表皮生长因子促进小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的实验研究

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响.方法 将生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在EGF浓度为0(对照)、0.5、1、2.5、5、10 ng/ml的培养液中进行体外培养,观察生殖泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的情况.将达到MⅡ期的卵母细胞进行体外受精,观察原核和胚胎发育情况.结果 EGF浓度为1、2.5、5、10 ng/ml组GVBD发生率高于对照组;EGF浓度2.5、5、10 ng/ml组PB1排出率高于对照组,其中EGF浓度5 ng/ml组的GVBD、PB1发生率最高(P＜0.01).卵母细胞在1、2.5、5、10 ng/ml EGF培养浓度下的退化率低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).卵母细胞的体外受精率、2-细胞和4-细胞胚胎的发生率在EGF浓度为5 ng/ml时明显高于对照组(P＜0.01).结论 EGF可促进GV期卵母细胞的成熟,对其受精能力和胚胎发展也有促进作用,也可能有抑制卵母细胞凋亡的作用,而EGF以上作用与剂量有关.     

补肾活血方对PCO小鼠未成熟卵母细胞体外核成熟的影响

目的 探讨补肾活血方对PCO小鼠未成热卵母细胞体外核成熟的影响.方法 (1)制备补肾活血方含药血清:(2)制作PCO小鼠模型;(3)将PCO小鼠生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在不同采血时间获取的补肾活血方含药血清培养液中进行体外培养,观察补肾活血方含药血清对生发泡破裂(germinal vesicle break-down,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的时效关系.结果 (1)2 h和2.5 h药物血清组卵母细胞GVBD的发生率高于正常血清组和对照组,培养后4 h差异有统计学意义(P<0.01);(2)2 h和2.5 h药物血清组卵母细胞PB1的发生率高于正常血清组和对照组,培养后18 h差异有统计学意义(P<0.01).结论 2～2.5 h补肾活血方舍药血清对PCO小鼠未成熟卵母细胞体外核成熟具有明显促进作用.     

氯化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的探讨氧化锌对小鼠卵母细胞体外成熟的影响。方法采用细胞体外培养的方法,观察卵母细胞在分别含有低、中、高浓度(0μg/ml、1μg/ml、10μg/ml)氯化锌的M199培养液中体外成熟率和减数分裂的变化情况。结果1μg/mlZnCl2组GVBD发生率在4、8h明显高于对照组(P<0.01),16、24h高于对照组(P<0.05);而10μg/mlZnCl2组GVBD发生率在各时间点均明显低于对照组(P<0.01)。8h后,1μg/mlZnCl2组PB1排出率明显高于对照组(P<0.05),而10μg/mlZnCl2组PB1排出率明显低于对照组(P<0.05)。结论锌对体外小鼠卵母细胞成熟和减数分裂有重要的影响。     

一氧化氮供体硝普纳对小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响

目的　探讨一氧化氮供体—硝普纳 (SodiumNitroprusside ,SNP)对昆明小鼠卵母细胞体外自发成熟的影响。方法　利用体外培养方法 ,在培养的不同时间观察卵母细胞的成熟情况 ,研究SNP对卵母细胞自发成熟的动力学影响。结果　 (1) 1mmol LSNP能够明显延迟卵丘卵母细胞复合体 (CEOs)的自发成熟 ,与对照组相比 ,CEOs的生发泡破裂 (GVBD)和第一极体 (PB1)释放分别延迟了 8h和 10h。但在培养结束 (2 4h)时 ,CEOs处理组的PB1释放率与对照组相比有明显的降低 ,而处理组的生发泡破裂 (GVBD)百分率和对照组相比没有明显变化 ;1mmol LSNP能够明显延迟裸卵母细胞 (DOs)的自发成熟 ,与对照组相比 ,DOs处理组的GVBD和PB1释放分别延迟了 6h和 12h。且在培养 2 4h后 ,DOs处理组的GVBD和PB1释放率与对照组相比有显著的降低。 (2 ) 1mmol LSNP能够明显促进CEOs中卵丘细胞的离散 ,造成CEOs互相粘连在一起。 (3) 1mmol LSNP能够明显影响体外培养的DOs的形态 ,但对CEOs的卵母细胞却没有影响。而 1μmol LSNP对CEOs和DOs的自发成熟都没有影响。 结论高浓度的SNP对小鼠卵母细胞体外自发成熟有抑制作用     

