检测乙、丙型肝炎病毒基因芯片的制备

目的：探讨研制检测乙型和丙型肝炎病毒的基因芯片。方法：以HBV、HCV高度保守的基因片段为探针,同时用没有同源性的植物基因片段为内参照基因,制备成“乙、丙型肝炎病毒双检基因芯片”。检测时抽提患者血清中的病毒核酸,进行RT－PCR扩增及荧光标记,然后与双检基因芯片杂交,结交结果用ScanArray3000扫描仪扫描。结果：双检基因芯片的内参照结果能做到绝对阳性和绝对阴性,同时对不同血清（正常人血清,乙肝E抗原阳性血清,丙肝RNA阳性血清,乙肝、丙肝阳性混合血清）能有效检测区分。结论：本研究成功地制作了乙、丙型肝炎病毒双检基因芯片,可望使用于临床。     

应用MGB探针检测人丙型肝炎病毒的基因型

目的检测血浆或血清样本中人丙型肝炎病毒（HCV）的基因型,建立了基于MGB探针的实时荧光定量PCR检测体系。方法在HCV基因组型特异性碱基的聚集区域设计荧光定量PCR引物及探针,为保证特征特异性及高分辨率,选择设计MGB探针,然后将PCR扩增的产物先进行基因克隆,而后制备病毒样颗粒做为阳性质控品,从而建立完整的MGB探针法的荧光定量PCR检测体系,最后对该检测体系进行方法学评价。结果成功建立了基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测体系。方法学评价显示,该检测体系的灵敏度达100IU/mL;重复性好;特异性良好,以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性。结论本研究建立基于MGB探针的HCV荧光定量PCR的基因分型检测方法,可定性检测血浆或血清样本及血液制品中的人丙型肝炎病毒HCV的基因型及含量,对于该疾病的研究及临床治疗都具有重要的意义。     

荧光定量PCR检测丙型肝炎RNA结果分析

目的：分析丙型肝炎病毒RNA[HCV—RNA]与丙型肝炎抗体（抗-HCV）及转氨酶（ALT）之间的关系.方法：荧光定量PCR（FQ—PCR）、酶免化学发光法、全自动生化分析仪分别检测含量与ALT水平之间无明显相关性，但是HCV—RNA阳性率在ALT正常组与异常组之间差异有显著性（P〈0．005）。结论：在丙肝的诊断、治疗中，检测HCV—RNA含量有积极的意义。     

丙型肝炎病毒核心抗原检测在临床诊断HCV感染的价值

目的:评估丙型肝炎病毒核心抗原(HCVcAg)诊断试剂在临床运用对HCV感染的诊断价值?方法:对临床214例确认HCV感染者?60例健康体检者?40例非HCV感染的其他肝炎患者同时检测HCVcAg?抗HCV和HCV RNA,并对78例HIV感染者进行HCV感染筛查,分析 HCVcAg试剂的敏感性?特异性?结果:214 例确认丙肝患者HCVcAg检测162例(75.7%)阳性,且HCV RNA水平越高,HCVcAg检出率也越高?当HCV RNA载量>106/ml时,HCVcAg与HCV RNA检测的符合率达98.7%;60例健康对照和40例非HCV感染的各种肝炎HCVcAg检测均为阴性,显示了HCVcAg对诊断HCV感染得高度特异性?对78份HIV感染者样本进行HCV RNA测定,有16例阳性,以HCVcAg法测定有15例阳性,以抗HCV法测定仅有9例阳性?结论:HCVcAg可作为HCV感染诊断的血清病毒标志物,也可用于使用免疫抑制剂,抗HCV产生受到抑制的患者,以及在一些不具备开展PCR的医院实验室作为HCV RNA检测的替代试验?     

丙型肝炎患者胰腺中丙型肝炎病毒C33C抗原的检测

丙型肝炎患者胰腺中丙型肝炎病毒Ｃ３３Ｃ抗原的检测郎振为孟忻郭新会李俊强张士杰近年来，有报道在丙型肝炎（简称丙肝）患者的外周血单个核细胞及唾液腺组织中检测出丙肝病毒（ＨＣＶ）ＲＮＡ。为进一步探讨丙肝病毒（ＨＢＶ）是否具有泛嗜性，我们采用ＨＣＶＣ３３ｃ单...     

