新疆维、汉妇女宫颈癌基因组表达谱的差异及聚类分析研究

目的:利用基因芯片技术寻找维吾尔族、汉族民族宫颈癌各自不同的相关基因差异表达情况,探讨维吾尔族、汉族宫颈癌基因谱改变的不同及导致宫颈癌发病机制的差异。方法:采用含有21 522条基因的芯片,检测4例维吾尔族、3例汉族宫颈癌患者宫颈组织的差异基因表达谱的改变情况。结果:(1)4例维吾尔族宫颈癌共同的差异表达4倍以上的基因共有378条(288条上调,90条下调);3例汉族宫颈癌共同的差异表达4倍以上的基因共有549条(356条上调,193条下调);4例维吾尔族宫颈癌和3例汉族宫颈癌共同的差异表达4倍以上的基因共有166条上调。(2)维吾尔族、汉族宫颈癌既有共同的差异表达基因,主要涉及原癌基因、抑癌基因、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白、蛋白翻译合成基因;又有各自特有的共同差异表达基因。(3)对4例维吾尔族和3例汉族宫颈癌共同的差异表达4倍以上的166条基因进行数据聚类分析,发现子宫颈癌类内部的个体在特征上具有相似性,不同类间个体特征的差异性较大。结论:维吾尔族和汉族宫颈癌既有相同的差异表达基因,又有各自特有的差异表达基因。对维吾尔族、汉族宫颈癌共同的差异表达基因的研究有助于对宫颈癌的发生、发展的分子机制、信号传导通路进行进一步的认识;对2个民族各自特有的共同差异表达基因的研究有助于进一步认识子宫颈癌在发病机制上可能存在民族差异。     

肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌的表达及其与HPV感染的关系

目的探讨肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中的蛋白表达以及人乳头瘤病毒(HPV)16E6、E7和HPV18E6/E7感染对其表达的影响。方法采用免疫组化SP法检测70例浸润性宫颈癌、15例原位癌、20例正常宫颈组织中KAI1蛋白的表达,采用PCR扩增-琼脂糖凝胶电泳法检测浸润性宫颈癌组织中HPV16E6、E7和HPV18E6/E7的DNA状况。结果宫颈浸润癌及原位癌组织中的KAI1蛋白表达与正常宫颈上皮中的表达相比明显下调(P<0.05),原位癌与浸润癌中的表达差异无统计学意义;HPV16E6、E7和HPV18E6/E7在浸润性宫颈癌中的阳性率分别为67.1%、54.3%和12.9%,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染与宫颈癌中的KAI1蛋白表达无相关性。结论肿瘤转移抑制基因KAI1在宫颈癌中呈下调表达,HPV16E6、E7和HPV18E6/E7感染不影响其表达。     

宫颈癌组织中HPV和p53基因表达的检测

①目的 探讨人乳头瘤病毒（HPV）感染和p53基因异常在宫颈癌发生发展中的作用。②方法 用PCR技术检测12例宫颈原位癌、45例宫颈癌和20例正常宫颈组织中HPVl6／18DNA，RT-PCR检测HPV16／18阳性标本E6基因mRNA表达，聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测p53基因外显子5～8的突变，同时采用免疫组化技术检测P53蛋白的表达。③结果 宫颈原位癌、宫颈癌HPV16／18阳性率均为66．67％，明显高于正常宫颈组织（20．00％），差异有显著性（χ^2=5．12、12．09，P〈0．05、0．01）。宫颈癌组织中HPV16／18 E6基因mRNA阳性表达率明显高于正常宫颈组织，差异有显著性（P=0．039）。宫颈原位癌和正常宫颈组织间、宫颈原位癌和宫颈癌间HPV16／18 E6 mRNA阳性表达率差异均无显著性（P=0．141、0．272）。45例宫颈癌标本中测得exon5和exon7突变各1例，均发生在HPV阴性宫颈癌组织，未检测到exon6和exon8的突变。宫颈原位癌和正常宫颈组织中均未检测到p53基因突变。正常宫颈组织中未检测到P53蛋白表达，宫颈原位癌和宫颈癌组织中P53蛋白阳性表达率分别为25．00％和42．22％，明显高于正常宫颈组织（χ^2=10．81，P（0．01）。P53蛋白的表达与HPV16／18感染无明显相关性（P〉O．05）。④结论 HPV感染和p53基因异常与官颈癌的发生密切相关，官颈癌组织中p53基因的突变率较低，推测P53蛋白的异常累积可能并非p53基因突变所致。     

