1,25-二羟维生素D_3对棕榈酸诱导巨噬细胞炎症因子表达的影响

目的研究1,25-二羟维生素D_3(1,25(OH)_2D_3)对棕榈酸(PMA)诱导THP-1巨噬细胞炎症因子表达的影响及其机制。方法用1,25(OH)_2D_3(10 nmol/L)和/或PMA(250μmol/L)处理THP-1巨噬细胞6 h,采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附法(ELISA)法检测肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和IL-10的表达水平;用1,25(OH)_2D_3和/或PMA处理THP-1巨噬细胞60 min,采用免疫印迹(Western-blot)法检测AMPKα1和磷酸化AMPKα1(p-AMPKα1)水平。结果 1,25(OH)_2D_3(10μmol/L))明显抑制PMA(250μmol/L)作用下THP-1巨噬细胞TNFα、IL-1β和IL-6的表达,并上调IL-10的表达;1,25(OH)_2D_3显著上调THP-1巨噬细胞AMPKα1的磷酸化水平。结论 1,25(OH)_2D_3抑制PMA诱导的THP-1巨噬细胞炎症因子表达,该效应可能与其激活AMPKα1有关。     

1,25(OH)2D3联合黄芪多糖对体外骨骼肌细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制

目的 探讨骨化三醇［1,25（OH）₂D₃］联合黄芪多糖（APS）对骨骼肌细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用及其作用机制,为采用1,25（OH）₂D₃和APS缓解IR提供依据。 方法 采用CCK-8法和己糖激酶法确定棕榈酸（PA）溶液（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L^－1）的最佳作用剂量和最佳作用时间、APS（25、50、100和200 mg·L^－1）最佳作用剂量及1,25（OH）₂D₃（1、10、100和1 000 nmol·L^－1）最佳作用剂量。将骨骼肌细胞分为对照组（不进行任何处理）、PA组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h）、PA+APS组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS作用24 h）、PA＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］、PA＋APS＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS和100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组细胞中胰岛素受体（InsR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、磷酸化胰岛素受体底物1（p-IRS-1）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、P65、磷酸化P65（p-P65）、P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,PA组骨骼肌细胞中ROS、IL-6、TNF-α、MCP-1水平和P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均升高（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与PA组比较,PA+APS、PA+1,25（OH）₂D₃和PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS、IL-6、MCP-1和TNF-α水平及P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均降低（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均升高（P<0.05）。PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS水平、p-P65和p38MAPK蛋白表达水平均低于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）,InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达水平均高于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）。 结论 1,25（OH）₂D₃联合APS可有效减轻IR,其机制可能是通过抑制氧化应激通路以及炎性因子的释放来实现的,且联合应用效果优于单独应用。     

脑皮质星形细胞在1,25-(OH)2D3限定培养中表达NGF

目的：研究原代中枢神经胶质细胞在1,25-二羟维生素D₃［1,25-(OH)₂D₃］化学限定培养中神经生长因子（NGF）基因转录及表达。方法：用新生乳鼠脑皮质制备星形胶质细胞,采用浓度0、10_-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11及10^-12 mol•L^-1 1,25-(OH)₂D₃化学限定无血清培养液培养后,RT-PCR法检测NGF mRNA转录,双向夹心-ELISA检测NGF。 结果：1,25-(OH)₂D₃化学限定无血清原代培养的神经胶质细胞在1,25-(OH)₂D₃作用下可分泌NGF,实验中1,25-(OH)₂D₃有效浓度范围10^-11~10_-7mol•L^-1;1,25-(OH)₂D₃培养6 h后开始检测到mRNA的表达,12 h时表达最高,36 h后检测不到NGF mRNA的表达;而NGF蛋白的ELISA反应持续时间大于48 h。结论：星形神经胶质细胞的NGF基因可被甾体激素1,25-(OH)₂D₃激活并转录表达。     

