几种骨髓抑制性贫血小鼠模型的比较研究

目的:辐射法和化学法均能使骨髓造血机能得到抑制,但其机理不同.目前常用的骨髓抑制贫血小鼠造模方式很多.通过对单纯照射、单纯环磷酰胺注射、照射加环磷酰胺注射复合造模3种造模方式进行了比较,认为复合造模(60Co2Gy cy 50 mg)是一种理想的骨髓全面抑制造模方式.     

八珍汤对骨髓抑制小鼠骨髓细胞BaxmRNA的影响

目的:观察八珍汤对骨髓抑制小鼠造血功能的影响,探讨其造血调控作用机制。方法:将实验小鼠分为正常对照组、模型组和八珍汤低、中、高剂量组,除正常组外,其它四组采用Co60γ照射和注射环磷酰胺复合制备骨髓抑制小鼠模型。造模完成的第2天开始给药,正常对照组和模型组每只小鼠灌胃0.2ml/d的生理盐水;八珍汤低、中、高剂量组分别给予5、10、15mg/kg,给药7d后采用原位杂交技术测定骨髓细胞凋亡相关蛋白BaxmRNA表达的影响。结果:八珍汤各组均能降低骨髓细胞中BaxmRNA的表达,而以中剂量组效果最为显著。结论:八珍汤能拮抗骨髓细胞凋亡、促进骨髓造血功能的恢复。     

造血一号抗贫血的实验研究

造血一号对环磷酰胺造模、失血性、溶血性及放射线照射所引起贫血，均能增加红细胞，血细胞数，并促进骨髓粒系祖细胞的增殖速率恢复正常，能增强机体免疫功能。     

苯诱发再生障碍性贫血小鼠骨髓病理改变及血液细胞的变化

目的：观察苯诱发再生障碍性贫血（再障）模型小鼠骨髓组织的病理改变及血液细胞的变化。方法：清洁级Balb/c小鼠40只,随机分为正常对照组及再障模型组。正常对照组注射玉米油4ml/kg;再障模型组注射苯油混合液（给苯剂量1ml/kg体重）,造模14d后取材。结果：与正常对照组比较,再障模型组小鼠骨髓有核细胞及血细胞数目明显减少,骨髓组织病理学观察显示造血细胞减少,非造血细胞增加。结论：苯试剂可造成再障小鼠骨髓组织损伤及血液细胞减少。     

穿龙薯蓣皂苷对再障小鼠骨髓CXCR4/SDF-1蛋白表达的影响

目的探讨穿龙薯蓣皂苷对再生障碍性贫血小鼠骨髓CXCR4/SDF-1蛋白表达的影响。方法将BALB/c雄性小鼠随机分为对照组和模型组,模型组小鼠经137Csγ射线照射后,于第4、5、6天腹腔注射环磷酰胺25 mg/(kg·d)和氯霉素62.5 mg/(kg·d),对照组予铅砖屏蔽行假照射,腹腔注射等体积生理盐水。造模结束后,将成模小鼠随机分为模型组、穿龙薯蓣皂苷组、环孢素组,各10只。经穿龙薯蓣皂苷干预14 d后,利用血细胞分析仪分析小鼠外周血细胞计数,利用流式检测骨髓Treg细胞的数量,用Western blot检测骨髓中CXCR4、SDF-1表达情况。结果经穿龙薯蓣皂苷干预14 d后,①与模型组比较,穿龙薯蓣皂苷组外周血中WBC、HGb、PLT、RET均呈现显著升高,差异有统计学意义(P 0.01);②与模型组比较,穿龙薯蓣皂苷能显著提升再障小鼠骨髓Treg细胞的数量(P 0.05);③与模型组比较,穿龙薯蓣皂苷能上调再障小鼠CXCR4、SDF-1蛋白的表达(P 0.01)。结论穿龙薯蓣皂苷通过调控CXCR4、SDF-1蛋白的表达,促进Treg细胞向骨髓迁徙,维持Treg细胞数量稳态,诱导机体免疫耐受。     