14-3-3ε和Cdc25B在小鼠卵母细胞生发泡期阻滞中的作用

目的: 研究14-3-3ε和Cdc25B对小鼠卵母细胞生发泡(GV)期阻滞作用的影响,为阐明蛋白激酶A/Cdc25B/14-3-3ε通路在小鼠卵母细胞GV期阻滞中发育调控机制奠定基础。方法: 在体外将表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-WT、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321A和pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321D转录成mRNA。超排卵方法获得小鼠GV期卵母细胞,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型) mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组,收集各组母卵细胞后采用Western blotting法检测外源性14-3-3ε和Cdc25B蛋白表达及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态;相差显微镜观察卵母细胞的形态学变化并计数生发泡破裂(GVBD)率。结果: 未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型) mRNA共注射组在显微注射后20h均未发生GVBD(P>0.05); 14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组在显微注射后1、2和3h卵母细胞的GVBD率分别为(5.00±0.68)%、(62.00±3.56)%和(100.00±0.00)%,显微注射后20h到达第2次减数分裂中期(MII)的比例为(79.00±2.80)%,与未注射组和TE缓冲液注射组比较,GVBD率和到达MII的比例均显著升高(P<0.01)。结论: 14-3-3ε通过Cdc25B的321位丝氨酸磷酸化和脱磷酸化调控卵母细胞由GV期向GVBD的过渡。     

金雀异黄素对雌性小鼠卵母细胞成熟及其受精能力的影响

目的:探讨金雀异黄素(Gen)对小鼠卵母细胞成熟的影响.方法:用不同浓度的Gen给小鼠腹腔注射后,检测Gen对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PB1)释放、体外受精和胚胎发育等的影响;用含不同浓度的Gen的培养液培养小鼠未成熟卵母细胞,观察卵母细胞GVBD、PB1释放的发生率;结果:腹腔注射Gen可以增加小鼠子宫湿重,增加小鼠的超排卵数(除高剂量组外)、影响卵母细胞体内成熟过程中的GVBD和第一极体的释放(Gen-0.5组除外),高剂量组小鼠成熟卵母细胞的受精能力和胚胎发育能力均下降.Gen以剂量依赖的方式抑制体外培养小鼠未成熟卵母细胞的GVBD和PB1的释放.结论:Gen能够可逆性地抑制小鼠未成熟卵母细胞的成熟,高剂量的Gen可能影响卵母细胞减数分裂过程,降低卵母细胞的受精能力,提示育龄妇女摄人过量Gen及其化合物可能会导致生育能力降低,甚至造成不育或不孕.     

牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响

目的 将处于生发泡期(GV期)和体外成熟期(IVM)的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻.解冻,对其卵裂率和囊胚率以及一些与发育相关基因的mRNA表达量进行评价.方法 玻璃化冷冻GV期(n=224)和IVM期(n=235)牛卵母细胞,解冻后对其进行体外培养并采用quantitative real time-PCR技术对冷冻.解冻后的GV和IVM期卵母细胞中Bax、Dnmtl、Hdacl、Cyclinbl、Cdc2和cu Zn SOD等基因的mRNA表达量进行检测.结果 GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(14.7%～89.4%,34.5%～89.4%,P<0.001)及囊胚率(3.0%～28.4%,12.3%～28.4%,P<0.001)均极显著低于对照组(n=238).且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率(14.7%～34.5%,P<0.001)和囊胚率(3.0%～12.3%,P<0.001)极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞;GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,Dnmtl和Cu Zn SOD基因的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),其余基因mRNA表达量变化不显著;对M期卵母细胞而言,Bax基因mRNA表达量极显著低于对照组(P<0.01),Cyclinbl、Cdc2和Cu Zn SOD基因的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),其余基因表达量没有发生显著变化.结论 对牛GV期或IVM卵母细胞进行玻璃化冷冻可能会导致基因mRNA表达量降低,可能会对胚胎发育产生负面影响.     

