Cyclosporine A in treatment of membranous lupus nephropathy

Objective To investigate retrospectively the efficacy of cyclosporine A (CsA) in the treatment of membranous lupus nephropathy (MLN).Methods Twenty-four patients with systemic lupus erythematosus (SLE) and biopsy-proven MLN were treated with CsA in combination with prednisone. CsA was given at a starting dosage of 5 mg·kg-1·d-1 for 3 months, with a 1mg·kg-1·d-1 reduction every month and then maintained at a dosage of 2 mg·kg-1·d-1. The dosage of oral prednisone differed from person to person according to levels of extra-renal activity. Clinical efficacy and adverse reactions were retrospectively analyzed. Complete remission was defined as having a urinary proteinuria level (Upr) of <0.4 g/d, and normal serum albumin and serum creatinine (SCr) levels, without SLE activity. Partial remission was defined as having a UPr decrement >50% of baseline value and a serum albumin value of 30-35 g/L, without SLE activity. No response was defined as having a Upr decrement <50% of baseline value and >2.0 g/d, or as a deterioration of renal function, or as having active SLE. Results One patient could no longer undergo follow-up, and the other 23 patients were treated with CsA and followed up for 6-36 months (mean 16.8±8.4 months). The mean starting dosage of CsA was 4.7±0.5) mg·kg-1·d-1 and the trough level of the whole blood CsA was 248±110) μg/L. Twelve patients (52.2%) achieved complete remission, 10 patients (43.3%) achieved partial remission after CsA treatment, and one patient showed no response. At different CsA treatment timepoint, the complete remission rates were 17.4% (3rd month), 21.7% (6th month), 40% (12thmonth), 88.9% (18th month) and 100% (24th month) respectively. SCr elevation, when within a normal limit was not observed in most patients during early CsA administration, and at the end of the follow-up all the patients had a normal SCr. Relapse occurred in 33.3% of the patients after withdrawing CsA for 4-24 months. No chronic CsA renal toxicity was observed in 4 patients who had a repeat renal biopsy after CsA treatment for 6-24 months. Conclusions CsA could be regarded as an effective therapy for patients with membranous lupus nephropathy, but its adverse effects, especially its nephrotoxicity, should be carefully monitored during CsA treatment.     

2型糖尿病肾病患者肾小球系膜细胞表型及功能改变

目的研究2型糖尿病肾病系膜细胞表型和功能的改变,进一步探讨糖尿病肾病的发病机理.方法经肾活检从2型糖尿病肾病患者获取肾组织,体外培养系膜细胞.采用流式细胞术、3H-胸腺嘧啶掺入及细胞倍增时间观察细胞表型改变.系膜细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、层粘连蛋白、纤维连接蛋白的表达用免疫荧光染色及流式细胞仪检测.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入.Northern杂交和流式细胞仪检测葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达.细胞谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性采用比色法测定.结果 2型糖尿病肾病来源的系膜细胞较正常对照表现出细胞体积增大、RNA/DNA比值增加并伴细胞增殖加快,细胞骨架蛋白α-SMA和细胞外基质合成增加.糖尿病肾病系膜细胞的葡萄糖摄入率高于对照(1 592 cpm·105 cell-1 与 1 275 cpm·105 cell-1,P<0.05),同时伴GLUT1mRNA及蛋白质表达增加.此外,糖尿病肾病系膜细胞的GFAT活性明显增高.结论 2型糖尿病肾病系膜细胞具有明显的表型与功能改变.此外,糖尿病肾病患者系膜细胞还表现出细胞糖摄入及己糖胺通路活性增加.上述表型及功能改变可能是糖尿病肾病系膜细胞病变形成的基础.     