1,25(OH)2D3通过上调IL-10受体抑制软骨细胞凋亡缓解骨关节炎的分子机制研究

目的：探讨骨化三醇[1,25(OH)₂D₃]对创伤性骨关节炎(PTOA)大鼠膝关节软骨的保护作用及其分子机制。方法：构建PTOA大鼠模型。将20只SD大鼠随机分为对照组、假手术组、PTOA组和1,25(OH)₂D₃组，每组5只。采用免疫组织化学(IHC)染色法检测膝关节软骨IL-10受体(IL-10R)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达，番红O染色法测定大鼠胫骨关节头软骨的损伤程度。分离大鼠骨髓干细胞(BMSCs)，将细胞分为未分化组、分化组、1,25(OH)₂D₃干预组和1,25(OH)₂D₃+IL-10R抗体组。采用荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测细胞中MMP-13和胶原蛋白10a1(Col10a1)m RNA表达，western blotting法检测磷酸化(p)-JAK、JAK、转化生长因子-β1(TGF-β1)、SOX9、Smad2和Runx2蛋白表达，TUNEL染色法检测细胞凋亡率。...     

血清PON1及1,25(OH)2D3对银屑病患者并发心血管疾病的预测价值

目的 检测血清氧磷酯酶1(PON1)及1,25二羟基维生素D₃[1,25(OH)₂D₃]水平及其对银屑病患者并发心血管疾病(CVD)的预测价值。方法 选取2018年2月—2022年2月中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院皮肤科收治银屑病患者88例为银屑病组,根据疾病严重程度,再分为轻度亚组(n=34)、中度亚组(n=26)和重度亚组(n=28);根据是否合并CVD分为非CVD亚组63例和CVD亚组25例。选取医院同期体检健康者70例为健康对照组。酶联免疫吸附实验检测血清PON1及1,25(OH)₂D₃水平;比较不同病情程度银屑病患者血清PON1及1,25(OH)₂D₃水平差异;多因素Logistic回归分析影响银屑病患者并发CVD的因素;受试者工作特征曲线分析血清PON1及1,25(OH)₂D₃对银屑病患者并发CVD的预测价值。结果 银屑病组血清PON1及1,25(OH)₂     

雌二醇联合1，25-二羟维生素D3对绝经后骨质疏松症大鼠的治疗作用

探讨雌二醇联合1,25-二羟维生素D3［1,25（OH）₂D₃］对绝经后骨质疏松症（PMOP）大鼠的治疗作用,并阐明其作用机制。     

不对称二甲基精氨酸对THP-1源性巨噬细胞表达MIF和分泌TNF-α、IL-8的影响(英文)

目的观察不对称二甲基精氨酸(ADMA)对THP-1源性巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和分泌TNF-α、IL-8的影响。方法用PMA诱导单核细胞THP-1分化为巨噬细胞。将分化后的THP-1源性巨噬细胞用不同浓度的ADMA作用24 h后,分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA方法检测MIF mRNA和蛋白表达水平及培养上清中TNF-α与IL-8的含量。结果 ADMA剂量依赖性的上调了THP-1源性巨噬细胞内MIF mRNA和蛋白表达,15μmol/L ADMA对MIFmRNA和蛋白表达的上调作用最明显。随着ADMA浓度增加,THP-1源性巨噬细胞培养上清中TNF-α和IL-8的水平逐渐升高,在15μmol/LADMA作用时达到峰值。结论 ADMA能够上调巨噬细胞内MIF的表达,促进TNF-α和IL-8的分泌。     