不同剂量HS6101对环磷酰胺损伤小鼠造血功能的影响

目的观察不同剂量HS6101对环磷酰胺（cyclophosphamide，CTX）损伤小鼠造血功能恢复的影响。方法正常ICR小鼠连续3 d腹腔注射CTX 100 mg/（kg·d）制备化疗药损伤模型，3组动物于首次CTX前1 d，每只分别皮下注射HS61010、9和27μg，每组动物数分别为20只，观察各组小鼠外周血细胞计数、第4和9天骨髓造血祖细胞集落数和骨髓病理组织学变化。结果不同剂量HS6101均可明显升高CTX化疗小鼠外周血白细胞和中性粒细胞数（P<0.05），增加骨髓各系造血祖细胞集落生成，刺激化疗损伤后骨髓细胞增殖。其中HS610127μg给药组效果更佳。结论 HS610127μg可明显促进CTX化疗ICR小鼠造血功能的恢复。     

升白胶囊对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症影响的研究

目的研究升白胶囊对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少症的影响以及升高白细胞的作用机制。方法将60只小鼠随机分为正常对照组,模型对照组,贞芪扶正胶囊组及升白胶囊大、小剂量组,每组12只,各组分别灌胃给予蒸馏水及相应药物混悬液,灌胃第8 d,除正常对照组外,其余4组小鼠通过腹腔注射环磷酰胺制备白细胞减少症模型,观测升白胶囊对小鼠外周血象、骨髓有核细胞数和骨髓DNA含量的影响。结果与正常对照组比较,模型对照组白细胞(WBC)数、骨髓有核细胞(BMNC)数及骨髓DNA含量显著降低(P0.01);与模型对照组比较,贞芪扶正胶囊组与升白胶囊大、小剂量组WBC数、BMNC数及骨髓DNA含量显著升高(P0.01或P0.05)。结论升白胶囊对环磷酰胺所致小鼠白细胞减少有显著的升高作用,其机制与促进骨髓造血功能有关。     

姜黄素抗环磷酰胺致染色体畸变的初步研究

目的 研究姜黄素对化疗药物环磷酰胺所致染色体畸变的影响.方法 昆明小鼠随机分成正常组,姜黄素组(100 mg/kg),模型组和环磷酰胺加姜黄素大、中、小剂量组(50、100、200 mg/kg).造模方法为腹腔注射环磷酰胺2次,浓度为50 mg/kg,2次间隔24 h.正常组(不造模)即阴性对照组,只喂基础饲料;模型组...     

清毒饮、养正片对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响

[目的]观察清毒饮及养正片对化疗所致骨髓抑制小鼠的影响.[方法]将66只NIH小鼠随机分为11组,分别为清毒饮高、中、低剂量组,养正片高、中、低剂量组,清毒饮 养正片高、中、低剂量组,正常组和模型组.除正常组外,其他各组均腹腔注射环磷酰胺(CTX)复制小鼠骨髓抑制模型,将清毒饮、养正片、清毒饮加养正片均分为2、1、0.5kg/L 3个浓度,每组于造模3 d后灌服中药0.3 mL/d,连续7 d.检测各组外周血常规及骨髓有核细胞计数.[结果]清毒饮、养正片单用或合用均能不同程度提高环磷酰胺所致骨髓抑制小鼠的外周血细胞各组分及骨髓有核细胞计数,尤以改善白细胞(WBC)、中性粒细胞(N)及血小板(PLT)计数为佳;在各给药组中,以养正片高、中剂量组效果最佳.[结论]清毒饮和养正片均能不同程度地减轻化疗所致的骨髓抑制.     

