隔药灸调节大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化TGF-β及其受体的研究

目的：观察隔药灸对大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化结肠组织TGF－β及其受体基因表达的影响，探讨隔药灸防治大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化的相关机制。方法：在建立大鼠溃疡性结肠炎肠纤维模型的基础上，采用针灸进行治疗，疗程结束后，剖取大鼠结肠组织，应用RT－PCR法检测各组动物结肠组织中TGF－β1及其TGF－βRⅠ、TGF－βRⅡmRNA表达情况，结果：与正常动物相比较，模型大鼠结肠组织中TGF－β1及其TGF－βRⅠ、TGF－βRⅡmRNA表达均有显著的上升，经隔药灸治疗则可明显改善这种异常状况，结论：隔灸防治溃疡性结肠炎肠纤维化可能与调节大鼠溃疡性结肠炎肠纤维化结肠TGF－β1及其受体TGF－βRⅠ、TGF－βRⅡmRNA表达，减少炎症组织TGF－β1的产生，并抑制其受体信号转导有关。     

针灸对大鼠克罗恩病结肠组织E-选择素、ICAM-1表达影响的实验研究

目的 :探讨针灸对大鼠克罗恩病结肠组织E 选择素、ICAM 1表达的影响。方法 :在成功制备大鼠克罗恩病模型的基础上 ,随机分为隔药灸组、电针组和模型组 ,并设正常组进行对照。隔药灸组与电针组分别予以隔药灸、电针“天枢”、“气海”治疗 ,采用免疫组化方法检测各组大鼠结肠组织E 选择素、ICAM 1免疫阳性细胞的表达。结果 :与正常大鼠相比 ,模型组大鼠结肠组织E 选择素、ICAM 1的表达均有显著升高。电针组大鼠E 选择素、ICAM 1的表达有明显的下调 ;隔药灸组大鼠结肠组织ICAM 1的异常表达显著下降 ,但E 选择素的异常表达下降不明显。结论 :大鼠克罗恩病的发病与E 选择素、ICAM 1的异常表达有关 ;电针治疗可能是通过调节克罗恩病大鼠结肠粘膜ICAM 1与E 选择素的异常表达而取效 ,隔药灸治疗对克罗恩病大鼠结肠粘膜E 选择素的表达没有显著影响 ,提示隔药灸与电针疗法的作用机制可能不完全相同。     

针灸对克罗恩病大鼠P物质与神经激肽1受体表达的影响

目的观察克罗恩病模型大鼠结肠黏膜中P物质(SP)和神经激肽1受体(NK-1R)表达的变化，以及隔药灸与电针治疗对其的影响。方法除正常组外，其余大鼠采用TNBS灌肠法制备克罗恩病模型，在确定模型成功的基础上，随机分为模型组、隔药灸组与电针组；隔药灸组与电针组分别予以隔药灸、电针“天枢”、“气海”治疗。采用免疫组化方法检测各组大鼠结肠组织SP及其受体NK-1R的表达。结果与正常组大鼠比较，模型大鼠结肠SP、NK—1R表达异常升高．隔药灸与电针对其有显著下调作用，尤以隔药灸作用显著，基本恢复正常水平。结论针灸治疗可能是通过下调SP、NK-1R的表达。消除肠道炎症，改善组织损伤，发挥治疗作用。     

隔药灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-1β、IGF-1表达影响的研究

目的：应用荧光定量PCR观察隔药灸对溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-1β、IGF-1表达的影响。方法：将溃疡性结肠炎大鼠随机分为模型组和隔药灸组，另设正常对照组。隔药灸组穴位选取“天枢”，采用隔药灸进行治疗，并应用实时荧光定量PCR方法检测IL-1βRNA、IGF-1 mRNA的表达。结果：溃疡性结肠炎大鼠结肠IL-1βmLNA、IGF-1mRNA表达异常升高。隔药灸治疗能降低其表达。结论：隔药灸可通过调节IL-1β、IGF-1基因的表达，消除UC大鼠肠道炎症，并可能起到防治肠纤维化的作用。     