宫颈癌组织中P16和HPV16/18 E7的表达及意义

①目的研究宫颈癌组织中抑癌基因p16 mRNA和蛋白质的表达,以及与HPV16/18 E7表达的关系.②方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测45例宫颈浸润癌组织、12例宫颈原位癌组织和20例正常宫颈组织中HPV16/18的感染情况;采用RT-PCR技术检测上述标本中HPV16/18阳性者E7 mRNA的表达水平及所有标本中p16 mRNA表达水平;采用免疫组化技术进一步检测HPV16/18 E7、P16蛋白的表达情况.③结果宫颈原位癌和浸润癌HPV16/18的感染率、HPV16/18 E7 mRNA和蛋白表达阳性率明显高于正常宫颈组织,差异有显著性(χ2=5.12～15.78,P<0.05、0.01),原位癌和浸润癌组之间比较差异无显著性(χ2=0.119、0.000,P>0.05);原位癌和浸润癌p16 mRNA的相对表达量明显高于正常宫颈,差异有显著性(F=5.412,q=4.125、5.519,P<0.05);HPV16/18 E7阳性组p16 mRNA的表达阳性率明显高于阴性组,差异有显著性(t=4.127,P<0.01);P16蛋白在宫颈原位癌和浸润癌组织中呈现过表达,在正常组织中为阴性表达或弱表达;p16 mRNA的相对表达量与HPV16/18 E7 mRNA的相对表达量呈显著正相关(r=0.813,P<0.05);P16蛋白的过表达与HPV16/18 E7蛋白表达有相关关系(χ2=8.959,P<0.01);HPV16/18 E7 mRNA和蛋白及p16 mRNA和蛋白的表达与肿瘤的组织学分级、淋巴结转移、肿瘤的大小和病人的年龄无关(P均>0.05).④结论抑癌基因p16的过表达发生在宫颈癌的早期和癌前病变阶段,可用于临床筛查和早期诊断宫颈癌.     

汉族、维吾尔族宫颈癌相关基因谱对比分析研究

目的：探讨汉族、维吾尔族官颈癌组织中基因表达的差异及子宫颈癌发病机理。方法：应用含有2048条人类全长基因cDNA表达谱芯片，对临床手术切除的3例汉族及3例维吾尔族（维族）宫颈鳞癌组织及自身部分正常宫颈组织标本的基因表达谱进行对比分析。站杲：3例汉族宫颈癌组织中有2条共同差异表达的基因，均为表达减少（下调）的基因。3例维吾尔族宫颈癌组织中有共同差异表达的基因64条。6例宫颈癌组织中无共同差异表达的基因，但在5例宫颈鳞癌组织中共同差异表达的基因3条，4例宫颈癌组织中共同差异表达基因49条。结论；宫颈癌的发生与多种肿瘤相关基因有关。汉、维族宫颈癌组织中有基因表达的差异，推测汉、维族宫颈癌的生存在差异。     

基因芯片在筛选宫颈癌相关基因中的应用研究

目的：通过研究宫颈癌组织和正常宫颈组织中差异表达的基因，筛选出与宫颈癌相关的基因群，并进一步研究其表达和初步功能。方法：以含2048条人类全长基因的cDNA基因表达谱芯片，检测3例宫颈癌标本和正常宫颈标本的基因表达谱，计算机分析比较两种组织中差异表达的基因。结果：3例宫颈癌差异表达基因分别有197条、429条和665条，共同差异表达的基因有64条。结论：宫颈癌同其他肿瘤一样，是多种基因结构和功能改变的结果，有关宫颈癌特异性相关基因及其作用有待进一步研究。     

HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织的表达及意义

目的:通过检测HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的表达情况,探讨由HLA-DR抗原介导的免疫应答在感染高危型人乳头瘤病毒(HPV)至发展为宫颈癌过程中的作用机制。方法:采用免疫组织化学SP法检测正常宫颈、宫颈上皮内瘤病变(CIN)及宫颈癌组织中HLA-DR抗原及HPV16/18E6的表达情况。结果:HLA-DR抗原的阳性表达率在正常宫颈、CIN、宫颈癌组织中分别为37.5%、73.3%、81.8%,而HPV16/18E6蛋白的阳性表达率则分别为37.5%、60.0%、75.8%,两者在3组的表达差异显著,P均<0.05。HLA-DR抗原及HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率随临床分期、分化程度及淋巴结是否转移而不同,但无显著性差异,P均>0.05。结论:HLA-DR抗原递呈病毒抗原给T细胞引起的免疫应答可能在宫颈癌的发生发展过程中起重要的作用。     

应用基因芯片技术筛选肝细胞癌相关基因

目的：应用基因芯片技术筛选肝细胞癌相关基因。方法：利用CapitalBio公司基因芯片,对肝细胞癌组织和正常组织基因表达谱进行检测,并利用生物信息学方法对检测结果进行分析。结果：按差异显著性标准,从16000条基因中筛选出在肝细胞癌组织中共同差异表达基因326个,其中已知基因194个,新基因132个。在筛选出的已知基因中,表达上调113个,表达下调81个,包括原癌基因和抑癌基因、免疫相关基因、细胞信号和传递蛋白相关基因、蛋白翻译和合成相关基因、代谢相关基因、细胞周期蛋白相关基因、细胞骨架相关基因、细胞凋亡相关基因、DNA合成和修复相关基因等。结论：基因表达谱芯片技术可以筛选出肝细胞癌表达异常的相关基因群,并高效对基因功能进行研究。基因表达谱的分析有助于研究肝细胞癌发病机制。     

RASSF1A基因在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨RASSF1A基因在宫颈癌发生过程中的作用及其与HPV感染的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链技术在39例宫颈癌及12例正常宫颈组织中检测RASSF1A基因的表达,并分析宫颈癌中HPV16/18的感染状况.结果:39例宫颈癌组织RASSF1A基因表达显著低于对照组(P＜0.01);淋巴结转移组RASSF1A表达亦低于淋巴结未转移组(P＜0.05);宫颈癌组HPV16/18的感染率为69.2%(27/39).宫颈癌中RASSF1A基因表达与患者年龄、肿瘤大小、病理分级、临床分期及HPV感染无显著相关性(P＞0.05).结论:RASSF1A基因的表达失活使其丧失了抑癌作用,是促进正常宫颈上皮细胞癌变的一个重要因素.     

宫颈癌组织Bcl-2基因的表达与HPV感染的关系

目的研究宫颈癌组织Bcl-2基因的表达与人乳头瘤病毒（HPV）感染的关系。方法应用免疫组化PV-9000法对正常宫颈组织38例、各级宫颈上皮内瘤样变（CIN）组织106例、宫颈癌组织66例中Bcl-2基因的表达水平进行检测。应用PCR方法对66例宫颈癌组织中HPV表达进行检测及分型。结果Bcl-2在各宫颈组织中均有表达,宫颈癌组Bcl-2阳性表达率（57．6％）,显著高于正常宫颈组（15．8％）和CINI组（19．4％）,P均〈0．01;高于CINⅡ组（28．6％）,P〈0．05;与CINlI组（60．0％）比较差异无统计学意义,P〉0．05。宫颈癌组织中Bcl-2蛋白表达与HPV感染具有相关性,P〈0．05。Bcl-2蛋白在HPVl6／18阳性宫颈癌组织和HPV其他型别阳性宫颈癌组织中表达差异无统计学意义,P〉0．05。结论Bcl-2蛋白的高表达可能在宫颈癌的发生发展中起重要作用。Bcl-2蛋白的高表达与宫颈癌HPV感染相关,但与HPV型别关系不大。Bcl-2蛋白可能成为宫颈癌诊断和治疗的指标。     