左归补髓生血方对再生障碍性贫血小鼠骨髓有核细胞凋亡的影响

目的 观察左归补髓生血方治疗小鼠再生障碍性贫血的疗效及其对骨髓中有核细胞凋亡的影响。方法 将40只SPF级ICR小鼠随机分正常组、模型组、西药组、中药组。采用二甲磺酸丁酯和环磷酰胺交替给药12 d的方法复制再生障碍性小鼠模型。观察外周血细胞计数以及骨髓组织形态学变化,采用TUNEL法检测各组小鼠骨髓中有核细胞凋亡。结果 与正常组比较,模型组小鼠外周血白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白浓度明显减低（P＜0.05）,骨髓有核细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）;光镜下可见小鼠骨髓增生极度减少,红系、粒系、巨核细胞系均明显减少。与模型组比较,中药组以及西药组外周血红细胞、白细胞、血小板计数和血红蛋白浓度明显升高（P＜0.05）,骨髓有核细胞凋亡率明显降低（P＜0.05）;光镜下可见骨髓中造血组织比例增多。结论 左归补髓生血方可以有效升高再生障碍性贫血小鼠外周血细胞计数,抑制骨髓中有核细胞的凋亡。     

小鼠骨髓移植修复卵巢功能损伤

目的研究骨髓移植对化疗引起的小鼠卵巢功能损伤的修复作用。方法 48只小鼠随机分为3组:正常对照组(A组)、化疗并骨髓移植组(B组)和化疗组(C组)。B、C组小鼠每天给予环磷酰胺150 mg/kg腹腔注射,连续3 d。1周后,对B组小鼠进行骨髓移植。给药起第21、50天分两批处死小鼠,称量卵巢、子宫湿重,观察卵巢组织学变化。用Hoechest33342荧光染料标记骨髓细胞,移植入预先注射环磷酰胺的小鼠体内,2 d后取小鼠卵巢做冰冻病理切片,荧光显微镜下观察。结果给药第21、50天,B组小鼠的卵巢系数、各级卵泡数目明显高于C组而低于A组,均具有统计学意义(P<0.05)。受体鼠的卵巢内发现显示荧光的供体鼠骨髓细胞。结论骨髓移植对化疗药物引起的卵巢功能损伤具有修复作用。     

不同提取方法的当归补血汤对化疗贫血模型的药效学研究

目的：考察不同提取方法的当归补血汤对化疗贫血模型小鼠外周血细胞计数、骨髓IL-2浓度、骨髓和肾组织EPO浓度、肾组织TGF-β1浓度的影响,选取具有最佳生物效应的提取工艺。方法：采用环磷酰胺建立化疗贫血模型,正常组、模型组胃饲蒸馏水,各给药组以不同萃取方法制备的当归补血汤胃饲小鼠,连续14天。血细胞计数仪测定外周血细胞计数,双抗体夹心ELISA法检测骨髓白介素2（IL-2）,肾组织EPO,骨髓EPO和骨髓TGF-β1浓度。结果：不同萃取方法制备的当归补血汤均提高小鼠外周血细胞计数（P〈0.05）,提高骨髓IL-2浓度,肾组织EPO浓度和骨髓EPO浓度（P〈0.05）,降低骨髓TGF-β1浓度（P〈0.05）,其中氯仿组优于其他给药组。结论：不同萃取方法制备的当归补血汤对环磷酰胺所致骨髓抑制有不同程度的保护作用,以氯仿组效果最优。推测当归补血汤中有效物质在氯仿萃取液中含量最多,生物效应最佳,为筛选该方的提取工艺提供实验依据。     

扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响

目的:观察扶正养营颗粒对免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓增殖及bcl-2表达的影响.方法:BALB/c小鼠40只随机分为正常组、模型对照组、环孢霉素A对照组、扶正养营颗粒实验组,记数外周血象、骨髓有核细胞,测定骨髓造血组织容量及bcl-2表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05);与模型组比较,环孢霉素A组、扶正养营颗粒组外周血象记数、骨髓有核细胞数、造血组织容量及bcl-2表达显著增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:扶正养营颗粒可能是通过上调拮抗凋亡因子bcl-2的表达,改善骨髓增殖,发挥其治疗再生障碍性贫血的作用.     