针灸对克罗恩病大鼠结肠胶原合成及TGFβmRNA表达的调节

目的：观察针灸对克罗恩病大鼠结肠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原蛋白合成及转化生成因子-β(TGFB)mRNA表达的影响。方法：在建立克罗恩病大鼠模型基础上,进行针灸治疗。采用免疫组织化学方法检测各组大鼠结肠黏膜Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原表达;用RT-PCR方法检测各组大鼠脾脏、结肠组织TGFβ mRNA达情况。结果：与正常组大鼠比较,模型组大鼠结肠I、Ⅲ、Ⅳ型胶原及脾脏、结肠TGFβ mRNA表达均异常升高,隔药灸治疗可明显抑制克罗恩病大鼠纤维化进程,降低结肠Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及脾脏、结肠TGFBβ mRNA表达。结论：结肠组织纤维化是克罗恩病大鼠的主要病理表现之一,隔药灸治疗大鼠克罗恩病肠纤维化的可能机制是通过下调克罗恩病大鼠结肠TGFβ mRNA过度表达,从而阻断或抑制细胞外基质(Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原)的合成,促使其组织结构与功能改善。     

黄芩汤有效成分配方抗大鼠实验性溃疡性结肠炎实验研究

目的　从细胞因子、自由基角度观察黄芩汤有效成分配方对实验性溃疡性结肠炎的治疗效果和作用机理。方法　采用三硝基苯磺酸法制备大鼠实验性溃疡性结肠炎模型。结果　模型组的IL 1β、IL 4、SOD、MDA含量与正常组比较均有显著性差异 (P <0 0 1)。黄芩汤有效成分配方中剂量组与模型组比较能显著降低IL 1、MDA含量 ,而提高IL 4、SOD含量 (P <0 0 1)。结论　黄芩汤有效成分配方通过改善细胞因子、自由基水平而对大鼠溃疡性结肠炎具有治疗作用     

痛泻要方对肝郁脾虚型溃疡性结肠炎动物模型的治疗作用

目的 :观察舒肝健脾方药痛泻要方对肝郁脾虚溃疡性结肠炎模型的治疗作用。方法 :采用肝郁脾虚大鼠溃疡性结肠炎动物模型 ,经痛泻要方水煎剂和阳性药柳氮磺胺吡啶 (SASP)治疗后 ,观察模型动物结肠病理变化 ,测定血清、组织液中肿瘤坏死因子 (TNF -α)和白介素 6 (IL - 6 )的含量 ;检测T淋巴细胞转化率。结果 :病理结果显示 :痛泻要方高、中两个剂量组的溃疡数、糜烂点及结肠损伤分数明显低于空白对照组 (P <0 .0 5和P <0 .0 1 ) ,痛泻要方三个剂量组血清、组织液中TNF -α、IL - 6含量明显低于空白对照组 (P <0 .0 5和P <0 .0 1 ) ;痛泻要方三个剂量组的T淋巴细胞转化率显著提高。结论 :痛泻要方对肝郁脾虚溃疡性结肠炎模型有较好的治疗作用 ,其作用机理可能是通过抑制细胞因子TNF -α和IL - 6、提高淋巴细胞转化率来发挥调节细胞免疫的作用     

维药西帕依溃结安对大鼠溃疡性结肠炎模型COX-2表达的影响

目的：研究维药西帕依溃结安（KJA）对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织中环氧化酶2（COX-2）表达的影响．方法：采用2,4-二硝基氯苯与乙酸复合法制备大鼠溃疡性结肠炎模型,分为5组进行实验．应用lit—PCR和WesternBlot方法分别检测各组COX-2的mRNA和蛋白质表达水平．结果：KJA大剂量干预组COX-2的蛋白质表达水平与生理盐水阴性对照组相比均明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）;KJA中剂量干预组和5-氨基水杨酸治疗组的COX-2的mRNA表达水平与生理盐水阴性对照组相比明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）．结论：KJA对溃疡性结肠炎的治疗作用可能与下调cox-2的表达有关,而其调节COX4的表达可能发生在转录水平上．     