EFFECT OF LOSARTAN ON SLOWING PROGRESSION OF CHRONIC ALLOGRAFT NEPHROPATHY

Objective To investigate the effects of losartan, a specific angiotensin Ⅱ receptor blocker, on slowing progression of renal insufficiency in patients with biopsy-proven chronic allograft nephropathy (CAN) and the molecular mechanism of the therapy.Methods Twenty-two renal transplant recipients with biopsy-proven CAN (group A) were treated with losartan within two months after renal dysfunction for at least one year. Losartan was administered at a dose of 50 mg/d. Twenty-four recipients in the same fashion (group B) who never received angiotensin Ⅱ receptor antagonist were studied as control. The investigation time for each patient lasted one year. Renal functions and concentrations of plasma and urine transforming growth factor-beta1 (TGF-beta1) were compared between the two groups at the initiation and end of the study. In group A, expressions of TGF-beta1 mRNA and immunofluorescence intensity of TGF-beta1 protein and pathological alterations in renal biopsy specimens were compared between before losartan therapy and after one year of the therapy.Results At the initiation of the investigation, no significant differences were found between group A and group B in clinical data such as donor age, cold-ischemia time, HLA mismatch, levels of creatinine clearance (Ccr), plasma and urineTGF-beta1 concentrations. One year later, 14 of 22 (63.6%) patients showed stable or improved graft functions in group A,and 4 of 24 (16.7%) in group B. The difference was significant (P＜0.05). At the end of the study, urine TGF-beta1 loss of Ccr was 6.6±5.4 mL/min in group A and 16.2±9.1 mL/min in group B. Both of the differences were significant between the two groups (P＜0.01). No significant differences were found in plasma TGF-beta1 concentrations between the four values determined at the initiation and end of the study in the two groups (F = 2.56, P ＞ 0.05). After one year losartan therapy, group A showed a significant decrease in expressions of TGF-beta1 mRNA and TGF-beta1 protein in renal biopsy specimens [from 1.59±0.35 to 0.96±0.27 and from (10.83 ± 2.33)×106 to (6.41±1.53)×106, respectively; both P＜0.01],but in light microscopy the histological changes were similar to the first renal biopsy. Losartan was excellently tolerated in all patients in group A. No cases with losartan therapy showed too low blood pressure and other side effects.Conclusion This study suggests that losartan have an effect on slowing progression of CAN. Reducing production of intrarenal TGF-betal may play a decisive role in the efficacy of losartan.     

Effects of Ligustricum Wallichii on acute nephrotoxicity induced by cyclosporine A in rats]

We investigated the influence of cyclosporine A (CsA) on renal function, renin-angiotensin system (RAS) and platelet aggregation in addition to the effect of Ligusticum Wallichii (LW) on CsA actions in SD rats. Infusion of CsA (50 mg/kg, iv) resulted in a significant fall in glomerular filtration rate (GFR) and renal plasma flow (RPF) and a significant increase of plasma renin activity (PRA), angiotensin II (A II) level and percentage platelet aggregation. At the same time, treatment with 20% LW (8 ml/kg, iv) before CsA infusion significantly prevented the decline of GFR and RPF as well as the enhancement of platelet aggregation, but had no influence on CsA-mediated RAS activation. These results suggested that LW may be beneficial to the acute nephrotoxicity induced by CsA.     