骨髓间充质干细胞治疗再生障碍性贫血的研究

目的探讨骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）治疗再生障碍性贫血（aplastic anemia,AA）模型鼠的可行性。方法建立免疫介导AA小鼠模型。输入体外增殖培养的BALB/c小鼠骨髓MSC,作为MSC组,15只;用未治疗的AA模型小鼠作为第一对照组（模型组）,15只;正常BALB/c小鼠作为第二对照组（正常组）,10只。把MSC输注到实验组小鼠体内,分别于第1周、第2周、第3周、第4周观察各组小鼠的存活率、血常规、骨髓形态学变化等各项指标。结果模型组小鼠,3只于第2周内死亡,7只于第3周内死亡,2只于第4周内死亡,28d存活率20.0%;MSC组,4只于第3周内死亡,28d存活率73.3%,与模型组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。AA小鼠模型组与MSC组在8d时外周血象明显下降,14d时模型组外周血象仍明显降低,而MSC组开始回升,至28d血象基本恢复正常。骨髓行形态学检查显示模型组骨髓增生明显减低,有核细胞数明显减少,由大量脂肪细胞填充骨髓,而MSC组骨髓增生活跃,脂肪细胞较少。结论骨髓间充质干细胞可以提高再生障碍性贫血小鼠存活率,改善骨髓造血功能,对再生障碍性贫血模型鼠有治疗作用。     

当归多糖干预再生障碍性贫血模型小鼠线粒体功能异常机制研究

目的:研究当归多糖(ASP)对再生障碍性贫血(AA)模型小鼠线粒体功能异常的作用机制。方法:AA小鼠随机分为对照组、再障组和治疗组,再障组与治疗组通过~(60)Coγ、腹腔注射环磷酰胺和氯霉素造模后,分别用生理盐水或ASP喂养2周。透射电子显微镜观察骨髓的线粒体超微结构。从骨髓细胞中分离出Lin~-Sca-1~+c-Kit~+(LSK)细胞,通过流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP),并进行活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、细胞色素氧化酶(COX)和单胺氧化酶(MAO)的相关检测。结果:与对照组比较,再障组和治疗组骨髓的单个核细胞、BFU-Es和CFU-Es、LSK细胞中的线粒体数量减少,MMP降低。应用ASP干预后,骨髓的单个核细胞、BFU-Es和CFU-Es等数值相比再障组显著增加。ASP可以纠正LSK线粒体数量下降的趋势,ASP纠正AA模型小鼠异常的MAO和COX水平,并通过降低ROS和MDA,纠正异常的膜电位而改善线粒体的功能(P0.05或P0.01)。结论:ASP可能通过上调线粒体膜电位、改善线粒体膜稳定性,纠正AA干细胞的过度凋亡。     

当归补血汤治疗癌性贫血的实验研究

目的：研究不同浓度当归补血汤对荷瘤小鼠补血作用。方法：建立生长良好的H22小鼠的腹水模型,将荷瘤小鼠随机分为2组（模型组、当归补血汤组）,另外再选12只健康小鼠为空白对照组（正常组）。给予正常组和模型组小鼠每日灌胃生理盐水,当归补血汤组给予当归补血汤灌胃（剂量为12g.kg·d^-1）。分组后连续给药1Od,于末次给药24h眼球采血后处死小鼠收集骨髓。结果：实验数据表明,与正常组相比,模型组红细胞数及血红蛋白含量明显减少,提示可能存在癌性贫血现象。当归补血汤组相比模型组其红细胞数、血红蛋白有所上升,提示当归补血汤可能对抗癌性贫血。将各组骨髓细胞体外培养,当归补血汤组能减缓癌性贫血小鼠骨髓红系祖细胞的凋亡速度。结论：当归补血汤对荷瘤小鼠有一定补血作用。     