生命早期VitD缺乏及干预对大鼠肺发育及肺SP-C表达的影响

目的探讨生命早期Vit D缺乏及适量干预对大鼠肺发育的影响及可能机制。方法将18只成年雌性SD大鼠随机分为正常对照组（对照组）、Vit D缺乏组（缺乏组）、1,25-（OH）₂D₃干预组（干预组）,每组6只。对照组及干预组予正常饲料、正常光照,缺乏组予不含Vit D饲料、避光,喂养2周后,与成年雄性SD大鼠交配,受孕第7日开始干预组予1,25-（OH）₂D₃（10μg·kg-1）隔天灌胃,对照组及缺乏组予1mL生理盐水代替,直到分娩后第21天,各组取新生第1、7、14、21天子鼠肺组织,光镜下观察肺形态结构,免疫组织化学方法检测肺SP-C蛋白水平表达。结果缺乏组子鼠较同日龄对照组肺组织肺泡数少,肺泡腔小,形态较不规则,肺泡间隔较宽;干预组子鼠较同日龄对照组肺泡数稍增加,肺泡腔大小均匀,肺泡间隔较薄;3组子鼠随着日龄增加,SP-C的表达量逐渐增多,缺乏组子鼠SP-C表达量均低于同日龄对照组及干预组,差异有统计学意义（P<0.05）;干预组子鼠SP-C表达量均高于对照组,其中第14、21天比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论维生素D在生命早期可影响大鼠肺发育,适量补充1,25-（OH）₂D₃有助于大鼠肺发育,其机制可能与影响肺SP-C的表达有关。     

迷迭香酸通过激活Nrf2/HO-1通路对Aβ1-42所致星形胶质细胞损伤的保护作用

目的 探讨迷迭香酸（RA）对β淀粉样蛋白1-42（Aβ_1-42）引起的星形胶质细胞损伤的保护作用及炎症因子释放的抑制作用,并阐明其相关机制。 方法 原代培养星形胶质细胞,将细胞分为对照组,Aβ_1-42组（5 μmol?L^－1）,不同浓度（20,50和100 μmol?L^－1）RA+Aβ_1-42组,核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）组,ML385+RA+Aβ_1-42组。星形胶质细胞以不同浓度（20、50和100 μmol?L^－1）RA预处理24 h,再给予终浓度5 μmol?L^－1Aβ_1-42处理24 h,ML385组在加入RA前先加入终浓度10 μmol?L^－1 ML385预处理6 h。MTT法检测各组细胞活性,乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒检测各组细胞LDH释放率,酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒检测各组细胞中白细胞介素1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,Griess法检测各组细胞培养液中一氧化氮（NO）水平,免疫荧光法检测各组细胞中胶质原纤维酸蛋白（GFAP）和Nrf2表达情况,Western blotting法检测各组细胞中GFAP、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）;与Aβ_1-42组比较,不同浓度RA+Aβ_1-42组细胞活性明显升高（P<0.05或P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显降低（P<0.01）,GFAP荧光强度明显减弱, Nrf2荧光强度明显增强,细胞中GFAP蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与RA（50 μmol?L^－1）+Aβ_1-42组比较,ML385+RA+Aβ_1-42组细胞活性明显降低（P<0.01）,LDH释放率及细胞中IL-1β、TNF-α和NO水平明显升高（P<0.01）,GFAP荧光强度明显增强, Nrf2荧光强度明显减弱,细胞中GFAP蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,Nrf2和HO-1蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。 结论 RA对Aβ_1-42诱导的星形胶质细胞炎症因子和NO释放有抑制作用,使星形胶质细胞免受损伤,该保护作用可能与激活Nrf2/HO-1通路有关。     

1, 25-二羟基维生素D3通过下调葡萄糖转运蛋白-1表达抑制膀胱癌细胞增殖

目的：研究 1,25-二羟基维生素 D₃(1,25-(OH)₂-VitD₃)对膀胱癌细胞增殖的影响，并探讨其作用机制。方法：体外培养膀胱癌细胞 T24,MTT 法检测不同浓度 1,25-(OH)₂-VitD₃对细胞活力的影响，并筛选 1,25-(OH)₂-VitD₃干预细胞的最佳时间及半数抑制浓度。将细胞分为 4 组：对照组、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT1)抑制组、1,25-(OH)₂-VitD₃组、1,25-(OH)₂-VitD₃+GLUT1 抑制组。采用 Hoechst 33258 染色观察各组细胞形态变化；试剂盒检测细胞内葡萄糖摄取、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)产生及乳酸形成水平；Real-time PCR 及 Western blot 检测 GLUT1、己糖激...