环孢素和他克莫司在体外对乙型肝炎病毒复制影响的对比研究

目的比较分析环孢素和他克莫司(FK506)在体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的影响。方法采用HBV DNA永久转染人肝癌细胞系HepG2.2.15细胞为体外实验模型,经四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验确定环孢素及FK506对HepG2.2.15细胞生长无抑制作用的药物安全浓度后,将不同安全浓度的环孢素(0.6~20.0μg/ml)或FK506(5~100ng/ml)作用于该细胞系,每24小时换相应浓度新鲜含药培养基,药物作用4d后收集培养上清液和培养细胞待测。采用酶联免疫吸附试验检测上清液中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平,采用狭缝印迹杂交法半定量分析细胞内HBV DNA水平,综合评价环孢素和FK506对HBV病毒复制的影响。结果MTT结果显示环孢素的药物作用安全浓度为0~40.0μg/ml,FK506的安全浓度为0~400ng/ml。在安全浓度范围内,随着环孢素作用浓度的增加,其对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升,细胞内HBV DNA复制水平下降;当1.3、2.5及5.0μg/ml环孢素作用4d时,对HBsAg的抑制率分别为16.5%±9.4%、21.5%±8.9%和33.1%±5.3%,对HBeAg的抑制率分别为7.8%±2.2%、11.0%±2.3%和20.8%±1.5%,HBV DNA的表达量仅为对照组的56.1%±16.5%、41.7%±10.9%和39.5%±9.5%。在安全浓度范围内,FK506对HepG2.2.15细胞HBsAg和HBeAg的表达分泌,以及细胞内HBV DNA复制无明显抑制作用。结论环孢素在体外能呈剂量依赖性地抑制HBV复制;而FK506则无此作用。     

他克莫司替换环孢素A延缓慢性移植肾肾病进展的临床研究

目的:探讨他克莫司(FK506)替换环孢素A(CsA)治疗慢性移植肾肾病(CAN)的有效性及安全性.方法:根据是否以FK506替换CsA,将73例CAN患者分成两组,CsA组30例,维持原免疫抑制方案(CsA、霉酚酸酯及泼尼松联用)不变,采用替换方案的FK506组43例,除将CsA转换成FK506外,其他用药同CsA组.两组均随访1年以上,监测血清肌酐(SCr)、肾小球滤过率(GFR)、24 h尿蛋白定量、血脂[包括总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)]等生化指标的变化情况,并观察随访期间药物的毒副作用.结果:转换治疗12个月后,FK506组SCr显著低于CsA组[分别为(194.8±42.5)μmol/L vs.(245.4±52.8)μmol/L,P＜0.01],FK506组GFR显著高于CsA组[(50.1 4±3.92)mL/(min·1.73 m2)vs.(40.58±2.49)mL/(min·1.73 m2),P＜0.01];FK506组24 h尿蛋白定量显著低于CsA组[(2.0±0.5)g vs.(3.9±0.7)g,P＜0.01];FK506组除HDL外,TC,TG,LDL均显著低于CsA组[(5.19±0.73)mmol/L vs.(6.94±1.37)mmol/L;(1.86±0.84)mmol/L vs.(3.14±1.38)mmol/L;(3.03±0.71)mmol/L vs.(3.82±0.89)mmol/L,P＜0.01];FK506组震颤发生率较CsA组高(P＜0.01),但高血压发生率显著低于CsA组(P＜0.05).结论:FK506转换治疗后,肾功能减退得到延缓,蛋白尿降低,血脂代谢得到改善,FK506可以有效延缓CAN进展.     

苦参碱对大鼠慢性环孢素肾毒性的保护作用的实验研究

目的 探讨苦参碱对大鼠慢性环孢素A(CsA)肾毒性是否具有保护作用及其可能机制.方法 采用大鼠慢性CsA肾毒性模型,将56只SD大鼠随机分为对照组、CsA模型组(CsA 20 mg/kg)、安博维组(安搏维10 mg/kg CsA 20 mg/kg)和苦参碱组(Matrine 100 mg/kg CsA 20 mg/kg),经胃管灌胃,每天1次,实验共4周.于第2周和第4周末两次采集血尿标本进行生化检测,肾组织行常规病理检查和免疫组化检测骨桥蛋白(OPN)、Ectodermal Dysplasia 1(ED-1)表达.结果 与对照组比较,CsA组24 h尿量、小管间质损伤评分、OPN表达和ED-1阳性细胞计数均增加,内生肌酐清除率(Ccr)下降(P均＜0.05).与CsA组相比,苦参碱能下调OPN表达,减少ED-1阳性细胞在肾组织的浸润,减轻肾脏病理改变(P＜0.05).结论 苦参碱对实验性大鼠慢性CsA肾毒性具有一定的保护作用.     