小鼠生殖泡期卵母细胞体外培养成熟、受精和胚胎发育的研究

为研究性成熟小鼠生殖泡期(GV)卵母细胞的体外成熟,同时比较体外成熟(IVM)和体内成熟组卵子的受精、胚胎发育情况,机械法分离性成熟小鼠卵巢中的GV期卵母细胞及刺激后的成熟卵母细胞,直接培养于[α-MEM+1 mg/ml Fetuin+10％FCS+1.5 IU/ml rHCG±5 ng/mlrEGF]中,16 h后移入f-HTF+10％FCS体外受精4 h,再在M16+10％FCS中培养72 h。记录其成熟、受精和胚胎发育情况,并与体内成熟的卵子比较。结果:GV期卵母细胞在含HCG培养液中成熟率为89.68％,培养液中添加EGF后,卵子成熟率无显著上升,但受精率、卵裂率均有显著提高(P<0.05)。体内成熟卵子的受精率可达62.83％,卵裂率60.18％;IVM组受精率仅48.92％,卵裂率36.69％,明显低于前者(P<0.01)。结论:小鼠GV期卵母细胞可体外培养成熟、受精和胚胎发育。培养液中添加促性腺激素和EGF都促进卵母细胞体外成熟、受精和胚胎发育能力。但IVM组卵母细胞的受精率、卵裂率低于体内成熟组,培养系统仍需改进。     

促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用

目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期), 随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组, 培养24~28 h后成熟卵母细胞进行ICSI授精, 并观察胚胎发育情况, 记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果 对于MⅠ期卵母细胞, 是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。对于GV期卵母细胞, 培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3% vs 4.2%, P<0.05), 但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养, 无论是否添加促性腺激素都可自然成熟, 在GV期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。     

两种玻璃化装载工具对人卵母细胞冻融效果的比较

目的 比较自制的Cryotop装载管与商用的Cryotop装载管对人卵母细胞玻璃化冻融效果.方法 冷冻时采用自制的Cryotop装载者为A组,采用商用的Cryotop装载者为B组.比较采用两种装载工具冻融体外受精胚胎移植(IVF-ET)中48 h后受精失败MⅡ(metaphase Ⅱ )卵子(A1、B1组)、获卵日MⅡ卵母细胞(A2 、B2组)及单精子显微注射(ICSI)患者的GV(germinal vesicle)卵子(A3、B3组).结果 冻融受精失败MⅡ卵母细胞部分: A1、B1组的回收率和存活率分别为93.9%、96.8%、82.9%和86.2%,相互比较差异无统计学意义(P>0.05);新鲜MⅡ卵母细胞部分: A2组的回收率、存活率、受精率、卵裂率和优胚率分别为100%、100%、80%、100%和25%; B2组的回收率、存活率、受精率、卵裂率和优胚率分别为100%、100%、60%、100%和33.3%;A2、B2组比较差异无统计学意义;GV期卵子, A3与B3组的回收率、存活率、GVBD率和MⅡ率分别为:100%与90%,81.3%与77.8%,92.3%与85.7%,83.3%与66.7%,与对照组比较差异均无统计学意义.结论 自制Cryotop装载管具有价格低廉的优点且并没有降低冻融效果,可以作为临床运用,特别是科研使用的一种玻璃化冷冻的装载工具.     

甲氧滴滴涕对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:观察甲氧滴滴涕(MXC)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响.方法:实验组小鼠未成熟卵用7.25,14.5,29ms/L MXC不同浓度培养液培养;对照组小鼠未成熟卵直接用合成人输卵管培养液培养,两组培养时间均为24 h.观察各组生发卵泡破裂(GVBD)和第一极体(PBl)的形成,出现PBl的卵母细胞视为核成熟.结果:培养24 h时,卵母细胞GVBD发生率7.25 ms/L MXC组为80.4%,14.5 ms/L MXC组为78.8%,29 ms/L MXC组为78.4%,与对照组的86%相比较并没有明显改变.培养过程中不同浓度MXC试验组GVBD发生较同期对照组相比较也没有明显延迟.但在培养液培养24 h时PBl的排出率7,25 mg/L MXC组为52.8%,14.5 mg/L MXC组为44.4%.29 mg/L MXC组为22%,明显低于对照组的71.2%,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:MXC对体外培养的小鼠卵母细胞GVBD发生没有影响,但能抑制其卵母细胞的核成熟.     