骨形态发生蛋白诱导髓外造血的实验研究

目的:探讨骨形态发生蛋白(BMP)诱导髓外造血以拯救骨髓造血衰竭的作用。方法:采用60Co-γ+氯霉素(CH)+环磷酰胺(CY)的方法诱导小鼠致死性再生障碍性贫血模型,实验组于诱导再障前6d肌肉内植入重组人-BMP-4(rh-BMP-4),对照组小鼠肌肉内植入琼脂。观察血象、病理形态等变化以及两组再障小鼠的死亡率。同时,给正常小鼠大腿肌肉内植入rh-BMP-4,动态观察植入后局部的形态变化、形成骨及骨髓的形态特点,脾集落形成单位(CFU-S)以及基质细胞干细胞生长因子(SCF)的表达。结果:正常小鼠在BMP肌肉内植入1周内,在BMP周围有大量间质细胞增殖,2周后才出现软骨化骨和骨小结形成,其骨髓基质细胞的SCF表达明显高于自体骨髓;BMP植入组的再障小鼠,不仅血象与对照组相比有明显改善,而且死亡率也明显下降,有46.7%存活超过3个月,其血象完全恢复正常,骨髓和脾脏的组织形态学改变也恢复正常。对照小鼠除1只存活超过3个月外(占6.7%),其余均死于急性再生障碍性贫血。结论:肌肉内植入BMP-4可诱导髓外造血,其机制可能与BMP-4诱导成年自体肌肉内存在的干细胞向造血分化有关,这一结果将为干细胞治疗提供了一条新的思路。     

当归注射液对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的保护作用

目的探讨当归注射液对环磷酰胺损伤小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的保护作用。方法将30只Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组和治疗组。于第7天断颈处死小鼠,取出尺骨和股骨,计数骨髓单个核细胞,并行尺骨组织学切片和超微结构观察。结果与正常组比较,模型组骨髓单个核细胞明显减少(P<0.01);而治疗组与模型组比较,骨髓单个核细胞明显增多(P<0.01)。骨髓超微结构观察显示模型组线粒体和内质网数量减少且明显受损,血窦减少、窦壁断裂。治疗组线粒体、内质网和血窦数量增加,形态基本正常。结论当归注射液能通过促进骨髓造血细胞增生,改善骨髓微环境而对受环磷酰胺损伤的小鼠进行保护。     

新西兰兔再生障碍性贫血模型的建立

目的 正交设计筛选苯和环磷酰胺联合使用建立新西兰兔再生障碍性贫血模型的适宜剂量.方法 新西兰兔,采用正交试验设计,应用L9(34)正交表对苯的剂量(A)、环磷酰胺的剂量(B)、苯的注射次数(C)、环磷酰胺的注射次数(D)四个因素及它们各自不同的3个水平在建立新西兰兔再生障碍性贫血模型,并最终从9个实验组中优选出建模的较优方案.给药方法为先背部皮下注射苯,隔日1次,再耳缘静脉注射环磷酰胺,每天注射,均按照规定次数注射.每6d检测1次血常规,于建模前、建模后36d取小段股骨进行骨髓组织学检查,观察变化.结果 将9组白细胞、红细胞、血小板计数进行对比分析,4~9组新西兰兔再障模型建立成功,第7、8、9组与其他组日均下降速率之差有统计学意义(P<0.05),其中第7组骨髓切片显示骨髓增生低下,造血组织减少,巨核细胞减少或消失,脂肪细胞增多.随访发现,第7组骨髓抑制一直存在,与该病临床特点相符合.结论 第7组采用苯1.5 mL/kg,8次/d,环磷酰胺10 mg/kg,4次/d,这一组合剂量建立的新西兰兔AA模型建模周期短、且模型稳定,是一种可广泛应用于动物实验的建模方法.