基质金属蛋白酶9在粒细胞集落刺激因子诱导的造血干/祖细胞动员中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)在粒细胞集落刺激因子(G-CSF)诱导的造血干/祖细胞(HSPC)动员中的作用。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法测定了健康供者稳态及G-CSF动员第5天骨髓、外周血MMP-9蛋白及mRNA水平的变化,比较富含MMP-9的细胞系HT1080无血清培养上清孵育前后CD34+细胞表面CXCR4表达及对基质细胞衍生因子1(SDF-1)的迁移能力的变化,将rhMMP-9与rhSDF-1孵育后应用Western印迹检测MMP-9对SDF-1的降解作用,观察注射MMP-9化学抑制剂(MPI)ο-邻二氮杂菲对G-CSF动员BALB/c小鼠外周血成熟白细胞计数(WBC)和干/祖细胞的数量的影响。结果G-CSF动员第5天,骨髓上清MMP-9浓度增加了6.6倍(P<0.01),骨髓组织表达MMP-9的中性粒细胞明显增多。动员后骨髓单个核细胞MMP-9mRNA表达水平上调(P<0.05)。rhSDF-1与rhMMP-9短期孵育后可被后者降解。HT1080无血清培养上清液能够上调脐血和动员外周血富集的CD34+细胞的CXCR4表达水平(均P<0.05)及增强CD34+细胞向SDF-1浓度梯度迁移能力(均P<0.05),该效应可被MPI阻断(P<0.05)。与G-CSF共注射MPI后BALB/c小鼠外周血成熟WBC(12.3×106/L±1.2×106/L)和造血祖细胞集落形成单位(69U/2×105MNC±3U/2×105MNC)数量显著低于对照组(P<0.05)。结论MMP-9可能通过裂解SDF-1、上调CD34+细胞表面SDF-1特异性受体CXCR4的表达及增强CD34+细胞迁移能力在G-CSF介导的HSPC动员中发挥重要作用。     

维拉帕米对环孢素A肾毒性的保护作用

为探讨维拉帕米（Ver)对环孢素A（CsA)肾毒性的保护作用，采用给急性缺血性肾衰大鼠静脉注射CsA，造成急性CsA肾中毒模型，在此模型上同时给予Ver，观察用药前后肾功能及血浆，肾组织中内皮素（ET）的变化，结果表明Ver可以抑制CsA引起的ET分泌释放，改善肾功能，提示Ver确实能有效减轻CsA对肾脏的损伤。     

Strong additive effect of calcitriol and cyclosporine A on lymphocyte proliferation in vitro and rat liver allotransplantations in vivo

Background Vitamin D3 and its metabolites have been found to exert immunosuppressive effects both in vivo and in vitro. We investigated the synergistic effect of calcitriol and cyclosporine A (CsA) on lymphocyte proliferation in vitro and graft rejection following rat liver allotransplantations in vivo.Methods Alloantigen driven, human peripheral mononuclear cells’ proliferation and cytokine production capacity were tested in the presence or absence of various concentrations of calcitriol or CsA. In vivo, liver allografts were transplanted in a high responder strain combination (SD to Wistar) rats and combination of subtherapeutical dose of CsA and calcitriol was administered in recipients, whereas the control recipients received single or no immunosuppressant. Proliferation of splenocyte from recipient was tested with mixed lymphocyte reaction. Serum interleukin-2 (IL-2) and interferon gamma (IFN-γ) concentrations were measured with enzyme linked immunosorbent assay. Results Combined medication of 10(-9) mol/L calcitriol and 100 ng/ml CsA inhibited human peripheral mononuclear cells’ proliferation to alloantigen and the production of IL-2 and IFN-γ but promoted that of IL-4 and IL-10. Similarly, combination of 250 ng·kg(-1)·d(-1) calcitriol and 1.0 mg·kg(-1)·d(-1) CsA showed an additive effect in liver transplant model. It restrained splenocyte proliferation to alloantigen from donor and significantly reduced serum concentration of IL-2 and IFN-γ in recipients. Consequently, allograft rejection in combined medication group was minor (median William’s grade was 1.0 vs 3.0 in combined medication group and in the control group, P&lt;0.05) and the recipients’ survival was evidently prolonged [(93.7±5.8) days vs (12.6±1.4) days in combined medication group and in the control group, P&lt;0.01].Conclusion A combination of calcitriol and CsA has an additive effect on limiting lymphocyte proliferation and prolonging liver graft survival. With its additional immunomodulating property, calcitriol is a potent immunosuppressant that can extend the therapeutic window of classical immunomodulators in prevention and treatment of liver graft rejection.     