Gene identification by cDNA arrays in HPV-positive cervical cancer

BACKGROUND: One of the most frequent malignancies in women worldwide is carcinoma of the uterine cervix. High-risk human papillomavirus (HPV) infection is considered the most important etiological factor of uterine cervical cancer. Our aim was to identify novel cellular genes that could potentially act as predictive molecular markers for human cervical cancer by means of cDNA arrays. METHODS: We used cDNA arrays to examine the expression profiles of six cell lines derived from human cervical cancer, three HPV+ tumor samples and three normal (HPV-) epithelium tissues. Data normalization was performed and the top overexpressed genes were obtained. Hierarchical cluster was performed and, to validate some of the differentially expressed genes between normal and carcinogenic samples, semi-quantitative RT-PCR, in situ hybridization and immunohistochemistry were performed in tissue samples. RESULTS: Four genes were demonstrated to be consistently overexpressed in invasive cervical cancer biopsies; three novel genes not previously related to cervical cancer: MMP10, Lamc2 and Claudin 1. Moreover, overexpression of IL6 and VEGF was corroborated. CONCLUSIONS: The identification of characteristic molecular changes in cervical cells by carcinogenesis and HPV infection can lead to a better understanding of cervical cancer. cDNA arrays are beginning to provide new possible molecular markers for prognosis and diagnosis. This technology could eventually help to elucidate the biological differences of the particular mechanisms associated with each different HPV-type infection and those with a poor prognosis.     

新疆维、汉妇女宫颈癌与人类乳头瘤病毒的关系研究

目的:探讨新疆地区维吾尔族、汉族妇女宫颈癌发病率不同的原因中是否有人类乳头瘤病毒(HPV)感染型别特点的影响因素。方法:采用导流杂交基因芯片技术检测200例维吾尔族和200例汉族宫颈癌患者21种HPV亚型感染的分布情况。结果:(1)维吾尔族宫颈癌中HPV高危亚型的排序是HPV16、HPV58、HPV18、HPV52和HPV31;汉族宫颈癌的排序是HPV16、HPV31、HPV58、HPV18和HPV52。HPV58、HPV31分别在维吾尔族、汉族宫颈癌中占第二位,是维吾尔族、汉族宫颈癌除HPV16之外较易感染的类型。(2)维吾尔族宫颈癌组织中多重感染者43例,占HPV阳性患者的21.83%;汉族宫颈癌组织中多重感染者27例,占HPV阳性患者的13.78%,两者比较差异有统计学意义。(3)HPV高危亚型感染频率在维吾尔族、汉族宫颈癌中不同。维吾尔族宫颈癌HPV16、HPV58、HPV18、HPV52在HPV阳性的宫颈癌中占的比例分别为65.88%、8.63%、7.06%和2.75%。汉族宫颈癌HPV16、HPV31、HPV58、HPV18在HPV阳性的宫颈癌中占的比例分别为66.81%、6.90%、4.74%和3.88%。结论:维吾尔族、汉族宫颈癌的HPV感染谱不同;维吾尔族宫颈癌患者有较多的HPV高危亚型多重感染,维吾尔族妇女感染上HPV后更容易发展成子宫颈癌。     

PCR detection and typing of human papilloma virus DNA in squamous carcinoma of the cervix in a cohort of Sri Lankan women

OBJECTIVE: To determine the prevalence of human papilloma virus (HPV) types 16 and 18 in squamous carcinomas of the cervix in Sri Lanka. DESIGN: Case control study. SETTING: One gynaecological unit at the Cancer Institute, Maharagama, Sri Lanka. PATIENTS: 15 patients with squamous carcinoma of the cervix, and 15 age matched controls with histologically normal cervices. MEASUREMENTS: DNA was extracted from paraffin embedded cervical biopsies. Polymerase chain reaction was performed on extracted DNA employing primers specific for HPV types 16 and 18. RESULTS: HPV 16 DNA was detected in 11 out of 15 cervical cancer biopsies (73.3%), in comparison with 3 out of 15 normal controls (20%). HPV 18 was detected in 3 out of 15 cervical cancer biopsies, but not in a single control biopsy. CONCLUSION: Despite the limited number of cases in this cohort, this study supports the strong association between HPV 16 and squamous cancer of the cervix.     

