狼毒大戟多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子分泌的影响

目的:探讨狼毒大戟多糖(EFP-AW1)对小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子白介素2(IL-2)和干扰素γ(IFN-γ)分泌的影响。方法:制备小鼠脾淋巴细胞,加入EFP-AW1,使终质量浓度分别为0、25、50、100、200 mg/L,再加入Con A,培养60 h后,采用MTT法检测不同质量浓度狼毒大戟多糖EFP-AW1对Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响;将5种不同浓度的EFP-AW1分别加入小鼠脾淋巴细胞培养体系,再加入Con A,培养48 h后,收集培养上清,ELISA法检测不同质量浓度EFP-AW1对小鼠脾淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ的影响。结果:与空白组比较,50、100、200 mg/L的狼毒大戟多糖能够促进Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应(P0.05),并能够提高脾淋巴细胞产生IL-2和IFN-γ的水平(P0.05)。结论:狼毒大戟多糖具有一定的免疫增强作用。     

国产Con-A诱导的抑制细胞对淋巴细胞转化反应的影响(小鼠)

植物凝集素用于探测细胞表面结构和功能,已在免疫学和细胞生物学等多方面的基础研究中发挥了重要作用。过去以PHA刺激淋巴细胞增殖来分析免疫应答效应的机制。近年证明Con—A能成功地诱导抑制性T淋巴细胞,因而提供了研究抑制性免疫调节机制的可能性。本文采用国产刀豆素A(Con—A)进行小鼠淋巴细胞转化试验,并在两阶段的培养系统中对其诱导抑制性淋巴细胞的作用进行了观察。材料与方法     

激活素A中和抗体对小鼠慢性肝损伤的影响

目的 探讨激活素在刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠慢性肝损伤过程中的作用.方法 采用小鼠尾静脉注射ConA,每周1次,连续4周,造成小鼠肝损伤模型,另设激活素抗体中和组于小鼠尾静脉注射ConA的次日腹腔注射激活素A的中和抗体,每周1次,连续4周,各组分别于末次给药后的次日检测小鼠血清酶变化及肝脏组织病理损伤程度,同时采用荧光定量PCR检测小鼠肝组织激活素A、激活素ⅡA型受体、纤维结合蛋白(FN)、Ⅰ型胶原及基质金属蛋白酶组织抑制因子2(TIMP2)的表达变化.结果 Con A组肝脏病理损伤最为严重,肝小叶结构紊乱,肝细胞索形态消失,细胞肿胀,呈气球样变;激活素抗体中和组病理损伤明显轻于Con A组,肝细胞略有肿胀,仍可见肝小叶结构.荧光定量PCR显示Con A组和抗体中和组激活素A及其激活素ⅡA型受体mRNA水平明显高于对照组,而FN、Ⅰ型胶原及TIMP2的mRNA水平抗体中和组明显低于Con A组.结论 激活素A是Con A诱导模型鼠肝损伤的重要致病因子.     

白细胞介素2的检测及其诱生条件的分析

用白细胞介素2(interteukin 2,IL2)依赖细胞株(Cytotoxic T-lymphocyte line,CTLL)检测IL2并滴定标本中IL2的活性单位,同时观察诱导IL2产生的条件和影响因素。结果表明CTLL对IL2绝对依赖,对植物血凝素(PHA)和伴刀豆球蛋白A(Con A)无反应。CTLL的增殖与IL2的量成正比。Con A刺激大鼠脾细胞的培养上清液(又称大鼠因子,RF)中有可透析的小分子抑制因子存在,如不除去会影响IL2活性单位的滴定。大鼠IL2的诱生受下列因素影响:①个体差异;②Con A浓度,IL2的产量随Con A浓度的增加(3μg～50μg/ml)而增加;③牛血清白蛋白(BSA)可以替代小牛血清(FCS),但IL2的产生受到影响。     