温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的研究

目的 探讨温肾养血方提高高龄雌鼠卵母细胞质量和胚胎发育潜能的作用机制。方法 按随机数字表法将8月龄ICR小鼠分为对照组、血清促性腺激素（pregnant mare serum gonadotropin,PMSG）组、温肾养血组、温肾组、养血组,观察用药后各组受精率和卵裂率,卵母细胞和受精卵线粒体的表达情况。结果 温肾养血组、温肾组、养血组的受精率和卵裂率明显高于对照组和PMSG组（P<0.05）,温肾养血组的受精率和卵裂率最高（P<0.05）。2细胞率、4细胞率、8细胞率、桑葚胚率和囊胚率,温肾养血组均比PMSG组高且差异有统计学意义（P<0.05）。卵母细胞和受精卵中的线粒体DNA拷贝数温肾养血组最高,与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 温肾养血方可能通过调控卵母细胞线粒体DNA拷贝数提高卵母细胞质量和胚胎发育潜能。     

泛素羧基末端水解酶L1 C90S和I93M点突变不影响小鼠卵母细胞成熟

目的 通过观察泛素羧基末端水解酶L1(UCHL1)点突变蛋白与野生型蛋白过量对小鼠卵母细胞成熟的影响,并分析其在小鼠卵母细胞离体成熟过程中的作用及作用方式.方法 通过原核重组蛋白技术制备UCHL1点突变(C90S和I93M)和野生型蛋白与谷胱甘肽S-转移酶(GST)的融合蛋白,通过显微注射技术将UCHL1野生型蛋白与GST的融合蛋白、UCHL1点突变蛋白与GST的融合蛋白、GST、PBS分别注射到小鼠未成熟卵母细胞,或在体外培养基中添加UCHL1野生型蛋白与GST的融合蛋白,分析野生型UCHL1过量、UCHL1(I93M)点突变蛋白添加及泛素水解酶活性缺失的UCHL1(C90S)点突变蛋白添加对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)率的影响.分离UCHL1(I93M)点突变小鼠与野生型小鼠的生发泡期卵母细胞,体外培养3 h后比较其GVBD率.结果 显微注射UCHL1野生型蛋白及其点突变体与GST的融合蛋白的各组之间、注射GST组、注射PBS组卵母细胞GVBD率差异均无统计学意义,在培养基中添加UCHL1蛋白与GST的融合蛋白组卵母细胞GVBD率与无注射无添加对照组相比差异也无统计学意义(P均>0.05).注射UCHL1(C90S)与GST的融合蛋白组有少量生发泡期卵母细胞体外发育为MⅡ期卵母细胞后呈现极体较对照组偏大的现象.UCHL1(I93M)点突变小鼠生发泡期卵母细胞体外GVBD率与野生型小鼠比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 在小鼠卵母细胞中添加外源性UCHL1、有致病作用的UCHL1(I93M)突变体或泛素水解酶活性丧失的UCHL1(C90S)突变体均不影响卵母细胞成熟的GVBD进程,UCHL1(I93M)点突变小鼠卵母细胞GVBD率亦无异常,但UCHL1(C90S)点突变可能影响极体的形成.     

点突变Uchl1不影响小鼠卵母细胞成熟

目的 通过观察突变蛋白与野生蛋白过量对卵母细胞成熟过程的影响,分析Uchl1在小鼠卵母细胞离体成熟中发挥的作用及其作用方式。方法 通过原核重组蛋白技术制备点突变（C90S和I93M）和野生型Uchl1蛋白,通过蛋白微量注射技术将突变蛋白与对照蛋白注射到未成熟卵母细胞,或体外培养液中添加突变蛋白与野生型蛋白,分析野生型Uchl1过量,或突变Uchl1-I93M蛋白添加,或泛素水解酶活性缺失的Uchl1-C90S突变蛋白添加,对于卵母细胞体外成熟的影响。结果 显微注射UCHL1融合蛋白的各组之间以及与注射PBS之间, GVBD率差异没有达到统计学显著性;同时培养液中添加Uchl1的GST融合蛋白,相对于无注射对照组,也没有统计学显著差异（P>0.05）。注射GST-C90S融合蛋白组少量GV期卵母细胞体外发育为MII期卵母细胞后呈现极体偏大于对照组。I93M点突变小鼠与WT小鼠比较,GV期卵母细胞体外GVBD率无显著差异。结论 在小鼠卵母细胞中,添加外源性Uchl1,或者有毒性作用的I93M突变体,或者水解酶活性结构改变的C90S突变体,均不影响卵母细胞成熟的GVBD进程。即使构建的I93M点突变小鼠卵母细胞GVBD率无异常。但是,其水解酶活性位点突变影响极体的形成。     