宫颈癌患者血液中人乳头瘤病毒检出率的临床意义

目的:探讨宫颈癌患者血液中人乳头瘤病毒(HPV)DNA检出率对宫颈癌的诊断及病情进展评价的临床意义。方法:应用巢式PCR检测48例宫颈癌,55例宫颈高度病变(HG),6例宫颈低度病变(LG),29例宫颈炎症患者血浆中HPV-16,18DNA。分析各组患者血中HPVDNA检出率的差异,以及检出率与宫颈癌临床分期的相关性。结果:血浆中HPVDNA在宫颈癌组、HG组、LG组及宫颈炎症组中的检出率分别为56.3%、41.8%、16.7%和37.9%,其中HPV-16分别为20.8%、5.5%、0.0%和6.9%;HPV-18分别为50.0%、38.2%、16.7%和31.0%。HPV-16和HPV-18均为阳性者8例,其中宫颈癌Ⅰ期3例,Ⅱ期4例,CINⅢ1例。在9例有淋巴结转移的患者中,6例血浆HPVDNA阳性。血浆HPVDNA在宫颈癌组中检出率高于其他3组,但无统计学差异。结论:宫颈癌患者血中HPV检出率高于CIN和宫颈炎症患者,并且在发生转移的宫颈癌患者中检出率更高,但血浆HPVDNA检出率与宫颈癌临床分期无关。宫颈癌患者血中HPV双重感染率较高。     

宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA检测的临床意义

目的探讨宫颈癌患者盆腔淋巴结人类乳头瘤病毒（HPV）-DNA检测的临床意义.方法采用GP-PCR方法扩增宫颈癌患者盆腔淋巴结组织HPV-DNAL1区基因序列,通过序列分析对HPV进行型别鉴定,分析淋巴结HPV阳性率与淋巴转移组织病理学结果之间的关系.结果40例宫颈癌患者盆腔淋巴结HPV-DNA的检出率为40%;组织病理学发现淋巴转移的10例患者淋巴结HPV-DNA检测均为阳性;宫颈癌病灶中检测到HPV18型的患者盆腔淋巴结也都可检测到HPV18型.结论盆腔淋巴结中检出HPV-DNA阳性早于组织病理学出现转移,因此检测盆腔淋巴结中HPV-DNA对早期的淋巴结转移具有提示作用,有助于发现组织病理学不易发现的淋巴结隐匿性转移,提示预后不良.宫颈检测到HPV18型的患者更易发生淋巴转移,是预后不良的一种高危类型.     

宫颈癌组织中HPV16 E7序列多态性分析

目的探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E7基因序列的多态性.方法采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E7,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而寻找其热点突变.结果50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.33例含有HPV16型的标本中扩增出25例HPV16E7,其中17例647位核苷酸“T”变异“C”,导致相应的蛋白质由天冬氨酸变异为丝氨酸.结论广东地区宫颈癌组织中HPV16E7DNA序列发生碱基替换的区域主要在647位至846位,热点突变点为Nt647和Nt846.     

116 441例普查妇女宫颈人乳头瘤病毒基因分型情况分析

目的:调查上海市闵行区116 441例普查妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染状况,分析HPV基因分型及其在宫颈病变病人中的分布特征。方法:采用高通量基因测序技术检测14种高危型HPV和2种低危型HPV。结果:成功检测115 463例,HPV感染率11.18%,高危型HPV感染率10.93%。≤ 25岁组HPV感染率（15.90%）最高,多重感染以>60岁老年妇女为主。普通人群感染率前5位的为HPV52、58、16、68、18型;多重感染占21.02%,感染型别最多六重。宫颈癌和癌前病变208例,97.60% HPV感染,CINⅢ和宫颈癌病人都有高危型HPV感染,HPV感染率前5位的为HPV16、52、58、18、31型,HPV16居首位,且感染率随着宫颈病变级别的升高而升高。结论:HPV16、52、58、18型持续性感染是闵行区女性发生宫颈癌前病变和宫颈癌的主要原因,HPV16型的致癌性最强。普查后需严密随访和管理HPV16、52、58、18型感染者,尤需关注合并HPV16型多重感染的老年妇女。     