肠炎康对溃疡性结肠炎大鼠模型P-糖蛋白表达的影响

目的：通过实验,观察中药肠炎康对溃疡性结肠炎大鼠模型结肠组织P糖蛋白表达的影响,并与柳氮磺吡啶（Sulfasalazinetablete,SASP）进行疗效比较。阐明该方治疗溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis,UC）作用机理,为溃疡性结肠炎的治疗提供理论和实践依据。方法：建立TNBS溃疡性结肠炎模型,应用HE染色观察结肠病理组织学变化,免疫组化方法检测P糖蛋白在大鼠结肠组织中表达变化。结果：2周治疗后,治疗组大鼠结肠组织中P糖蛋白表达较模型组明显降低（P〈0.05）。结论：中药肠炎康可以有效的降低大鼠结肠黏膜组织中的P-pg水平,延缓药物肠黏膜中的消除,增强药物疗效,减少耐药性。     

紧密连接蛋白occludin和claudin-1在大鼠溃疡性结肠炎的表达

[目的]观察溃疡性结肠炎模型大鼠紧密连接蛋白occludin、claudin-1表达情况及其与结肠病变的关系.[方法]采用三硝基苯磺酸(TNBS)复制大鼠溃疡性结肠炎模型,于实验周期的第10、20、30天分3组(即模型1、2、3组)处死大鼠,另设正常对照组,以大鼠结肠occludin、claudin-1表达(免疫荧光法)、结肠大体和病理评分为主要检测指标.[结果]随着实验周期延长,模型组结肠大体和病理平均评分逐渐降低,occludin表达平均评分先降低后回升,但均低于正常组;occludin表达与其结肠大体和病理评分均呈负相关(P＜0.05).claudin-1表达平均评分呈降低→上升→再降低,但均与正常组比较接近;claudin-1表达与其大体和病理均无显著相关性(P＞0.05).[结论]溃疡性结肠炎大鼠occludin表达降低,且与其结肠病变呈负相关;occludin表达改变比claudin-1更显著.     

隔药饼灸对子宫内膜异位症大鼠雌激素相关因子表达的影响

目的:探索隔药饼灸对子宫内膜异位症大鼠雌激素相关因子表达的影响。方法:采用自体移植法造模,成功后随机将SD大鼠分为模型组、隔药饼灸组和达那唑组,另设未造模的大鼠为空白对照组。空白对照组和模型组大鼠常规固定、暴露关元穴,不做其他处理;其余两组分别给予隔药饼灸法治疗、达那唑悬浊液灌胃,共2个疗程。待治疗结束后,用HE染色观察子宫内膜组织及异位内膜组织形态学变化;ELISA法检测血清E2水平;RT-PCR检测内膜组织芳香化酶(P450arom)和环氧化酶-2(COX-2)的mRNA表达。结果:HE染色结果显示,模型组的异位内膜上皮细胞呈柱状增生,间质细胞密集,局部纤维化,血供丰富;隔药饼灸组的异位内膜上皮细胞萎缩,呈矮立方状,间质细胞萎缩,血供减少,局部呈纤维化。与空白对照组比较,模型组大鼠血清E2水平和异位内膜组织P450arom mRNA、COX-2 mRNA的表达量显著升高(P0.05);与模型组比较,隔药饼灸组和达那唑组大鼠血清E2水平和异位内膜组织P450arom mRNA、COX-2的mRNA表达量明显降低(P0.05);与隔药饼灸组比较,达那唑组血清E2水平和异位内膜组织P450arom mRNA、COX-2 mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论:隔药饼灸可能通过改善血液循环,降低子宫内膜异位症大鼠血清E2和异位内膜组织中P450arom、COX-2的表达,从而抑制雌激素的生成代谢、抑制异位病灶的生长。     

