,隔日一次）和脑复康（40 mg/kg,每日一次）。术后第八天开始对各组进行Morris水迷宫空间记忆能力测试,使用Western blot技术检测各组大鼠synapsin1蛋白水平。结果与生理盐水组、rHu-EPO治疗组及脑复康组相比,AD组水迷宫测试潜伏期延长,synapsin1表达降低,差异均有统计学意义（P〈0.05）。EPO治疗组与脑复康组相比,水迷宫测试结果与synapsin1蛋白表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 EPO可以显著改善AD样大鼠的空间记忆能力,其机制可能与提高synapsin1蛋白表达有关。     

BDNF对Aβ致伤大鼠海马神经元突触功能修复的影响

目的：观察不同浓度BDNF时Aβ致伤神经元突触形态及突触蛋白Ng、Nm表达的影响.方法：大鼠海马神经元体外常规培养、鉴定,建立Aβ1-42寡聚体致伤神经元模型.应用免疫荧光细胞化学法,检潮不同浓度BDNF与体外培养的Aβ1-42致伤神经元共孵育,对突触蛋白Ng、Nm表达水平的影响.结果：Aβ1-42与神经元共孵育24h后,10μmol/L、20呻l/L Aβ1-42神经细胞生存率较对照组明显降低,凋亡率较对照组明显增高（P＜0.05）.Aβ致伤后神经细胞明显减少,胞体小,突起变短、消失.与0ng/mL组比较,BDNF5ng/mL、20ng/mL、100w/mL浓度组随着浓度增高,神经细胞存活状态有所恢复,有较多的圆形细胞和悬浮细胞,多数细胞突起数量较少、长度变短.正常对照组Ng、Nm免疫荧光染色表达强阳性,BDNF、10μmol/L Aβ1-42与神经元共孵育24h,海马神经细胞Ng、Nm平均荧光强度较正常对照组明显降低（P＜o.01）;与0nVmL浓度组相比,其他各组（5ng/mL、20ng/mL、100ng/mL浓度）Ng、Nm荧光强度明显增强（P＜0.01）,但与正常对照组相比Ng、Nm荧光强度仍较弱（P＜0.05）.结论：10μmol/L是Aβ1-42致伤海马神经元的较佳有效浓度;Aβ1-42可导致突触蛋白Ng、Nm的表达减少;BDNF可以通过押制Aβ1-42寡聚体所致突触蛋白Ng、Nm减少,发挥突触修复及神经保护作用.