miRNA在HPV阳性和阴性宫颈癌组织之间的差异研究

目的:研究微小RNA(miRNA)在人乳头状瘤病毒(HPV)阳性宫颈癌和HPV阴性宫颈癌组织之间的差异。方法:选择宫颈癌患者作为研究对象,根据术后病理结果分为HPV阳性的观察组和HPV阴性的对照组,采用Trizol法抽提宫颈癌组织中的总mRNA、Stem-loop RT PCR的方法合成cD-NA第一链,荧光定量PCR的方法检测目的基因的含量。结果:观察组miR21、miR221和miR222含量明显高于对照组,miR-10b、miR-9、miR15a、miR16含量明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV阳性与HPV阴性的宫颈癌组织中miRNA存在显著差异,并且与宫颈癌的发生密切相关。     

The association between cervical carcinoma and human papilloma virus (HPV) in Xiangyuan County.

A mass survey was conducted to investigate the association between cervical carcinoma and human papilloma virus (HPV) infection in a high-risk area, Xiangyuan County, Shanxi Province. Fifty-four cases of cervical cancer in situ (CIS), including severe dysplasia (CIN III), 14 cases of invasive cervical carcinoma, 28 cases of mild cervical dysplasia (CIN I), and 13 cases of moderate cervical dysplasia (CIN II) were identified among 6710 women examined. One hundred and sixty-nine punch biopsies from abnormal cervix and genital tract were examined for the presence of HPV 6B/11, 16 and 18 DNA sequences by dot blot hybridization: The positive rates of HPV infection in cervicitis, CIN I, II, III, CIS and invasive cervical carcinoma specimens were 35.06% (27/77), 25% (2/8), 33.33% (2/6), 40% (2/5), 70.58% (24/34) and 40% (4/10), respectively. Among these groups, there was no regular distribution of HPV types except for HPV 16, the positive rate of which was increased from 25% in CIN I to 46.15% in CIS: HPV 16 was also the only type seen in the invasive cervical cancer group. Distribution analysis of HPV types in HPV-positive cervical cancer tissues uncovered an HPV 16 positive rate of 59.4%; 3.7 and 2.4 times higher than those of HPV 6B/11 and HPV 18, respectively. These data confirm the close association between cervical cancer and HPV 16 infection.     

宫颈癌患者HPV16感染及其血清抗体检测分析

目的：探讨宫颈癌与人乳头瘤病毒16（HPV16）感染及其血清抗体的关系，为HPV感染及宫颈癌的临床诊断提供理论依据。方法：选择28例宫颈癌患，用PCR方法检测宫颈癌组织的HPV型别；并采用重组杆状病毒－昆虫细胞系统制备HPV16病毒样颗粒（VLPs），用ELISA方法检测其血清HPV16VPLs抗体，同时以36份尖锐湿疣患血清及72份健康体检查血清作为对照。结果：宫颈癌HPV通用型DNA阳性率为50％（14／28），HPV16DNA阳性率为42．9％（12／28），HPV18DNA阳性率为3．5％（1／28），较健康对照组阳性率为1．4％（1／72）、中位数－0．0220）－0．0265）和尖锐湿疣组阳性率为8．3％（3／36）、中位数为0．0165（0．0145）差异具显性意义（P＜0．01）。HPV16DNA检测法与HPV16VLPsELISA血清抗体检测法两间呈中度相关（K＝0．471，P＜0．05）。结论：本组宫颈癌以HPV16感染为多见，HPV16VLPs血清ELISA抗体检测可用作HPV16感染的血清学诊断和宫颈癌的免疫学研究。