定量聚合酶链反应检测血清中HCV RNA^＋

目的：探讨定量聚合酶链反应用于检测丙型肝炎病毒HCV含量变化的意义。方法：用信号引物能量转移定量聚合酶链反应（PCR），检测68例丙型肝炎患者血清HCVRNA水平。结果：其HCVRNA含量范围103～1011拷贝／ml，急性丙肝106.83±3.72拷贝／ml，慢性丙肝106.54±2.67拷贝／ml，而无症状携带者104.95±2.16拷贝／ml。血清HCVRNA水平同ALT水平呈相关。结论：丙肝病毒感染后HCV复制水平与肝损害相关，定量检测HCVRNA的水平变化是预测和评价干扰素疗效的重要指标。     

丙型肝炎感染的模式及其临床价值

目的检测丙型肝炎游离核心抗原、抗体及HCV-RNA病毒载量,探讨丙型肝炎的感染模式及临床意义。方法对179份已经确诊的HCV感染血样,采用酶联免疫法检测HCV抗体和HCV核心抗原,荧光定量PCR检测HCV-RNA,观察丙型肝炎的感染模式。结果丙型肝炎的感染至少存在7种模式：Ⅰ型HCVcAg（-）,HCVAb（＋）,HCV-RNA（-）;Ⅱ型HCVcAg（＋）,HCVAb（-）,HCV-RNA（＋）;Ⅲ型HCVcAg（-）,HCVAb（-）,HCV-RNA（＋）;Ⅳ型HCVcAg（＋）,HCVAb（-）HCV-RNA（-）;Ⅴ型HCVcAg（-）,HCVAb（＋）,HCV-RNA（＋）;Ⅵ型HCVcAg（＋）,HCVAb（＋）,HCV-RNA（＋）;Ⅶ型HCVcAg（＋）,HCVAb（＋）,HCV-RNA（-）。结论联合检测HCV抗体、HCVcAg、及HCV-RNA,分析丙型肝炎的感染模式,对丙型肝炎病情的诊断和治疗具有重要意义。     

鸭乙型肝炎病毒核酸荧光定量PCR方法的建立及应用

目的：建立鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)荧光定量的方法。方法：根据DHBV DNAS基因区的序列设计扩增所需3条引物，通过偶联反应用AmpliSensor荧光信号标记半巢式引物，经过前期不对称扩增、半巢式扩增及在线检测建立DHBV DNA阳性标准品QPCR的标准曲线，并将70份鸭血清分别用荧光定量PCR方法和地高辛标记的DHBV DNA探针斑点杂交的方法检测，比较结果的相关性。结果：DHBV DNA阳性标准品经过30次循环后，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出有180bp、70bp两个片段，与设计的片段大小相符，扩增产物的浓度与标准品的起始浓度成正比，扩增指数的数值大小与该循环时己合成的扩增产物的量成正比，起始浓度的大小与要合成的一定扩增产物的量所需的循环次数成反比。用荧定量PCR方法和斑点杂交的方法检测血清中DHBV DNA的结果有良好的相关性(r＝0．97，P＜0.01，ν＝58)。结论：荧光定量PCR方法可作为检测DHBV DNA含量的一个重要手段。     

应用双重原位杂交技术定位检测肝细胞癌中乙型,丙型肝炎病毒

探索乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒是否可同时感染同一宿主细胞。联合应用地高辛标记探针和生物素标记探针的双标记方法,成功建立起非放射性双重原位杂交技术,并应用这一技术检测了１０例肝细胞性肝癌及癌周细胞细胞内乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染情况。     

一种新的同时定量检测乙型肝炎病毒前基因组RNA和DNA的检测方法

目的 设计并建立一种新的能够同时测定核酸提取物中乙型肝炎病毒（HBV）前基因组RNA（pgRNA）和DNA的检测方法。方法 建立检测HBV pgRNA和DNA的探针法双重荧光定量PCR体系,通过DNA凝胶电泳、定量PCR等实验考察该检测体系的特异性和灵敏度,验证以该方法测定HepG2.2.15细胞及其培养上清中HBV pgRNA和DNA的可行性及准确度。结果 建立的探针法双重荧光定量PCR体系具有较好的特异性和灵敏度,测定不同稀释倍数的细胞培养上清时,在稀释倍数和测定结果间具有较好的相关性。但该方法更适用于测定细胞培养上清中的HBV pgRNA和DNA,而不适用于测定细胞样本。结论 本实验建立的方法能够避免核酸提取物中由于HBV DNA污染造成HBV RNA定量不准的问题,并且在一管PCR反应中同时实现了HBV pgRNA和DNA的双重检测,极大提高了检测效率,具有潜在的临床应用价值。     