黄芩苷对不同刺激剂诱导的小鼠T淋巴细胞体外活化的影响

目的分析黄芩苷对小鼠T淋巴细胞体外活化的影响,探讨其对免疫系统的作用,阐明其免疫抑制作用机制。方法无菌分离小鼠淋巴结,制备淋巴细胞悬液,以不同终质量浓度的黄芩苷预孵育淋巴细胞4 h,再以刀豆蛋白A(Con A)或佛波醇酯类多克隆刺激剂(PDB)诱导小鼠淋巴细胞活化,利用流式细胞术分别结合双色免疫荧光单克隆抗体染色技术检测CD3 T细胞早期活化标志CD69和中期活化标志CD25分子的表达。结果黄芩苷(10、20、30 mg/L)能明显抑制Con A或PDB诱导T细胞活化分子CD69和CD25的表达,且呈浓度依赖性。结论黄芩苷能够明显抑制多克隆刺激剂Con A或PDB诱导的T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系。提示黄芩苷在T细胞活化过程的信号转导中有抑制作用,从而可以通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂。     

胡桃楸对电离辐射损伤小鼠免疫功能的影响

目的:探讨胡桃楸乙醇提取物（AEBJ）对电离辐射所致小鼠免疫功能损伤的影响。方法：60只小鼠随机分为假照射组、照射对照组、AEBJ低剂量（300 mg•kg^-1）照射给药组、AEBJ高剂量（600 mg•kg^-1）照射给药组、AEBJ低剂量单纯给药组和AEBJ高剂量单纯给药组6个实验组,检测小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞百分数、淋巴细胞绝对值、脏器指数和Con A刺激小鼠脾淋巴细胞增殖能力。结果：照射对照组小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分数、脏器指数和Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应能力均低于假照射组（P< 0.05）;AEBJ高、低剂量照射给药组小鼠外周血白细胞数、淋巴细胞绝对值、淋巴细胞百分数、脏器指数和Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应能力均高于照射对照组（P< 0.05）;AEBJ高、低剂量单纯给药组的淋巴细胞百分数和Con A诱导的脾淋巴细胞增殖反应能力均高于假照射组（P< 0.05）。结论：AEBJ对电离辐射所致的小鼠免疫功能损伤有保护和修复作用。     

Monoclonal anti-idiotype antibody bearing the internal image of nasopharyngeal carcinoma associated antigen

目的　制备和鉴定具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型单克隆抗体 (Ab2 )。方法　用鼻咽癌单抗 (Ab1)免疫小鼠 ,免疫鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2 / 0融合获得杂交瘤细胞系。用SandwichELISA和结合抑制试验筛选阳性克隆。为进一步证实Ab2是否具有鼻咽癌相关抗原的内影像 ,用Ab2免疫小鼠获得抗血清 ,以ELISA和竞争抑制试验检测Ab3。用迟发性变态反应和T细胞增殖试验检测Ab2诱导的细胞免疫反应。结果　选用两株抗鼻咽癌单抗FC2、HNL5 (Ab1)为免疫原 ,制备两株抗相应Ab1独特型的抗独特型抗体 2H4和5D3(Ab2 )。 2H4、5D3能分别与FC2、HNL5特异性结合 ,并能抑制相应Ab1与靶细胞HNE2的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3)。并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。结论　抗独特型抗体 2H4、5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

分泌抗活化小鼠T细胞抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用Con A活化的小鼠脾脏细胞免疫同品系动物(BALB/c鼠),取免疫鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,选择了一株有分泌抗活化小鼠T细胞抗原抗体的杂交瘤细胞,经有限稀释法连续4次克隆化。采用ELISA法分析,初步证实该杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体(McAb)与Con A 活化的小鼠脾细胞的结合反应明显高于与未经活化的其他细胞(胸腺细胞、肠系膜淋巴结细胞、脾细胞)的反应。用琼脂双扩散法证明该MeAb属于小鼠IgG类。     

慢性移植物抗宿主反应诱导SLE样小鼠模型

目的运用慢性移植物抗宿主反应(GVHR)诱导系统性红斑狼疮(SLE)样小鼠模型,为进一步探索SLE发病机制奠定基础。方法将亲代BALB/C小鼠淋巴细胞经静脉途径输入(BALB/C×C57BL/6)F1代小鼠体内,用ELISA测定IgG类抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体,用免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)核型和免疫复合物沉积,用免疫印迹法测定抗可浸出核抗原(ENA)抗体。结果亲代淋巴细胞所致的慢性移植物抗宿主反应可诱导F1代小鼠产生高滴度的抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体等多种ANA,免疫小鼠的肾脏有显著的免疫复合物沉着。结论运用慢性GVHR诱导的SLE样小鼠模型,小鼠发病迅速,抗核抗体的产生与人SLE相似,有利于实验室进行有关SLE的研究。     