血液透析病人外周血单核细胞糖基化终产物受体的表达及其与细胞因子水平的关系

目的　探讨慢性肾功能衰竭长期血液透析病人外周血单核细胞表面晚期糖基化终产物(AGE)受体的表达及其与循环肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素 1β(IL 1β)水平之间的关系 ,以及血透病人循环中高水平促炎症细胞因子的发生机制。方法　选择慢性肾功能衰竭病人 5 9例 (其中非透析组 2 2例 ,维持性血透组 37例 )和正常人 30例 ,观察单核细胞表面AGE结合蛋白的数量和亲和力 ,检测单核细胞表面AGE受体 (RAGE)的表达及单核细胞培养上清中的TNFα和IL 1β的水平。 结果　血透病人单核细胞与12 5I AGE 白蛋白的特异性结合率 (41 4fmol/ 10 5细胞± 2 2fmol/ 10 5细胞 )较正常人 (31 6fmol/ 10 5细胞± 4 1fmol/ 10 5细胞 ,P <0 0 5 )明显升高 ,细胞表面AGE结合蛋白的数目(2 4 2± 0 2 1× 10 5/细胞 )高于正常人 (1 74± 0 2 9× 10 5/细胞 ,P <0 0 5 ) ,但亲和常数 (Kd)与正常人单核细胞相比无明显差异 ;血透病人单核细胞表面RAGE表达亦高于正常人 ;在相同剂量AGE 白蛋白刺激下 ,血透病人单核细胞分泌的TNFα和IL 1β水平较正常人明显升高 ,这种升高作用可被抗RAGE抗体所阻断 ;单核细胞AGE结合蛋白表达上调的血透病人 ,其循环TNFα和IL 1β水平亦显著升高。结论　血透病人单核细胞AGE受体表达上调 ,在     

丙泊酚、咪达唑仑对小儿紫绀型先天性心脏病体外循环心内直视术的心肌保护作用

目的 比较观察丙泊酚和咪达唑仑对紫绀型先天性心脏病患儿心内直视术的心肌保护作用。方法选择ASAI～Ⅱ级心内直视手术的紫绀型先天性心脏病患儿32例,随机等分为两组,每组16例,丙泊酚复合小剂量芬太尼组（PF组）,咪达唑仑复合小剂量芬太尼组（MF组）。观察患儿血流动力学变化,脉搏血氧饱和度及体温,记录术后拔管时间及术后ICU停留时间;取主动脉阻断后10～20min（T2）和主动脉开放后10-20min（L）时的心肌组织,观察心肌血红素加氧酶．1（HO．1）的表达;采集开放静脉通路时（T0）、主动脉开放后2h（T4）、术后24h（L）的静脉血,检测血浆中肌钙蛋白I（eTnI）含量。结果PF组患儿术后的平均拔管时间和平均ICU停留时间较MF组短（分别为14．17h vs 23．65h,30．17h vs 49．47h）;两组患儿T4时（PF：97ng/ml±33ng／ml,MF：138ng／ml±56ng／m1）cTnI的水平均高于T0（PF：0．17ng／ml±0．10ng／ml,MF：0．62ng／ml±0．96ng／m1）和T5（PF：23ng／ml±13ng／ml,MF：24ng／ml±6ng／m1）,L时cTnI的水平高于T0,但两组间同时点值比较差异无统计学意义;PF和MF组T2时心肌HO-1表达均低于T,（灰度值PF：182．2±0．8vs125．6±2．1,MF：193．5±1．4VS145．5±7．4）,MF组患儿T2、T3时心肌HO-1的表达低于PF组同时点值。结论丙泊酚和咪达唑仑对紫绀型先天性心脏病患儿体外循环心内直视术心肌有保护作用,丙泊酚在刺激心肌保护性蛋白HO-1方面优于咪达唑仑。     