排卵前成熟卵泡液对卵母细胞体外成熟的影响

目的 :探讨成熟卵泡液、促性腺激素对人类生殖泡期 (germinalvesicle,GV)不成熟卵母细胞体外成熟 (invitromaturation ,IVM)的影响。方法 :在基本培养液中加入 5 0 %成熟卵泡液 (folliclefluids ,FF) (Ⅰ组 )、或促性腺激素 (gonadotrophin ,Gn) (Ⅱ组 )或单用基本培养液即对照组 (Ⅲ组 )用于GV期卵母细胞的体外培养 ,观察成熟率及进一步发育能力。结果 :三组之间GVBD(生殖泡期破裂 )率差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,MⅡ期率和受精率 ,Ⅰ、Ⅱ组明显高于Ⅲ组 (P <0 .0 1)、Ⅰ组与Ⅱ组之间无差异 (P >0 .0 5 ) ;Ⅰ组卵裂至 8细胞的比例为 6 2 .5 % ,明显高于Ⅱ组的33.3% (P <0 .0 1)。结论 :GV期卵母细胞尽管在基本培养液中可完成核成熟 ,但胞质不成熟 ,加入 5 0 %FF或Gn均能促卵母细胞的成熟 ,两者相比 5 0 %FF效果更好。     

补肾中药复方对小鼠精子受精能力影响的研究

目的观察补肾中药复方对小鼠精子受精能力的影响,并探讨其作用机制。方法正常雄性小鼠随机分为服用补肾中药复方的实验组和服用生理盐水的对照组,实验组灌服补肾中药复方溶液,1次/d,每次1mL,共14d,对照组同时间灌服等量的生理盐水。于末次灌胃后第7d与超排的雌鼠合笼,合笼成功后处死雌鼠取出受精卵(1cell胚),体内实验观察卵裂率和囊胚生成百分率;体外实验观察体外受精百分率(IVF%)和囊胚率,并观察与精子受精能力相关的完整顶体百分率(AIS%)和顶体酶活性。结果体内实验发现实验组卵裂率(88.3%±1.29%)高于对照组(62.1%±3.48%),P=0.005;体外实验发现实验组IVF%为82.4%±2.89%,高于对照组(62.5%±3.58%),P=0.015;而体内、外实验均发现两组的囊胚生成百分率差异无统计学意义。实验组顶体酶活性为(44.29±5.49)IU,与对照组〔(27.12±4.87)IU〕的差异有统计学意义(P=0.048),两组AIS%差异无统计学意义。结论补肾中药复方能提高小鼠精子的受精能力,其作用机制有可能通过调节顶体酶活性来影响小鼠精子的受精能力。     

不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻

目的 比较显微授精治疗周期中剩余的生发泡(GV)期不成熟卵母细胞的体外成熟培养及玻璃化冷冻效率.方法 将显微授精(ICSI)周期剩余的GV期卵母细胞随机分为3组:①在GV期玻璃化冷冻,解冻后进行体外成熟培养;②体外成熟培养至MII期后行玻璃化冷冻;③对照组:直接进行体外成熟培养(IVM).观察体外培养成熟卵母细胞及不同成熟阶段卵母细胞冷冻后的受精和发育潜力.结果 对照组的成熟率为71.6%(53/74),其中16枚行显微授精(ICSI),受精率为87.5%(14/16),卵裂率为85.7%(12/14),囊胚形成率为14.3%(1/7);组1与组2的存活率分别为97.5%(39/40)和87.5%(35/40),差异没有显著性;但是组1的成熟率28.2%(11/39)显著低于(P<0.01)对照组的成熟率71.6%(53/74);组2的受精率74.1%(20/27)与对照组的受精率87.5%(14/16)相比,差异没有显著性.结论 ICSI周期剩余的GV期卵母细胞能在体外培养成熟并具有良好的发育潜力,将GV期卵母细胞体外成熟培养至MⅡ期更适合于玻璃化冷冻保存.     