Tju103和CTLA4-Ig诱导T淋巴细胞免疫耐受的比较

目的观察比较Tju103和CTLA4-Ig分别调节、诱导T淋巴细胞免疫耐受的作用.方法用经丝裂霉素处理的异基因正常BALB/c(H-2d)小鼠巨噬细胞做耐受诱导原,分别用Tju103和CTLA4-Ig体外训导、调节C57BL/6(H-2d)小鼠T淋巴细胞,通过增殖效应(单向混合淋巴细胞反应,MLR)和杀伤效应(MTT法),考察经训导的C57BL/6小鼠T淋巴细胞分别对BALB/c小鼠和CBA(H-2k)小鼠脾细胞以及EL9611(H-2d)红白血病细胞的增殖效应和杀伤效应的改变.结果经Yju103调节后,C57BL/6 小鼠T淋巴细胞对BALB/c和CBA小鼠脾细胞以及EL9611红白病细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显,未能诱导对已接触抗原(BALB/c小鼠)产生特异性免疫耐受.经CTLA4-Ig孵育后,C57BL/6 小鼠T淋巴细胞对这三种细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显;对已接触抗原呈现免疫耐受,而对第三种抗原(CBA小鼠)和EL9611白血病细胞保持反应性.结论在特异抗原存在下,Tju103和CTLA4-Ig均能明显抑制异基因小鼠T淋巴细胞增殖反应性和杀伤效应,但Tju103诱导非特异免疫抑制,而CTLA4-Ig诱导特异免疫耐受,更适合于诱导移植免耐受.     

鼠麻风杆菌实验感染模型的细胞免疫

鼠麻风杆菌(MLM)腹腔感染BALB/C和C57BL/6小鼠,随着感染时间的延长,鼠脾重量增加,脾带菌量增多,肠系膜病变加剧;鼠脾细胞对伴刀豆蛋白A(Con A)刺激的增殖反应和产生白细胞介素2(IL 2)的能力进行性降低,BALB/C鼠尤为严重。感染90d时在经Con A活化的BALB/C鼠脾细胞表面未检出IL 2受体,同时发现感染鼠脾细胞可以抑制正常鼠脾细胞经Con A刺激产生IL 2和表达IL 2受体的能力。推测感染鼠脾细胞免疫功能低下可能是该菌活化了抑制细胞,继而抑制T淋巴细胞合成和分泌IL 2和表达IL 2受体。     

促丝裂原活化淋巴细胞诱导抗双链DNA抗体生成

抗双链DNA（ds—DNA）抗体是系统性红斑狼疮（SLE）的特征性和致病性抗体，但该自身抗体的诱生机理至今不明。我们用刀豆蛋白（ConA）和脂多糖（LPS）活化的小鼠淋巴细胞为自身抗原，分别免疫同系小鼠，均能诱导出IgG类抗ds—DNA抗体，并且小鼠肾脏有IgG类免疫复合物沉积形成。结果提示活化淋巴细胞的核内成分是诱生抗ds—DNA抗体的自身抗原。     

Chemical conjugation of a novel antibody-interleukin 2 immunoconjugate agains t c-erbB-2 product

Objective To develop a new chemical method to produce a monoclonal antibody (MoAb) 520C9/recombinant human interleukin 2 (rhIL-2) conjugate. Methods MoAb 520C9 reactive with the protooncogene c-erbB-2 product P185 was chemically conjugated with rhIL-2 by using a simple two-step method.First, the rhIL-2 was activated by Sulfosuccinimidyl 4-［N-maleimidomethyl］ cyclohexane-1-carboxylate, a heterobifunctional linker, and N-succinimidyl s-acetylthioacetate was introduced onto 520C9.Then SATA on the 520C9 was reacted with the maleimide group on the activated rhIL-2 to generate 520C9-rhIL-2 immunoconjugate. Results The immunoconjugate retained the antigen binding activity compared to the respective native antibody as determined by an indirect live cell binding assay.The immunoconjugate also possessed IL-2 activity as measured by the standard CTLL-2 cells proliferation assay and the stimulation of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) into lymphokine-activated killer cells. Conclusion Our method of conjugation of rhIL-2 to 520C9 preserves the binding activity of the antibody and the cytokine function of IL-2.This simple and efficient method of conjugation should be applicable to other types of MoAbs and recombinant cytokines.     