雷帕霉素抑制肝癌细胞生长及转移的实验研究

目的探讨具有抗肿瘤特性的新型免疫抑制剂雷帕霉素(RPM)对肝癌细胞生长及转移的作用。方法应用流式细胞仪检测RPM(10 ng/m l)、环孢素(CsA)(100 ng/m l)、以及两者合用对人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡及细胞周期的影响;应用MTT法检测上述药物对细胞增殖的影响。用实时定量聚合酶链反应(PCR)法检测RPM处理后血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)mRNA、缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)mRNA、转化生长因子b(TGFb)的表达。ELISA法检测MHCC97H培养液上清VEGF蛋白水平的变化。28只原位种植高转移性人肝癌模型LC I-D20裸鼠,随机分为CsA(25 mg/kg)组、RPM(2 mg/kg)组、CsA+RPM组及对照组(生理盐水),每组7只;探讨免疫抑制剂对肿瘤生长及自发肺转移的影响。结果体外实验中,RPM抑制了MHCC97H细胞的增殖,并使细胞停滞于G0/G1期,但未促进细胞凋亡。RPM下调了H IF-1α和VEGF的基因表达及MHCC97H培养液上清VEGF蛋白的表达(890.3 pg/m l±25.1 pg/m lvs 1583.7 pg/m l±17.3 pg/m l,P=0.000)。CsA对细胞周期及增殖无影响。体内实验中,RPM及CsA+RPM抑制了LC I-D20模型移植瘤的生长(0.76 g±0.38 g vs 2.09 g±0.75 g,P=0.001;0.40 g±0.22 g vs 2.09 g±0.75 g,P=0.000)及肺部转移的发生(均为2/7 vs 7/7,P=0.021)。CsA组肺部自发转移灶的数目多于对照组(6±2 vs 4±1,P=0.046)。结论RPM能明显抑制肝癌细胞的生长及转移,以RPM为基础的免疫抑制方案在肝癌肝移植中可能有临床应用前景。     

缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病的发病机理及药物干预的实验研究

目的 探讨缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病(CAN)的机理及药物干预的防治效果和作用机制.方法 利用已建立的大鼠原位异体肾移植硬化加快模型进行原位肾移植.实验分组:A组单用环孢素A(CsA) 10 mg/(kg·d),B、C、D组分别给予小剂量[4 mg/(kg·d)]、大剂量[8 mg/(kg·d)]益生注射液或吗替麦考酚酯[MMF,20 mg/(kg·d)], 联合应用CsA[10 mg/(kg·d)],E组为空白对照.移植术后4、8及12周处死动物,观察移植肾病理变化并测定肾功能.采用免疫组化和实时荧光定量PCR检测各组TGF-β1、Smad2、Smad7蛋白和mRNA表达及其在移植肾的定位情况.结果 大剂量益生组,血浆肌酐水平升高较小剂量组低,CAN病理改变较小剂量组为轻.移植肾标本中,A、B组Smad2、TGF-β1表达上调、Smad7表达下调,尤以A组明显,A组与其它各组相比在各时间点上差异均有统计学意义(P＜0.05);移植肾肾小管上皮细胞、间质细胞及肾小球,Smad2、TGF-β1表达均呈强阳性,Smad7表达呈弱阳性;C、D组Smad2、TGF-β1表达下调,而Smad7表达上调,组间差异无统计学意义.结论 缺血再灌注损伤致CAN机理可能是通过TGF-β1过表达及上调Smad2表达,下调Smad7表达,直接或间接致移植肾实质和血管的纤维化.中药益生注射液及MMF可能通过下调TGF-β1及Smad2表达、上调Smad7表达而发挥其抗纤维化作用.     