不同浓度雷帕霉素对小鼠卵母细胞体外成熟及发育潜能的影响

摘要:目的 探究不同浓度雷帕霉素对小鼠卵母细胞体外成熟(invitro maturation,IVM)结局的影响及其在最佳浓 度下对卵母细胞质量产生的具体效应。方法 收集雌性ICR 小鼠的未成熟卵母细胞(GV 期)进行IVM,在培养液中添 加不同浓度的雷帕霉素(1nmol/L~10μmol/L),通过比较成熟率和激活率,筛选最佳作用浓度。随后,在处理组的培养 液中加入最佳浓度的雷帕霉素,对处理组与对照组中IVM 卵母细胞的激活后发育情况、纺锤体组装、染色体排列情况进 行比较。结果 10nmol/L 雷帕霉素培养组的 卵 母 细 胞 在IVM 后 呈 现 出 较 高 的 成 熟 率[(84.5±1.6)%]和 激 活 率 [(62.4±1.5)%],故选择10nmol/L作为添加雷帕霉素的最佳浓度。在随后的培养中,10nmol/L雷帕霉素组激活胚胎 的卵裂率和囊胚形成率也较对照组显著升高[卵裂率:(54.9±2.6)% vs.(41.9±2.1)%,P=0.0178;囊 胚 形 成 率: (12.5±1.6)%vs.(6.4±1.4)%,P=0.0441]。此外,与对照组相比,10nmol/L雷帕霉素组的成熟卵母细胞染色体排 列异常率降低[染色体异常率:(21.0±1.8)%vs.(33.7±3.5)%,P=0.0236],而纺锤体形态未见明显差异[纺锤体异 常率:(26.1±3.1)% vs.(32.1±3.6)%,P=0.2668]。结论 雷帕霉素对小鼠未成熟卵母细胞IVM 的作用与其浓度 密切相关,10nmol/L雷帕霉素能够改善小鼠IVM 卵母细胞的发育潜能和质量。     

促性腺激素及雌二醇对小鼠卵母细胞体外成熟的影响

目的:探讨取卵前给予孕马血清(PMSG)或人绒毛膜促性腺激素(HCG)以及在培养液中添加不同浓度雌二醇对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟(IVM)及胚胎发育的影响。方法:将雌性小鼠随机分成5组,即24 h PMSG组(取卵前24 h给小鼠腹腔注射PMSG)、48 h PMSG组(取卵前48 h给小鼠腹腔注射PMSG)1、6 h HCG组(取卵前16 h给小鼠腹腔注射HCG)、PMSG+HCG组(给小鼠腹腔注射PMSG 48 h后腹腔注射HCG 16 h取卵)和未用药组。取未成熟卵丘-卵母细胞复合体(COCs)置入含不同浓度E2(0,0.5,1.0,2.0 mg/L)培养液中培养24 h,并行卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)及胚胎培养。比较各组之间卵母细胞成熟率、受精率和卵裂率。结果:①24 h PMSG组和48 h PMSG组COCs的卵母细胞成熟率明显高于未用药组或16 hHCG组,差异有统计学意义(P<0.05)。PMSG+HCG组的受精率和卵裂率明显高于其他4组(P<0.01)。②与对照组比较,1.0 mg/L E2组和1.5 mg/L E2组中COCs的卵母细胞受精率和卵裂率明显增高(P<0.05)。各浓度17β-E2组间以及与对照组比较DO的成熟率和受精率无显著差异(P>0.05),但极少数受精卵发生卵裂。结论:①取卵前给予小鼠PMSG或者联合给与HCG均可促进卵母细胞体外成熟,但不能提高其早期胚胎发育能力;取卵前给予小鼠HCG不能提高卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育能力。②在培养液中添加一定浓度E2可促进未成熟卵母细胞胞质成熟,但不能促进核成熟。     

补肾填精中药对妊娠期小鼠子宫内膜容受性影响的研究

目的观察补肾填精中药对妊娠小鼠子宫内膜容受性的影响。方法 120雌性小鼠随机分为治疗组和对照组,治疗组予调经助孕胶囊,对照组予六味地黄丸灌胃2周,动情期小鼠按雌雄2∶1比例合笼,次晨阴道查有阴栓为妊娠第1天。两组分别于妊娠第3、5、7天,取每组20只妊娠小鼠处死,取出子宫,刮取内膜。测定内膜αvβ3 mRNA及蛋白的表达。观察第5天妊娠小鼠胚泡着床数。结果整合素β3在治疗组和对照组早孕小鼠子宫内膜中的表达随妊娠天数呈规律变化,在治疗组的表达高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。妊娠第5天治疗组孕鼠胚泡着床数目明显多于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论补肾填精中药通过增加小鼠子宫内膜整合素β3的表达,提高胚泡着床数目,而改善子宫内膜容受性,提高妊娠率。