抗Ia单克隆抗体对异基因小鼠皮肤移植物的影响

目的　探讨抗Ia抗体对移植皮片存活期的影响。方法　用A .TL鼠 (H 2 k)皮肤及淋巴细胞免疫A .TH鼠(H 2 S) ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (P3U1 )融合后 ,经HAT培养基选择性培养 ,得到杂交瘤细胞 ,用补体依赖的细胞毒试验检测上清中的抗体与人B细胞反应的活性 ,阳性孔细胞以有限稀释法进行克隆化 ,得到抗Ia单克隆抗体 ,预先将抗Ia抗体注入异基因皮肤移植的受体小鼠腹腔后 ,观察移植皮片存活期。结果　实验组皮肤移植物存活期与对照组相比明显延长 (P <0 .0 1 )。结论　抗Ia单克隆抗体能延长异基因移植皮片存活期     

Anti-Proliferative Effects Induced by Anti-CD4 Human/Murine Chimeric Antibody and Murine Anti-CD4 Monoclonal Antibody

ＣＤ４ｍｏｌｅｃｕｌｅｉｓａｓｐｅｃｉａｌｍａｒｋｅｒｏｆｔｈｅｈｅｌｐｅｒＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ（ＴＨ）ａｎｄｄｅｌａｙｅｄｔｙｐｅｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ（ＴＤＴＨ）ａｓｗｅｌａｓａｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｍａｒ...     

抗独特型抗体诱导对小鼠移植免疫反应的影响

目的 探讨抗独特型抗体诱导对小鼠移植免疫反应的影响。方法 以C57BL／6小鼠脾细胞免疫BALB/c小鼠制备抗同种异品系抗体（Ab1),Ab1交联KLH后,免疫BALB／c小鼠诱导产生抗独特克隆抗体（Ab2),以小鼠皮片移植、诱导迟发型变态反应、混合淋巴细胞培养、淋巴细胞亚群检测等实验方法,观察Ab2诱导对小鼠移植免疫反应的影响。结果 和对照组相比,Ab2诱导组的小鼠的免疫学检测指标有显性差异（P＜0．05）。结论 移植前在受体体内诱导产生以移植物抗原为始动抗原的抗独特型的抗体,可以有效诱导特异性低免疫反应状态。     

抗小鼠T淋巴细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用C3H小鼠胸腺细胞免疫的Wistar大鼠脾细胞分别与两株小鼠骨髓瘤细胞(SP2/O和NS-1)融合,选择两个具有分泌抗小鼠T细胞单克隆抗体(McAb)阳性孔的杂交瘤细胞,用有限稀释法连续进行3次克隆化,获得50个分泌阳性McAb的亚克隆杂交瘤细胞。对其中两个亚克隆细胞培养上清液的生物学特性进行分析。结果表明:(1)它能在补体参与下杀伤多种品系小鼠的胸腺细胞(>90％)、淋巴结细胞(约60％)和脾细胞(约30％);(2)用间接荧光法证实它与多种品系小鼠胸腺细胞、淋巴结细胞和脾细胞结合的百分率与上述补体依赖细胞毒试验的结果一致;(3)用细胞培养上清液加补体共同处理小鼠淋巴结和脾脏细胞后,受处理的细胞失去对刀豆素A(ConA)的应答反应而保留对脂多糖(LPS)的应答能力。初步认为这两个亚克隆杂交细胞培养物所分泌的McAb是针对小鼠T淋巴细胞表面抗原的。     

甲状腺微粒体过氧化物酶及其单克隆抗体的制备

本工作共分３部分：①取健康人甲状腺组织，经匀浆、超声波处理及不同速度离心去除其中细胞碎片，胞核和线粒体，再经超速离心沉淀和即获得粗提的甲状腺微粒体过氧化物酶（ＴＰＯ）。②以此粗提ＴＰＯ免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取其脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞杂交，获得分泌抗ＴＰＯ单抗的杂交瘤细胞系多株，经组化染色证明这些单抗能与人甲状腺微粒体结合。②用这些单抗与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂ偶联，将粗提ＴＰＯ作亲和层析，获