慢性移植肾肾病患者西罗莫司替代钙调磷酸酶抑制剂对肾功能的影响

目的 观察慢性移植肾肾病(CAN)患者采用西罗莫司(SIR)替代钙调磷酸酶抑制剂(CNI)治疗的疗效和安全性.方法 前瞻性、开放性、非随机对照研究,2004年1月至2006年6月浙江大学医学院附属第一医院肾脏病中心诊断CAN患者74例,基线估算的肾小球滤过率(eGFR)为30～60ml·min-1·(1.73 m2)-1.其中36例采用SIR切换治疗(CNI药物停用12 h后开始使用SIR),另外38例继续使用CNI药物维持治疗(环孢素治疗30例;他克莫司治疗8例).所有患者霉酚酸酯适当加量并随访4年,定期观察移植物肾功能和eGFR,记录排斥反应等不良事件的发生情况,监测血常规、血脂、肝功能等指标.结果 SIR切换组和CNI维持组切换前eGFR分别为(40±7)ml·min-1·(1.73 m2)-1和(38±6)ml· min-1· (1.73 m2)-1,差异无统计学意义(P＞0.05).切换后SIR切换组较CNI维持组移植肾功能改善明显,在随访至3、12、24、36和48个月时SIR切换组eGFR均明显高于CNI维持组(均P＜0.05).随访结束时SIR切换组发生急性排斥反应2例,蛋白尿1例,肺部感染1例;CNI维持组发生急性排斥反应2例(P＞0.05).以肌酐翻倍作为终点事件显示SIR切换组的4年存活率(75.0％)显著优于CNI维持组(50.0％)(P=0.03).随访3个月时SIR切换组血总胆固醇和甘油三酯均显著高于切换前;总胆红素显著低于切换前和CNI维持组(均P＜0.05).结论 SIR替代CNI药物治疗CAN患者可以明显改善移植肾肾功能,提高移植肾长期存活,同时并不增加排斥风险.     

阿伐他汀对急性冠状动脉综合征患者NF-κB和可溶性细胞间黏附因子-1的影响

目的：探讨阿伐他汀对急性冠状动脉综合征（ACS）患者治疗后核因子-κB p65（NF-κB p65）阳性率和可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)浓度的影响及其临床意义。方法：68例ACS患者随机分成阿伐他汀治疗组（阿伐他汀组，37例）及常规治疗组（常规组，31例），治疗前及治疗12周后采用夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）测定血浆sICAM-1浓度和免疫组织化学染色法测定外周血单核细胞NF-κB p65阳性率，比较两者的变化。结果：治疗前两组比较NF-κBp65阳性率 和sICAM-1浓度水平差异无显著性（P＞０.05）；治疗12周后，常规治疗组NF-κB p65阳性率和sICAM-1浓度水平前后差异无显著性（P＞０.05）；而阿伐他汀组NF-κB p65阳性率和sICAM-1浓度水平治疗后明显低于治疗前（P＜０.05）。结论：阿伐他汀对ACS患者有抗炎和稳定粥样斑块作用，其作用可能与降低 NF-κB活性和sICAM-1浓度水平有关。     