实验性溃疡性结肠炎大鼠模型的研究

目的　建立溃疡性结肠炎大鼠模型。方法　经结肠给大鼠注入 8%乙酸溶液 ,每日观察大鼠一般情况 ,10d后处死大鼠取出结肠 ,肉眼观察并做组织学切片进行镜下观察 ,同时应用免疫组化技术检测结肠黏膜内TNF α、IL 10、NF κB细胞因子的表达。结果　大鼠的一般情况、大体病理及组织学病理均与人类溃疡性结肠炎类似 ,并且结肠黏膜TNF α、NF κB表达明显升高 ,IL 10表达明显降低 ,上述细胞因子变化亦与人类溃疡性结肠炎的变化基本一致。结论　该大鼠模型重复性好 ,方法简单 ,短期内即可出现明显症状 ,适合于研究溃疡性结肠炎的发病机制及临床新药开发 ,同时还可用于评价新药疗效。     

大鼠溃疡性结肠炎组织中c-fos与iNOS mRNA的表达

目的研究大鼠溃疡性结肠炎组织中iNOS与c-fos mRNA的表达与溃疡性结肠炎(UC)发生的关系.方法建立大鼠溃疡性结肠炎模型,提取结肠组织总RNA,经半定量RT-PCR检测iNOS与c-fos mRNA的表达.结果大鼠溃疡性结肠炎组织中iNOS mRNA表达较正常结肠组织明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);c-fos mRNA与正常组相比,无明显变化(P＞0.05).结论大鼠溃疡性结肠炎模型中iNOS mRNA表达水平升高,证实iNOS与溃疡性结肠炎的发生有关;c-fos 在mRNA水平与溃疡性结肠炎的发生无直接关系,推测c-fos蛋白可能与UC相关.     

诃子抗大鼠溃疡性结肠炎免疫机制实验研究

目的:观察单味诃子水煎剂对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用并研究其抗溃疡性结肠炎的免疫作用机制。方法:Wistar大鼠32只,随机分为空白对照组、模型组、诃子水煎剂组、SASP对照组,除空白对照组外,均用6%乙酸制备溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后,诃子水煎剂组和SASP对照组分别给予单味诃子水煎剂和柳氮磺吡啶肠溶片(SASP)灌胃治疗7d,同时空白对照组和模型组给予等量的生理盐水。应用免疫组化法对大鼠结肠黏膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达进行测定。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠结肠黏膜组织中TNF-α、IL-6的表达水平显著升高(P0.01);与模型组相比,诃子水煎剂组大鼠结肠黏膜组织中TNF-α的表达水平显著降低(P0.01),IL-6的表达水平显著降低(P0.05)。结论:单味诃子水煎剂对大鼠溃疡性结肠炎有一定治疗作用,其治疗溃疡性结肠炎的机制可能是与结肠黏膜促炎因子TNF-α、IL-6的下调有关。     

葛仙汤对溃疡性结肠炎大鼠结肠TNF-α和iNOS表达的干预作用

目的观察不同浓度葛仙汤对实验性溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)和诱生型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达的影响,探讨葛仙汤改善UC症状的可能机制。方法随机将SD大鼠分为4组,包括模型对照组和葛仙汤高、中、低剂量治疗组,采用大肠杆菌加乙酸复合法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,连续给药21天后处死,进行结肠组织病理学评分(histopathological score,HS),免疫组化法检测各组大鼠结肠组织中TNF-α和iNOS蛋白的表达。结果用药3周后,低、中、高剂量葛仙汤治疗组的结肠HS均明显低于模型对照组(P<0.01);3个治疗组的结肠组织中TNF-α和iNOS蛋白阳性表达积分值较模型对照组明显降低(P值<0.01)。结论葛仙汤能明显减轻溃疡性结肠炎大鼠结肠的组织学损伤程度,可能与其下调TNF-α和iNOS蛋白的表达有关,其低剂量即发挥疗效。     

针灸对IBS内脏痛大鼠结肠肌间神经丛神经元P2X_2受体表达的调节

目的观察针灸对肠易激综合征(IBS)内脏痛大鼠结肠肌间神经丛神经元嘌呤受体亚型P2X2表达的调节。方法应用直结肠球囊扩张刺激法制备慢性内脏高敏感IBS大鼠模型,随机分为正常组、模型组、电针组,电针组采用电针"天枢""上巨虚"穴进行治疗。治疗结束后,进行腹部撤回反射评分(AWR),应用免疫荧光法检测肠结肠肌间神经丛P2X2表达变化。结果模型大鼠AWR评分升高,电针治疗后降低;模型组大鼠结肠肌间神经丛神经元中P2X2表达与正常组大鼠相比异常增加,电针组显著降低。结论电针(天枢、上巨虚)能抑制结肠肌间神经丛神经元P2X2受体异常表达,改善IBS大鼠的内脏痛觉敏感状态。     

溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜MMP-1、TIMP-1的表达

目的建立大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型,检测UC大鼠结肠黏膜基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）的表达。方法采用硫酸葡聚糖（DSS）诱导大鼠UC模型,采用逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）测定大鼠结肠黏膜MMP-1、TIMP-1在转录水平的表达;免疫组织化学染色法测定MMP-1、TIMP-1蛋白水平的表达。结果在转录水平上,UC大鼠病变结肠黏膜的MMP-1、TIMP-1的表达明显高于正常对照组（P〈0．05）,两者具有显著差异,而以MMP-1的增高程度更为明显;蛋白水平的表达与此一致。结论DSS诱导的大鼠溃疡性结肠炎与MMP-1的过度表达及TIMP—1的相对不足有关,MMP-1／TIMP-1的比例失调在UC的损伤过程中有重要作用。     

大鼠溃疡性结肠炎实验模型中核因子-κB p65、COX-2的表达研究

目的探讨NF-κBp65、COX-2在溃疡性结肠炎发病和发展过程中的作用.方法采用2,4-二硝基氯苯(DNCB)与乙酸复合灌肠法制备大鼠溃疡性结肠炎实验模型,实验动物分为正常组与溃疡性结肠炎模型组两组.采用半定量RT-PCR的方法,在mRNA水平上检测各组结肠组织NF-κBp65、COX-2的表达.结果与正常组相比,溃疡性结肠炎模型组结肠组织中NF-κBp65、COX-2表达显著增高(P＜0.05).在模型组中,NF-κBp65活性与COX-2的表达水平呈正相关关系(P＜0.05).结论在溃疡性结肠炎中,NF-κBp65的激活可能调控COX-2的表达升高,从而导致了溃疡性结肠炎发生、发展.     

隔药饼灸对慢性支气管炎模型大鼠肺组织TNF-α蛋白及其mRNA表达的影响

目的观察隔药饼灸对慢性支气管炎大鼠肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白及其mRNA含量的影响。方法将48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、隔药饼灸组、隔纸垫灸组,每组12只。采取改良烟熏法复制慢性支气管炎大鼠模型,观察用隔药饼灸治疗后大鼠的一般情况,并与空白组、模型组、隔纸垫灸组进行对照,大鼠肺组织中的TNF-αmRNA的表达用RT-PCR法检测,肺组织中TNF-α的蛋白表达用Western blot法检测。结果与模型组相比,隔药饼组和隔纸垫组大鼠肺及气管的病理损伤均有好转;隔药饼灸组和隔纸垫灸组都能使慢支大鼠肺组织TNF-αmRNA及TNF-α蛋白含量表达降低(P0.05),且隔药饼灸组效果更好(P0.05)。结论隔药饼灸能改善慢支大鼠一般症状及气道炎症,提示其机制可能是通过下调TNF-α蛋白及其mRNA的表达达到治疗慢性支气管炎的目的。     

仙地液对大鼠溃疡性结肠炎结肠组织中ICAM-1表达的影响

目的：检测大鼠结肠组织中的ICAM-1，观察中药灌肠对ICAM-1蛋白表达的影响，探讨中药灌肠治疗溃疡性结肠炎可能的作用机制及环节。方法：大鼠随机分为6个实验组，自由饮用葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DSS）水溶液诱导UC模型，以仙地液灌肠干预后，用Western Blotting免疫印迹增强化学发光的方法，以Actin为内参照半定量检测大鼠结肠黏膜及组织中ICAM-1蛋白的表达情况。结果：经中药灌肠干预后的大鼠与模型组相比结肠黏膜及组织中的ICAM-1含量均明显下降，P〈0．05。结论：中药灌肠可能通过下调溃疡性结肠炎结肠组织中的ICAM-1表达实现其治疗作用。