丙型肝炎病毒RNA含量与抗-HCV及ALT的关系探讨

目的 了解丙型肝炎病毒核糖核酸（HCV RNA）与抗丙肝病毒抗体（抗-HCV）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）的关系。方法 83份确诊为丙肝的住院患者样本作观察组，95份健康体检人群样本作对照组，用荧光定量逆转录聚合酶反应（FQ-RT-PCR）检测这两组样本的HCV RNA含量，并同时采用ELISA法检测抗-HCV，用全自动生化检测仪测定ALT水平。结果 观察组HCV RNA含量高于80copy／ml者67份，抗-HCV阳性者64份．经进一步相关性分析，两者有很好的相关性（r=0．587，P=0．002）；83份病例中有58份ALT异常，其异常率随HCV RNA含量的升高而增加。经统计学分析，ALT异常例数和正常例数差异有显著性（P〈0．01）；ALT水平和HCV RNA含量无相关性（r=0．175，P=0．095）；而ALT异常率与HCV RNA含量呈正相关（r=0．903，P=0．036）。结论 HCV RNA含量与抗-HCV同时检测可提高临床对丙型肝炎的诊断。HCV RNA是反映HCV复制的可靠指标，结合ALT的结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的炎症状态。FQ-RT-PCR法检测HCV RNA具有非常好的临床应用价值。     

丙肝病毒核心抗原的检测在诊断丙肝中的意义

目的：通过分别检测丙肝病毒抗体（HCV-Ab）、丙肝病毒核心抗原（HCV-cAg）和定量检测HCV-RNA,探究丙肝病毒核心抗原检测对于丙型肝炎诊断的意义。方法对36例丙肝抗体阳性患者和120例丙肝抗体阴性患者同时检测HCV-Ab、HCV-cAg和HCV-RNA。丙肝抗体检测采用间接ELISA法,丙肝核心抗原检测采用双抗体夹心ELISA法,丙肝HCV-RNA检测采用荧光PCR法定量检测。结果36例丙肝抗体阳性组中,HCV-cAg阳性28例,HCV-RNA阳性25例。120例丙肝抗体阴性的门诊肝炎患者中HCV-cAg阳性有2例,HCV-RNA阳性有1例。结论 HCV-cAg检测可以缩短HCV抗体检测窗口期,特异性高,操作简便,可将二者联合起来,提高丙型肝炎病毒的检出率及准确度。     

江苏地区不同类型乙型肝炎患者HBV基因分型研究

目的:了解江苏地区乙型肝炎病毒基因型分布特征,探讨HBV各基因型与血清HBV DNA水平的关系.方法:采用荧光定量PCR结合Taqman MGB探针技术,对江苏地区176份乙型肝炎患者血清中的HBV DNA进行基因分型和定量检测.结果:176例血清中,C型117人(66.5%),B, C型40人(22.7%),B型9人(5.1%),D型1人(0.6%),A型1人(0.6%).C型与B, C混合型在HBV DNA水平上存在统计学差异(P＜0.05),B, C混合型的HBV DNA水平明显高于C型.C基因型在慢性乙型肝炎患者中的所占比例(71.4%)比在急性乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者中所占的比例较高,但差异无统计学意义.结论:江苏地区HBV基因型以C型为主, B, C混合型次之,B型较少,D型,A型极少;B, C混合型患者的HBV DNA数量水平高于C型.     

血清病毒载量与丙型肝炎相关肾病转归

目的 探讨血清病毒载量与丙型肝炎相关肾病转归的关系.方法 采用前瞻性研究方法,评价46名丙型肝炎(HC)相关肾病患者抗病毒治疗的效果.结果 46名HC相关肾病患者完成6个月抗病毒治疗后出现12例HCV-RNA阴转患者,检测这12例治疗前后血清丙氨酸转氨酶(ALT):从平均(92.4±62.2) IU/L降低至(54.1±34.3) IU/L,P=0.005;治疗前后24小时尿蛋白:从平均5.2g降到1.40 g,P=0.001.结论 血清病毒载量与丙型肝炎相关肾病转归存在相关性.通过抗病毒治疗,对改善肾脏病理有作用,是治疗HC相关肾病患者的有效手段.     

献血人群中HCV感染与HLA-II类基因的相关性研究

目的人类白细胞抗原（HLA）在机体抗病毒免疫中起重要作用，探讨献血人群中丙型肝炎病毒（HCV）感染与HLA-II类基因的相关性。方法选择2011年10月至2013年10月在浙江省血液中心献血的人员中HCVRNA阳性的样本45例，同时以健康人群为对照，其中HLA-DRB1位点对照样本8333例，HLA-DRB1位点对照样本72例，用PCR-SBT方法测定献血者HLA-II类基因中DRB1和DQB1等位基因情况。结果HLA-DRB1基因的DRB1*01:02（P=0.0394，OR=23.4，95%CI=2.89～189.1），DRB1*13:01（P=0.0095，OR=5.60，95%CI：1.74～18.00）；HLA-DQB1基因的DQB1*03:03（P=0.0402，OR=0.45，95%CI：0.21～0.94），DQB1*06:01（P=0.0456，OR=2.47，95%CI：1.05～5.83），这些基因位点的多态性在HCVRNA阳性献血者中的频率与健康对照人群比较有统计学差异。结论在献血人群中HCV感染与HLA-II类基因中部分多态性位点有相关性。     