干扰素诱导人肝细胞癌胸苷磷酸化酶表达和拮抗血管生成的实验研究

目的研究干扰素α(IFNα)对人肝细胞癌胸苷磷酸化酶(TP)表达水平及血管生成能力的影响。方法在体内外用一定剂量的IFNα处理人肝癌细胞SMMC7721,用RTPCR和ELISA方法分别检测细胞TPmRNA和蛋白表达水平,Boyden小室法检测诱导内皮细胞移动的能力,免疫组化法检测SMMC7721裸鼠皮下移植瘤组织中微血管密度(MVD)。结果IFNα上调SMMC7721细胞TPmRNA表达水平,呈现剂量依赖性。与未处理组相比,浓度为5000、10000U/ml的IFNα处理的细胞TPmRNA表达水平显著升高(P<0.05),但诱导内皮细胞移动的能力差异无统计学意义。随着IFNα剂量的增加,裸鼠皮下移植瘤组织中TP蛋白表达水平逐渐增加,而MVD数目先增加后下降。IFNα不同剂量时(9.0×106、1.5×107U·kg-1·d-1),肿瘤组织中TP蛋白表达水平显著高于(48ng/mg±24ng/mg)未处理组(60ng/mg±6ng/mg,P<0.01);MVD数目分别为6.0±1.8,4.0±1.5,P<0.05)。与未处理组相比IFNα(1.5×107U·kg-1·d-1)组肿瘤重量明显下降(P<0.05)。结论一定剂量的IFNα既能上调肝细胞癌TP表达水平,又能抵消TP表达上调后促进血管生成能力的增强。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

牛骨钙素的分离,纯化和放射免疫分析法的建立

采用凝胶过滤、快速液相（FPLC）和高压液相（HPLC）成功地从小牛股骨提取和纯化了骨钙素（BGP）。用其作为抗原免疫家免产生了高效价的抗体，38．5％结合率（Bo／T）的最终稀释度为1：35000。应用此抗体建立的放射免疫分析法，稳定性好，灵敏度高，亲和常数为2．29×1011，回收率为（102±2．2）％，批内变异为2．1％，批间变异为5．6％，同降钙素、甲状旁腺激素和胰岛素无任何交叉反应。81名健康志愿者血清BGP水平为（5．3±1．5）ng／ml。绝经后骨质疏松、原发性甲状旁腺功能亢进症、慢性肾功能不全和畸形性骨炎患者血清BGP值均明显高于健康者。而库欣（Cushing）综合征和甲状旁腺功能减退患者血清BGP水平明显低于健康者。本研究结果表明，骨转换增加的疾病，血BGP值有增高；骨形成降低或者转换减慢的疾病，其血BGP值有下降。因此，血清BGP浓度是反映骨转换敏感而可靠的指标，在骨代谢疾病的临床和科研中具有重要意义。     

药物中断对慢性环孢素A肾毒性大鼠表皮生长因子表达的影响

[目的]观察停用环孢素A对慢性环孢素A肾中毒大鼠体内表皮生长因子(EGF)表达的影响.[方法]皮下注射给予SD大鼠环孢素A 5周,建立慢性环孢素A肾毒性后,停用环孢素A观察5周和10周;另设正常对照组,皮下注射给予橄榄油.检测各组大鼠体重、收缩期血压、血清肌酐及肌酐清除率;以PAS染色和三色染色观察肾组织病理改变.用免疫印迹法及免疫组织化学染色检测EGF蛋白的表达和分布.[结果]与对照组比较,慢性环孢素A肾毒性组大鼠体重明显减轻,血肌酐显著上升,肌酐清除率明显下降,入球动脉发生玻璃样病变,肾小管间质带状纤维化,EGF蛋白表达明显减少.停用环孢素A可见上述各项指标发生逆转.EGF蛋白的表达随药物中断时间发延长而呈阶梯状增加,且与肾小管间质带状纤维化程度呈负相关(r=-0.848).[结论]停用环孢素A可上调EGF的表达,且呈时间依赖性,而EGF的高表达与改善肾小管间质带状纤维化相关.