实时荧光定量PCR检测丙型肝炎病毒

目的探讨实时荧光定量PCR（FQ—PCR）技术检测丙型肝炎病毒（HCV）RNA载量与抗-HCV及丙氨酸氨基转移酶（ALT）异常的相关性。方法用FQ—PCR检测115份疑似HCV感染的病人血清HCV—RNA，ELISA法检测抗-HCV，全自动生化分析仪测定ALT。结果以80拷贝／ml血清为标准，115份标本中HCV—RNA阳性率为54．8％（63／115）；抗-HCV阳性率为53．9％（62／115）；ALT异常率为40．9％（47/115）。HCV—RNA载量与抗-HCV（＋）例数呈正相关（r=0．986，P〈0．01）。HCV—RNA载量与ALT异常例数（r=0．94，P〈0．01）、含量（r=0．624，P〈0．01）呈正相关。结论HCV—RNA载量升高，抗-HCV阳性率相应增加，ALT高于正常值（40U／L）的异常率和浓度也增高，均呈正相关。FQ—PCR法可作为临床检测丙型肝炎的确诊方法之一。     

北京市1997-2003年丙型肝炎疫情报告病例的流行病学分析

目的 了解北京市丙型肝炎流行趋势.方法 整理分析历年来传染病疫情报告中病毒性肝炎的资料.结果 北京市急性丙型肝炎报告年平均发病率为1/10万左右.1997-2003年病毒性肝炎总发病数逐年呈明显下降趋势,而急性丙肝逐年发病水平有所上升,急性丙肝报告病例数占病毒性肝炎发病总报告数的百分比亦呈上升趋势.急性丙肝主要发病集中在60岁以上的老年男性.结论 目前本市丙肝急性发病处于较低水平,应注重阻断静脉吸毒、性传播、医源性等途径的丙肝病毒传播.     

丙型肝炎病毒发现过程的若干哲学思考

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的发现不仅有力地促进了病毒性肝炎的研究，在如何应用现代科学技术探索未知病原方面也给我们以深刻的启迪。在传统的病原体分离、纯化和抗原、抗体研究均无进展的情况下，人们转而采用重组ＤＮＡ技术首先获得了ＨＣＶ核酸序列，进而得到了重组抗原并建立了免疫学诊断方法，使得丙型肝炎的研究取得了突破性进展。回顾这一过程我们认识到，逆向的思维和研究方法是ＨＣＶ研究取得突破的关键，分子生物学理论和技术的不断发展为发现ＨＣＶ提供了客观条件，实践－认识－再实践－再认识是人类认识自然的正确途径。     

南通地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因分型

目的 :了解南通地区慢性丙型肝炎患者的HCV基因型分布情况。方法 :将 5 3例抗HCV阳性的血清标本用RT -PCR法检测HCV -RNA ,然后采用膜显色结果判读的基因芯片对 3 2例HCV -RNA阳性者进行基因分型研究。结果 :南通地区HCV感染检出 1b、1a、2a、1b + 1a、1b + 1a + 2a共 5种单一基因型和混合基因型 ,其中以 1b型为主 ,占 5 3 .1%。结论 :南通地区 1b型为优势株 ,2a和 1b + 1a型居次 ;1b + 1a型高于全国其他地区。     

PCR与ELISA检测乙肝病毒的对比及临床意义

目的 探讨荧光PCR法检测HBV-DNA定量ELISA定性检测乙肝病毒标志物临床价值比较.方法 取受试者空腹血清标本同时以荧光定量PCR法检测HBV-DNA和酶联免疫法捡测乙肝病毒两对半.结果 HBV-DNA定量在9.99×10^8 IU/mL～1.00×10^6 IU/mL之间的404例,大三阳比例为85.89％;HBV-DNA定量在9.99×10^5 IU/mL～1.00×10^3 IU/mL之间的416例,小三阳比例为59.38％;HBV-DNA定量在1.00×10^3 IU/ml～1.00×10^2 IU/mL的140例中,HBsAg、HBcAb阳性患者比例为71.43％;HBV-DNA定量＜1.00×102 IU/mL的992例中,HBsAg、HBeAg阴性模式比例为95.67％.结论 荧光定量PCR法检测HBV-DNA和ELISA定性检测HBV表面标记物呈正相关,即HBV-DNA拷贝数多的以大三阳居多,HBV-DNA拷贝数少的以无传染性病毒携带者和阴性者居多.荧光定量PCR可以直接反映体内乙肝病毒感染状态及病毒载量情况,较ELISA更利于判断疾病的严重程度和传染性,更有利于指导临床药物选择和疗效观察.